CN111904968A - 硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用 - Google Patents
硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111904968A CN111904968A CN202010836045.8A CN202010836045A CN111904968A CN 111904968 A CN111904968 A CN 111904968A CN 202010836045 A CN202010836045 A CN 202010836045A CN 111904968 A CN111904968 A CN 111904968A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sulfated
- galacttetraose
- galactotetraose
- cell adhesion
- epithelial cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 48
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 13
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 11
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 5
- 241000196224 Codium Species 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000121220 Tricholoma matsutake Species 0.000 claims description 4
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims description 3
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 claims description 3
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 102000016621 Focal Adhesion Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 46
- 108010067715 Focal Adhesion Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 210000001650 focal adhesion Anatomy 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 5
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 102000018546 Paxillin Human genes 0.000 description 3
- ACNHBCIZLNNLRS-UHFFFAOYSA-N Paxilline 1 Natural products N1C2=CC=CC=C2C2=C1C1(C)C3(C)CCC4OC(C(C)(O)C)C(=O)C=C4C3(O)CCC1C2 ACNHBCIZLNNLRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700031954 Tgfb1i1/Leupaxin/TGFB1I1 Proteins 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- ACNHBCIZLNNLRS-UBGQALKQSA-N paxilline Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@]1(C)[C@@]3(C)CC[C@@H]4O[C@H](C(C)(O)C)C(=O)C=C4[C@]3(O)CC[C@H]1C2 ACNHBCIZLNNLRS-UBGQALKQSA-N 0.000 description 3
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124783 FAK inhibitor Drugs 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 2
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 2
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000002740 oral squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100021238 Dynamin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000012199 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Human genes 0.000 description 1
- 108050002772 E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101000817607 Homo sapiens Dynamin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000705921 Homo sapiens Proline-rich protein 3 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 102100031053 Proline-rich protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102100039810 Protein-tyrosine kinase 6 Human genes 0.000 description 1
- 101710094328 Protein-tyrosine kinase 6 Proteins 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 102000006463 Talin Human genes 0.000 description 1
- 108010083809 Talin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000006909 anti-apoptosis Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 102000037979 non-receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008046 non-receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000003385 ring cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7024—Esters of saccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。将所述硫酸半乳四糖或者所述硫酸半乳四糖衍生物应用于抗上皮细胞黏附的药物，或者将所述硫酸半乳四糖或者所述硫酸半乳四糖衍生物应用于抗上皮细胞黏附的功能食品。所述硫酸半乳四糖能靶向结合斑激酶(FAK)；有效抑制上皮细胞的黏附能力。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
背景技术
黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)是一种细胞内的非受体酪氨酸激酶，在转染的V-Src鸡胚成纤维细胞中被首次发现[1]。FAK在多数组织中都有较高的表达，其蛋白序列在很多物种(鼠、蟾蜍、人等)中具有较高的同源性。FAK在细胞内是多条信号传导通路的交汇处，参与肿瘤形成、增殖、转移和凋亡、心血管疾病等多个生物过程。本文对近年来FAK的主要信号转导通路、生物学效应及其作为抗肿瘤靶点等研究进展进行综述。FAK的相对分子质量为125kDa，其结构可以分为4个部分：氨基端的FERM(4.1-ezrin-radixinmoesin)区域、中间的激酶催化区域、羧基端的黏着斑目标(focal-adhesiontargeting，FAT)区域以及多个起连接作用的富含脯氨酸区域(proline-richregions，PRRs)。FAK有7个酪氨酸磷酸化位点，分别是位于FERM区域的Y194、位于FERM和激酶区域之间的Y397、位于激酶区域的Y576和Y577、位于PRR3区域的Y861以及位于FAT区域的Y925和Y1007，其中Y397具有自磷酸化作用，对FAK的活性和生物学功能的实现起着重要的作用。
FAK通过多条信号通路促进肿瘤细胞的生存和生长，其中包括激酶依赖和非激酶依赖途径，涉及肿瘤细胞的凋亡、耐药和细胞周期等生理过程。在多种肿瘤细胞中，FAK的表达量和活性增加，能够促进细胞抗凋亡作用。其中，FAK通过非激酶依赖途径，在细胞核内发挥脚手架蛋白功能与P53和MDM2相互作用，促进P53泛素化失活，抑制其转录功能，从而促进细胞抗凋亡。FAK经激酶依赖途径发挥抗凋亡作用，多数通过PI3K-AKT信号通路[15]。如由蛋白酪氨酸激酶6(protein tyrosine kinase 6，PTK6)介导的FAKY861磷酸化激活，能够引起由AKT介导的抗凋亡作用[16]。同时，FAK活化可以激活细胞内的生存信号，从而促进肿瘤生长。
肿瘤细胞侵袭是肿瘤形成的重要过程，是肿瘤细胞入侵周围微环境的过程，有助于肿瘤转移至正常组织形成新病灶。肿瘤细胞侵袭需要有以下几个过程：黏着斑和细胞骨架力学的改变；基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)表达量或者活性的改变以及上皮细胞间质转化(epithelial-to-mesenchymaltransition，EMT)。FAK通过多个信号通路参与黏着斑的形成和翻转过程。FAK在新生黏着斑处募集活化，与RHOARHGEF28连接。研究表明，FAK-ARHGEF28复合物在原位结肠癌小鼠中，促进肿瘤细胞的局部侵袭[17]。FAK-ARHGEF28二聚体和FAK活性增强，促进桩蛋白(paxillin)酪氨酸磷酸化过程。桩蛋白是黏着斑位点上肌动蛋白-膜附着的细胞骨架蛋白，参与黏着斑的成熟[18]。FAK还会将整合素活化调节蛋白(talin)募集至新生黏着斑[19]。同时，FAK-talin连接参与黏着斑的翻转过程。研究表明，干扰FAK-tailin连接的基因突变，会抑制tailin剪切，从而抑制有效的黏着斑翻转[19]。
FAK与肿瘤的增殖、生存、转移和凋亡之间存在密切关系，在多种类型的肿瘤细胞(如卵巢癌、肺癌、肝癌等)中发现FAK上调现象，FAK逐渐成为一个临床抗肿瘤靶点。最初的尝试是通过下调FAK在肿瘤细胞中的表达以达到抑制肿瘤的目的。通过转染羧基端失活的FAK(FAK-CD)沉默FAK，减少细胞黏着和增殖，在活体实验中实现了抑制乳腺癌细胞生长的作用[27]。通过转染含有FAK-silenced RNA(FAK-siRNA)的质粒，在活体内抑制了癌症。同时抑制FAK和FAK下游信号分子(如SRC)的表达，能够使得抗肿瘤效应增强。
FAK在肿瘤细胞内扮演十分重要的角色，是多条信号传导通路的交汇点，是目前受到广泛关注的抗肿瘤靶点之一。近年来的研究发现，FAK可经多种因素激活，包括整合素、G蛋白偶联受体等，同时FAK经激酶依赖和非激酶依赖2种途径调控细胞内P53、PI3K-AKT-mTOR等信号通路，参与肿瘤细胞的生存、增殖、转移等生物过程。基于FAK在肿瘤细胞中的重要功能，目前有多种FAK抑制剂作为抗肿瘤药物，处于临床前研究或临床试验阶段。对FAK功能的研究及其抑制剂的研发，将为临床治疗肿瘤带来新的思路和化疗策略。本发明聚焦硫酸半乳四糖与FAK的靶向结合以及抗上皮细胞黏附的功能，可将硫酸半乳四糖开发为新型FAK抑制剂的抗肿瘤药物。
发明内容
本发明的目的在于提供了硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的一方面提供硫酸半乳四糖在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
本发明的另一方面提供硫酸半乳四糖衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
优选的，将所述硫酸半乳四糖或者所述硫酸半乳四糖衍生物应用于抗上皮细胞黏附的药物，或者将所述硫酸半乳四糖或者所述硫酸半乳四糖衍生物应用于抗上皮细胞黏附的功能食品。
优选的，所述硫酸半乳四糖能靶向结合斑激酶(FAK)；有效抑制上皮细胞的黏附能力。
优选的，硫酸半乳四糖是以海洋松藻为原料，通过乙醇脱脂、用热水提取后，然后用不同百分比的乙醇分级沉淀，得到沉淀组分，取沉淀组分质量的80％，进一步采用化学降解、超滤和凝胶柱分离纯化，得到所述硫酸半乳四糖；
优选的，所述硫酸半乳四糖分子结构式如下：
优选的，所述硫酸半乳四糖衍生物包括：以包含半乳四糖为母核的硫酸化衍生物、以包含半乳四糖为母核的磷酸化衍生物，以及以包含半乳四糖为母核的乙酰化衍生物。
优选的，所述硫酸半乳四糖的用量为25-355mg/kg。
优选的，所述半乳四糖的制备方法包括如下步骤：
1)、将采集的松藻晒干、研磨成粉，脱脂后在恒温水浴下搅拌；
2)、浓缩后采用不同百分比的乙醇分级沉淀，收集沉淀冻干，得到醇沉冻干粉末，备用；
3)、取醇沉冻干粉末的80％，采用稀盐酸进行恒温降解，得到降解溶液；
4)、将步骤3)得到的溶液进行浓缩、醇沉，取上清液经旋转仪浓缩后，再通过凝胶色谱柱进行脱盐处理；
5)、然后采用Bio-Gel P6色谱柱分离纯化；
6)、收集峰尖部分，冻干即得硫酸半乳四糖。
本发明的有益效果在于：
1、本发明提供硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
2、本发明实施例提供了硫酸半乳四糖在制备靶向FAK抗上皮细胞黏附药物中的应用，并提供了硫酸半乳四糖衍生物在制备靶向FAK抗上皮细胞黏附药物中的应用。
3、本发明硫酸半乳四糖与FAK的亲和力极强，相互作用结合口袋位于FAK的硫酸半乳四糖可紧凑的与FAK的Loop区域结合，亲和力为-5.3kcal/mol。实验表明硫酸半乳四糖能显著抑制口腔鳞状癌细胞的黏附能力。
4、本发明实施例原料来源于松藻，具有资源丰富、制备工艺简单、得率高、容易产业化，以及产品具有水溶性好、稳定性高等优点，在口腔鳞状癌的防治方面具有广阔的市场应用前景。
附图说明
图1是本发明实施例中硫酸半乳四糖的二级质谱图。
图2是硫酸半乳四糖与靶点蛋白的FAK的分子对接图谱
图3是硫酸半乳四糖与靶点蛋白的FAK相互作用的活性口袋分析。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
本发明的一实施例提供硫酸半乳四糖在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。需要说明的是，硫酸半乳四糖属于硫酸半乳糖一大类。
具体的，将硫酸半乳四糖应用于抗上皮细胞黏附的药物，或者应用于抗上皮细胞黏附的功能食品。
具体应用方式为：将所述硫酸半乳四糖直接作为药物或者功能食品进行食用。
具体的用法用量为：每天(2)次，以硫酸半乳四糖的用量计，每次(12.5-177.5)mg。所述硫酸半乳四糖的用量为25-355mg/kg。
本发明的另一实施例提供硫酸半乳四糖衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
具体的，将硫酸半乳四糖衍生物应用于抗上皮细胞黏附的药物，或者应用于抗上皮细胞黏附的功能食品。
具体应用方式为：将所述硫酸半乳四糖衍生物直接作为药物或者功能食品进行食用。
具体的用法用量为：每天(2)次，以硫酸半乳四糖的用量计，每次(12.5-177.5)mg。所述硫酸半乳四糖的用量为25-355mg/kg。
本发明实施例中，所述硫酸半乳四糖衍生物包括：以包含半乳四糖为母核的硫酸化衍生物、以包含半乳四糖为母核的磷酸化衍生物，以及以包含半乳四糖为母核的乙酰化衍生物。
本发明实施例中，所述硫酸半乳四糖能靶向结合斑激酶(FAK)；有效抑制上皮细胞的黏附能力。
本发明实施例中，硫酸半乳四糖是以海洋松藻为原料，通过乙醇脱脂、用热水提取后，然后用不同百分比的乙醇分级沉淀，得到沉淀组分，取沉淀组分质量的80％，进一步采用化学降解、超滤和凝胶柱分离纯化，得到所述硫酸半乳四糖；
具体的，包括如下步骤：
1)、将采集的松藻晒干、研磨成粉，经70％乙醇脱脂，然后在恒温50℃水浴下搅拌4-10小时提取，将提取液进行浓缩；
2)、浓缩后依次采用70％乙醇、80％乙醇分级沉淀，收集沉淀冻干，得到醇沉冻干粉末，备用；
3)、取醇沉冻干粉末的80％，采用稀盐酸进行恒温降解，得到降解溶液；
4)、将步骤3)得到的溶液进行浓缩、醇沉，取上清液经旋转仪浓缩后，再通过凝胶色谱柱进行脱盐处理；
5)、然后采用Bio-Gel P6色谱柱分离纯化；
6)、收集峰尖部分，冻干即得硫酸半乳四糖。
所述硫酸半乳四糖分子量为746.1kD；所述硫酸半乳四糖分子结构式如下：
以下为具体实施例。
实施例1
实施例1：硫酸半乳四糖提取制备及分析
将松藻晒干、研磨成粉，脱脂后恒温50摄氏度水浴下搅拌10小时；浓缩后70％和80％乙醇分级沉淀；收集沉淀冻干；采用0.05-0.1mol/L稀盐酸58摄氏度将粉末进行恒温降解，58摄氏度，3小时；将溶液进行浓缩、醇沉，取上清液经旋转仪浓缩后，再通过凝胶色谱柱进行脱盐处理；然后采用Bio-Gel P6色谱柱分离纯化；收集峰尖部分，冻干即得硫酸半乳四糖。
所制得的硫酸半乳四糖结构式如下：
取样品加入0.05M的NaBH4与冰箱4C中反应过夜，以1∶1乙酸水调PH为7.0。采用AG50W-X8对反应后的寡糖样品进行蒸馏水洗脱，然后浓缩冻干。在质谱分析过程中，以氮气为吹干气体和喷雾气体，流速为250L/h，以乙腈∶水＝1∶1(V/V)为流动相进行质朴分析。在二级质谱中，需要锥孔电压80eV，氩气作为碰撞气体，流速为15L/h。同时，保持碰撞能量保持在20-50eV交换时，得到最佳序列信息。离子源和溶剂挥发峰温度分别为80℃和150℃。
硫酸半乳四糖的二级质谱如图1所示。在[M-H]-745.1(m/z)中，(m/z 241)，(m/z403)，(m/z 421)，(m/z 565)，(m/z 583)是环间断裂分子，由此可以推断硫酸半乳四糖的连接顺序；(m/z 331)，(m/z 493)，(m/z 523)，(m/z 625)，(m/z655)，(m/z 685)为环内断裂产生的离子碎片。依据这些特征碎片离子推断此四糖为还原端带有硫酸基团的直链四糖，结构为β-D-Galp-(4SO4)-(1→3)-β-D-Galp-(1→3)-β-D-Galp--(1→3)-β-D-Galp。
实验测试1：硫酸半乳四糖与FAK蛋白激酶的紧密相互结合作用分析
采用实施例1所制备的硫酸半乳四糖进行测试。具体步骤为：
我们采用分子对接软件Autodock vina 1.1.2研究了硫酸半乳四糖与FAK蛋白激酶的相互作用方式。首先使用ChemDraw Professional 15.1软件画出小分子硫酸半乳四糖的分子结构，然后用Chem3D 15.1软件转化为三维结构，MMFF94力场进行能量优化。FAK蛋白激酶用AutodockTools 1.5.6添加极性氢，并转化为PDBQT分子对接格式。确定GK的活性口袋坐标为：center_x＝-27.408，center_y＝-0.201，center_z＝16.359；size_x＝20，size_y＝38，size_z＝42。为了增加计算的准确度，我们将参数exhaustiveness设置为10。最终选取打分值最高的构象用PyMoL 1.7.6和DS客户端进行作图和结果分析。
由分析结果可知，硫酸半乳四糖可紧凑的与FAK的Loop区域结合，亲和力为-5.3kcal/mol。硫酸半乳四糖位于由ASN551、GLN432、SER568、GLU430、MET499、GLY563、VAL436、ALA452、ASP564、ARG550、LEU553组成的疏水腔袋中，形成强烈的疏水相互作用。而且硫酸半乳四糖可与FAK的活性腔袋中氨基酸GLN432、ARG550、GLU506形成4个稳定的氢键，因而，我们可以推知：这种特殊的结合模式，可使硫酸半乳四糖与FAK形成稳定的复合物，有利于硫酸半乳四糖作用的发挥。
实验测试2：硫酸半乳四糖人口腔鳞癌的生长抑制作用
采用实施例1所制备的硫酸半乳四糖进行测试。
液氮内保存的人口腔鳞癌SCC-15细胞取出后进行复苏，接种于DMEM培养基。在37℃、5％CO2恒温的培养箱中培养细胞。24h后细胞呈贴壁生长即复苏成功，每隔1d冲洗换液1次，2d后，用胰蛋白酶消化并制成细胞悬液用于实验。
将对数生长期的SCC-15制成细胞悬液，接种于96孔的孔板中，每孔200μl，含5000个SCC-15细胞，设置5个复孔，将其放置在CO2为5％，温度为37℃恒温箱中孵育，观察到细胞将96孔平底板的孔底部铺满时，加入不同的药物浓度(DMEM培养液配制)100μl，空白对照组为添加等量不含药液的DMEM培养液，培养时间为24h及48h。检测前每孔加入MTT 20μl(5mg/ml)，继续置于培养箱中培养4h，离心后弃去培养液，用PBS洗3次，再加入含MTT培养液，终止培养后吸去培养液，加入150μl二甲基亚砜，低速震荡10min，在酶标仪上读取570nm波长下每孔的吸光度值，按细胞生长抑制率(inhibitory rate，IR)的计算公式算出IR的数值：IR＝(1-药物组A值/对照组A值)×100％。
表1半硫酸半乳四糖对人口腔鳞癌SCC-15细胞的生长抑制作用
| 组别(μmol/L) | 细胞生长抑制率(％) |
| 对照组 | 0 |
| 5.0 | 7.1±0.08 |
| 10 | 12.7±0.11 |
| 20 | 18.68±1.16* |
| 40 | 21.41±1.21<sup>**</sup> |
| 80 | 31.02±1.16<sup>**</sup> |
| 150 | 41.55±3.82<sup>**</sup> |
| 300 | 48.72±4.10<sup>**</sup> |
| 600 | 48.21±4.11<sup>**</sup> |
注：n＝8，x±SD，与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，硫酸半乳四糖从20mg/ml的剂量开始，可显著抑制人口腔鳞癌SCC-15细胞的生长，当剂量加大到300mg/ml时，其抑制人口腔鳞癌SCC-15细胞生长率高达48.72％。
需要说明的是，在整个申请文件中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，由于文字表达的有限性，而客观上存在无限的试试方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进、润饰或变化，也可以将上述技术特征以适当的方式进行组合；这些改进润饰、变化或组合，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.硫酸半乳四糖在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
2.硫酸半乳四糖衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，将所述硫酸半乳四糖或者所述硫酸半乳四糖衍生物应用于抗上皮细胞黏附的药物，或者将所述硫酸半乳四糖或者所述硫酸半乳四糖衍生物应用于抗上皮细胞黏附的功能食品。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述硫酸半乳四糖能靶向结合斑激酶；有效抑制上皮细胞的黏附能力。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，硫酸半乳四糖是以海洋松藻为原料，通过乙醇脱脂、用热水提取后，然后用不同百分比的乙醇分级沉淀，得到沉淀组分，取沉淀组分质量的80％，进一步采用化学降解、超滤和凝胶柱分离纯化，得到所述硫酸半乳四糖。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述硫酸半乳四糖分子结构式如下：
7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述硫酸半乳四糖衍生物包括：以包含半乳四糖为母核的硫酸化衍生物、以包含半乳四糖为母核的磷酸化衍生物，以及以包含半乳四糖为母核的乙酰化衍生物。
8.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述硫酸半乳四糖的用量为25-355mg/kg。
9.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述半乳四糖的制备方法包括如下步骤：
1)、将采集的松藻晒干、研磨成粉，脱脂后在恒温水浴下搅拌；
2)、浓缩后采用不同百分比的乙醇分级沉淀，收集沉淀冻干，得到醇沉冻干粉末，备用；
3)、取醇沉冻干粉末的80％，采用稀盐酸进行恒温降解，得到降解溶液；
4)、将步骤3)得到的溶液进行浓缩、醇沉，取上清液经旋转仪浓缩后，再通过凝胶色谱柱进行脱盐处理；
5)、然后采用Bio-GelP6色谱柱分离纯化；
6)、收集峰尖部分，冻干即得硫酸半乳四糖。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010836045.8A CN111904968A (zh) | 2020-08-21 | 2020-08-21 | 硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010836045.8A CN111904968A (zh) | 2020-08-21 | 2020-08-21 | 硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111904968A true CN111904968A (zh) | 2020-11-10 |
Family
ID=73278517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010836045.8A Pending CN111904968A (zh) | 2020-08-21 | 2020-08-21 | 硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111904968A (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1183043A (zh) * | 1995-04-28 | 1998-05-27 | 澳大利亚国立大学 | 硫酸化低聚糖的制备方法和用途 |
-
2020
- 2020-08-21 CN CN202010836045.8A patent/CN111904968A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1183043A (zh) * | 1995-04-28 | 1998-05-27 | 澳大利亚国立大学 | 硫酸化低聚糖的制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| NA LI ET AL.: "Sequence analysis of the pyruvylated galactan sulfate-derived oligosaccharides by negative-ion electrospray tandem mass spectrometry" * |
| 刘凤健: "以半乳聚糖为原料制备半乳寡糖的研究" * |
| 周立民等: "上皮细胞黏附分子表达与乳腺癌病理分型及预后的相关性分析" * |
| 李娜: "叉枝松藻抗凝血多糖及其寡糖的制备和结构研究" * |
| 李娜: "松藻多糖的提取分离及结构与生物活性分析" * |
| 蔡芸等: "上皮细胞黏附因子及肿瘤相关糖蛋白-72在结肠癌中的表达及临床意义" * |
| 许华丽等: "上皮特异性黏附分子在肿瘤中的表达研究进展" * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102766184B (zh) | 原人参二醇过氧化衍生物及其制备方法与应用 | |
| CN105017368B (zh) | 人参二醇衍生物及其制备方法与应用 | |
| CN105949265A (zh) | 20(r)-人参三醇衍生物的制备方法与应用 | |
| Tuli et al. | Cordycepin: a cordyceps metabolite with promising therapeutic potential | |
| CN110066283B (zh) | 一种吲哚二酮哌嗪类生物碱及其制备方法和用途 | |
| CN109824686B (zh) | 鸟巢烷型二萜类化合物、制备方法及其应用 | |
| CN113603744A (zh) | 一种白桦脂酮酸衍生物及其制备方法 | |
| Tuli et al. | Cordycepin: A cordyceps metabolite with promising therapeutic potential | |
| CN111904968A (zh) | 硫酸半乳四糖及其衍生物在制备抗上皮细胞黏附药物中的应用 | |
| CN114716500A (zh) | 山楂酸葡萄糖苷及其合成方法与应用 | |
| CN102040569A (zh) | 类胡萝卜素衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN103214543A (zh) | 新山楂酸衍生物、其制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用 | |
| TWI518094B (zh) | One kind of derivatives of sterols, their preparation and use | |
| JPH07196686A (ja) | 化合物ｔａｎ−１７４６類、その製造法および用途 | |
| CN110882263B (zh) | 礁膜寡二糖在制备抗乳腺癌药物中的应用 | |
| CN111574486B (zh) | 香叶基三羟基色酮及其在制备肝x受体激动剂中的应用 | |
| CN108948109A (zh) | 雷酚内酯苷类化合物及其应用 | |
| WO2003006060A1 (fr) | Inhibiteurs de la liaison au domaine sh3 | |
| CN104447931A (zh) | 原人参三醇衍生物及其制备方法与应用 | |
| CN106660927A (zh) | 紫苏酸衍生物、用于制备紫苏酸衍生物的方法、药物组合物、紫苏酸衍生物的用途及癌症治疗方法 | |
| JPH07278041A (ja) | 抗腫瘍性物質ｂｅ−２４８１１及びその製造法 | |
| CN116693593A (zh) | 一种熊果酮酸衍生物、微生物转化制备方法及应用 | |
| WO1994018190A1 (en) | Depsidone compound | |
| EP0659431A1 (en) | Oncogene function-inhibitory alkaloid from Ervatamia microphylla | |
| JPS6043387A (ja) | 抗腫瘍性物質およびその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |