CN111825741A - 一种抗病毒的化合物及其制剂和合成方法 - Google Patents

Abstract

本发明“一种抑制病毒沉默抑制子的化合物及其合成方法和制剂”,属于制药技术，其结构如式(I)所示：

Description

一种抗病毒的化合物及其制剂和合成方法

技术领域

本发明涉及制药领域，具体地说，涉及一种抗病毒的化合物及其制剂和合成方法。

背景技术

植物病毒病是农作物的重要病害之一，每年给全球农业生产带来的经济损失高达数十亿美元。近年来，特别对于经济作物，植物病毒病的危害日益严重。如烟草病毒病，一旦发病，烟叶的质量至少下降2-3等级，严重时甚至完全失去经济价值，且由于极难防治，其所造成的经济损失已远远超过烟草真菌病，成为烟草生产上威胁最大的一类病害。

由于植物病毒侵染植物后是全面依赖寄主的代谢进行增殖，很难在不影响寄主正常代谢功能的情况下对病毒进行特异性的灭除，所以对于病毒病的防治极为困难。国内外已有的防治病毒药剂如宁南霉素、S-甲基苯并[1,2,3]噻二唑-7-硫代羧酸酯(BTH,syn.acibenzolar-S-methyl)等，主要通过诱导植物产生系统获得抗性(System acquiredresistance)起作用，效果较差且仅有预防作用。实际上，目前针对植物病毒有治疗效果的药剂寥寥无几。

近些年来发现的RNA沉默(RNA silencing)机制现已被认为是植物对抗病毒最主要也是最重要的防御机制。简单来说，即病毒侵染寄主后，其自身的核酸会引起植物产生针对该核酸特异性的降解，从而达到消灭病毒的目的。但类似于军备竞争，病毒也相应地进化出一种沉默抑制子(Viral RNA silencing suppressor)来抵挡植物RNA沉默这种防御手段。如马铃薯Y病毒、李痘病毒编码的Hc-Pro，黄瓜花叶病毒属编码的2b以及番茄丛矮病毒属编码的P19等。其作用机理主要是通过与在RNA沉默中起重要作用的小RNA结合来干扰整个沉默机制。

如果开发能有效抑制病毒沉默抑制子的药剂，将能有效治疗和控制病毒引起植物病害。

发明内容

基于上述领域的需求或空白，本发明的目的是根据最新病毒互作分子机制，提供一种具有精准分子靶标的高效新型抗病毒药剂。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

一种抗病毒的化合物，其结构式如式(I)所示；

其中，R选自氢、硝基、亚硝基、磺酸基、羧基、氨基或偶氮、卤原子、C1-10烷基、C2-10链烯基或C2-10链炔基中的一种，R的数目为1-5。

所述化合物，具有式(II)或(III)所示的结构：

一种抗病毒的药剂，其特征在于，其药效成分包含上述式(II)或(III)所示的化合物或其盐。

一种抗病毒的药剂，其特征在于,其药效成分为式(II)或(III)所示的化合物或其盐。

优选所述药剂为平均粒径在200-350nm之间的纳米溶液，优选210-340nm之间。

还包含药学上可接受的辅料。

所述病毒指含沉默抑制子Hc-Pro，2b或P19的病毒。

所述病毒是指含沉默抑制子Hc-Pro的马铃薯Y病毒，李痘病毒；含沉默抑制子2b的番茄不孕病毒，黄瓜花叶病毒属病毒；含沉默抑制子P19的香石竹意大利环斑病毒，番茄丛矮病毒属病毒。

本发明更重要的一方面，还提供了制备前述纳米溶液药剂的方法，其特征在于：将所述化合物或其盐分散于水中，并加入1-10倍当量的氢氧化金属盐，在30-90℃条件下加热搅拌30-300分钟，自然冷却至室温，加入反应体系体积的0.1％-10％的表面活性剂，使用超声波处理0-60min，即得纳米胶体水溶液，

所述表面活性剂选自：聚乙二醇、烷基葡糖苷，脂肪酸甘油酯，脂肪酸山梨坦，聚山梨酯、硬脂酸、十二烷基苯磺酸钠和卵磷脂。

一种预防或治疗植物病毒病害的方法，其特征在于，按时将含有式(II)或(III)所示的化合物或其盐的溶液或所述的药剂喷洒至待预防或治疗的植株表面。

所述溶液或药剂中含有的式(II)或(III)所示化合物或其盐的浓度为50-400ppm。

所述植物病毒病害指由含Hc-Pro抑制子，2b抑制子或P19抑制子的病毒所引起；

所述病毒病害是指由以下一种或多种病毒引起：含Hc-Pro抑制子的马铃薯Y病毒，李痘病毒；含2b抑制子的番茄不孕病毒，黄瓜花叶病毒属病毒；含P19抑制子的香石竹意大利环斑病毒，番茄丛矮病毒属病毒。

再一方面，本发明提供前述式(I)所示化合物的合成方法，其特征在于，所述R为羧基，在酯化反应条件下，使以下式(IV)所示化合物的3位羟基与苯甲酸衍生物上的羧基发生酯化反应并进行纯化回收，

所述苯甲酸衍生物选自邻位苯二甲酸，间位苯二甲酸，对位苯二甲酸，邻苯二甲酸酐，1,2,4-苯三甲酸，1,3,5-苯三甲酸，苯四甲酸，均苯四甲酸酐，苯五甲酸，苯六甲酸，苯六甲酸酐。

式(IV)所示化合物的合成方法属于本发明创新的一部分包含以下步骤：

在反应瓶容器中，将白桦醇溶于二氯甲烷中，加入三氟甲烷磺酸铋(Bi(OTf)3)，50摄氏度回流反应4小时；

反应结束后，冷却，用饱和碳酸氢钠洗3次，饱和氯化钠洗一次，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发得式(IV)所示化合物。

本发明的优选实施方案中，提供式(II)所示化合物的高效高产率合成方案,具体如下：

所述苯甲酸衍生物为邻苯二甲酸酐，所述酯化反应条件如下：

将式(IV)所示的化合物，4-二甲氨基吡啶和邻苯二甲酸酐溶于吡啶中，于100-140℃回流反应8-12小时，进行回收和纯化得到式(II)所示化合物，反应式如下：

其中式(IV)所示的化合物和邻苯二甲酸酐质量之和与溶剂吡啶的体积比例为5.35g：150ml；

且式(IV)所示的化合物与4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1：1～1：5

优选地，所述纯化回收步骤如下：

反应结束后，冷却后加入大量水，二氯甲烷萃取2-4次；10％盐酸洗2-4次，饱和食盐水洗1-3次，采用无水硫酸钠干燥；柱色谱分离得到式(II)所示化合物。

本发明的优选实施方案中，也提供式(III)所示化合物的高效高产率合成方案,具体如下：

所述苯甲酸衍生物为均苯四甲酸二酐，所述酯化反应条件如下：

将式(IV)所示的化合物溶于二氯甲烷中，加入均苯四甲酸二酐和N,N-二异丙基乙胺，40-60℃回流反应8-12小时，进行回收和纯化得到式(III)所示化合物，反应式如下：

优选地，式(IV)所示的化合物与均苯四甲酸二酐的摩尔比为1:1，

将式(IV)所示的化合物与均苯四甲酸二酐质量之和与溶剂二氯甲烷的体积比例为2.99g：200ml；

且式(IV)所示的化合物与N,N-二异丙基乙胺的质量体积比为2g：1.6ml。

优选地，所述纯化回收步骤如下：

将回流回收物加入到与所述二氯甲烷等体积的1mol/L稀盐酸中，搅拌至出现浑浊的沉淀，抽滤，水洗；将滤饼溶入所述二氯甲烷一半体积的醋酸溶液，加热到80-120℃后加与所述二氯甲烷等体积的水，冷却，抽滤，分别使用50％醋酸水溶液、甲醇、二氯甲烷洗涤，干燥得到式(III)所示化合物。

本发明提供一种新的化合物及合成方法和应用试剂,对多种病毒具有显著的抗病毒活性；其分子的水溶性好，仅需简单的步骤即可制备为具有均一粒径的纳米溶液，易于生物吸收，进一步显著提高了抗病毒活性。

本发明还提供上述新化合物的合成方法，步骤简单，产率理想。

表1至表4的示例性实验数据显示，本发明提供式(II)，式(III)化合物在植物细胞内能够发挥优良的抗病毒活性，而且通过本发明所提供的纳米溶液制备工艺所得的纳米制剂，在同浓度下，表现出显著提高的细胞内抗病毒活性。

附图说明

图1.示例性地显示：本发明化合物II的纳米溶液的激光纳米粒度仪测试结果；

图2.示例性地显示：本发明化合物III的纳米溶液的激光纳米粒度仪测试结果；

图3.为本发明实施例1中小分子药剂式(化合物II)应用于抑制沉默抑制子P19的活性检测EMSA试验

其中1泳道为阴性对照，只含有siRNA。2泳道为阳性对照，含siRNA与P19；3-9泳道为实验组，均含有siRNA、P19和实验药剂，浓度梯度为0.5、1、2、3、6、8、10ppm。

图4.为本发明实施例2中小分子药剂式(化合物III)应用于抑制沉默抑制子P19的活性检测EMSA试验。

其中1泳道为阳性对照，含siRNA与P19蛋白。2泳道为阴性对照，只含有siRNA。3-7泳道为实验组，均含有siRNA、P19和实验药剂，浓度梯度为10、5、2、1、0.5ppm。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1.本发明示例性化合物(II)的合成

步骤1.取500mL的反应瓶，将5g白桦醇(商购，商标：阿拉丁)溶于300mL二氯甲烷中，加入三氟甲烷磺酸铋(Bi(OTf)3)200mg，50摄氏度回流反应4小时；反应结束后，冷却，饱和碳酸氢钠洗3次，饱和氯化钠洗一次，无水硫酸钠干燥，旋蒸得式(IV)所示化合物的粗品，反应式如下：

步骤2.酯化反应:取500mL的反应瓶，将2g式(IV)所示化合物的粗品、4-二甲氨基吡啶(1.4g)和邻苯二甲酸酐(3.35g)溶于150mL吡啶中，120摄氏度回流反应10小时；

回收纯化：反应结束后，冷却，加入大量水，二氯甲烷萃取三次；10％盐酸洗三次，饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，柱色谱分离(二氯甲烷：甲醇＝40:1)，得到化合物如式(II)所示，根据产物摩尔量计算，产率达85％。

核磁氢谱(设备Bruker 400MHz；溶剂CDCl₃；Me₄Si)0.76(3H,s),0.84(3H,s),0.85(3H,s),0.91(3H,s),0.95(3H,s),0.97(6H,s),3.20(1H),3.44(1H,d),3.53(1H,s),3.78(1H,dd),7.49 9 3H,s),0.84(3H,s),0.8(1H,m),7.83831(3H,s),0.95＝589.4(M+H)⁺。

实施例2.本发明示例性化合物(III)的合成

步骤1.同实施例1.

步骤2.酯化反应：取500mL的反应瓶，将2g式(IV)所示粗品(4.52mmol)溶于200mL二氯甲烷中，加入0.99g均苯四甲酸二酐(4.52mmol)和1.6mL N,N-二异丙基乙胺，50摄氏度回流反应8小时。

反应式如下：

回收纯化：

回流回收物加入到200mL 1mol/L的稀盐酸中，搅拌至出现浑浊的沉淀，抽滤，水洗。

将滤饼溶于100mL的醋酸溶液，加热到100摄氏度，加入水200mL。冷却，抽滤，分别使用50％醋酸水溶液、甲醇、二氯甲烷洗涤，干燥，得化合物III，称重1.53g，根据产物摩尔量计算，产率为85％。

核磁氢谱(设备Bruker 400MHz；溶剂CDCl3；Me4Si)0.76(3H,s),0.84(3H,s),0.85(3H,s),0.91(3H,s),0.95(3H,s),0.97(6H,s),3.32(1H),3.44(1H,d),3.65(1H,s),4.66(1H,dd),7.49–7.61(2H,m),7.88(1H,s),7.98(1H,s).m/z＝678.4(M+H)+。

实施例3.本发明化合物的纳米溶液

纳米溶液制备步骤：准确称取实施例1或2所得式(II)和式(III)化合物20mg，KOH60mg，加入圆底烧瓶，再准确加入纯水10ml，55摄氏度度条件下加热搅拌1h，冷却至室温后，转入至密封瓶，并加入2ml司盘，超声15min，得到透明澄清的溶液，使用激光纳米粒度仪测试，如图1和图2所示，粒径均一，化合物II的平均粒径范围为337nm，化合物III的粒径210nm，即在水中的分散性非常好，具有良好的水溶性，利于生物吸收。

对照：式(IV)所示的化合物，虽然经过上述相同的纳米溶液制备步骤处理，但无法形成透明澄清的纳米溶液，而是生成白色沉淀。

实施例4.体外试验：式(II)所示化合物抑制沉默抑制子P19的活性检测

试剂：

P19：以本实验室保存的番茄丛矮病毒接种适龄烟草，七天后取症状明显的新鲜叶片提取总RNA，根据已知ORF设计上下游引物(Seq ID No.1和Seq ID No.2)，并以RNA为模板进行反转录PCR扩增出P19基因(约520bp)，克隆至原核表达载体pET-28a(+)。转化大肠杆菌DH5α，挑取菌落摇菌后送测序，挑选阳性克隆提取质粒并转化至大肠杆菌BL21，将经过验证含重组质粒的大肠杆菌BL21加入LB液体培养基37摄氏度隔夜震荡培养后，按1:100的比例加入250mL LB中，37摄氏度振荡培养至菌液OD600至0.5-0.6。取1mL菌液作为诱导前的对照，加入IPTG至终浓度为0.6mM，25℃继续震荡培养8-10h，保留1mL菌液作诱导后对照。

离心收集菌体后，-20摄氏度冻存。裂解菌体后，通过Ni-NTA方式纯化蛋白得P19，测定浓度后用Amicon Ultra超滤管将含高浓度咪唑的蛋白溶液换成1×PBS缓冲液，-20摄氏度冻存。

siRNA：

5'-21nt AGACACCAUUAUGCUGUCUUU(Seq ID No.1)

3'-21nt AGACAGCAUUAUGGUGUCUUU(Seq ID No.2)

合成自金斯瑞生物科技有限公司。

将(II)所示化合物应用于抑制沉默抑制子P19的活性检测凝胶电泳迁移试验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)

实验步骤:

将P19与式(II)所示化合物在结合缓冲液(购自北京碧云天生物技术有限公司，货号GS005)中混匀，室温下充分反应25分钟，其中P19浓度为2μM，式(II)所示化合物浓度为0.5-10ppm。

随后加入终浓度为50nM的siRNA，充分混匀后继续室温反应25分钟。

然后电泳转膜后显色观察结果，如图3所示：

显色结果中，只有siRNA能显示条带，并处于图下部位置(游离siRNA)。

沉默抑制子蛋白与siRNA结合后会使得siRNA电泳速率变慢，电泳距离变短，所以处于图上部位置(结合siRNA)。

而在加入式(II)所示化合物时，siRNA又恢复原有电泳速率，所以在图下方显示条带信号增强，说明加入的化合物能抑制该蛋白与siRNA结合。

图3中，1泳道为阴性对照，只含有siRNA。2泳道为阳性对照，含siRNA与P19。3-9泳道为实验组，均含有siRNA、P19和浓度梯度为0.5、1、2、3、6、8、10ppm的小分子药剂(式(II)所示化合物)。可以看出，阴性对照组条带均出现于图下部游离siRNA位置。阳性对照加入抑制子蛋白之后，部分siRNA与蛋白结合，显示于图上部结合siRNA的条带。

而当加入浓度递增的小分子药剂时，图上部的条带逐渐减弱，说明该小分子药剂能有效阻止沉默抑制子蛋白与siRNA的结合反应。如图3所示,10ppm浓度的该小分子药剂即能良好抑制2μM浓度的P19与siRNA的结合反应。

对其它沉默抑制子如Hc-Pro，2b的实验中，同样得到类似如图3所示的结果。

实施例5.体外试验：式(III)所示化合物抑制沉默抑制子P19的活性检测

将该小分子药剂应用于抑制沉默抑制子P19的活性检测凝胶电泳迁移试验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)，其结果如图4所示。将P19与该小分子药剂在结合缓冲液中混匀，室温下充分反应25分钟。其中P19浓度为2μM，该小分子药剂浓度为0.5-10ppm。随后加入终浓度为50nMsiRNA，充分混匀后继续室温反应25分钟。然后电泳转膜后显色观察结果。显色结果中，只有siRNA能显示条带，并处于图下部位置(游离siRNA)。沉默抑制子蛋白与siRNA结合后会使得siRNA电泳速率变慢，电泳距离变短，所以处于图上部位置(结合siRNA)。而当加入化合物且能抑制该蛋白与siRNA结合时，siRNA又恢复原有电泳速率，所以在图下方显示条带信号增强。

图4中，1泳道为阳性对照，含siRNA与P19蛋白。2泳道为阴性对照，只含有siRNA。3-7泳道为实验组，均含有siRNA、P19和小分子药剂，浓度梯度为10、5、2、1、0.5ppm。可以看出，阴性对照组条带均出现于图下部游离siRNA位置。阳性对照加入抑制子蛋白之后，部分siRNA与蛋白结合，显示于图上部结合siRNA的条带。而当加入浓度递增的小分子药剂时，图上部的条带逐渐减弱，说明该小分子药剂能有效阻止沉默抑制子蛋白与siRNA的结合反应。如图4所示，10ppm浓度的该小分子药剂即能良好抑制2μM浓度的P19与siRNA的结合反应。

对其它沉默抑制子如Hc-Pro，2b的实验中，同样得到如图4所示的类似结果。

实施例6.本发明化合物对植物病毒的防治效果

选4-5叶期，长势相近的本氏烟，用30mL双蒸水充分研磨症状明显的0.15g新鲜病叶，0.5％病毒接种液通过硅藻土摩擦接种，每株接种2片叶。

治疗组：

150ppm纳米溶液和非纳米溶液治疗组，300ppm纳米溶液和非纳米溶液治疗组：接种后4天、11天，喷药。

预防组：

150ppm纳米溶液和非纳米溶液预防组，300ppm纳米溶液和非纳米溶液预防组：先用药剂对植株喷药，4天后接种病毒，接种7天后第二次喷药。

每浓度处理组设20株。接种后第7、10、15天计算防治效果，调查结果见表1-4：

a.CMV病情分级标准:

0级—无症状。

1级—接种叶出现轻微症状。

2级—一至两片系统叶片明脉、变形。

3级—多数上部叶片花叶、萎黄或变形。

4级—全株叶片花叶、严重变形或坏死，病株矮化严重。

b.病情指数

病情指数＝[∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶片数×4)]×100％。

c.防治效果

防治效果(％)＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100％

表1 式(II)所示化合物防治CMV效果统计结果

表2 式(III)所示化合物防治CMV效果统计结果

a.TBSV病情分级标准:

0级—无症状。

1级—接种叶出现轻微症状。

2级—一至两片系统叶片明脉、变形。

3级—多数上部叶片变形或主侧脉坏死，病株矮化。

4级—全株植株严重变形或坏死。

b.病情指数

病情指数＝[∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶片数×4)]×100％。

c.防治效果

防治效果(％)＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100％

表3 式(II)所示化合物防治TBSV效果统计结果

表4 式(III)所示化合物防治TBSV效果统计结果

表1至表4的示例性实验数据显示，本发明提供式II,式III化合物对病毒在植物细胞内能够发挥优良的抗病毒活性，而且通过本发明所提供的纳米溶液制备工艺所得的纳米制剂，在同浓度下，表现出显著提高的细胞内抗病毒活性。

Claims (13)

1.一种化合物，其结构式如式(I)所示；

其中，R选自氢、硝基、亚硝基、磺酸基、羧基、氨基或偶氮、卤原子、C1-10烷基、C2-10链烯基或C2-10链炔基中的一种，R的数目为1-5。

2.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(II)或(III)所示的结构：

3.一种抗病毒的药剂，其特征在于，其药效成分包含权利要求1或2所述的化合物或其盐。

4.一种抗病毒的药剂，其特征在于,其药效成分为权利要求1或2所述的化合物或其盐。

5.根据权利要求3或4所述的药剂，其特征在于,所述药剂为平均粒径在200-350nm之间的纳米溶液，优选210-340nm之间。

6.根据权利要求5所述药剂，其特征在于,所述病毒是指含沉默抑制子Hc-Pro的马铃薯Y病毒，李痘病毒；含沉默抑制子2b的番茄不孕病毒，黄瓜花叶病毒属病毒；含沉默抑制子P19的香石竹意大利环斑病毒，番茄丛矮病毒属病毒。

7.权利要求5所述药剂的制备方法，其特征在于：将权利要求1或2所述的化合物或其盐分散于水中，并加入1-10倍当量的氢氧化金属盐，在30-90℃条件下加热搅拌30-300分钟，自然冷却至室温，加入反应体系体积的0.1％-10％的表面活性剂，使用超声波处理0-60min，即得纳米胶体水溶液，

所述表面活性剂选自：聚乙二醇、烷基葡糖苷，脂肪酸甘油酯，脂肪酸山梨坦，聚山梨酯、硬脂酸、十二烷基苯磺酸钠和卵磷脂。

8.一种预防或治疗植物病毒病害的方法，其特征在于，按时将含有权利要求1或2所述的化合物或其盐的溶液或权利要求3-7任一所述的药剂喷洒至待预防或治疗的植株组织上。

9.式(IV)所示化合物的合成方法，其特征在于：

在反应瓶容器中，将白桦醇溶于二氯甲烷中，加入三氟甲烷磺酸铋(Bi(OTf)3)，50摄氏度回流反应4小时；

反应结束后，冷却，分别用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤，然后干燥得式(IV)所示化合物。

优选地，将5g白桦醇溶于300mL二氯甲烷中，加入200mg三氟甲烷磺酸铋(Bi(OTf)3)，50摄氏度回流反应4小时；反应结束后，冷却，用饱和碳酸氢钠洗3次，饱和氯化钠洗1次，采用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发得式(IV)所示化合物

10.式(I)所示化合物的合成方法，其特征在于，所述R为羧基，在酯化反应条件下，使式(IV)所示化合物的3位羟基与苯甲酸衍生物上的羧基发生酯化反应并进行纯化回收，

所述苯甲酸衍生物选自邻位苯二甲酸，间位苯二甲酸，对位苯二甲酸，邻苯二甲酸酐，1,2,4-苯三甲酸，1,3,5-苯三甲酸，苯四甲酸，均苯四甲酸酐，苯五甲酸，苯六甲酸，苯六甲酸酐；

所述苯甲酸衍生物为邻苯二甲酸酐，所述酯化反应条件如下：

将式(IV)所示的化合物，4-二甲氨基吡啶和邻苯二甲酸酐溶于吡啶中，于100-140℃回流反应8-12小时，进行回收和纯化得到式(II)所示化合物，反应式如下：

11.根据权利要求10所述的合成方法，

其中式(IV)所示的化合物和邻苯二甲酸酐质量之和与溶剂吡啶的体积比例为5.35g：150ml；

且式(IV)所示的化合物与4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1：1～1：5

优选地，所述纯化回收步骤如下：

反应结束后，冷却后加入大量水，二氯甲烷萃取2-4次；10％盐酸洗2-4次，饱和食盐水洗1-3次，采用无水硫酸钠干燥；柱色谱分离得到式(II)所示化合物。

12.根据权利要求10所述的合成方法，其特征在于：所述苯甲酸衍生物为均苯四甲酸二酐，所述酯化反应条件如下：

将式(IV)所示的化合物溶于二氯甲烷中，加入均苯四甲酸二酐和N,N-二异丙基乙胺，40-60℃回流反应8-12小时，进行回收和纯化得到式(IV)所示化合物，反应式如下：

13.根据权利要求13所述的合成方法，

式(IV)所示的化合物与均苯四甲酸二酐的摩尔比为1:1，

将式(IV)所示的化合物与均苯四甲酸二酐质量之和与溶剂二氯甲烷的体积比例为2.99g：200ml；

且式(IV)所示的化合物与N,N-二异丙基乙胺的质量体积比为2g：1.6ml。

优选地，所述纯化回收步骤如下：

将回流回收物加入到与所述二氯甲烷等体积的1mol/L稀盐酸中，搅拌至出现浑浊的沉淀，抽滤，水洗；将滤饼溶于所述二氯甲烷一半体积的醋酸溶液，加热到80-120℃后加与所述二氯甲烷等体积的水，冷却，抽滤，分别使用50％醋酸水溶液、甲醇、二氯甲烷洗涤，干燥得到式(III)所示化合物。

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