CN109053839A - 核苷修饰物3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷的新型制备方法 - Google Patents
核苷修饰物3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷的新型制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及核苷修饰物3’‑O‑CH2N3‑2’‑O‑Me‑胞嘧啶核苷的新型制备方法。本发明的方法以天然核苷修饰物2’‑O‑Me‑N4‑Bz‑胞嘧啶核苷为原料,首先通过与硅烷化试剂反应,将5’‑OH进行硅烷化保护;之后与乙酸酐反应获得中间体3’‑O‑CH2SCH3‑2’‑O‑Me‑N4‑Bz‑胞嘧啶核苷;接着用磺酰氯处理,得到关键中间体3’‑O‑CH2Cl‑2’‑O‑Me‑N4‑Bz‑胞嘧啶核苷;然后经过叠氮化取代,脱保护等工艺处理,高收率,高选择性地生成期望的新型核苷修饰物3’‑O‑CH2N3‑2’‑O‑Me‑胞嘧啶核苷。本发明的方法简便、经济,可实现大规模生产。
Description
技术领域
本发明属于核苷化合物合成领域,更具体地,本发明涉及一种新型核苷修饰物3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷的制备方法。
背景技术
近年,随着基因组创药的发展,反义寡核苷酸药物被急速开发,究其原因在于其较传统药物来讲具有以下几点优势:1)特异性较强。一个15聚体的反义寡核苷酸含有30-45氢键,而低分子的传统药物(200-600u)与靶点一般只形成1-4个键;2)信息量较大。遗传信息从DNA-RNA-蛋白质,用互补寡核苷酸阻断某种蛋白的合成是很准确的;3)反义药物以核酸为靶点,与蛋白质作为靶点比较,更易合理设计新药物。由于作用于遗传信息传递的上游,所需药量较低,副作用可能较少。
随着技术研究的推进,对反义药物的研究正兴盛起来。国内已有数家科研单位正在开展反义药物的研究,并已有若干反义寡核苷酸产品处在临床前试验阶段,相信国产反义药物有望在未来5~8年内上市并造福于国内广大患者。
但是,目前反义药物的工业化合成工艺进行仍处于初级阶段,而实验室规模的工艺制备,无法满足工业化要求。
因此,本领域迫切需要提供有效且无需特别设备,适合大规模工业化生产反义药物或其前期合成原料的技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型核苷修饰物3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷的制备方法。
在本发明的第一方面,提供一种制备式I所示核苷修饰化合物的方法,
所述的方法包括:
(1)以2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷(化合物F)作为原料,与硅烷化试剂反应,选择性地将5’-OH进行硅烷化保护,获得中间体E;
其中,R1为硅烷化保护基团;
(2)将(1)的中间体E与乙酸酐(Ac2O)于DMSO中进行反应,单一性地修饰3’-OH基团,得到中间体D;
(3)将(2)的中间体D与磺酰氯进行反应,单一性地修饰3’-O-CH2SCH3基团,得到中间体C;
(4)将(3)的中间体C与叠氮化试剂进行反应,单一性地修饰3’-O-CH2Cl基团,得到叠氮基取代的中间体B;
(5)将(4)的中间体B脱除保护基,从而得到目标化合物A;
在一个优选例中,(1)中,所述的硅烷化试剂为R1-Cl,选自:TMS-Cl,TBDMS-Cl,TBDPS-Cl或其组合,优选地为TBDMS-Cl;较佳地,2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷与R1-Cl按照摩尔比为1∶1.0-3.0(较佳地为1∶1.2-2.0;最佳地为1∶1.5);或
将5’-OH进行硅烷化保护在溶剂1中进行,所述的溶剂1选自:吡啶,二氯甲烷/三乙胺,乙腈/三乙胺;优选地为吡啶;较佳地,按照重量体积比溶剂1的用量为2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷的5~10倍。
在另一优选例中,(1)中,进行硅烷化保护后,还包括进行结晶处理的步骤以纯化所述的中间体E;较佳地,以乙酸乙酯/正庚烷作为溶剂进行结晶;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷重量的5~10倍。
在另一优选例中,(1)中,2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷以溶剂1溶解后减压带水,之后在60℃,进一步加入溶剂1溶解,搅拌、降温至0±2℃,加入硅烷化试剂进行反应。
在另一优选例中,(1)中,进行硅烷化保护后、结晶之前,还包括进一步处理及萃取的步骤;较佳地,该步骤包括:向反应体系中加入乙醇搅拌,之后加入NaHCO3,搅拌,之后减压浓缩,溶于乙酸乙酯后,以盐水萃取后去水相,有机相进行干燥和过滤,乙酸乙酯淋洗,之后减压浓缩干。
在另一优选例中,(2)中,乙酸酐的用量为中间体E的5~10倍摩尔当量;或所述的中间体E与乙酸酐在溶剂2中反应,同时加入DMSO,所述溶剂2为醋酸;较佳地,DMSO的用量为中间体E的20~30倍摩尔当量;较佳地,按照重量体积比溶剂2的用量为中间体E的5~10倍。
在另一优选例中,(2)中,进行反应后,还包括进行结晶处理的步骤,以纯化所述的中间体D;较佳地,以乙酸乙酯/正庚烷作为结晶的溶剂;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为中间体E的5~10倍。
在另一优选例中,(2)中,化合物E以DMSO和AcOH溶解,冷却、搅拌,加入乙酸酐,控制加入速度使得温度小于40℃;加完后在45±2℃搅拌,反应10~15小时。
在另一优选例中,(2)中,反应后、结晶之前,还包括进一步处理及萃取的步骤;较佳地,该步骤包括:反应体系降温至20±5℃;以乙酸乙酯稀释后以氯化钠萃取,合并水相;以乙酸乙酯反萃取,合并有机相;干燥、过滤、淋洗固体;之后减压浓缩干。
在另一优选例中,(3)中,中间体D和磺酰氯的摩尔比为1∶1.0-3.0(较佳地为1∶1.5-2.5;最佳地为1∶2.0)。
在另一优选例中,中间体D与磺酰氯在溶剂3中反应,所述的溶剂3为二氯甲烷/环己烯;较佳地,二氯甲烷的用量为中间体D重量体积比的5~10倍,环己烯的用量为中间体D重量体积比的1~2倍。
在另一优选例中,(3)中,中间体D先用溶剂3溶解,再加入环己烯,加完后降温至-5±5℃;以二氯甲烷稀释磺酰氯后加入反应体系,控制温度0℃以下;加完后在0±5℃下搅拌反应。
在另一优选例中,(4)中,所述叠氮化试剂选自:叠氮化钠,叠氮化锂,TMS-N3或其组合;优选叠氮化钠;较佳地,中间体C和叠氮化试剂的摩尔比为1∶3.0-10.0(较佳地为1∶4.0-6.0;最佳地为1∶5.0)。
在另一优选例中,中间体C与叠氮化试剂在溶剂4中进行反应;较佳地,溶剂4选自:DMF,DMSO,乙腈或其组合;优选DMF;较佳地,按照重量体积比,溶剂4的用量为中间体C的5~10倍。
在另一优选例中,(4)中,进行反应后,还包括进行结晶处理的步骤,以纯化所述的中间体B;较佳地,以乙酸乙酯/正庚烷作为结晶的溶剂;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为中间体C的5~10倍。
在另一优选例中,(4)中,在(3)的反应产物中加入叠氮化试剂,于30±2℃搅拌反应2±1小时。
在另一优选例中,(4)中,反应后、结晶之前,还包括进一步处理及萃取的步骤;较佳地,该步骤包括:反应体系以乙酸乙酯稀释,以氯化钠萃取,合并水相,以乙酸乙酯反萃取,合并有机相,进一步再以氯化钠萃取以及以乙酸乙酯反萃取,合并有机相;干燥;过滤;淋洗固体;之后减压浓缩干。
在另一优选例中,(5)中,中间体B与碱性试剂进行反应以脱去保护基;较佳地,所述碱性试剂选自:氢氧化钠,氢氧化钾或其组合;更佳地,所述碱性试剂的用量为化合物B的5~10倍摩尔当量;或
中间体B与碱性试剂在溶剂5中进行反应,所述溶剂5选自:水/甲醇,水/乙醇,水/THF;优选地为水/乙醇;较佳地,重量体积比溶剂5的用量为化合物B的5~10倍,其中有机溶剂占比为50~90%。
在另一优选例中,(5)中,进行反应后,还包括进行结晶处理的步骤,以纯化所述的化合物A;较佳地,进行结晶的溶剂选自:乙醇,甲醇,乙腈或其组合;优选乙醇;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为化合物B的8~10倍。
在另一优选例中,(5)中,将化合物B加入乙醇和水中搅拌溶解,降温至20±5℃,加入碱性试剂,在25±2℃搅拌反应。
在另一优选例中,(5)中,反应后、结晶之前,还包括进一步后处理的步骤;较佳地,该步骤包括:将反应体系调节pH为7~8,于45±2℃减压浓缩;以水复溶;脱盐;减压浓缩。
在本发明的另一方面,提供一种化合物,其结构式如式A所示:
在一个优选例中,所述的化合物由所述方法制备获得。
在本发明的另一方面,提供所述的化合物的用途,用于合成反义寡核苷酸。
本发明的其它方面由于本文的公开内容,对本领域的技术人员而言是显而易见的。
具体实施方式
发明人经过广泛的研究和试验,首次发现使用现有的天然核苷修饰物2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷作为起始原料,经由一系列的反应,可以简便、经济地大量合成新型核苷修饰物3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷。本发明的方法无需特别设备,适合于大规模工业化生产。
本发明的方法中,以2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷为原料,首先,将之与硅烷化试剂反应,选择性地将5’-OH进行硅烷化保护;接着,以乙酸酐与反应理,得到中间体3’-O-CH2SCH3-2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷;然后,用磺酰氯处理该中间体,从而得到关键中间体3’-O-CH2Cl-2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷;接着经过叠氮化取代、脱保护等工艺处理,高收率、高选择性地生成新型核苷修饰物3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷(化合物A)。
本发明中,所述的3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷的结构如下式A:
首先,本发明提供了一种式B所示的中间体化合物的制备方法,该化合物具有如下式B所示的结构式:
所述的式B化合物可通过如下合成路线制备获得:
更进一步地,本发明提供了一种适合工业化生产制备3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷(式A化合物)的方法,合成路线如下:
作为本发明的优选方式,所述的硅烷化试剂为R1-Cl,选自:TMS-Cl,TBDMS-Cl,TBDPS-Cl或其组合,优选地为TBDMS-Cl。
作为本发明的优选方式,所述化合物F和硅烷化试剂R1-Cl的摩尔比为1∶1.0-3.0;较佳地为1∶1.2-2.0;最佳地为1∶1.5。
作为本发明的优选方式,乙酸酐的用量为中间体E的5~10倍摩尔当量。
作为本发明的优选方式,所述中间体D和磺酰氯的摩尔比为1∶1.0-3.0;较佳地为1∶1.5-2.5;最佳地为1∶2.0。
作为本发明的优选方式,所述中间体C和叠氮化试剂的摩尔比为1∶3.0-10.0;较佳地为1∶4.0-6.0;最佳地为1∶5.0。
本发明涉及的各步骤的合成反应中,还包括应用各种溶剂来溶解各组分。
作为本发明的优选方式,所所述的溶剂1选自:吡啶,二氯甲烷/三乙胺,乙腈/三乙胺;R1-Cl试剂选自:TMS-Cl;TBDMS-Cl,TBDPS-Cl;应理解,溶剂1以及R1-Cl试剂可以应用本领域技术人员熟悉的那些,只要能够实现溶解反应物且缚酸作用,同时不与R1-Cl起反应的溶剂均是可以用于本发明中的。作为本发明的优选方式,所述的溶剂1试剂吡啶,R1-Cl为TBDMS-Cl;结晶溶剂体系为:乙酸乙酯/正庚烷。
作为本发明的优选方式,所所述的溶剂2为醋酸。更优选地,反应温度为40~45℃。
作为本发明的优选方式,所述的溶剂3为二氯甲烷/环己烯。更优选地,反应温度为-5~5℃;
作为本发明的优选方式,所述的溶剂4选自:DMF,DMSO,乙腈;优选DMF;叠氮化试剂选自:叠氮化钠,叠氮化锂,TMS-N3;优选叠氮化钠。更优选地,反应温度为30~35℃。
作为本发明的优选方式,在反应体系中生成中间体E、中间体D、中间体B的之后,还包括:进行萃取和/或纯化的步骤,以提高后续反应的反应效率,获得良好的后产物。较佳地,所述的纯化为结晶纯化。
作为本发明的优选方式,在进行碱解反应生成化合物A之后,还包括步骤:在获得了式A的化合物粗品之后,还通过结晶工序,进而获得高纯度的式A化合物。应理解,尽管本发明中提供了优选的结晶溶剂体系,但本领域已知的一些可替代溶剂体系也是可用于式A化合物的纯化的。
作为本发明的优选方式,反应在惰性气体(更佳地为氩气或氮气)氛围下进行。
作为本发明的优选方式,所述的方法的步骤(2)中,反应温度为40~45℃。
作为本发明的优选方式,所述的方法的步骤(3)中,反应温度为-5~5℃。
作为本发明的优选方式,所述的方法的步骤(4)中,反应温度为30±2℃。
作为本发明的优选方式,所述的方法的步骤(5)中,反应温度为25±2℃。
在本发明的具体实施例中,提供了一种式A化合物的制备方法,包括步骤:
第一步,将化合物F溶于吡啶体系中,降温至0℃左右,然后加入R1-Cl试剂,制得中间体E粗品;经结晶纯化处理后,得到中间体E纯品。
第二步,将中间体E溶于DMSO/醋酸体系中,然后控温40℃以下滴加入乙酸酐;然后45±2℃下搅拌反应,制得中间体D粗品;经结晶纯化处理后,得到中间体D纯品。
第三步,将制得中间体D溶于二氯甲烷/环己烯体系中,然后降温至0±5℃后,滴加入磺酰氯,然后于0±5℃下搅拌反应,制得化合物C粗品;
第四步,将浓缩后的化合物C粗品溶于DMF中,加入叠氮化试剂,然后于30±2℃下搅拌反应,制得化合物B粗品;经结晶纯化处理后,得到化合物B纯品。
第五步,将化合物B溶于溶剂5中,加入碱试剂,然后于25±2℃下搅拌反应,制得化合物A粗品;经结晶纯化处理后,得到化合物A纯品。
据此,本发明提供了有效且无需特别设备,适合大规模工业化生产,可得到高纯度3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷(式A化合物)的制备方法,可满足市场的需求。
本发明还提供了新型化合物3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷,其可作为合成新型反义寡核苷酸的基础原料,可被应用于反义寡核苷酸的合成领域。
并且,除可作为药物开发工具外,3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷还可用于科学研究,特别是功能基因组学研究。
本发明提到的上述特征,或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用,说明书中所揭示的各个特征,可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明,所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,实施例中的定义各试剂的量的百分比(%)是质量体积比(w/v)。
本发明下述实施例中的HPLC(高效液相色谱)条件:
柱:YMC-AQ C18 5μm 4.6*250mm
流速:0.8mL/min
波长:260nm
流动相:A液:TEAA缓冲液(0.1摩尔/升的乙酸水溶液用三乙胺调至PH=7.0)。B液:色谱级乙腈。分析过程中A液,B液在线脱气,氦气流速50ml/min。
梯度:
时间(min) | A% | B% |
0 | 100 | 0 |
4 | 100 | 0 |
8 | 20 | 80 |
16 | 20 | 80 |
20 | 100 | 0 |
30 | 100 | 0 |
实施例1、中间体E的制备
将20Kg化合物F(2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷,CAS:52571-45-6)用200L吡啶(Py)溶解后减压带水一次,水浴设温60℃。然后再次加入200L吡啶将浓缩剩余物溶解,然后溶液搅拌降温至0±2℃,体系中加入10.9KgTBDMS-Cl。加完后,体系维温0±2℃下搅拌反应,20小时后,取样HPLC监控,原料剩余0.2%,结束反应。向釜中加入乙醇5L,加完后,搅拌10~30分钟;再向体系中加入10.93Kg NaHCO3固体,体系于25±10℃下搅拌2~5小时。然后将体系于50±2℃下减压浓缩至不滴为止。浓缩剩余物溶于200L乙酸乙酯,体系用200L饱和盐水萃取三次,水相弃去。有机相用20Kg无水Na2SO4干燥后,过滤,用20L乙酸乙酯淋洗,后滤液于45±2℃下减压浓缩干。用100L乙酸乙酯于70℃下溶解固体,然后加入100L正庚烷,体系先于25±5℃下搅拌2小时,然于0±5℃下搅拌结晶12小时。过滤,固体用20L乙酸乙酯/正庚烷=5/5的混合液淋洗,固体干燥后,得23.6Kg中间体E,HPLC纯度99.2%。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.21(s,1H),8.32(d,J=7.0Hz,1H),8.01(d,J=7.0Hz,2H),7.63-7.60(m,1H),7.52-7.49(m,2H),7.37(d,J=5.0Hz,1H),5.88(d,J=3.5Hz,1H),5.14(d,J=6.5Hz,1H),4.30-4.27(m,1H),4.05-4.00(m,2H),3.55-3.53(m,1H),3.46-3.42(m,1H),3.29(s,3H),0.88(s,9H)0.09(s,6H).
实施例2、中间体D的制备
将10Kg中间体E置于反应釜中,加入46.2Kg DMSO和44.1Kg AcOH将其溶解,循环水冷却下搅拌,再加入20.7Kg Ac2O,控制加入速度,控制内温小于40℃。加完后控温45±2℃下搅拌,反应12小时后,取样HPLC,原料剩余0.5%,结束反应。反应完后,体系降温至20±5℃。体系用100L乙酸乙酯稀释后用10%氯化钠水溶液100L*6萃取六次,水相合并后用10L乙酸乙酯反萃一次后弃去,合并乙酸乙酯相,用5%碳酸氢钠水溶液100L*6萃取六次,水相合并后用10L乙酸乙酯反萃一次后弃去。合并有机相,用10KgNa2SO4干燥后,过滤,10L乙酸乙酯淋洗固体,滤液于50±2℃下减压至不滴为止,然后加入20L乙酸乙酯于75±2℃下溶解,然后加入80L正庚烷。体系于20±5℃下搅拌至有固体析出后静置12小时后过滤,固体用5L乙酸乙酯/正庚烷=2/8的混合溶液淋洗,固体干燥后,得10.6Kg中间体D,HPLC纯度99.5%。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.20(s,1H),8.30(d,J=7.0Hz,1H),8.00(m,2H),7.64-7.60(m,1H),7.53-7.51(m,2H),7.35(m,1H),6.21(d,J=3.5Hz,1H),4.68(d,J=6.5Hz,1H),4.60(d,J=6.5Hz,1H),4.25-4.22(m,1H),4.03-3.99(m,2H),3.53-3.51(m,1H),3.45-3.43(m,1H),3.29(s,3H),2.13(s,3H),0.88(s,9H)0.09(s,6H).
实施例3、化合物C的制备
将6.5Kg中间体D置于反应釜中,用65L二氯甲烷溶解,再加入6.5L环己烯,加完后降温至-5±5℃下搅拌,3.47Kg SO2Cl2先用15L二氯甲烷稀释后滴加入釜中,控内温0度以下。滴完后于0±5℃下搅拌反应2小时后,取样HPLC监控,原料剩余0.8%,结束反应。将体系于10±2℃下减压浓缩至不滴为止,然后再加入65L的DMF体系再于10±2℃下减压浓缩20分钟,去除干净二氯甲烷,制得化合物C粗品,无需纯化,直接用于下一步反应。
实施例4、化合物B的制备
向上一步反应釜中一次性加入4.69Kg NaN3,然后体系于30±2℃下搅拌反应。反应2小时后,取样HPLC监控,原料化合物C剩余0.2%,结束反应。反应完后,体系用130L乙酸乙酯稀释。体系用10%氯化钠水溶液65L*6萃取六次,水相合并后用10L乙酸乙酯反萃一次后弃去。合并乙酸乙酯相,用10%氯化钠水溶液65L*4再次萃取四次,水相合并后用10L乙酸乙酯反萃一次后弃去。合并有机相,用6.5Kg Na2SO4干燥后,过滤,用10L乙酸乙酯淋洗固体,滤液于45±2℃下减压至不滴为止。然后加入32.5L乙酸乙酯于75±2℃下溶解,然后加入32.5L正庚烷。体系于20±5℃下搅拌至有固体析出后静置12小时后过滤,固体用5L乙酸乙酯/正庚烷=5/5的混合溶液淋洗,固体干燥后,得6.1Kg化合物B,HPLC纯度99.4%。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.22(s,1H),8.31(d,J=7.0Hz,1H),8.02(m,2H),7.63-7.60(m,1H),7.55-7.52(m,2H),7.33(m,1H),6.24(d,J=3.5Hz,1H),4.76(d,J=9.0Hz,1H),4.62(d,J=9.0Hz,1H),4.21-4.17(m,2H),4.13-4.11(m,1H),4.08-4.06(m,1H),4.03-4.00(m,1H),3.27(s,3H),0.87(s,9H)0.09(s,6H).
实施例5、化合物A的制备
将6Kg化合物B置于反应釜中,加入48L乙醇和12L去离子水,搅拌溶解,降温至20±5℃,然后加入2Kg NaOH固体。加完后,体系于25±2℃下搅拌,反应2小时后,取样HPLC,原料化合物B剩余0.31%,结束反应。将体系pH值用6N盐酸调节至7-8后,反应液于45±2℃下减压浓缩至不滴为止。剩余物用120L去离子水复溶后,用脱盐膜反复脱盐四次,去除生成的氯化钠,然后于45±2℃下减压浓缩干,剩余物用30L无水乙醇于75±2℃下搅拌溶解,然后体系于20±5℃下搅拌至有固体析出后静置2小时后,于0±5℃下搅拌12小时后过滤,固体用3L乙醇淋洗,固体干燥后,得2.8Kg化合物A,HPLC纯度99.6%。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):11.25(s,1H),8.49(d,J=7.5Hz,1H),7.97(m,2H),7.64-7.60(m,2H),7.54-7.51(m,2H),6.22(d,J=3.5Hz,1H),4.78(s,2H),4.31-4.27(m,2H),4.23-4.21(m,1H),4.16-4.13(m,1H),4.11-4.08(m,1H),3.26(s,3H).
实施例6、3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷合成下游产品的工艺
利用3’-O-CH2N3-2’-O-Me-胞嘧啶核苷合成下游产品的主要工艺流程如下:
根据以上工艺流程,获得有用的下游产物,应用于反义寡核苷酸药物领域。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并非用以限定本发明的实质技术内容范围,本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中,任何他人完成的技术实体或方法,若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同,也或是一种等效的变更,均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
Claims (13)
1.一种制备式I所示核苷修饰化合物的方法,
其特征在于,所述的方法包括:
(1)以2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷作为原料,与硅烷化试剂反应,选择性地将5’-OH进行硅烷化保护,获得中间体E;
其中,R1为硅烷化保护基团;
(2)将(1)的中间体E与乙酸酐于DMSO中进行反应,单一性地修饰3’-OH基团,得到中间体D;
(3)将(2)的中间体D与磺酰氯进行反应,单一性地修饰3’-O-CH2SCH3基团,得到中间体C;
(4)将(3)的中间体C与叠氮化试剂进行反应,单一性地修饰3’-O-CH2Cl基团,得到叠氮基取代的中间体B;
(5)将(4)的中间体B脱除保护基,从而得到目标化合物A;
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(1)中,所述的硅烷化试剂为R1-Cl,选自:TMS-Cl,TBDMS-Cl,TBDPS-Cl或其组合,优选地为TBDMS-Cl;较佳地,2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷与R1-Cl按照摩尔比为1∶1.0-3.0;或
将5’-OH进行硅烷化保护在溶剂1中进行,所述的溶剂1选自:吡啶,二氯甲烷/三乙胺,乙腈/三乙胺;优选地为吡啶;较佳地,按照重量体积比溶剂1的用量为2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷的5~10倍。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(1)中,进行硅烷化保护后,还包括进行结晶处理的步骤以纯化所述的中间体E;较佳地,以乙酸乙酯/正庚烷作为溶剂进行结晶;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为2’-O-Me-N4-Bz-胞嘧啶核苷重量的5~10倍。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(2)中,乙酸酐的用量为中间体E的5~10倍摩尔当量;或
所述的中间体E与乙酸酐在溶剂2中反应,同时加入DMSO,所述溶剂2为醋酸;较佳地,DMSO的用量为中间体E的20~30倍摩尔当量;较佳地,按照重量体积比溶剂2的用量为中间体E的5~10倍。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(2)中,进行反应后,还包括进行结晶处理的步骤,以纯化所述的中间体D;较佳地,以乙酸乙酯/正庚烷作为结晶的溶剂;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为中间体E的5~10倍。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(3)中,中间体D和磺酰氯的摩尔比为1∶1.0-3.0;或
中间体D与磺酰氯在溶剂3中反应,所述的溶剂3为二氯甲烷/环己烯;较佳地,二氯甲烷的用量为中间体D重量体积比的5~10倍,环己烯的用量为中间体D重量体积比的1~2倍。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(4)中,所述叠氮化试剂选自:叠氮化钠,叠氮化锂,TMS-N3或其组合;优选叠氮化钠;较佳地,中间体C和叠氮化试剂的摩尔比为1∶3.0-10.0;或
中间体C与叠氮化试剂在溶剂4中进行反应;较佳地,溶剂4选自:DMF,DMSO,乙腈或其组合;优选DMF;较佳地,按照重量体积比,溶剂4的用量为中间体C的5~10倍。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(4)中,进行反应后,还包括进行结晶处理的步骤,以纯化所述的中间体B;较佳地,以乙酸乙酯/正庚烷作为结晶的溶剂;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为中间体C的5~10倍。
9.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(5)中,中间体B与碱性试剂进行反应以脱去保护基;较佳地,所述碱性试剂选自:氢氧化钠,氢氧化钾或其组合;更佳地,所述碱性试剂的用量为化合物B的5~10倍摩尔当量;或
中间体B与碱性试剂在溶剂5中进行反应,所述溶剂5选自:水/甲醇,水/乙醇,水/THF;优选地为水/乙醇;较佳地,重量体积比溶剂5的用量为化合物B的5~10倍,其中有机溶剂占比为50~90%。
10.如权利要求1所述的方法,其特征在于,(5)中,进行反应后,还包括进行结晶处理的步骤,以纯化所述的化合物A;较佳地,进行结晶的溶剂选自:乙醇,甲醇,乙腈或其组合;优选乙醇;更佳地,按照重量体积比,结晶溶剂用量为化合物B的8~10倍。
11.一种化合物,其结构式如式A所示:
12.如权利要求11所述的化合物,其特征在于,其由权利要求1~10任一所述方法制备获得。
13.权利要求11~12所述的化合物的用途,用于合成反义寡核苷酸。
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