CN111825611A - 4(1h)-奎诺酮衍生物及其用途 - Google Patents

Abstract

一种4(1H)‑奎诺酮衍生物及其用途，其为式(I)化合物：

本发明提供用于治疗、延缓和/或预防如癌症的增殖性疾病的新化合物、组合物及方法，所述癌症包括例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或白血病(例如，对一或多种抗微管药物有抗性的癌症(例如，与P‑糖蛋白(P‑gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的癌症)。本发明提供抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本内的癌细胞微管聚合、结合β‑微管蛋白、抑制微管组合及诱发组织、生物样本或个体内对多种药物有抗性的癌细胞凋亡的方法。本发明还提供使用该化合物治疗本发明所述的任何目标疾病的医药组合物、套组及方法。

Description

4(1H)-奎诺酮衍生物及其用途

技术领域

本发明涉及4(1H)-奎诺酮衍生物及其于治疗、延缓和/或预防增殖 性疾病不利影响的用途。

背景技术

癌症是全球第二大最常见的死亡原因，而肺癌是癌症相关死亡的主因。 尽管在过去20年治疗有所进步，但肺癌患者的预后仍然很差。抗药性限 制了抗癌药的功效，并在大多数情况下导致治疗失败。因此，亟需开发新 的药物，以克服抗药性并改善癌症患者的存活率。

微管(microtubules)是由异质双体(heterodimeric)α/β-微管蛋白(tubulin) 单元所组成的长中空圆柱体。它们是细胞骨架的重要组成部分，且与有丝 分裂(mitosis)、活动性(motility)及有机质输送(organelle transport)有 关。癌细胞依赖于微管的有丝分裂及快速分裂，此使得微管成为抗癌剂的 合适标靶。微管的成核作用(nucleation)发生在中心体(centrosome)，且 由于它们是不断组合及拆解的高动态结构，因此抗微管药物(microtubule-targeting agent，MTA)可调节其动力学，因而导致有丝分裂 期停滞(mitotic arrest)并随后引发细胞凋亡。MTA(亦即紫杉醇(taxanes)、 长春花生物碱(vinca alkaloid)、秋水仙素(colchicine)及劳力马来 (1aulimalide))根据其作用模式与微管蛋白结合位点进行分类。紫杉醇(例 如太平洋紫杉醇(paclitaxel)及伊沙匹隆(ixabepilone))与长春花生物碱 (例如敏克瘤(vincristine)及敏毕瘤(vinblastine))是两种主要的MTA 类型，其在临床上广泛用于治疗许多不同类型的恶性肿瘤，包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌及血癌。然而，大多数接受MTA长期治 疗的患者的癌症对治疗计划产生续发性抗药性(acquired resistant)。

MTA诱发抗药性的两个主要机制涉及β微管蛋白(β-tubulin)及ATP 结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter)的突变。β微管蛋白药 物结合位点的结构改变突变或构形改变的β-微管蛋白同种型(isotype)的 表达可能会干扰MTA与其在β-微管蛋白上结合位点之间的相互作用，因 而导致治疗失败。嵌于细胞膜的排出转运蛋白(effluxtransporter)会将不 同类型的抗癌药从细胞内泵送至细胞外空间，因而减少细胞内的药物累积， 导致多重抗药性(multidrug resistance，MDR)，使得治疗癌症患者更加困 难。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是第一个鉴定出的ATP结合盒排出 泵(ATP-bindingcassette efflux pump)，其已获得良好表征。P-gp过度表达 所引起的MDR是已知涉及临床癌症治疗的最常见的抗药机制，因此寻找 可改善患者预后并防止抗药性的新药剂仍是主要且未获得满足的需求。

发明内容

目前仍致力于开发新的治疗策略，以克服癌细胞的抗药性。在2百万 种化学药品中，本发明已确定4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯 (ethyl 4-oxo-2-phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，AS1712)为肺 癌细胞增殖及异位移植(xenograft)肿瘤生长的低毒性抑制剂。此显现示 例性化合物AS1712具有抗广泛癌细胞株的活性且能够结合于β-微管蛋白 的秋水仙素-结合口袋(binding pocket)中，因而抑制微管组合，并因此诱 导有丝分裂期停滞及凋亡。本文所述基于细胞的结构-活性关系研究确定了 一种新的示例性化合物2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯 (ethyl 2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydro quinoline-6-carboxylate， RJ-LC-15-8)，其对H1975细胞具有更高的抗增殖效果(IC₅₀＝24nM)， 且维持与AS1712类似的作用机制。值得注意的是，示例性化合物AS1712 及RJ-LC-15-8皆克服了P-糖蛋白排出泵及β-微管蛋白改变(其会对癌细 胞的抗微管药物造成续发性抗药性)。AS1712及RJ-LC-15-8可作为开发 药物的示例性化合物，其可克服癌细胞对抗微管药物的续发性抗药性。本 发明更致力于进一步鉴定出可通过克服癌细胞对抗微管药物的续发性抗 药性来治疗增殖性疾病(例如，癌症)的其它化合物。

据此，本发明提供如下式(I)的化合物。本文所述的化合物可用于治 疗一所需个体的增殖性疾病(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的 癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的癌 症))。本发明提供新化合物、组合物及治疗各种疾病(例如，增殖性疾病， 如举例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或 血癌的癌症(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的癌症(例如，与 P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的癌症))的方法。本 文所述的癌症可能对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱) 治疗有抗性。本文所述的化合物可抑制所需个体、或细胞、组织或生物样 本内的癌细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合，因而诱发组织、 生物样本或个体内对多种药物有抗性的癌细胞凋亡。本文所述的化合物如下式(I)所示。本发明还提供本文所述的任一化合物的医药组合物、套组、 方法及用途。

在一实施方式中，本发明提供式(I)化合物：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中：

每一R1独自为卤素、-C(＝O)(视情况经取代烷基)、视情况经取代烷基、 视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经 取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、 -N(R^D1a)₂或-SR^D1；

每一R²独自为卤素、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情 况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代 杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、-N(R^D1a)₂， 或-SR^D1；

R³为氢、视情况经取代烷基或氮保护基；

每一R⁴独自为卤素、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情 况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代 杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1；

R^D1为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯 基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视 情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、当接至氧原子时的氧保护基或当 接至硫原子时的硫保护基；

每一R^D1a为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取 代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、 视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基或氮保护基，或R^D1a中任选两者 与介于其间的原子一起形成经取代或未经取代的杂环或经取代或未经取 代的杂芳环；

m为0、1、2、3、4或5；

n为0、1、2、3或4；且

p为0或1。

在一实施方式中，本发明提供式(I)化合物：

或其医药上可接受的盐，其中：R¹、R²、R³、R⁴、m、n及p如本文 所述。

在某些实施例中，m与n中至少一者不为0。

在某些实施例中，式(I)化合物为式(IA)、(IB)或(IC)：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中R¹、R²、R³、 R⁴、m及p如本文所述。优选地，每一R¹独自为卤素、未经取代或经卤 素取代的C_1-10烷基、未经取代或经卤素取代的C_2-10烯基、未经取代或经 卤素取代的C_2-10炔基、未经取代或经卤素取代的C_3-10碳环基、-OR^D1、或 -SR^D1，其中R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未 经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、当接至氧原子时的氧保护 基、或当接至硫原子时的硫保护基；每一R²独自为-C(＝O)OR^2a、 -C(＝O)N(R^2b)₂或-(CH₂)_xOR^2a，其中R^2a、R^2b及x如本文所述，优选地，每 一R²独自为-C(＝O)OR^2a、-C(＝O)N(R^2b)₂、-(CH2)_xOR2^a、或 -C(＝O)(OCH₂CH₂)_zO(R^2c)，其中x为0、1、2、3、4、5或6，z为1、2、 3、4、5或6，R^2a为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、 未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、未经取代的C_6-14芳基、 或氧保护基，每一R^2b独自为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、未经取代的C_6-14芳基、或氮保护基，且R^2c为氢或氧保护基；R3为氢、未经取代的C_1-10 烷基、或氮保护基；m为0、1、2、3、4、或5；且p为0。更优选地， R¹为卤素、经卤素取代的C_1-10烷基、经卤素取代的C_2-10烯基、经卤素取 代的C_2-10炔基、或-OR^D1，其R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取 代的C_2-10烯基、或未经取代的C_2-10炔基；而R^2a、R^2b、R^2c、R³、x、z、 m及p如上所述，R^2a优选为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、或未经取代的C_6-14芳基；R^2b优选为其一者 为氢，而另一者为未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、或未经 取代的C_2-10炔基；R^2c优选为氢；R³优选为氢。

在某些实施例中，式(I)化合物为下式：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中每一R¹独自为 卤素、未经取代或经卤素取代的C₁-₁₀烷基、未经取代或经卤素取代的C_2-10烯基、未经取代或经卤素取代的C_2-10炔基、未经取代或经卤素取代的 C_3-10碳环基、-OR^D1、或-SR^D1，其中R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未 经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、当 接至氧原子时的氧保护基、或当接至硫原子时的硫保护基；每一R²独自 为-C(＝O)OR^2a、-C(＝O)N(R^2b)₂、或-(CH₂)_xOR^2a，其中R^2a、R^2b及x如本文 所述，优选地，每一R²独自为-C(＝O)OR^2a、-C(＝O)N(R^2b)₂、-(CH₂)_xOR^2a、 或-C(＝O)(OCH₂CH₂)_zO(R^2c)，其中x为0、1、2、3、4、5或6，z为1、 2、3、4、5或6，R^2a为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、 未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、未经取代的C_6-14芳基、 或氧保护基，每一R^2b独自为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、未经取代的C_6-14芳基、或氮保护基，且R^2c为氢或氧保护基；R³为氢、未经取代的C_1-10烷基、或氮保护基；m为0、1、2、3、4、或5；且n为0、1、2、3、或 4，但m与n中至少一者不为0。优选地，R¹为卤素、经卤素取代的C_1-10烷基、经卤素取代的C_2-10烯基、经卤素取代的C_2-10炔基、或-OR^D1，其 R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、或未经取代的 C_2-10炔基；而R^2a、R^2b、R^2c、R³、x、z、m及n如上所述，R^2a优选为氢、 未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、或未经取代的C_6-14芳基；R^2b优选为其一者为氢，而另一者为未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、或未经取代的C_2-10炔基；R^2c优选为氢； R³优选为氢；m优选为0或1，且n优选为1。

在某些实施例中，式(I)化合物为下式：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中R¹、R²及R³如本文所述。优选地，每一R¹独自为卤素、未经取代或经卤素取代的C_1-10烷基、未经取代或经卤素取代的C_2-10烯基、未经取代或经卤素取代的 C_2-10炔基、未经取代或经卤素取代的C_3-10碳环基、-OR^D1、或-SR^D1，其中R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的 C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、当接至氧原子时的氧保护基、或当 接至硫原子时的硫保护基；R²为-C(＝O)OR^2a、-C(＝O)N(R^2b)₂、或-(CH2)_xOR^2a， 其中R^2a、R^2b及x如本文所述，优选地，R²为-C(＝O)OR^2a、-C(＝O)N(R2^b)₂、 -(CH₂)_xOR^2a、或-C(＝O)(OCH₂CH₂)_zO(R^2c)，其中x为0、1、2、3、4、5 或6，z为1、2、3、4、5或6，R^2a为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经 取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、未经 取代的C_6-14芳基、或氧保护基，每一R^2b独自为氢、未经取代的C_1-10烷基、 未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、 未经取代的C_6-14芳基、或氮保护基，且R^2c为氢或氧保护基；R³为氢、未 经取代的C_1-10烷基、或氮保护基。更优选地，R¹为卤素、经卤素取代的 C_1-10烷基、经卤素取代的C_2-10烯基、经卤素取代的C_2-10炔基、或-OR^D1， 其R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、或未经取代的C_2-10炔基；而R^2a、R^2b、R^2c、R³、x及z如上所述，R^2a优选为氢、未 经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、或未 经取代的C_6-14芳基；R^2b优选为其一者为氢，而另一者为未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、或未经取代的C_2-10炔基；R^2c优选为氢；R³优选为氢。最优选地，R¹为卤素，且R²为-C(＝O)OR^2a，其中R^2a为未 经取代的C_1-10烷基。

在某些实施例中，式(I)化合物为下式：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中R¹、R^2a、R^2b、 R³及x如本文所述。

在某些实施例中，式(I)化合物为下式：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中R¹为卤素、未 经取代或经卤素取代的C_1-10烷基、未经取代或经卤素取代的C_2-10烯基、 未经取代或经卤素取代的C_2-10炔基、未经取代或经卤素取代的C_3-10碳环 基、-OR^D1、或-SR^D1，其中R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的 C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经取代的C_3-10碳环基、当接至氧原 子时的氧保护基、或当接至硫原子时的硫保护基；R^2a为氢、未经取代的 C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经取代的 C_3-10碳环基、未经取代的C_6-14芳基、或氧保护基；每一R^2b独自为氢、未 经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、未经 取代的C_3-10碳环基、未经取代的C_6-14芳基、或氮保护基；R^2c为氢或氧保 护基；x为0、1、2、3、4、5或6；z为1、2、3、4、5或6，且R³为氢、 未经取代的C_1-10烷基、或氮保护基。优选地，R¹为卤素、经卤素取代的 C_1-10烷基、经卤素取代的C_2-10烯基、经卤素取代的C_2-10炔基、或-OR^D1， 其R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、或未经取代 的C_2-10炔基；而R^2a、R^2b、R^2c、R³、x及z如上所述，R^2a优选为氢、未 经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、或未 经取代的C_6-14芳基；R^2b优选为其一者为氢，而另一者为未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、或未经取代的C_2-10炔基；R^2c优选为氢； R³优选为氢。

在某些实施例中，式(I)化合物为下式：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中R¹为卤素、经 卤素取代的C_1-10烷基、经卤素取代的C_2-10烯基、经卤素取代的C_2-10炔 基、或-OR^D1，其R^D1为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯 基、或未经取代的C_2-10炔基；而R^2a及R³如上所述，R^2a优选为氢、未经取代的C_1-10烷基、未经取代的C_2-10烯基、未经取代的C_2-10炔基、或未经 取代的C_6-14芳基；且R³优选为氢。更优选地，R¹为卤素，R^2a为未经取代 的C_1-10烷基。

式(I)的示例性化合物包括，但不限于：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

在另一实施方式中，本发明提供医药组合物，其包括一或多个本文所 述的化合物以及医药上可接受的赋形剂。在某些实施例中，本文所述的医 药组合物包括治疗或预防有效量的本文所述化合物。这些医药组合物可用 于抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本的癌细胞微管聚合、结合β- 微管蛋白、抑制微管组合及诱导组织、生物样本或所需个体对多种药物具 抗性的癌细胞的凋亡，可用于治疗所需个体的增殖性疾病，例如癌症，包 括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血 癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗具抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白 (P-gp)过度表达相关的对多种药物有抗性的癌症))。本文所述的癌症可 能对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗性。在 某些实施例中，所施用或使用的化合物可抑制所需个体、组织或生物样本 的癌细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合、诱导组织、生物样 本或所需个体对多种药物具抗性的癌细胞的凋亡、治疗所需个体的增殖性 疾病，例如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、 颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗具抗性的癌症 (例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达相关的对多种药物有抗性的癌症(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗性的 癌症))。在某些实施例中，被治疗的个体为哺乳动物(例如，人或非人类 的哺乳动物)。本文所述或本领域已知的所有类型的生物样本均视为在本 发明的保护范围内。

本发明的另一实施方式涉及套组，其包含具有本文所述化合物或其医 药组合物的容器。本文所述的套组可包含单剂或多剂的化合物或医药组合 物。这些套组可用于本发明的方法。在某些实施例中，该套组还包含使用 该化合物或医药组合物的说明。该套组还可视情况包括用于投予该化合物 或组合物的装置(例如注射器，如肠胃外投药的预填充注射器)。

在某些实施例中，所投予或使用的该化合物可抑制所需个体、或细胞、 组织或生物样本内的癌细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合、 和/或诱发组织、生物样本或个体内对多种药物有抗性的癌细胞凋亡。

本发明的另一实施方式涉及治疗所需个体的增殖性疾病的方法，该方 法包括投予一治疗有效量的本发明化合物或医药组合物至该个体。在另一 实施方式中，本发明提供预防所需个体的增殖性疾病的方法，该方法包括 投予一预防有效量的本发明化合物或医药组合物至该个体。

在再一实施方式中，本发明提供本文所述的化合物及医药组合物以用 于本发明所述的方法(例如，抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本内 的癌细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合、和/或诱发组织、 生物样本或个体内对多种药物有抗性的癌细胞凋亡的方法、诱发个体的细 胞凋亡的方法、治疗和/或预防增殖性疾病的方法，例如癌症，包括举例如 肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如， 对一或多种抗微管药物治疗具抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过 度表达相关的对多种药物有抗性的癌症)(例如，对一或多种抗微管药物 (例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗性的癌症))。

以下将详细描述特定官能基团及化学名词的定义。化学元素采用CAS 版本的“化学与物理手册(Handbook of Chemistry and Physics)75级编” 内页封面元素周期表的定义，特定的官能基团一般如本文所定义。此外， 有机化学的一般原则及特定的官能基团和反应性则采用以下书籍中的定 义，包括《Thomas Sorrell，Organic Chemistry，University Science Books， Sausalito，1999；Smith and March，March’sAdvancedOrganic Chemistry，5^th Edition，John Wiley&Sons，Inc.，New York，2001；Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publishers，Inc.，New York，1989；及Carruthers，Some Modern Methods of Organic Synthesis，3^rd Edition， CambridgeUniversity Press，Cambridge，1987》。本发明用意不在于以任何方 式受到本文所述的取代基示例性列表所限制。

本文所述的化合物可包括一或多个不对称中心，因此可存在不同的异 构形式，例如，对映异构物和/或非对映异构物。举例而言，本文所述的化 合物可以是单一对映异构物、非对映异构物或几何异构物的形式，还可为 立体异构物的混合物，其包括外消旋混合物及富集一或多种立体异构物的 混合物。对本发明技术领域普通技术人员而言，可利用包括手性(chiral) 高效液相层析(HPLC)及手性盐的形成与结晶而从混合物中分离出异构物，或以不对称合成法来制备特定异构物。例如可参见《Jacques et al.， Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen et al.，Tetrahedron33：2725(1977)；Eliel，Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill，NY，1962)；及Wilen，Tables ofResolving Agents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel，Ed.，Univ.of Notre Dame Press，Notre Dame，IN 1972)》。本发明另涵盖本文所述的化合物，其为实质 上不含其他异构物的单一异构物，或是多种异构物的混合物。

当列出一范围值时，其意在涵盖所述范围内的每个数值及其次范围。 举例来说，“C₁-₆”意在涵盖C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C_1-6、C_1-5、C_1-4、 C_1-3、C_1-2、C_2-6、C_2-5、C_2-4、C_2-3、C_3-6、C_3-5、C_3-4、C_4-6、C_4-5及C_5-6。

“脂肪族”(aliphatic)一词包含饱和及不饱和直链(即，无支链)、 支链、非环状、环状、多环的脂肪族烃，其可视情况经一或多个官能基团 取代。本发明领域普通技术人员当可理解，本文中的“脂肪族”含义包括， 但并不限于，烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基及环炔基基团。因此， 术语“烷基”包括直链、支链及环状烷基。同样的语法也适用于其它上位名词，如“烯基”(alkenyl)及“炔基”(alkynyl)等。除此之外，术语“烷 基”、“烯基”及“炔基”等名词也涵盖经取代及未经取代基团。在某些实 施例中，“低级烷基”(lower alkyl)是用来表示这些具有1-6个碳原子的 烷基(环形、非环形、经取代基、未经取代基、支链或直链)。

在某些实施例中，本发明所使用的烷基、烯基及炔基含有1-20个脂肪 族碳原子。在某些其它实施例中，本发明使用的烷基、烯基和炔基分别含 有1-10个脂肪族碳原子。在另外其他实施例中，本发明使用的烷基、烯基 和炔基分别含有1-8个脂肪族碳原子。在其它实施例中，本发明使用的烷 基、烯基和炔基分别含有1-6个脂族碳原子。在另外其他实施例中，本发 明使用的烷基、烯基和炔基分别含有1-4个碳原子。

说明性的脂肪族基团包含，但不限于，例如，甲基、乙基、正丙基、 异丙基、环丙基、-CH₂-环丙基、乙烯基、丙烯基、正丁基、仲丁基、异 丁基、叔丁基、环丁基、-CH₂-环丁基、正戊基、仲戊基、异戊基、叔戊 基、环戊基、-CH₂-环戊基、正己基、仲己基、环己基、-CH₂-环己基及其 类似者，其又可带有一或多个取代基。烯基包含，但不限于，例如，乙烯 基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁-1-烯基(1-methyl-2-buten-1-y1)及其类 似者。代表性的炔基包含，但不限于，乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1- 丙炔基及其类似者。

“烷基”(alkyl)一词是指具有1到10个碳原子的直链或支链饱和烃 基团(“C_1-10烷基”)。在某些实施例中，烷基具有1到9个碳原子(“C_1-9烷基”)。在某些实施例中，烷基具有1到8个碳原子(“C_1-8烷基”)。在 某些实施例中，烷基具有1到7个碳原子(“C_1-7烷基”)。在某些实施例 中，烷基具有1到6个碳原子(“C_1-6烷基”)。在某些实施例中，烷基具 有1到5个碳原子(“C_1-5烷基”)。在某些实施例中，烷基具有1到4个 碳原子(“C_1-4烷基”)。在某些实施例中，烷基具有1到3个碳原子(“C_1-3烷基”)。在某些实施例中，烷基具有1到2个碳原子(“C_1-2烷基”)。在 某些实施例中，烷基具有1个碳原子(“C₁烷基”)。在某些实施例中，烷 基具有2到6个碳原子(“C_2-6烷基”)。C_1-6烷基的示例包含甲烷基(C₁)、 乙烷基(C₂)、丙烷基(C₃)(例如正丙基、异丙基)、丁烷基(C₄)(例如 正丁基、叔丁基、仲丁基、异丁基)、戊烷基(C₅)(例如正戊基、3-戊基、 戊基(amyl)、新戊基、3-甲基-2-丁基、叔戊基)以及己烷基(C₆)(例如 正己基)。烷基的其他示例包含正庚基(C₇)、正辛基(C₈)及其类似者。 除非另有所指，否则每一烷基可独自为未经取代(“未经取代的烷基”)或 经一或多个取代基(例如卤素，如F)取代(“经取代的烷基”)。在某些 实施例中，烷基为未经取代的C_1-10烷基(例如未经取代的C_1-6烷基，例 如-CH₃)。在某些实施例中，烷基为经取代的C_1-10烷基(例如经取代的 C_1-6烷基，例如-CF₃)。

“烯基”(alkenyl)是指具有2至20个碳原子、一或多个碳-碳双键、 没有三键的直链基或支链烃基(“C_2-20烯基”)。在某些实施例中，烯基有2 至10个碳原子(“C_2-10烯基”)。在某些实施例中，烯基有2至9个碳原子 (“C_2-9烯基”)。在某些实施例中，烯基有2至8个碳原子(“C_2-8烯基”)。 在某些实施例中，烯基有2至7个碳原子(“C_2-7烯基”)。在某些实施例中， 烯基有2至6个碳原子(“C_2-6烯基”)。在某些实施例中，烯基有2至5个 碳原子(“C_2-5烯基”)。在某些实施例中，烯基有2至4个碳原子(“C_2-4烯基”)。在某些实施例中，烯基有2至3个碳原子(“C_2-3烯基”)。在某些 实施例中，烯基有2个碳原子(“C₂烯基”)。一或多个碳-碳双键可在内部(如2-丁烯基)或在终端(如1-丁烯基)。C_2-4烯基的示例包括乙烯基(C₂)、 1-丙烯基(C₃)、2-丙烯基(C₃)、1-丁烯基(C₄)、2-丁烯基(C₄)、丁二烯 基(C₄)及其类似者。C_2-6烯基的例子包括上述的C_2-4烯基以及戊烯基(C₅)、 戊二烯基(C₅)、己烯基(C₆)及其类似者。烯基的其他实例包括庚烯基 (C₇)、辛烯基(C₈)、辛三烯基(C₈)及其类似者。除非另有所指，否则 每一烯基独自视情况地含有取代基，亦即，未经取代(“未经取代的烯基”) 或经一或多个取代基取代(“经取代的烯基”)。在某些实施例中，烯基为 未经取代的C_2-10烯基。在某些实施例中，烯基为经取代的C_2-10烯基。在 烯基中，若未特别指明C＝C双键的立体化学(例如，-CH＝CHCH₃或

)， 则其可是(E)-或(Z)-双键。

“炔基”(alkynyl)是指具有2至20个碳原子、一或多个碳-碳三键及 视情况有一或多个双键的直链或支链烃基(“C_2-20炔基”)。在某些实施例 中，炔基有2至10个碳原子(“C_2-10炔基”)。在某些实施例中，炔基有2 至9个碳原子(“C_2-9炔基”)。在某些实施例中，炔基有2至8个碳原子(“C_2-8炔基”)。在某些实施例中，炔基有2至7个碳原子(“C_2-7炔基”)。在某些 实施例中，炔基有2至6个碳原子(“C_2-6炔基”)。在某些实施例中，炔基 有2至5个碳原子(“C_2-5炔基”)。在某些实施例中，炔基有2至4个碳原 子(“C_2-4炔基”)。在某些实施例中，炔基有2至3个碳原子(“C_2-3炔基”)。 在某些实施例中，炔基有2个碳原子(“C₂炔基”)。一或多个碳-碳三键可 在内部(如2-丁炔基)或终端(如1-丁炔基)。C_2-4炔基的示例包含，但 不限于，乙炔基(C₂)、1-丙炔基(C₃)，2-丙炔基(C₃)、1-丁炔基(C₄)、 2-丁炔基(C₄)及其类似者。C_2-6炔基的例子包括上述的C_2-4炔基以及戊 炔基(C₅)、己炔基(C₆)及其类似者。炔基的其他实例包括庚炔基(C₇)、 辛炔基(C₈)及其类似者。除非另有所指，否则每一炔基可独自视情况被 取代，亦即，未经取代(“未经取代的炔基”)或经一或多个取代基取代(“经 取代的炔基”)。在某些实施例中，炔基为未经取代的C_2-10炔基。在某些实 施例中，炔基为经取代的C_2-10炔基。

“碳环基”(carbocyclyl)或“碳环的”(carbocyclic)是指具有3至 10个环上碳原子(“C_3-10碳环基”)且在该非芳香环系统内不含杂原子的非 芳香环状烃基团。在一些实施例中，碳环基有3至8个环上碳原子(“C_3-8碳环基”)。在一些实施例中，碳环基有3至6个环上碳原子(“C_3-6碳环基”)。 在一些实施例中，碳环基有3至6个环上碳原子(“C_3-6碳环基”)。在一些 实施例中，碳环基有5至10个环上碳原子(“C_5-10碳环基”)。示例性C_3-6碳环基包含，但不限于，环丙基(C₃)、环丙烯基(C₃)、环丁基(C₄)、 环丁烯基(C₄)、环戊基(C₅)、环戊烯基(C₅)、环己基(C₆)、环己烯基 (C₆)、环己二烯基(C₆)及其类似者。示例性C_3-8碳环基包含，但不限 于，上述的C_3-6碳环基以及环庚基(C₇)、环庚烯基(C₇)、环庚二烯基(C₇)、 环庚三烯基(C₇)、环辛基(C₈)、环辛烯基(C₈)、双环[2.2.1]庚烷基(C₇)、 双环[2.2.2]辛基(C₈)及其类似者。示例性C_3-10碳环基包含，但不限于， 上述的C_3-8碳环基以及环壬基(C₉)、环壬烯基(C₉)、环癸基(C₁₀)、环 癸烯基(C₁₀)、八氢-1H-茚基(C₉)、十氢萘基(C₁₀)、螺[4.5]癸基(C₁₀) 及其类似者。如上范例中所阐述，在某些实施例中，碳环基是单环(“单 环的碳环基”)或是含有稠合(fused)、桥连(bridged)或螺环(spiro)的 环状系统，例如双环系统(“双环的碳环基”)，且可为饱和或可为部分不 饱和。“碳环基”还包括多环系统，其中如上所定义的环状碳环与一或多 个芳基或杂芳基稠合，又其中连接点是在环状碳环上，在此情况下，环状 碳环系统内的碳原子编号是以连续的编号指定的。除非另有所指，否则每 一碳环基可独自视情况地被取代，亦即，未经取代(“未经取代的碳环基”) 或经一或多个取代基取代(“经取代的碳环基”)。在某些实施例中，碳环 基是未经取代的C_3-10碳环基。在某些实施例中，碳环基是经取代的C_3-10碳环基。

在一些实施方式中，“碳环基”(carbocyclyl)为具有3至10个环上碳 原子的单环饱和碳环基(“C_3-10环烷基”)。在一些实施方式中，环烷基具 有3至8个环上碳原子(“C_3-8环烷基”)。在一些实施方式中，环烷基具有 3至6个环上碳原子(“C_3-6环烷基”)。在一些实施方式中，环烷基具有5 至6个环上碳原子(“C_5-6环烷基”)。在一些实施方式中，环烷基具有5至10个环上碳原子(“C_5-10环烷基”)。C_5-6环烷基的示例包含环戊基(C₅) 及环己基(C₆)。C_3-6环烷基的示例包含上述C_5-6环烷基及环丙基(C₃)与 环丁基(C₄)。C_3-8环烷基的示例包含上述C_3-6环烷基、环庚基(C₇)及环 辛基(C₈)。除非另有所指，否则每一环烷基可独自视情况地被取代，亦 即未经取代基(“未经取代的环烷基”)或经一或多个取代基取代(“经取 代基的环烷基”)。在某些实施方式中，环烷基是未经取代的C_3-10环烷基。 在某些实施方式中，环烷基是经取代的C_3-10环烷基。

“杂环基”(heterocyclyl)或“杂环的”(heterocyclic)是指具有环上 碳原子及1至4个环上杂原子的3至10元非芳香环系统，其中每个杂原 子可独自选自氮、氧、硫、硼、磷及硅(“3-10元杂环基”)。在含有一或 多个氮原子的杂环基中，在原子价数允许下，连接点可以是碳原子或氮原 子。杂环基可为单环(“单环杂环基”)、或稠合、桥连或螺环的环状系统， 例如双环系统(“双环杂环基”)，其可为饱和或可为部分不饱和。杂环基 双环系统可包括一或多个杂原子于一或两个环内。“杂环基”还包括其中 如上定义的环状杂环与一或多个碳环基稠合的环状系统，其中连接点可以 是在环状碳环或环状杂环、或其中如上定义的环状杂环与一或多个芳基或 杂芳基稠合的环状系统上(其中连接点是在杂环上)，在此情况下，环状 杂环系统内的环成员编号是以连续环成员编号指定的。除非另有所指，否 则每一杂环基可独自视情况地被取代，亦即，未经取代(“未经取代的杂 环基”)或经一或多个取代基取代(“经取代的杂环基”)。在某些实施例中， 杂环基是未经取代的3-10元杂环基。在某些实施例中，杂环基是经取代的 3-10元杂环基。

在一些实施例中，杂环基为具有环上碳原子及1-4个环上杂原子的 5-10元非芳香环系统，其中每一个杂原子独自选自氮、氧、硫、硼、磷及 硅(“5-10元杂环基”)。在一些实施例中，杂环基为具有环上碳原子及1-4 个环上杂原子的5-8元非芳香环系统，其中每个杂原子独自选自氮、氧及 硫(“5-8元杂环基”)。在一些实施例中，杂环基为具有环上碳原子及1-4 个环上杂原子的5-6元非芳香环系统，其中每个杂原子独自选自氮、氧及 硫(“5-6元杂环基”)。在一些实施例中，该5-6元杂环基具有1-3个环上 杂原子，其选自氮、氧及硫。在一些实施例中，该5-6元杂环基具有1-2 个环上杂原子，其选自氮、氧及硫。在一些实施例中，该5-6元杂环基具 有1个环上杂原子，其选自氮、氧及硫。

含有一个杂原子的示例性3元杂环基包含，但不限于，氮丙啶基 (azirdinyl)、环氧乙烷基(oxiranyl)、硫杂环丙基(thiiranyl)。含有一个 杂原子的示例性4元杂环基包含，但不限于，吖丁啶基(azetidinyl)、环 氧丙烷基(oxetanyl)及硫杂环丁基(thietanyl)。含有一个杂原子的示例 性5元杂环基包含，但不限于，四氢呋喃基(tetrahydrofuranyl)、二氢呋 喃基(dihydrofuranyl)、四氢噻吩基(tetrahydrothiophenyl)、二氢噻吩基 (dihydrothiophenyl)、吡咯啶基(pyrrolidinyl)、二氢吡咯基(dihydropyrrolyl) 及吡咯-2，5-二酮(pyrrolyl-2，5-dione)。含有两个杂原子的示例性5元杂环 基包含，但不限于，二氧戊环基(dioxolanyl)、氧硫杂呋喃基(oxasulfuranyl)、 二硫杂呋喃基(disulfuranyl)及恶唑啶-2-酮(oxazolidin-2-one)。含有3 个杂原子的示例性5元杂环基包含，但不限于，三唑啉基(triazolinyl)、 恶二唑啉基(oxadiazolinyl)及噻二唑啉基(thiadiazolinyl)。含有一个杂 原子的示例性6元杂环基团包含，但不限于，呱啶基(piperidinyl)、四氢 吡喃基(tetrahydropyranyl)、二氢吡啶基(dihydropyridinyl)及噻嗯基 (thianyl)。含有两个杂原子的示例性6元杂环基包含，但不限于，呱嗪基 (piperazinyl)、吗啉基(morpholinyl)、二噻环己烷基(dithianyl)及二 氧六环基(dioxanyl)。含有三个杂原子的示例性6元杂环基包含，但不限 于，三嗪基(triazinanyl)。含有一个杂原子的示例性7元杂环基包含，但 不限于，氮杂环庚基(azepanyl)、氧杂环庚基(oxepanyl)及硫杂环庚基 (thiepanyl)。含有一个杂原子的示例性8元杂环基包含，但不限于，氮杂 环辛基(azocanyl)、氧杂环辛基(oxecanyl)及硫杂环辛基(thiocanyl)。 示例性5元杂环基团稠合至C₆芳香环(本文亦称为5，6-双环杂环)包含，但不限于，吲哚啉基(indolinyl)、异吲哚啉基(isoindolinyl)、二氢苯并 呋喃基(dihydrobenzofuranyl)、二氢苯并噻吩基(dihydrobenzothienyl)、 苯并恶唑啉酮基(benzoxazolinonyl)及其类似者。示例性6元杂环基团稠 合至芳香环(本文亦称为6，6-双环杂环)包含，但不限于，四氢喹啉基 (tetrahydroquinolinyl)、四氢异喹啉基(tetrahydroisoquinolinyl)及其类似 者。

“芳基”(aryl)是指单环或多环(例如，双环或三环)的4n+2芳香 环系统基团(例如，环状排列中有6、10或14个共用π电子)，其具有6-14 环上碳原子且芳香环系统中不含杂原子(“C_6-14芳基”)。在一些实施例中， 芳基具有6个环上碳原子(“C₆芳基”；例如苯基)。在一些实施例中，芳 基具有10个环上碳原子(“C₁₀芳基”；例如，萘基，如1-萘基及2-萘基)。 在一些实施例中，芳基具有14个环上碳原子(“C₁₄芳基”；例如，蒽基)。 “芳基”还包括多环系统，其中上述定义的芳香环与一或多个碳环基或杂 环基稠合，其中基团(radical)或连接点是在芳基环上，在这种情况下， 芳香环系统内的碳原子编号是以连续的碳原子编号指定的。除非另有所指， 否则每一芳基可独自视情况地被取代，即未经取代(“未经取代的芳基”)或经一或多个取代基取代(“经取代的芳基”)。在某些实施例中，芳基是 未经取代的C_6-14芳基。在某些实施例中，芳基是经取代的C_6-14芳基。

“芳烷基”(aralkyl)是烷基与芳基的子集合，其指被视情况取代的芳 基所取代的视情况取代的烷基。在某些实施例中，芳烷基为视情况经取代 的苯甲基。在某些实施例中，芳烷基是苯甲基。在某些实施例中，芳烷基 为视情况经取代的苯乙基。在某些实施例中，芳烷基是苯乙基。

“杂芳基”(heteroaryl)是指5-10元单环或双环4n+2芳香族环系统 的基团(例如，环状排列中有6或10个共用π电子)，其具有环上碳原子 及1-4个提供于芳香族环系统中的杂原子，其中每个杂原子独自选自氮、 氧及硫(“5-10元杂芳基”)。在含有一或多个氮原子的杂芳基中，在原子 价数允许下，其连接点可以是碳原子或氮原子。杂芳基的双环系统可包括 一或多个杂原子于一或两个环内。“杂芳基”包括杂芳环(如上文所定义) 与一或多个碳环基或杂环基稠合的环状系统，其中连接点在杂芳环上，在 这种情况下，杂芳环系统内的环成员编号是以连续环成员编号指定的。“杂 芳基”还包括杂芳环(如上文所定义)与一个或多个芳基稠合的环状系统， 其连接点是在芳环或杂芳环上，在这种情况下，环成员编号是指定稠合(芳 基/杂芳基)环系统中的环成员编号。其中一个环不含有杂原子的双环杂芳 基(例如吲哚基(indolyl)、喹啉基(quinolinyl)、咔唑基(carbazolyl) 及其类似者)，其连接点可在任一环上，即，在含杂原子的环上(例如， 2-吲哚基)，或不含杂原子的环上(例如，5-吲哚基)。

在一些实施方式中，杂芳基是具有环上碳原子及提供于芳香环系统中 的1-4个杂原子的5-10元芳香环系统，其中每个杂原子独自为氮、氧或硫(“5-10元杂芳基”)。在一些实施例中，杂芳基是具有环上碳原子及提供 于芳香环系统中的1-4个环上杂原子的5-8元芳香环系统，其中每个杂原 子独自为氮、氧或硫(“5-8元杂芳基”)。在一些实施例中，杂芳基是具有 环上碳原子及提供于芳香环系统中的1-4个环上杂原子的5-6元芳环系统， 其中每个杂原子独自为氮、氧或硫(“5-6元杂芳基”)。在一些实施例中， 该5-6元杂芳基具有1-3个环上杂原子，其选自氮、氧及硫。在一些实施 例中，该5-6元杂芳基具有1-2个环上杂原子，其选自氮、氧及硫。在一 些实施例中，该5-6元杂芳基有1个环上杂原子，其选自氮、氧及硫。除 非另有所指，否则每一杂芳基可独自视情况被取代，即未经取代(“未经 取代的杂芳基”)，或经一或多个取代基取代(“经取代的杂芳基”)。在某 些实施例中，杂芳基是未经取代的5-14元杂芳基。在某些实施例中，杂芳 基为经取代的5-14元杂芳基。

含有一个杂原子的示例性5元杂芳基包含，但不限于，吡咯基 (pyrrolyl)、呋喃基(furanyl)及噻吩基(thiophenyl)。含有两个杂原子 的示例性5元杂芳基包含，但不限于，咪唑基(imidazolyl)、吡唑基 (pyrazolyl)、恶唑基(oxazolyl)、异恶唑基(isoxazolyl)、噻唑基(thiazolyl) 及异噻唑基(isothiazolyl)。含有3个杂原子的示例性5元杂芳基包含，但 不限于，三唑基(triazolyl)、恶二唑基(oxadiazolyl)及噻二唑基(thiadiazolyl)。含有4个杂原子的示例性5元杂芳基包含，但不限于，四唑基(tetrazolyl)。 含有一个杂原子的示例性6元杂芳基包含，但不限于，吡啶基(pyridyl)。 含有两个杂原子的示例性6元杂芳基包含，但不限于，哒嗪基(pyridazinyl)、 嘧啶基(pyrimidinyl)及吡嗪基(pyrazinyl)。含有3或4个杂原子的示例 性6元杂芳基分别包含，但不限于，三嗪基(triazinyl)及四嗪基(tetrazinyl)。 含有一个杂原子的示例性7元杂芳基包含，但不限于，氮庚因基(azepinyl)、 氧庚因基(oxepinyl)、硫庚因基(thiepinyl)。示例性5，6-双环杂芳基包含， 但不限于，吲哚基(indolyl)、异吲哚基(isoindolyl)、吲唑基(indazolyl)、苯并三唑基(benzotriazolyl)、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、异苯并噻 吩基(isobenzothiophenyl)、苯并呋喃基(benzofuranyl)、苯并异呋喃基 (benzoisofuranyl)、苯并咪唑基(benzimidazolyl)、苯并恶唑基 (benzoxazolyl)、苯并异恶唑基(benzisoxazolyl)、苯并恶二唑基(benzoxadiazolyl)、苯并噻唑基(benzthiazolyl)、苯并异噻唑基 (benzisothiazolyl)、苯并噻二唑基(benzthiadiazolyl)、吲哚嗪基(indolizinyl) 及嘌呤基(purinyl)。示例性6，6-双环杂芳基包含，但不限于，萘啶基(naphthyridinyl)、喋啶基(pteridinyl)、喹啉基(quinolinyl)、异喹啉基(isoquinolinyl)、噌啉基(cinnolinyl)、喹恶啉基(quinoxalinyl)、酞嗪基(quinoxalinyl)及喹唑啉基(quinazolinyl)。

“杂芳烷基”(heteroaralkyl)为烷基与杂芳基的子集合，其指被视情 况取代的杂芳基所取代的视情况取代的烷基。

“不饱和”(unsaturated)或“部分不饱和”(partially unsaturated)是 指包括至少一个双键或三键的基团。“部分不饱和”的环状系统意在涵盖 具有多个不饱和部位的环，但不包括芳香基(例如，芳基或杂芳基)。同 样地，“饱和”是指不含有双键或三键的基团，即，皆为单键。

二价桥接基的烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基进 一步以亚开头(英文为-ene字尾)来形容，例如，亚烷基(alkylene)、亚 烯基(alkenylene)、亚炔基(alkynylene)、亚碳环基(carbocyclylene)、亚 杂环基(heterocyclylene)、亚芳基(arylene)及亚杂芳基(heteroarylene)。

除非另有所指，否则在价数允许的情况下，本文所述的原子(atom)、 基团(moiety)或基(group)可为未经取代或经取代。“视情况经取代” (optionallysubstituted)一词是指经取代或未经取代。

除非另有所指，否则基团均为视情况经取代。“视情况经取代” (optionallysubstituted)一词是指经取代或未经取代。在某些实施例中， 烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基为视情况经取代(例 如，“经取代”或“未经取代”烷基、“经取代”或“未经取代”烯基、“经 取代”或“未经取代”炔基、“经取代”或“未经取代”碳环基、“经取代” 或“未经取代”杂环基、“经取代”或“未经取代”芳基、或“经取代” 或“未经取代”杂芳基)。一般而言，“经取代”一词，无论前面是否有“视 情况”，其意指该基团有至少一氢原子(例如，碳原子或氮原子上的氢原 子)被一允许的取代基所取代，该取代基例如为置换后变成稳定化合物的 取代基，该化合物例如为不会通过如重排、环化、消去或其它反应而自动 转换的化合物。除非另有指明，否则“经取代”基团在基团的一或多个位 置处带有取代基，当其结构有超过一个位置被取代时，每一位置处的取代 基可以相同或不同。“经取代”一词拟包括以所有有机化合物可允许的取 代基、本文所述可形成稳定化合物的任何取代基所进行的取代。本发明涵 盖为了达成稳定化合物的任何及全部的组合。为达本发明目的，如本文所述，杂原子(如氮原子)可在满足该杂原子价数且能形成稳定基团的前提 下具有氢的取代基和/或任一合适的取代基。在某些实施例中，该取代基是 碳原子上的取代基。在某些实施例中，该取代基是氮原子上的取代基。在 某些实施例中，该取代基是氧原子上的取代基。在某些实施例中，该取代 基是硫原子上的取代基。

示例性的碳原子上的取代基包含，但不限于，卤素、-CN、-NO₂、- N₃、-SO₂H、-SO₃H、-OH、-OR^aa、-ON(R^bb)₂、-N(R^bb)₂、-N(R^bb)₃ ⁺X^-、 -N(OR^cc)R^bb、-SH、-SR^aa、-SSR^cc、-C(＝O)R^aa、-CO₂H、-CHO、-C(OR^cc)₂、 -CO₂R^aa、-OC(＝O)R^aa、-OCO₂R^aa、-C(＝O)N(R^bb)₂、-OC(＝O)N(R^bb)₂、-NR^bbC(＝O)R^aa、-NR^bbCO₂R^aa、-NR^bbC(＝O)N(R^bb)₂、-C(＝NR^bb)R^aa、- C(＝NR^bb)OR^aa、-OC(＝NR^bb)R^aa、-OC(＝NR^bb)OR^aa、-C(＝NR^bb)N(R^bb)₂、- OC(＝NR^bb)N(R^bb)₂、-NR^bbC(＝NR^bb)N(R^bb)₂、-C(＝O)NR^bbSO₂R^aa、-NR^bbSO₂R^aa、 -SO₂N(R^bb)₂、-SO₂R^aa、-SO₂OR^aa、-OSO₂R^aa、-S(＝O)R^aa、-OS(＝O)R^aa、- Si(R^aa)₃、-OSi(R^aa)₃-C(＝S)N(R^bb)₂、-C(＝O)SR^aa、-C(＝S)SR^aa、-SC(＝S)SR^aa、 -SC(＝O)SR^aa、-OC(＝O)SR^aa、-SC(＝O)OR^aa、-SC(＝O)R^aa、 -P(＝O)(R^aa)₂，-P(＝O)(OR^cc)₂、-OP(＝O)(R^aa)₂、-OP(＝O)(OR^cc)₂、 -P(＝O)(N(R^bb)₂)₂、-OP(＝O)(N(R^bb)₂)₂、-NR^bbp(＝O)(R^aa)₂、-NR^bbp(＝O)(OR^cc)₂、 -NR^bbp(＝O)(N(R^bb)₂)₂、-P(R^cc)₂，-P(OR^cc)₂、-P(R^cc)₃ ⁺X^-、-P(OR^cc)₃ ⁺X^-、-P(R^cc)₄、 P(OR^cc)₄、-OP(R^cc)₂、-OP(R^cc)₃ ⁺X^-、-OP(OR^cc)₂、-OP(OR^cc)₃ ⁺X^-、-OP(R^cc)₄、 -OP(OR^cc)₄、-B(R^aa)₂、-B(OR^cc)₂、-BR^aa(OR^cc)、C_1-10烷基、C_1-10全卤代烷 基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_3-10碳环基、3-14元杂环基、C_6-14芳基及5- 14元杂芳基，其中每一烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂 芳基可独自被0、1、2、3、4或5个R^dd基所取代；其中X^-是相对离子 (counterion)；

或者，碳原子上的两个偕(geminal)氢原子是由基团＝O、＝S、＝NN(R^bb)₂、 ＝NNR^bbC(＝O)R^aa、＝NNR^bbC(＝O)OR^aa、＝NNR^bbS(＝O)₂R^aa、＝NR^bb或＝＝NOR^cc所取代；

每一R^aa独自选自由C_1-10烷基、C_1-10全卤代烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔 基、C_3-10碳环基、3-14元杂环基、C_6-14芳基及5-14元杂芳基，或两个R^aa基连接起来形成3-14元杂环基或5-14元杂芳环，其中每一烷基、烯基、 炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基可独自被0、1、2、3、4或5个 R^dd基所取代；

每一R^bb独自选自由氢原子、-OH、-OR^aa、-N(R^cc)₂、-CN、-C(＝O)R^aa、 -C(＝O)N(R^cc)₂、-CO₂R^aa、-SO₂R^aa、-C(＝NR^cc)OR^aa、-C(＝NR^cc)N(R^cc)₂、- SO₂N(R^cc)₂、-SO₂R^cc、-SO₂OR^cc、-SOR^aa、-C(＝S)N(R^cc)₂、-C(＝O)SR^cc、- C(＝S)SR^cc、-P(＝O)(R^aa)₂、-p(＝O)(OR^cc)₂、-P(＝O)(N(R^cc)₂)₂、C_1-10烷基、 C_1-10全卤代烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_3-10碳环基、3-14元杂环基、C_6-14芳基及5-14元杂芳基，或两个R^bb基连接起来形成3-14元杂环基或5-14元杂芳环，其中每一烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基 可独自被0、1、2、3、4或5个R^dd基所取代；其中X^-是相对离子(counterion)；

每一R^cc独自选自由氢原子、C_1-10烷基、C_1-10全卤代烷基、C_2-10烯基、 C_2-10炔基、C_3-10碳环基、3-14元杂环基、C_6-14芳基及5-14元杂芳基，或 两个R^cc基连接起来形成3-14元杂环基或5-14元杂芳环，其中每一烷基、 烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基可独自被0、1、2、3、4或 5个R^dd基所取代；

每一R^dd独自选自由卤素、-CN、-NO₂、-N₃、-SO₂H、-SO₃H、-OH、 -OR^ee、-ON(R^ff)₂、-N(R^ff)₂、-N(R^ff)₃ ⁺X^-、-N(OR^ee)R^ff、-SH、-SR^ee、-SSR^ee、 -C(＝O)R^ee、-CO₂H、-CO₂R^ee、-OC(＝O)R^ee、-OCO₂R^ee、-C(＝O)N(R^ff)₂、 -OC(＝O)N(R^ff)₂、-NR^ffC(＝O)R^ee、-NR^ffCO₂R^ee、-NR^ffC(＝O)N(R^ff)₂、- C(＝NR^ff)OR^ee、-OC(＝NR^ff)R^ee、-OC(＝NR^ff)OR^ee、-C(＝NR^ff)N(R^ff)₂、- OC(＝NR^ff)N(R^ff)₂、-NR^ffC(＝NR^ff)N(R^ff)₂、-NR^ffSO₂R^ee、-SO₂N(R^ff)₂、-SO₂R^ee、 -SO₂OR^ee、-OSO₂R^ee、-S(＝O)R^ee、-Si(R^ee)₃、-OSi(R^ee)₃、-C(＝S)N(R^ff)₂、 -C(＝O)SR^ee、-C(＝S)SR^ee、-SC(＝S)SR^ee、-p(＝O)(OR^ee)₂、-p(＝O)(R^ee)₂、- OP(＝O)(R^ee)₂、-OP(＝O)(OR^ee)₂、C_1-6烷基、C_1-6全卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-10碳环基、3-10元杂环基、C_6-10芳基及5-10元杂芳基，其中 每一烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基可独自被0、1、 2、3、4或5个R^dd基所取代；或两个偕R^dd取代基可连接在一起形成＝O 或＝S；其中X^-是相对离子；

每一R^ee独自选自由C_1-6烷基、C_1-6全卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、 C_3-10碳环基、C_6-10芳基、3-10元杂环基及3-10元杂芳基，其中每一烷基、 烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基可独自被0、1、2、3、4或 5个R^gg基所取代；

每一R^ff独自选自由氢、C_1-6烷基、C_1-6全卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-10碳环基、3-10元杂环基、C_6-10芳基及5-10元杂芳基，或两个 R^ff基连接在一起形成3-14元杂环基或5-14元杂芳环，其中每一烷基、烯 基、炔基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基可独自被0、1、2、3、4或5 个R^gg基所取代；且

每一R^gg独自选自由卤素、-CN、-NO₂、-N₃、-SO₂H、-SO₃H、-OH、 -OC_1-6烷基、-ON(C_1-6烷基)₂、-N(C_1-6烷基)₂、-N(C_1-6烷基)₃ ⁺X^-、-NH(C_1-6烷基)₂ ⁺X^-、-NH₂(C_1-6烷基)⁺X^-、-NH₃ ⁺X^-、-N(OC_1-6烷基)(C_1-6烷基)、 -N(OH)(C_1-6烷基)、-NH(OH)、-SH、-SC_1-6烷基、-SS(C_1-6烷基)、-C(＝O)(C_1-6烷基)、-CO₂H、-CO₂(C_1-6烷基)、-OC(＝O)(C_1-6烷基)、-OCO₂(C_1-6烷基)、 -C(＝O)NH₂、-C(＝O)N(C_1-6烷基)₂、-OC(＝O)NH(C_1-6烷基)、-NHC(＝O)(C_1-6烷基)、-N(C_1-6烷基)C(＝O)(C_1-6烷基)、-NHCO₂(C_1-6烷基)、-NHC(＝O)N(C_1-6烷基)₂、-NHC(＝O)NH(C_1-6烷基)、-NHC(＝O)NH₂、-C(＝NH)O(C_1-6烷基)、 -OC(＝NH)(C_1-6烷基)、-OC(＝NH)OC_1-6烷基、-C(＝NH)N(C_1-6烷基)₂、 -C(＝NH)NH(C_1-6烷基)、-C(＝NH)NH₂、-OC(＝NH)N(C_1-6烷基)₂、 -OC(NH)NH(C_1-6烷基)、-OC(NH)NH₂、-NHC(NH)N(C_1-6烷基)₂、 -NHC(＝NH)NH₂、-NHSO₂(C_1-6烷基)、-SO₂N(C_1-6烷基)₂、-SO₂NH(C_1-6烷 基)、-SO₂NH₂、-SO₂C_1-6烷基、-SO₂OC_1-6烷基、-OSO₂C_1-6烷基、-SOC_1-6烷基、-Si(C_1-6烷基)₃、-OSi(C_1-6烷基)₃、-C(＝S)N(C_1-6烷基)₂、-C(＝S)NH(C_1-6烷基)、-C(＝S)NH₂、-C(＝O)S(C_1-6烷基)、-C(＝S)SC_1-6烷基、-SC(＝S)SC_1-6烷基、-P(＝O)(OC_1-6烷基)₂、-P(＝O)(C_1-6烷基)₂、-OP(＝O)(C_1-6烷基)₂、 -OP(＝O)(OC_1-6烷基)₂、C_1-6烷基、C_1-6全卤代烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-10碳环基、C_6-10芳基、3-10元杂环基、5-10元杂芳基；或两个偕R^gg取代基可连接在一起形成＝O或＝S；其中X^-是相对离子。

“相对离子”(counterion)或“阴离子型相对离子”(anionic counterion) 是与正电荷基团结合以维持电中性的负电荷基团。阴离子型相对离子可以 是单价(即包含一形式负电荷)。阴离子型相对离子亦可为多价(即包含 多于一个的形式负电荷)，例如二价或三价。示例性相对离子包含卤离子 (例如F^-、Cl^-、Br^-、I^-)、NO₃ ^-、ClO₄ ^-、OH^-、H₂PO₄ ^-、HSO₄ ^-、磺酸根离子(例如，甲磺酸根、三氟甲磺酸根、对甲苯磺酸根、苯磺酸根、10- 樟脑磺酸根、萘-2-磺酸根、萘-1-磺酸-5-磺酸根、乙-1-磺酸-2-磺酸根及其 类似者)、羧酸根离子(例如，乙酸根、丙酸根、苯甲酸根、甘油酸根、 乳酸根、酒石酸根、羟乙酸根、葡萄糖酸根及其类似者)、BF₄ ^-、PF₄ ^-、 PF₆ ^-、AsF₆ ^-、SbF₆ ^-、B[3、5-(CF₃)₂C₆H₃]₄]^-、BPh₄ ^-、Al(OC(CF₃)₃)₄ ^-及碳硼 烷阴离子(例如CB₁₁H₁₂ ^-或(HCB₁₁Me₅Br₆)^-)。示例性的多价相对离子包含 CO₃ ^2-、HPO₄ ^2-、PO₄ ^3-、B₄O₇ ^2-、SO₄ ^2-、S₂O₃ ^2-、羧酸根离子(例如酒石酸 根、柠檬酸根、反丁烯二酸根、顺丁烯二酸根、苹果酸根、丙二酸根、葡 萄糖酸根、琥珀酸根、戊二酸根、己二酸根、庚二酸根、辛二酸根、壬二 酸根、癸二酸根、水杨酸根(salicylate)、邻苯二甲酸根(phthalates)、天 门冬胺酸根(aspartate)、麸胺酸根(glutamate)及其类似者)以及碳硼烷。

“卤”(halo)或“卤素”(haolgen)是指氟原子(氟，-F)、氯原子 (氯，-C1)、溴原子(溴，-Br)或碘原子(碘，-I)。

“酰基”(acyl)是指选自由-C(＝O)R^aa、-CHO、-CO₂R^aa、-C(＝O)N(R^bb)₂、 -C(＝NR^bb)R^aa、-C(＝NR^bb)OR^aa、-C(＝NR^bb)N(R^bb)₂、-C(＝O)NR^bbSO₂R^aa、 -C(＝S)N(R^bb)₂、-C(＝O)SR^aa及-C(＝S)SR^aa所组成的群组，其中R^aa和R^bb如 本文所定义。

氮原子在价数允许下可经取代或不经取代，其包括伯、仲、叔及季氮 原子。示例性的氮原子取代基包含，但不限于，氢、-OH、-OR^aa、-N(R^cc)₂、 -CN、-C(＝O)R^aa、-C(＝O)N(R^cc)₂、-CO₂R^aa、-SO₂R^aa、-C(＝NR^bb)R^aa、 -C(＝NR^cc)OR^aa、-C(＝NR^cc)N(R^cc)₂、-SO₂N(R^cc)₂、-SO₂R^cc、-SO₂OR^cc、-SOR^aa、 -C(＝S)N(R^cc)₂、-C(＝O)SR^cc、-C(＝S)SR^cc、-P(＝O)(OR^cc)₂、-P(＝O)(R^aa)₂、 -P(＝O)(N(R^cc)₂)₂、C_1-10烷基、C_1-10全卤烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_3-10碳环基、3-14元杂环基、C_6-14芳基及5-14元杂芳基，或接至N原子的二 个R^cc基连结形成3-14元杂环或5-14元杂芳环，其中每一烷基、烯基、炔 基、碳环基、杂环基、芳基及杂芳基可独自被0、1、2、3、4或5个R^dd基所取代，其中，R^aa、R^bb、R^cc和R^dd如本文所定义。

在某些实施例中，氮原子上的取代基为氮保护基(亦称为氨基保护基 团)。氮保护基包括，但不限于，-OH、-OR^aa、-N(R^cc)₂、-C(＝O)R^aa、- C(＝O)N(R^cc)₂、-CO₂R^aa、-SO₂R^aa、-C(＝NR^cc)R^aa、-C(＝NR^cc)OR^aa、- C(＝NR^cc)N(R^cc)₂、-SO₂N(R^cc)₂、-SO₂R^cc、-SO₂OR^cc、-SOR^aa、-C(＝S)N(R^cc)₂、 -C(＝O)SR^cc、-C(＝S)SR^cc、C_1-10烷基(例如芳烷基、杂芳烷基)、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_3-10碳环基、3-14元杂环基、C_6-14芳基及5-14元杂芳基，其 中每一烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳烷基、芳基及杂芳基可独 自被0、1、2、3、4或5个R^dd基所取代，其中，R^aa、R^bb、R^cc和R^dd如 本文所定义。本发明所属领域普通技术人员皆知氮保护基团，其包含《Protecting Groups in Organic Synthesis，T.W.Greene and P.G.M.Wuts，3^rd edition，John Wiley&Sons，1999》所述内容，其并于此作为参考。

举例来说，诸如酰胺基(如，-C(＝O)R^aa)的氮保护基包含，但不限 于，甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯乙酰胺、 3-苯丙酰胺、吡啶甲酰胺(picolinamide)、3-吡啶羧酰胺(3- pyridylcarboxamide)、N-苯甲酰基苯丙胺酰基衍生物(N-benzoyl phenylalanyl derivative)、苯甲酰胺(benzamide)、对-苯基苯甲酰胺(p-phenylbenzamide)、邻-硝基苯乙酰胺(o-nitophenylacetamide)、邻-硝基苯 氧乙酰胺(o-nitrophenoxyacetamide)、乙酰乙酰胺(acetoacetamide)、(N′ -二硫苯甲氧酰胺)乙酰胺((N′-dithiobenzyloxyacylamino)acetamide)、 3-(对-羟基苯基)丙酰胺((N′-dithiobenzyloxyacylamino)acetamide)、 3-(邻-硝基苯基)丙酰胺(3-(o-nitrophenyl)propanamide)、2-甲基-2-(邻 -硝基苯氧基)丙酰胺(2-methyl-2-(o-nitrophenoxy)propanamide)、2-甲 基-2-(邻-苯偶氮苯氧基)丙酰胺(2-methyl-2-(o-phenylazophenoxy)propanamide)、4-氯丁酰胺(4-chloro butanamide)、3- 甲基-3-硝基丁酰胺(3-methyl-3-nitrobutanamide)、邻-硝基肉桂酰胺(o- nitrocinnamide)、N-乙酰甲硫胺酸衍生物(N-acetyl methionine derivative)、 邻-硝基苯甲酰胺(o-nitrobenzamide)及邻-(苯甲酰氧基甲基)苯甲酰胺 (o-(benzoyloxy methyl)benzamide)。

诸如胺甲酸酯基(例如，-C(＝O)R^aa)的氮保护基团包含，但不限于， 胺甲酸甲酯(methyl carbamate)、胺甲酸乙酯(ethylcarbamate)、胺甲酸 9-茀甲酯(9-fluorenylmethyl carbamate，Fmoc)、胺甲酸9-(2-硫)茀甲酯 (9-(2-sulfo)fluorenylmethyl carbamate)、胺甲酸9-(2，7-二溴)茀甲酯 (9-(2，7-dibromo)fluoroenylmethylcarbamate)、胺甲酸2，7-二-叔丁基-[9- (10，10-二氧代-10，10，10，10-四氢噻吨基)]甲酯(2，7-di-t-butyl- [9-(10，10-dioxo-10，10，10，10-tetrahydro thioxanthyl)]methylcarbamate， DBD-Tmoc)、胺甲酸4-甲氧苯甲酰甲酯(4-methoxyphenacyl carbamate，Phenoc)、胺甲酸2，2，2-三氯乙酯(2，2，2-trichloroethyl carbamate，Troc)、 胺甲酸2-三甲硅乙酯(2-trimethylsilylethyl carbamate，Teoc)、胺甲酸2- 苯乙酯(2-phenylethylcarbamate，hZ)、胺甲酸1-(1-金刚烷基)-1-甲 基乙酯(1-(1-adamantyl)-1-methylethylcarbamate，Adpoc)、胺甲酸1，1- 二甲基-2-卤乙酯(1，1-dimethyl-2-haloethylcarbamate)、胺甲酸1，1-二甲基 -2，2-二溴乙酯(1，1-dimethyl-2，2-dibromoethylcarbamate，DB-t-BOC)、胺 甲酸1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙酯(1，1-dimethyl-2，2，2-trichloroethyl carbamate，TCBOC)、胺甲酸1-甲基-1-(4-联苯基)乙酯(1-methyl-1- (4-biphenylyl)ethyl carbamate，Bpoc)、胺甲酸1-(3，5-二-叔丁基苯基) -1-甲基乙酯(1-(3，5-di-t-butyl phenyl)-1-methylethyl carbamate，t- Bumeoc)、胺甲酸2-(2′-和4′-吡啶基)乙酯(2-(2′-and 4′- pyridyl)ethyl carbamate，Pyoc)、胺甲酸2-(N，N-二环己基羧酰胺基)乙酯 (2-(N，N-dicyclohexylcarboxamido)ethyl carbamate)、胺甲酸叔-丁酯(t- butyl carbamate，BOC或Boc)、胺甲酸1-金刚烷酯(1-adamantyl carbamate， Adoc)、胺甲酸乙烯酯(vinyl carbamate，Voc)、胺甲酸烯丙酯(allyl carbamate，Alloc)、胺甲酸1-异丙基烯丙酯(1-isopropylallyl carbamate， Ipaoc)、胺甲酸肉桂酯(cinnamylcarbamate，Coc)、胺甲酸4-硝基肉桂 酯(4-nitrocinnamyl carbamate，Noc)、胺甲酸8-喹啉基酯、(8-quinolyl carbamate)、胺甲酸N-羟呱啶酯(N-hydroxypiperidinylcarbamate)、胺甲 酸二硫代烷基酯(alkyldithio carbamate)、胺甲酸苯甲基酯(benzylcarbamate，Cbz)、胺甲酸对-甲氧苯甲基酯(p-methoxy benzyl carbamate，Moz)、 胺甲酸对-硝基苯甲基酯(p-nitobenzyl carbamate)、胺甲酸对-溴苯甲基酯 (p-bromobenzylcarbamate)、胺甲酸对-氯苯甲基酯(p-chloro benzyl carbamate)、胺甲酸2，4-二氯苯甲基酯(2，4-dichlorobenzyl carbamate)、胺 甲酸4-甲亚磺酰苯甲基酯(4-methylsulfinylbenzyl carbamate，Msz)、胺甲 酸9-蒽甲酯(9-anthrylmethylcarbamate)、胺甲酸二苯甲酯(diphenylmethyl carbamate)、胺甲酸2-甲基硫代乙酯(2-methylthioethyl carbamate)、胺甲 酸2-甲基磺酰乙酯(2-methylsulfonylethylcarbamate)、胺甲酸2-(对-甲 苯磺酰基)乙酯(2-(p-toluene sulfonyl)ethylcarbamate)、胺甲酸[2- (1，3-二硫杂环己基)]甲酯([2-(1，3-dithianyl)]methylcarbamate，Dmoc)、 胺甲酸4-甲基硫代苯酯(4-methylthiophenyl carbamate，Mtpc)、胺甲酸 2，4-二甲基硫代苯酯(2，4-dimethylthiophenyl carbamate，Bmpc)、胺甲酸 2-磷鎓基乙酯(2-phosphonioethyl carbamate，Peoc)、胺甲酸2-三苯基磷 鎓基异丙酯(2-triphenylphosphonioisopropyl carbamate，Ppoc)、胺甲酸1，1- 二甲基-2-氰乙酯(1，1-dimethyl-2-cyanoethyl carbamate)、胺甲酸间-氯-对 -酰氧苯甲基酯(m-chloro-p-acyloxybenzyl carbamate)、胺甲酸对-(二羟 氧硼基)苯甲基酯(p-(di hydroxyboryl)benzyl carbamate)、胺甲酸5-苯并 异恶唑基甲酯(5-benzisoxazolyl methylcarbamate)、胺甲酸2-(三氟甲 基)-6-色酮基甲配(2-(trifluoromethyl)-6-chromonylmethyl carbamate， Tcroc)、胺甲酸间-硝基苯酯(m-nitrophenyl carbamate)、胺甲酸3，5-二甲 氧基苯甲基酯(3，5-dimethoxy benzyl carbamate)、胺甲酸邻-硝基苯甲基 酯(o-nitrobenzyl carbamate)、胺甲酸3，4-二甲氧基-6-硝基苯甲基酯(3，4- dimethoxy-6-nitro)、胺甲酸苯基(邻-硝基苯基)甲酯(benzyl carbamate， phenyl(o-nitrophenyl)methyl carbamate)、胺甲酸叔-戊酯(t-amyl carbamate)、硫代胺甲酸S-苯甲基酯(S-benzyl thiocarbamate)、胺甲酸对 -氰基苯甲基酯(p-cyanobenzyl carbamate)、胺甲酸环丁酯(cyclobutyl carbamate)、胺甲酸环己酯(cyclohexyl carbamate)、胺甲酸环戊酯(cyclopentyl carbamate)、胺甲酸环丙基甲酯(cyclopropyl methyl carbamate)、胺甲酸对-癸氧苯甲基酯(p-decyloxybenzyl carbamate)、胺 甲酸2，2-二甲氧酰基乙烯酯(2，2-dimethoxyacylvinyl carbamate)、胺甲酸 邻-(N，N-二甲基羧酰胺基)苯甲基酯o-(N，N-dimethylcarboxamido)benzyl carbamate)、胺甲酸1，1-二甲基-3-(N，N-二甲基羧酰胺基)丙酯 (1，1-dimethyl-3-(N，N-dimethylcarbox amido)propyl carbamate)、胺甲酸 1，1-二甲基丙炔酯(1，1-dimethylpropynyl carbamate)、胺甲酸二(2-吡啶 基)甲酯(di(2-pyridyl)methyl carbamate)、胺甲酸2-呋喃基甲酯(2-furanyl methyl carbamate)、胺甲酸2-碘乙酯(2-iodoethyl carbamate)、胺甲酸异 冰片酯(isoborynl carbamate)、胺甲酸异丁酯(isobutyl carbamate)、胺甲 酸异烟碱酰酯(isonicotinyl carbamate)、胺甲酸对-(对’-甲氧苯偶氮)苯 甲基酯(p-(p′-methoxyphenylazo)benzyl carbamate)、胺甲酸1-甲基环丁 酯(1-methylcyclobutyl carbamate)、胺甲酸1-甲基环己酯(1-methylcyclohexyl carbamate)、胺甲酸1-甲基-1-环丙基甲酯(1- methyl-1-cyclopropylmethyl carbamate)、胺甲酸1-甲基-1-(3，5-二甲氧苯 基)乙酯(1-methyl-1-(3，5-dimethoxy phenyl)ethyl carbamate)、胺甲酸 1-甲基-1-(对-苯偶氮苯基)乙酯(1-methyl-1-(p-phenylazophenyl)ethyl carbamate)、胺甲酸1-甲基-1-苯乙酯(1-methyl-1-phenyl ethyl carbamate)、 胺甲酸1-甲基-1-(4-吡啶基)乙酯(1-methyl-1-(4-pyridyl)ethyl carbamate)、 胺甲酸苯酯(phenyl carbamate)、胺甲酸对-(苯偶氮)苯甲酯(p- (phenylazo)benzyl carbamate)、胺甲酸2，4，6-三-叔-丁基苯酯(2，4，6-tri-t-butylphenyl carbamate)、胺甲酸4-(三甲基铵)苯甲酯 (4-(trimethylammonium)benzylcarbamate)、及胺甲酸2，4，6-三甲基苯甲 酯(2，4，6-trimethylbenzyl carbamate)。

诸如磺酰胺基(例如，-S(＝O)₂R^aa)的氮保护基包含，但不限于，对- 甲苯磺酰胺(p-toluenesulfonamide，Ts)、苯磺酰胺(benzenesulfonamide)、 2，3，6-三甲基-4-甲氧苯磺酰胺(2，3，6，-trimethyl-4-methoxybenzene sulfonamide，Mtr)、2，4，6-三甲氧苯磺酰胺(2，4，6- trimethoxybenzenesulfonamide，Mtb)、2，6-二甲基-4-甲氧苯磺酰胺(2，6-dimethyl-4-methoxybenzenesulfonamide，Pme)、2，3，5，6-四甲基-4-甲氧苯磺 酰胺(2，3，5，6-tetra methyl-4-methoxybenzenesulfonamide，Mte)、4-甲氧苯 磺酰胺(4-methoxybenzene sulfonamide，Mbs)、2，4，6-三甲基苯磺酰胺 (2，4，6-trimethylbenzenesulfonamide，Mts)、2，6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺(2，6-dimethoxy-4-methylbenzenesulfonamide，iMds)、2，2，5，7，8-五甲基色 烷-6-磺酰胺(2，2，5，7，8-pentamethylchroman-6-sulfonamide，Pmc)、甲烷 磺酰胺(methanesulfonamide，Ms)、β-三甲硅基乙烷磺酰胺 (methanesulfonamide，SES)、9-蒽磺酰胺(9-anthracene sulfonamide)、4-(4′，8′-二甲氧萘基甲基)苯磺酰胺(4-(4′，8′-dimethoxynaphthyl methyl)benzenesulfonamide，DNMBS)、苯甲磺酰胺(benzylsulfonamide)、 三氟甲基磺酰胺(trifluoromethylsulfonamide)和苯甲酰甲基磺酰胺 (phenacyl sulfonamide)。

其他氮保护基包含，但不限于，吩噻嗪基-(10)-酰基衍生物 (phenothiazinyl-(10)-acyl derivative)、N’-对-甲苯磺酰胺酰基衍生物(N′ -p-toluenesulfonylaminoacyl derivative)、N’-苯胺硫代酰基衍生物(N′ -phenylaminothioacylderivative)、N-苯甲酰基苯基丙胺酰基衍生物(N- benzoylphenylalanyl derivative)、N-乙酰基甲硫胺酸衍生物(N- acetylmethionine derivative)、4，5-二苯基-3-恶唑啉-2-酮(4，5-dipheny1-3- oxazolin-2-one)、N-酞酰亚胺(N-phthalimide)、N-二硫代丁二酰亚胺 (N-dithiasuccinimide，Dts)、N-2，3-二苯基顺丁烯二酰亚胺(N-2，3-diphenylmaleimide)、N-2，5-二甲基吡咯(N-2，5-dimethylpyrrole)、N-1，1，4，4- 四甲基二硅基氮环戊烷加成物(N-1，1，4，4-tetramethyldisilylazacyclopentane adduct，STABASE)、5-经取代的1，3-二甲基-1，3，5-三氮环己-2-酮 (5-substituted 1，3-dimethyl-1，3，5-triazacyclohexan-2-one)、5-经取代的1，3- 二苯甲基-1，3，5-三氮环己-2-酮(5-substituted 1，3-dibenzyl-1，3，5-triazacyclohexan-2-one)、1-经取代的3，5-二硝基-4-吡啶 酮(1-substituted 3，5-dinitro-4-pyridone)、N-甲胺(N-methylamine)、N- 烯丙胺(N-allylamine)、N-[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲胺(N-[2-(trimethylsilyl) ethoxy]methylamine，SEM)、N-3-乙酰氧基丙胺(N-3-acetoxypropylamine)、 N-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)胺 (N-(1-isopropyl-4-nitro-2-oxo-3-pyroolin-3-yl)amine)、季铵盐(quaternary ammonium salts)、N-苯甲胺(N-benzylamine)、N-二(4-甲氧苯基)甲 胺(N-di(4-methoxyphenyl)methylamine)、N-5-二苯并环庚胺 (N-5-dibenzosuberylamine)、N-三苯甲基胺(N-triphenylmethylamine，Tr)、N-[(4-甲氧苯基)二苯基甲基]胺(N-[(4- methoxyphenyl)diphenylmethyl]amine，MMTr)、N-9-苯茀胺 (N-9-phenylfluorenyl amine，PhF)、N-2，7-二氯-9-茀亚甲胺(N-2，7-dichloro-9-fluorenylmethyleneamine)、N-二茂铁基甲胺基(N-ferrocenyl methylamino，Fcm)、N-2-吡啶甲胺N-氧化物(N-2-picolylamino N-oxide)、 N-1，1-二甲基硫亚甲胺(N-1，1-dimethyl thiomethyleneamine)、N-苯亚甲基 胺(N-benzylidene amine)、N-p-甲氧苯亚甲基胺(N-p-methoxybenzylidene amine)、N-二苯基亚甲基胺(N-diphenylmethyleneamine)、N-[(2-吡啶基) 均三甲苯基]亚甲胺(N-[(2-pyridyl)mesityl]methylene amine)、N-(N′，N′ -二甲基胺亚甲基)胺(N-(N′，N′-dimethylaminomethylene)amine)、N，N′ -异亚丙二胺(N，N′-isopropylidene diamine)、N-对-硝苯亚甲基胺 (N-p-nitrobenzylideneamine)、N-亚水杨基胺(N-salicylideneamine)、N-5-氯亚水杨基胺(N-5-chloro salicylideneamine)、N-(5-氯-2-羟苯基)苯亚 甲胺(N-(5-chloro-2-hydroxyphenyl)phenylmethyleneamine)、N-环亚己基 胺(N-cyclohexylideneamine)、N-(5，5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)胺 (N-(5，5-dimethyl-3-oxo-1-cyclohexenyl)amine)、N-硼烷衍生物(N-borane derivative)、N-二苯基硼酸衍生物(N-diphenylborinic acid derivative)、N-[苯 基(五酰铬-或钨)酰基]胺(N-phenyl(pentaacylchromium-or tungsten)acyl]amine)、N-铜螯合物(N-copper chelate)、N-锌螯合物(N-zinc chelate)、N-硝基胺(N-nitroamine)、N-亚硝胺(N-nitrosoamine)、胺N-氧化物(amine N-oxide)、二苯基膦酰胺(diphenylphosphin amide，Dpp)、 二甲基硫代膦酰胺(dimethylthiophosphinamide，Mpt)、二苯基硫代膦酰 胺(diphenylthiophosphinamide，Ppt)、胺基磷酸二烷酯(dialkyl phosphoramidates)、胺基磷酸二苯甲酯(dibenzylphosphoramidate)、胺基 磷酸二苯酯(diphenyl phosphoramidate)、苯次磺酰胺(benzenesulfenamide)、 邻-硝基苯次磺酰胺(o-nitrobenzenesulfen amide，Nps)、2，4-二硝基苯次 磺酰胺(2，4-dinitro benzenesulfenamide)、五氯苯次磺酰胺(pentachlorobenzene sulfonamide)、2-硝基-4-甲氧苯次磺酰胺(2-nitro-4-methoxybenzenesulfenamide)、三苯基甲基次磺酰胺(triphenyl methyl sulfonamide)及3-硝基吡啶次磺酰胺(3-nitropyridinesulfen amide，Npys)。

示例性氧原子取代基包括，但不限于，-R^aa、-C(＝O)SR^aa、-C(＝O)R^aa、 -CO₂R^aa、-C(＝O)N(R^bb)₂、-C(＝NR^bb)R^aa、-C(＝NR^bb)OR^aa、-C(＝NR^bb)N(R^bb)₂、 -S(＝O)R^aa、-SO₂R^aa、-Si(R^aa)₃、-P(R^cc)₂、-P(R^cc)₃ ⁺X^-、-P(OR^cc)₂、-P(OR^cc)₃ ⁺X^-、 -P(＝O)(R^aa)₂、-P(＝O)(OR^cc)₂及-P(＝O)(N(R^bb)₂)₂，其中X^-、R^aa、R^bb及R^cc如本文所定义。在某些实施例中，氧原子上的氧原子取代基为氧保护基 (亦称为羟基保护基)。本发明所属领域普通技术人员皆知氧保护基，其包含《Protecting Groups in Organic Synthesis，T.W.Greene and P.G.M.Wuts，3^rdedition，John Wiley&Sons，1999》所述内容，其详细描述并于此做为参 考。示例性的氧保护基包含，但不限于，甲基、叔丁氧羰基(BOC或Boc)、 甲氧甲基(MOM)、甲基硫代甲基(MTM)、叔-丁基硫代甲基、(苯基二 甲基硅基)甲氧甲基(SMOM)、苯甲氧甲基(BOM)、对-甲氧苯甲氧甲 基(PMBM)、(4-甲氧基苯氧基)甲基(p-AOM)、愈创木酚甲基 (guaiacolmethyl，GUM)、叔-丁氧甲基、4-戊烯氧甲基(POM)、硅氧甲 基、2-甲氧乙氧甲基(MEM)、2，2，2-三氯乙氧甲基、双(2-氯乙氧基) 甲基、2-(三甲基硅基)乙氧甲基(SEMOR)、四氢吡喃基(THP)、3-溴四氢吡喃基(3-bromotetra hydropyranyl)、四氢噻喃基 (tetrahydrothiopyranyl)、1-甲氧环己基、4-甲氧四氢吡喃基(MTHP)、4- 甲氧四氢噻喃基、4-甲氧四氢噻喃基S，S-二氧化物(4-methoxy tetrahydrothiopyranyl S，S-dioxide)、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧哌啶 -4-基(CTMP)、1，4-二

烷-2-基(1，4-dioxan-2-y1)、四氢呋喃基、四氢硫 代呋喃基(tetrahydrothiofuranyl)、2，3，3a，4，5，6，7，7a-八氢-7，8，8-三甲基-4，7- 甲桥苯并呋喃-2-基 (2，3，3a，4，5，6，7，7a-octahydro-7，8，8-trimethyl-4，7-methanobenzo furan-2-y1)、 1-乙氧乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、1-甲基-1-甲氧乙基、1-甲基-1-苯甲 氧乙基、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙基、2，2，2-三氯乙基、2-三甲基硅基乙 基、2-(苯基硒基)乙基、叔-丁基、烯丙基、对-氯苯基、对-甲氧苯基、 2，4-二硝基苯基、苯甲基(Bn)、对-甲氧苯甲基、3，4-二甲氧苯甲基、邻 -硝基苯甲基、对-硝基苯甲基、对-卤苯甲基、2，6-二氯苯甲基、对-氰苯甲 基、对-苯基苯甲基、2-吡啶甲基(2-picolyl)、4-吡啶甲基(4-picolyl)、 3-甲基-2-吡啶甲基N-氧撑(3-methyl-2-picolyl N-oxido)、二苯基甲基、对， 对′-二硝基二苯甲基(p，p′-dinitrobenzhydryl)、5-二苯并环庚基(5- dibenzosuberyl)、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、对-甲氧苯基二苯基甲 基、二(对-甲氧苯基)苯基甲基、三(对-甲氧基苯基)甲基、4-(4′- 溴苯甲酰甲氧苯基)二苯基甲基、4，4′，4″-三(4，5-二氯酞酰亚胺苯基)甲基、4，4′，4″-三(4-乙酰丙酰基氧基苯基)甲基(4，4′，4″-tris(1evulinoyloxy phenyl)methyl)、4，4′，4″-三(苯甲酰氧苯基)甲基、3-(咪唑-1-基)双(4′，4″- 二甲氧基苯基)甲基、1，1-双(4-甲氧苯基)-1’-芘基甲基、9-蒽基、9- (9-苯基)吨基(9-(9-phenyl)xanthenyl)、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基 (9-(9-phenyl-10-oxo)anthryl)、1，3-苯并二硫杂环戊烷-2-基(，3-benzo disulfuran-2-yl)、苯并异噻唑基S，S-二氧撑(benzisothiazolylS，S-dioxido)、 三甲基硅基(TMS)、三乙基硅基(TES)、三异丙基硅基(TIPS)、二甲 基异丙基硅基(IPDMS)、二乙基异丙基硅基(DEIPS)、二甲基叔己基硅 基(dimethylthexylsilyl)、叔丁基二甲基硅基(TBDMS)、叔丁基二苯基硅 基(TBDPS)、三苯甲基硅基、三-对-二甲苯基硅基、三苯基硅基、二苯基 甲基硅基(DPMS)、叔丁基甲氧基苯基硅基(TBMPS)、甲酸根、苯甲酰甲酸根、乙酸根、氯乙酸根、二氯乙酸根、三氯乙酸根、三氟乙酸根、 甲氧基乙酸根、三苯基甲氧乙酸根、苯氧乙酸根、对-氯苯氧乙酸根、3- 苯基丙酸根、4-氧代戊酸根(乙酰丙酸根(levulinate))、4，4-(亚乙基二 硫)戊酸根(乙酰丙酰基二硫缩醛(1evulinoyldithioacetal))、特戊酸根 (pivaloate)、金刚酸根(adamantoate)、巴豆酸根、4-甲氧巴豆酸根、苯 甲酸根、对-苯基苯甲酸根、2，4，6-三甲基苯甲酸根(菜酸根)、烷基甲基碳 酸根、9-茀甲基碳酸根(Fmoc)、烷基乙基碳酸根、烷基2，2，2-三氯乙基 碳酸根(Troc)、2-(三甲基硅基)乙基碳酸根(TMSEC)、2-(苯磺酰基) 乙基碳酸根(Psec)、2-(三苯基磷鎓基)乙基碳酸根(Peoc)、烷基异丁 基碳酸根、烷基乙烯基碳酸根、烷基烯丙基碳酸根、烷基对-硝苯基碳酸根、 烷基苯甲碳酸根、烷基对-甲氧苯甲基碳酸根、烷基3，4-二甲氧苯甲碳酸根、 烷基邻-硝苯甲基碳酸根、烷基对-硝苯甲基碳酸根、烷基S-苯甲基硫代碳 酸根、4-乙氧-1-萘基碳酸根、甲基二硫碳酸根、2-碘苯甲酸根、4-叠氮基 丁酸根、4-硝基-4-甲基戊酸根、邻-(二溴甲基)苯甲酸根、2-甲酰苯磺酸 根、2-(甲基硫代甲氧基)乙基、4-(甲基硫代甲氧基)丁酸根、2-(甲 基硫代甲氧甲基)苯甲酸根、2，6-二氯-4-甲基苯氧乙酸根、2，6-二氯-4- (1，1，3，3-四甲基丁基)苯氧乙酸根、2，4-双(1，1，-二甲基丙基)苯氧乙酸根、氯二苯乙酸根、异丁酸根、单丁二酸根、(E)-2-甲基-丁烯酸根、邻- (甲氧酰基)苯甲酸根、α-萘酸根、硝酸根、烷基N，N，N′，N′-四甲基二 胺基磷酸根、烷基N-苯基胺甲酸根、硼酸根、二甲基硫膦基 (dimethylphosphinothioyl)、烷基2，4-二硝基苯次磺酸根、硫酸根、甲烷 磺酸根(甲磺酸根)、苯甲基磺酸根和甲苯磺酸根(Ts)。

示例性硫原子取代基包括，但不限于，-R^aa、-C(＝O)SR^aa、-C(＝O)R^aa、 -CO₂R^aa、-C(＝O)N(R^bb)₂、-C(＝NR^bb)R^aa、-C(＝NR^bb)OR^aa、-C(＝NR^bb)N(R^bb)₂、 -S(＝O)R^aa、-SO₂R^aa、-Si(R^aa)₃、-P(R^cc)₂、-P(R^cc)₃ ⁺X^-、-P(OR^cc)₂、-P(OR^cc)₃ ⁺X^-、 -P(＝O)(R^aa)₂、-P(＝O)(OR^cc)₂及-P(＝O)(N(R^bb)₂)₂，其中R^aa、R^bb及R^cc如本 文所定义。

“烃链”(hydrocarbon chain)是指经取代或未经取代的二价烷基、烯 基或炔基。烃链包含(1)直接介于烃链二基团之间的一或多个碳原子链； (2)碳原子链上可任选的一或多个氢原子；以及(3)碳原子链上可任 选的一或多个取代基(“非链取代基”(non-chainsubstituents)，其不为氢)。 碳原子链由连续连接的碳原子(“链原子”(chain atoms)或碳单元)所组 成，且不包含氢原子或杂原子。然而，烃链的非链取代基可包含任何原子， 包含氢原子、碳原子及杂原子。举例来说，烃链-C^AH(C^BH₂C^CH₃)-包含一 链原子C^A、一位在C^A上的氢原子、以及非链取代基-(C^BH₂C^CH₃)。“C_x烃 链”(C_x hydrocarbon chain)(其中x为正整数)一词指包含x个链原子介 于烃链二基团之间的烃链。若有超过一个可能的x值，则以x的最小可能 值来定义烃链。举例来说，-CH(C₂H₅)-为C₁烃链，而

则为C₃烃链。当使用一范围值时，则该范围的含义如本文所述。举例来说，C_3-10烃链指介于烃链二基团之间的最短碳原子链的碳原子数为3、4、5、6、7、 8、9或10的烃链。烃链可为饱和(例如-(CH₂)₄-)。烃链也可为不饱和， 其包含一或多个位于烃链任何位置的C＝C和/或C≡C键。举例来说， -CH＝CH-(CH₂)₂-、-CH₂-C≡C-CH₂-及-C≡C-CH＝CH-皆为未经取代且未饱 和的烃链范例。在某些实施方式中，烃链为未经取代(例如，-C≡C-或-(CH₂)₄-)。在某些实施方式中，烃链为经取代(例如，-CH(C₂H₅)-及-CF₂-)。 任二个位于烃链上的取代基可连接形成视情况经取代的碳环、视情况经取 代的杂环、视情况经取代的芳基，或视情况经取代的杂芳环。例如，

及

皆为烃链的示例。相较之下，在某些实施例中，

及

非属本文所述的烃链范围。当以杂原子取代C_x烃链的链原子时， 所得到的基团为有一链原子被杂原子取代的C_x烃链，而非C_x-1烃链。举例 来说，

为一链原子被氧原子取代的C₃烃链。“离去基”(leaving group)一词为合成有机化学领域中的一般含义，其指能被亲核剂 (nucleophile)置换的原子或基团。举例来说，可参见《Smith，MarchAdvanced Organic Chemistry 6th ed.(501-502)》。离去基的示例包含，但 不限于，卤素(例如，F、Cl、Br或I)、烷氧羰氧基(alkoxycarbonyloxy)、 芳氧基羰氧基(aryloxycarbonyloxy)、烷基磺酰氧基(alkanesulfonyloxy)、 芳磺酰氧基(arenesulfonyloxy)、烷基-羰氧基(例如乙酰氧基)、芳基羰氧 基、芳氧基、甲氧基、N，O-二甲基羟胺、苯基呫吨基(pixyl)及卤代甲酸 酯(haloformates)。在一些例子中，离去基为活化经取代的羟基(例如- OC(＝O)SR^aa、-OC(＝O)R^aa、-OCO₂R^aa、-OC(＝O)N(R^bb)₂、-OC(＝NR^bb)R^aa、 -OC(＝NR^bb)OR^aa、-OC(＝NR^bb)N(R^bb)₂、-OS(＝O)R^aa、-OSO₂R^aa、-OP(R^cc)₂、 -OP(R^cc)₃、-OP(＝O)₂R^aa、-OP(＝O)(R^aa)₂、-OP(＝O)(OR^cc)₂、-OP(＝O)₂N(R^bb)₂及-OP(＝O)(NR^bb)₂，其中R^aa、R^bb及R^cc如本文所定义)。在一些例子中， 离去基为磺酸酯，例如甲苯磺酸酯基(tosylate，-OTs)、甲磺酸酯基(mesylate， -OMs)、对-溴苯磺酸酯基(brosylate，-OBs)、-OS(＝O)₂(CF₂)₃CF₃(九氟 丁烷磺酸酯(nonaflate)，-ONf)或三氟甲磺酸酯(triflate，-OTf)。在一 些例子中，离去基为溴苯磺酸基(brosylate)，例如对-溴苯磺酰基(p-bromobenzenesulfonyloxy)。在一些例子中，离去基为硝基苯磺酰基 (nosylate)，例如2-硝基苯磺酰基(2-nitrobenzenesulfonyloxy)。在一些 实施例中，离去基为含磺酸根基团。在一些实施例中，离去基为甲苯磺酸 酯基。该离去基还可为氧化膦(phosphineoxide)(例如，在Mitsunobu反 应过程中形成)或内部离去基，例如环氧化物或环状硫酸根。离去基的其 他非限制范例为水、氨、醇、醚基团、硫醚基团、卤化锌、镁基团、重氮 盐及铜基团。

“医药上可接受的盐”(pharmaceutically acceptable salt)一词是指在 可靠的医学判断范围内，适合与人类及较为低等动物的组织接触使用，而 不会造成不适当的毒性、刺激性、过敏性反应等的盐类，且符合合理的利 益/风险比例。本发明所属技术领域普通技术人员已知医药上可接受的盐。 举例来说，Berge et al.在J.PharmaceuticalSciences，1977，66，1-19中详细 描述的医药上可接受的盐，其并于此做为标的参考且为参考目的。本发明 化合物的医药上可接受的盐包括衍生自合适无机及有机酸及碱的盐类。医药上可接受、无毒酸加成盐为胺基的盐类，其由胺基与无机酸(如盐酸、 氢溴酸、磷酸、硫酸及过氯酸)、或与有机酸(如乙酸、草酸、顺丁烯二 酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)、或通过使用本领域中已知的其 它方法(如离子交换法)而形成。其它医药上可接受的盐包括，己二酸盐、 藻酸盐、抗坏血酸盐、天门冬胺酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、酸式硫酸盐、 硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二 葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖 酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、 2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸 盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸 盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3- 苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、 硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐及其 类似者。衍生自适当碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵及N⁺(C_1-4烷基)₄ ^-的盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐等等。此 外，医药上可接受的盐包括，在合适的时候，由无毒的铵、季铵及胺阳离 子与相对离子(如卤素根(halide)、氢氧根(hydroxide)、羧酸根、硫酸 根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根及芳基磺酸根)所共同形成的盐类。

“溶剂合物”(solvate)一词是指通常通过溶剂分解反应(solvolysis) 而与溶剂结合在一起的化合物形式。此物理性结合可包含氢键。常规的溶 剂包含水、甲醇、乙醇、乙酸、二甲亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)、 四氢呋喃(THF)、二乙醚及其类似物。本文所述的化合物可制备成例如 晶体形式，也可为溶剂化。合适的溶剂合物包含医药上可接受的溶剂合物， 且还包含化学计量溶剂合物及非化学计量溶剂合物两者。在某些情况下， 举例来说，当一或多个溶剂分子并在晶形固体的晶格中时，溶剂合物将能 够分离。“溶剂合物”包含溶液相及可分离的溶剂合物。代表性溶剂合物 包含水合物(hydrate)、乙醇合物(ethanolate)以及甲醇合物(methanolate)。

“水合物”(hydrate)一词是指与水结合的化合物。一般来说，化合 物的水合物中所含有的水分子个数与水合物中化合物分子的个数呈一明 确比例。因此，举例来说，可以通式R·xH₂O来表示化合物的水合物，其 中R是化合物，而x则为大于0的数值。一既定化合物可形成多于一种形 式的水合物，包含，例如一水合物(x为1)、低水合物(x大于0且小于1，例如半水合物(R·0.5H₂O))及多水合物(x大于1，例如二水合物(R·2 H₂O)及六水合物(R·6H₂O))。

“互变异构物”(tautomers)或“互变异构的”(tautomeric)一词是指 因氢原子的至少一次形式迁移(formal migration)和至少一价数的改变(例 如，单键变双键、三键变单键或反之亦然)所形成的二个或更多可互相转 换的化合物。互变异构物的确切比例取决于几个因素，包括温度、溶剂和 酸碱值。可由酸或碱催化产生互变异构化(即，该反应提供一对互变异构 体)。示例性的互变异构化包括酮-至-烯醇、酰胺-至-酰亚胺、内酰胺-至-内酰亚胺、烯胺-至-亚胺及烯胺-至-(另一种烯胺)之间的互变异构化。

亦可理解，具有相同分子式但不同性质或原子键结次序或原子空间排 列的化合物称为“异构物”(isomer)。当其原子空间排列不同时，此种异 构物被称为“立体异构物”(stereoisomer)。

彼此不呈镜像的立体异构物称为“非对映异构物”(diastereomer)，而 彼此呈无法重叠的对映物称为“对映异构物”(enantiomer)。当化合物具 有不对称中心(例如，键结至四个不同基团)时，会产生一对对映异构物。 对映异构物的特点在于其不对称中心的绝对组态，其可以Cahn及Prelog 的R-和S-排序法则来阐述，或以分子旋转偏光平面的方式指定为右消旋 或左消旋(即，分别为(+)或(-)-异构物)。手性化合物可以个别对映 异构物或其混合物的形式存在。含有相同比例的对映异构物的混合物称为 “外消旋混合物”(racemic mixture)。

“多形体”(polymorph)一词是指呈特定晶体堆积排列(crystal packingarrangement)的化合物(或其盐、水合物或溶剂合物)的晶体形式。所有 多形体具有相同元素组成。不同的晶体形式通常具有不同的X射线绕射图 谱、红外线图谱、熔点、密度、硬度、晶型、光学及电性特性、稳定性及 溶解度。重结晶溶剂、结晶速度、储存温度以及其他因素均可能导致一种 晶体形式成为优势晶形。可在不同条件下以结晶作用来制备化合物的各种 多形体。

“前驱药”(prodrug)是指具有可裂解基团的化合物，其在溶剂分解 作用或生理条件下可转变为本文所述具有体内医药活性的化合物。这些例 子包含，但不限于，胆碱酯(choline ester)衍生物、N-烷基吗福林酯 (N-alkylmorpholine esters)及其类似者。本文所述的化合物的其它衍生物 在其酸及酸衍生物形式皆具有活性，但酸敏感形式通常具有溶解度、组织 相容性和/或在哺乳动物中延缓释放的优点(可参见Bundgard，H.，Designof Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam1985)。前驱药包含本发明所 属领域技术人员所熟知的酸衍生物，举例来说，以适当的醇与母体酸 (parent acid)反应形成的酯类，或是以经取代或未经取代胺或酸酐(acid anhydrides)或混合酐与母体酸化合物反应形成的酰胺。衍生自侧键结于 本发明化合物上的酸基的简单脂族或芳香酯、酰胺及酐可作为特定的前驱 药。在一些情况下，需制备双酯型前驱药，如(酰氧基)烷酯((acyloxy)alkylesters)或((烷氧羰基)氧基)烷酯(((alkoxycarbonyl)oxy)alkylesters)。 优选是本发明化合物的C₁-C₈烷基、C₂-C₈烯基、C₂-C₈炔基、芳基、C₇-C₁₂经取代芳基及C₇-C₁₂芳烷基酯。

“组合物”(composition)及“制剂”(formulation)用词可互换使用。

本文使用的“个体”(subject)是指人类(即任何年龄群的男性或女性， 例如婴儿、幼儿或青少年的小儿科个体，或是例如青年、中年或老年的成 人个体)。该个体还包括任何非人类动物，包含但不限于马来猴或恒河猴、 牛、猪、马、绵羊、山羊、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或鸟(诸如鸡、鸭、 鹅或火鸡等商业相关的鸟类)。在某些实施方式中，非人类动物是鱼类、爬虫类或二栖类。在某些实施方式中，非人类动物是哺乳类、灵长类、啮 齿类、禽类、马、绵羊、牛、山羊、猫科或犬科。非人类动物可以是任何 发育阶段的雄性或雌性个体。非人类动物可以是基因转殖动物或基因改造 动物。“病患”(patient)指需治疗疾病的人类个体。该个体可以是植物。

“生物样本”(biological sample)一词是指包含组织样本(例如，组 织切片及组织针穿刺切片)、细胞样本(例如，细胞抹片(例如，Pap或血 液抹片)或微切割所得的细胞样本)、全生物样本(例如，酵母菌或细菌 的样本)、或细胞部分、片段或胞器(例如，分解细胞，并通过离心或其 他方式分离的成分)。生物样本的其它示例包含，血液、血清、尿液、精 液、粪便、脑脊液、组织间液、黏液、泪液、汗液、脓液、切片组织(例 如，外科手术切片或针穿刺切片)、乳头抽出物、乳汁、阴道液、唾液、 刮取物(例如，颊部刮取物)以及任何含有源自第一生物检体的材料。

“投予”、“给药”、“投药”或“施用”(administer，administering，administration)一词是指植入、吸收、摄入、注入、吸入或其他可将本发 明化合物或其组合物导入至个体的方式。

“治疗”(treatment)一词是指反转、减缓或延迟本文所述的疾病的发 生或抑制该疾病的进程。在某些实施方式中，可在疾病一或多种征状或病 征发生后，或是观察到疾病一或多种征状或病征后，投予治疗。在其他实 施方式中，可在未出现疾病的征状或病征时，投予治疗。举例来说，可在 病征发生前，对有罹患风险的个体投予治疗(例如基于病征的病史和/或基 于病原体的接触)，借以延缓或预防疾病的发生。还可于病征消除后持续 投予治疗，举例来说，借以延缓或预防复发。

“病状”(condition)、“疾病”(disease)及“病症”(disorder)可互 换使用。

本发明化合物的“有效量”(effective amount)是指足以产生所需生物 反应(亦即治疗病状(治疗性或预防性))的剂量。如本领域中普通技术 人员所知，本发明化合物的有效量可依据例如所欲生理终点、化合物的药 物动力学、欲治疗的病状、投药模式及个体的年龄及健康状况等因素作变 化。在某些实施方式中，有效量是指治疗有效量。在某些实施方式中，有 效量是指预防性治疗。在某些实施方式中，有效量是指单一剂量的本发明 化合物的剂量。在某些实施方式中，有效量是多剂量的本发明化合物的合 并剂量。

本发明化合物的“治疗有效量”(therapeutically effective amount)是 指在治疗病状时，或使该病状相关的一或多种病征延缓、降至最小或消除 时，足以产生治疗效益的剂量。化合物的治疗有效量是指单独或与其他治 疗并用而在治疗病状中产生治疗效益的治疗药剂的剂量。“治疗有效量” 一词可包含能够改善整体治疗、减少或避免该病状的病征、征兆或病因， 和/或提高另一治疗药剂的治疗功效的剂量。

本发明化合物的“预防有效量”(prophylactically effective amount)是 指足以预防一病状、一或多种与该病状相关的病征或预防其复发的剂量。 化合物的预防有效量意指单独或与其他药剂并用而在预防病状中产生预 防效益的治疗药剂的剂量。“预防有效量”一词可包含能够改善整体预防 或提高另一预防药剂的预防功效的剂量。

本发明提供用于治疗给药的多种制剂的示例性抗癌药剂。在一实施方 式中，该药剂通过与合适的医学上可接受的载体或稀释剂组合而配制成医 药组合物，其配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂，例如锭、胶 囊、粉末、颗粒、软膏、溶液，栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶，微球(microsphere) 及气雾剂。借此，可通过各种方式来达成投药。在某些制剂中，药剂在 给药后是全身性的；在其它制剂中，药剂通过剂型而局部化，例如使用植 入剂以将活性剂量保持在植入部位。

如本文所用，“测定”、“评估”、“分析”、“测量”及“检测”等词是 指定量及定性测定，因此，术语“测定”一词在本文中可与“分析”、“测 量”及其类似者互换使用。在需进行定量测定时，则使用“测定数量”其 其类似描述来表达。在需进行定性或定量测定时，则使用“测定量”或 “检测量”来表达。

“增殖性疾病”(proliferative disease)是指由细胞增殖异常或扩增所 造成的疾病(Walker，Cambridge Dictionary of Biology；Cambridge University Press：Cambridge，UK，1990)。增殖性疾病可与以下因素相关：1)正常静 止细胞的病理性增殖；2)细胞由其正常位置病理性转移(例如，增殖细 胞的转移)；3)诸如基质金属蛋白酶(例如，胶原酶、明胶酶及弹性蛋白 酶)的蛋白水解酶的病理性表现；或4)增殖性视网膜病变及肿瘤转移的 病理性血管新生。示例性增殖性疾病包含癌症(即，恶性肿瘤)、良性肿 瘤、血管新生、发炎性疾病及自体免疫疾病。

“癌症”(cancer)一词是指由异常细胞所导致的疾病，其中该异常细 胞不受控制地增生，且具有侵袭及破坏正常身体组织的能力。例如可参见， 《Stedman’s MedicalDictionary，25th ed.；Hensyl ed.；Williams&Wilkins： Philadelphia，1990》。示例性的癌症包含，但不限于，血液恶性肿瘤。其他 示例性癌症包含，但不限于，肺癌(例如，支气管癌、小细胞肺癌(small cell lmg cancer，SCLC)、非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer，NSCLC)、 肺腺癌)、肾脏癌(例如，肾母细胞瘤、威尔姆氏(a.k.a.Wilms)肿瘤、 肾细胞癌)、听神经瘤、腺癌、肾上腺癌、肛门癌、血管肉瘤(例淋巴管 内瘤、淋巴管内皮肉瘤、血液性肉瘤)、阑尾癌、良性单克隆丙种球蛋白 病(benign monoclonal gammopathy)、胆道癌(例如，胆管癌)、膀胱癌、 乳癌(例如，乳腺癌(adenocarcinoma of the breast)、乳突癌、乳腺癌 (mammary cancer)、乳房髓样癌(medullary carcinoma of the breast))、脑 癌(例如，脑膜瘤、神经胶质母细胞瘤、神经胶质瘤(例如，星状细胞瘤、 寡树突神经胶细胞瘤、神经管胚细胞瘤)、支气管癌、类癌、子宫颈癌(例 如子宫颈腺癌)、绒毛膜癌、脊索瘤、颅咽管瘤、大肠直肠癌(例如，大 肠癌、直肠癌、大肠直肠腺癌)、结缔组织癌、上皮细胞癌、室管膜瘤、 内皮肉瘤(例如，卡波西氏肉瘤、多特发性出血性肉瘤)、子宫内膜癌(例 如，子宫癌、子宫肌瘤)、食道癌(例如，食道腺癌、巴雷特腺癌)、伊文 氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、眼癌(例如，眼内黑色素瘤、视网膜母细胞 瘤)、熟悉嗜伊红性白血球增高(familiarhypereosinophilia)、胆囊癌、胃 癌(例如，胃腺癌)、胃肠道基质瘤(GIST)、生殖细胞癌、头颈部癌(例 如，头颈部鳞状细胞癌、口腔癌(例如，口腔鳞状细胞癌)、咽喉癌(例 如，喉癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌))、重链病(例如，α-链病、γ-链病、μ- 链病)、血管母细胞瘤、舌下癌、炎性肌纤维母肿瘤、免疫细胞性淀粉样 变性、肝癌(例如，肝细胞癌(HCC)、恶性肝肿瘤)、平滑肌肉瘤(LMS)、 肥大细胞增多症(例如，系统性肥大细胞增多症)、肌肉癌、骨髓增生异 常综合症(MDS)、间皮瘤、骨髓增殖性疾病(MPD)(例如，真性红细胞 增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、特发性骨髓性增生(AMM)、 骨髓纤维化(MF)、慢性特发性骨髓纤维化、慢性粒细胞白血病(CML)、 慢性中性粒细胞白血病(CNL)、增多综合症(HES))、神经母细胞瘤、神经纤维瘤(例如，第1型或第2型神经纤维瘤(NF)、许旺氏细胞瘤)、 神经内分泌癌(例如，胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌症候群)、 骨肉瘤(例如，骨癌)、卵巢癌(例如，囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)、 乳突状腺癌、胰脏癌(例如，胰脏腺癌、导管内乳头状黏液瘤(IPMN)、 胰岛细胞瘤)、阴茎癌(例如，阴茎和阴囊的佩吉特氏病)、松果体瘤、原 始神经外胚层肿瘤(PNT)、浆细胞瘤、肿瘤相关症候群、上皮内增殖、 前列腺癌(例如摄护腺癌)、直肠癌、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、皮肤癌(例 如，鳞状细胞癌(SCC)、角化棘皮瘤(KA)、黑色素瘤、基底细胞癌(BCC))、 小肠癌(例如，阑尾癌)、软组织肉瘤(例如，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、 脂肪肉瘤、恶性神经鞘瘤(MPNST)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、黏液肉瘤)、 皮脂腺癌、小肠癌、汗腺癌、滑液膜瘤、睾丸癌(例如，精原细胞瘤、睾 丸胚胎癌)、甲状腺癌(例如，甲状腺乳突状癌(papillary carcinoma of the thyroid)、甲状腺乳突癌(papillary thyroidcarcinoma，PTC)、甲状腺髓样 癌)、尿道癌、阴道癌及外阴癌(例如，外阴的佩吉特氏病(Paget’s disease of the vulva))。

术语“麸丙酮酸转胺酶(alanine aminotransferase)”与“ALT”可互换 使用。术语“天门冬胺酸胺基转移酶(aspartate transaminase)”与“AST” 可互换使用。术语“Bcl-2-性关联蛋白(Bcl-2-associated X protein)”与 “BAX”可互换使用。术语“BUN”是指血液中尿素氮；术语“CBSI” 是指秋水仙素结合位点抑制剂；术语“Cre”是指肌酸酐(creatinine)。术 语“Cyto.C”是指细胞色素C；术语“DAPI”是指4′，6-二脒基-2-苯基吲 哚(4′，6-diamidino-2-phenylindole)。术语“GAPDH”是指甘油醛-3-磷 酸脱氢酶；术语“HFB”是指人纤维母细胞；术语“NBE”是指人正常支 气管上皮细胞。术语“NSCLC”是指非小细胞肺癌；术语“MDR”是指 多重抗药性；术语“Mito”是指线粒体；术语“MTCO1”指线粒体性编码 细胞色素c氧化酶I(Mitochondrially Encoded Cytochrome C Oxidase I.)。 术语“MTS”指3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2- (4-磺基苯基)-2H-四唑鎓 (3-(4，5-dimethylthiazol-2-y1)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2- (4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)；术语“PARP”是指聚[ADP-核糖]聚合酶； 术语“P-gp”是指P-糖蛋白；术语“p-HH3”是指磷酸化组织蛋白H3；“PI” 一词是指碘化丙啶。术语“RF”是指抗药因子；术语“RU”是指共振单 元；术语“SPR”是指表面电浆共振。术语“TNBC”是指三阴性乳癌； 术语“TKI”是指酪胺酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor)；术语“TUNEL” 是指末端脱氧核苷酸转移酶脱氧尿苷三磷酸切口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTPnick end labeling)。

术语“抗微管药物(microtubule-targeting agent)”或“MTA”是指靶 向并干扰癌细胞微管、调节癌细胞微管的动力学、并因而导致有丝分裂停 滞及随后细胞凋亡的药物。示例性抗微管药物包括，但不限于，微管稳定 剂(MSA)及去稳定剂(MDA)。示例性微管稳定剂包括，但不限于，紫 杉醇及长春花生物碱。

本文阐述本发明一或多个实施例的细节。根据详细描述、实施例及权 利要求书，本发明的其他特征、目的及优点将显而易见。

附图说明

图1A至1F呈现示例性化合物AS1712在体外及体内抑制癌细胞增殖： (图1A)示例性化合物AS1712对不同非小细胞肺癌及正常肺细胞株的细 胞毒性作用(用示例性化合物AS1712处理细胞72小时，并通过MTS分 析检测细胞存活率；数据为三个测量值的平均值)；(图1B及1C)用ASl712 (12.5-200nM)处理CL1-0细胞14天(固定菌落，用结晶紫染色，接着计数；数据为平均值±SD；*p＜0.05)；(图1D及1E)用AS1712 (12.5-200nM)处理H1975细胞14天(固定菌落，用结晶紫染色，接着 计数；数据为平均值±SD；*p＜0.05)；及(图1F)皮下注射H1975细 胞(2×10⁶)至BALB/c裸鼠中(小鼠用DMSO或4或8mg/kg的AS1712 进行每周一次的腹膜内注射，连续25天；在每次注射之前测量肿瘤体积； 数据是平均值±SEM；*p＜0.05)；

图2A至2D呈现用示例性化合物AS1712(4或8mg/kg)处理以抑 制H1975异位移植肿瘤生长(数据是平均值±SEM，*p＜0.05)：肿瘤影 像(图2A)；肿瘤重量(图2B)；牺牲后的代表性苏木紫-伊红(H&E)染 色切片(图2C)；及体重(图2D)‘

图3呈现用指定浓度的示例性化合物AS1712处理CL1-0、H1975及 HFB细胞24-72小时后评估促凋亡蛋白表达程度；

图4A至4F呈现示例性化合物AS1712诱导CL1-0及H1975肺癌细 胞株的凋亡及细胞周期停滞(用指定浓度的AS1712处理细胞24小时)： (图4A)以免疫墨点法检测促凋亡蛋白表达；(图4B)评估细胞质及线 粒体中的细胞色素c的量；(图4C)用碘化丙啶染色细胞，以流式细胞仪 测定其DNA含量；(图4D)蛋白质进行免疫墨点法，以检测其表达量； (图4E)通过p-HH3染色对细胞进行高通量细胞影像分析，以计算有丝 分裂细胞的比例(数据为平均值±SD；*p＜0.05)；(图4F)用AS1712 处理细胞6小时，以通过α-微管蛋白染色(绿色)观察纺锤丝组织，其中 通过共聚焦激光显微镜检测免疫荧光，并通过DAPI染色(蓝色)检测细 胞核；

图5A至5C呈现检测AS1712-处理-HFB细胞的凋亡途径指标(图5A)、 来自线粒体的细胞色素c(图5B)及细胞周期调节(图5C)；

图6A至6E呈现示例性化合物AS1712抑制微管聚合：(图6A)以α- 微管蛋白染色(绿色)检测微管网络之前，将细胞与AS1712培养6小时， 其中通过DAPI染色(蓝色)检测细胞核)；(图6B)将细胞与DMSO、 AS1712、太平洋紫杉醇或诺考达唑培养6小时，接着收集并分离为可溶(微 管蛋白单体)及未溶(微管蛋白聚合物)收集层，其中通过免疫墨点法检 测α-微管蛋白的含量；(图6C)基于免疫荧光的微管聚合测定法：在低温 暴露30分钟后，用40nMAS1712处理H1975细胞1小时，接着在37℃下 培养达指定时间；(图6D)将纯化的猪微管蛋白及GTP于37℃下与5μM AS1712、5μM太平洋紫杉醇、5μM敏克瘤、5μM诺考达唑或DMSO(控 制组)培养，其通过监测A340，每分钟评估微管聚合达1小时；(图6E) 纯化的中心体先与AS1712培养接着再与微管蛋白培养，其中形成的微管 星体用单克隆抗-α-微管蛋白(绿色)染色，测量纤维长度(每组n＝20 星体)，且数据为平均值±SD；

图7呈现用40nM AS1712处理6小时后的HFB细胞中的微管网络；

图8A至8G呈现示例性化合物RJ-LC-15-8通过干扰微管聚合以抑制 肿瘤进展：观察指定蛋白质表达之前，用RJ-LC-15-8处理H1975细胞24 小时(图8A)；用25nM RJ-LC-15-8处理6小时后的H1975细胞中的微 管网络(图8B)；纯化的微管蛋白与GTP用仅含缓冲液(控制组)、5μM RJ-LC-15-8、5μM太平洋紫杉醇、5μM敏克瘤或5μM诺考达唑的反应 混合物培养，其中每分钟监测微管聚合达1小时(图8C)；每周3次腹膜 内注射DMSO或RJ-LC-15-8(4或8mg/kg)，以处理H1975异位移植肿 瘤达21天：肿瘤体积(图8D)、体重(图8E)，其中数据是平均值±SEM； 每周3次腹膜内注射DMSO或RJ-LC-15-8(4或8mg/kg)，以处理 MDA-MB-231异位移植肿瘤达35天：肿瘤体积(图8F)及体重(图8G)， 其中数据是平均值±SEM；

图9A至9H呈现示例性化合物AS1712与β-微管蛋白的秋水仙素结合 口袋结合：(图9A)将H1975细胞裂解物与磁珠-控制组或磁珠-AS1712 培养过夜，并通过免疫墨点法检测沉淀的蛋白质；(图9B)通过表面电浆 共振测量AS1712对微管蛋白的结合亲和力；(图9C和9D)将微管蛋白 (1mg/mL)与100μM诺考达唑、敏克瘤、AS1712或DMSO(控制组) 在30℃下培养30分钟，接着在冰上对样本进行胰蛋白酶消化10分钟，其 中胰蛋白酶水解产物αN、αC及β-col的位置显示在凝胶右侧，数据为平 均值±SD；(图9E)秋水仙素竞争测定：AS1712及诺考达唑降低秋水仙 素-微管蛋白复合物的荧光，其中数据为平均值±SD；(图9F)嵌合的AS1712-微管蛋白(橙色)与秋水仙素-微管蛋白复合物(紫色)重叠；(图9G)微管蛋白异质双体与AS1712之间的相互作用；(图9H)AS1712与 微管蛋白-残基相互作用的示意图；

图10A至10E呈现RJ-LC-15-8在不干扰P-gp的情况下抑制KBtax肿 瘤生长并诱导细胞凋亡：(图10A)将KBtax(1×10⁷)细胞皮下注射至 BALB/c裸鼠，对小鼠进行每周3次腹膜内注射DMSO、太平洋紫杉醇(15 mg/kg)或RJ-LC-15-8(8mg/kg)的处理达21天，每次处理前测量肿 瘤体积，其中数据为平均值±SEM；(图10B)用苏木紫-伊红(H&E)对 肿瘤切片进行组织学染色，并通过TUNEL染色测定细胞凋亡状态；(图 10C)P-gp泵送活性的罗丹明排出(rhodamine efflux)分析；(图10D)用 指定浓度的RJ-LC-15-8处理KBtax细胞样本24小时，接着收集以评估指 定蛋白质的表达；(图10E)用30nM RJ-LC-15-8处理6小时后的KBtax 细胞中的微管网络及纺锤丝组织；

图11A至图11B呈现用DMSO、太平洋紫杉醇或RJ-LC-15-8处理带 有KBtax异位移植肿瘤的小鼠：肿瘤重量(图11A)及体重(图11B)， 其中数据为平均值±SEM；*p＜0.05。

具体实施方式

本发明提供4(1H)-喹诺酮衍生物，用于治疗目标增殖性疾病，例如 癌症，包括例如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌，头 颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的癌症(例如，对 与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的多种药物有抗性的癌症))。本文所述 的癌症可能对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有 抗性。本文所述的化合物可用于治疗、延缓和/或预防增殖性疾病，例如癌 症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈 癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的癌症(例如，对与 P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的多种药物有抗性的癌症)(例如，对一或 多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗性的癌症)))、和/或抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本的癌细胞微管聚合、结合β- 微管蛋白、抑制微管组合、和/或诱导组织、生物样本或个体对多种药物具 抗性的癌细胞的凋亡。本发明还提供医药组合物、套组及使用这些化合物 以抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本的癌细胞微管聚合、结合β- 微管蛋白、抑制微管组合、和/或诱导组织、生物样本或所需个体对多种药 物具抗性的癌细胞凋亡及用于治疗本文所述任一目标增殖性疾病的方法。

化合物

在一实施方式中，公开式(I)化合物：

或其医药上可接受的盐，其中：R¹、R²、R³、R⁴、m、n及p如本文 所述。在某些实施例中，本文所述的化合物如式(I)所示：

或其医药上可接受的盐。在某些实 施例中，该医药上可接受的盐为MsOH的盐。在某些实施例中，该医药上 可接受的盐为CH₃SO₂OH的盐。

在某些实施例中，式(I)化合物如式(IA)、(IB)或(IC)所示：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中R¹、R²、R³、 R⁴、m及p如本文所述。

在一些实施例中，式(I)包括0或更多取代基R¹。在一些实施例中， 式(I)包括0个取代基R¹。在一些实施例中，式(I)包括一或多个取代 基R¹。在某些实施例中，m为0。在某些实施例中，m为1。在某些实施 例中，m为2。在某些实施例中，m为3。在某些实施例中，m为4。在某 些实施例中，m为5。在某些实施例中，n为4。在某些实施例中，至少一 R¹为卤素(例如F、Cl、Br或I)。在某些实施例中，至少一R¹为溴。在 某些实施例中，至少一R¹为氟。在某些实施例中，至少一R¹为氯。在某 些实施例中，至少一R¹为碘。

在某些实施例中，至少一R¹为-C(＝O)(视情况经取代烷基)(例如， -C(＝O)(视情况经取代C_1-6烷基))。在某些实施例中，至少一R¹为视情 况经取代烷基(例如，视情况经取代C_1-6烷基)。在某些实施例中，至少 一R¹为视情况经取代C_1-6烷基(例如，视情况经取代甲基、乙基或丙基)。 在某些实施例中，至少一R¹为视情况经卤素取代的烷基。在某些实施例中，至少一R¹为视情况经卤素取代的C_1-6烷基。在某些实施例中，至少一 R¹为-CF₃。

在某些实施例中，至少一R¹为视情况经取代烯基(例如，视情况经 取代C₂-C₆烯基)。在某些实施例中，至少一R¹为视情况经取代炔基(例 如，视情况经取代C₂-C₁₀炔基)。在某些实施例中，至少一R¹可为视情况 经取代碳环基(例如，经取代或未经取代的3-至7-元单环碳环基，其在碳 环的环系统中包含0、一或两个双键)。在某些实施例中，至少一R¹可为视情况经取代杂环基(例如，经取代或未经取代的5-至10-元单环或双环 杂环，其中在杂环中的一或两原子独自为氮、氧或硫)。在一些实施例中， 至少一R¹可为视情况经取代芳基(例如，苯基或苄基)。在一些实施例中， 至少一R¹可为视情况经取代杂芳基(例如，5-至7-元单环杂芳基，其中杂 芳环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫；或视情况经取代 8-至10-元双环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独自 为氮、氧或硫)。在一些实施例中，至少一R¹可为-CN。在某些实施例中， 至少一R¹为-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1，且R^D1如本文所定义。在一些实施 例中，至少一R¹可为-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1，其中R^D1为氢、视情况经 取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、 视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况 经取代杂芳基、当接至氧原子时的氧保护基、或当接至硫原子时的硫保护 基；每一R^D1a为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取 代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、 视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、氮保护基；或R^D1a中任选两者 与介于其间的原子一起形成经取代或未经取代的杂环或经取代或未经取 代的杂芳环。在一些实施例中，至少一R¹可为-OR^D1(例如，-OH或 -OMe)。在一些实施例中，至少一R¹可为-OR^D1，且R^D1为氢或视情况经 取代烷基。在一些实施例中，至少一R¹为-OH、-OMe或

在一些实施例中，至少一R¹为-OH。在一些实施例中，至少一R¹为-O(视 情况经取代烷基)(例如，-O(视情况经取代C_1-6烷基))。在某些实施例 中，至少一R¹为-O(视情况经取代C_1-6烷基)(例如，-O(视情况经取代 甲基)、-O(视情况经取代乙基)或-O(视情况经取代丙基))。在某些实施例 中，至少一R¹为-OMe。在某些实施例中，至少一R¹为-O(CH₂)_y(R^la)，其 中y为1、2、3、4、5或6；且R^la为卤素、视情况经取代烯基、视情况 经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代 芳基或视情况经取代杂芳基。在某些实施例中，至少一R¹为-O(CH₂)_y(R^1a)， 其中y为1、2、3或4；且R^1a为卤素、视情况经取代烯基或视情况经取 代炔基。在一些实施例中，至少一R¹为

在某些实施例中， 至少一R¹为-O(视情况经炔基取代的烷基)。在某些实施例中，至少一R¹为-O(视情况经炔基取代的C_1-6烷基)。在一些实施例中，至少一R¹可为- N(R^D1a)₂(例如，-NH₂或-NMe₂)。在一些实施例中，至少一R¹可为-SR^D1 (例如，-SH或-SMe)。

在某些实施例中，R^D1为氢。在某些实施例中，R^D1为视情况经取代酰 基(例如，-C(＝O)Me)。在某些实施例中，R^D1为视情况经取代烷基(例 如，经取代或未经取代C_1-6烷基)。在某些实施例中，R^D1为经取代或未经 取代甲基。在某些实施例中，R^D1为经取代或未经取代乙基。在某些实施 例中，R^D1为经取代或未经取代丙基。在某些实施例中，R^D1为视情况经取代烯基(例如，经取代或未经取代C_2-6烯基)。在某些实施例中，R^D1为视 情况经取代炔基(例如，经取代或未经取代C_2-6炔基)。在某些实施例中， R^D1为视情况经取代碳环基(例如，经取代或未经取代的3-至7-元单环碳 环基，其在碳环的环系统中包含0、一或两个双键)。在某些实施例中， R^D1为视情况经取代杂环基(例如，经取代或未经取代的5-至10-元单环或 双环杂环，其中在杂环中的一或两原子独自为氮、氧或硫)。在某些实施 例中，至少一R^D1为视情况经取代芳基(例如，经取代或未经取代的6-至 10-元芳基)。在某些实施例中，R^D1为苄基。在某些实施例中，R^D1为视情 况经取代苯基。在某些实施例中，R^D1为视情况经取代杂芳基(例如，5- 至6-元单环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、 氧或硫；或经取代或未经取代9-至10-元双环杂芳基，其中杂芳环系统中 的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫)。在某些实施例中，R^D1当接 至氧原子时为氧保护基。在某些实施例中，R^D1当接至硫原子时为硫保护 基。

在某些实施例中，至少一R^D1a为氢。在某些实施例中，至少一R^D1a为视情况经取代酰基(例如，-C(＝O)Me)。在某些实施例中，至少一R^D1a为 视情况经取代烷基(例如，经取代或未经取代C_1-6烷基)。在某些实施例 中，至少一R^D1a为经取代或未经取代甲基。在某些实施例中，至少一R^D1a为经取代或未经取代乙基。在某些实施例中，至少一R^D1a为经取代或未经 取代丙基。在某些实施例中，至少一R^D1a为视情况经取代烯基(例如，经 取代或未经取代C_2-6烯基)。在某些实施例中，至少一R^D1a为视情况经取 代炔基(例如，经取代或未经取代C_2-6炔基)。在某些实施例中，至少一 R^D1a为视情况经取代碳环基(例如，经取代或未经取代的3-至7-元单环碳 环基，其在碳环的环系统中包含0、一或两个双键)。在某些实施例中，至 少一R^D1a为视情况经取代杂环基(例如，经取代或未经取代的5-至10-元 单环或双环杂环，其中在杂环中的一或两原子独自为氮、氧或硫)。在某 些实施例中，至少一R^D1a为视情况经取代芳基(例如，经取代或未经取代 的6-至10-元芳基)。在某些实施例中，至少一R^D1a为苄基。在某些实施例 中，至少一R^D1a为视情况经取代苯基。在某些实施例中，至少一R^D1a为视 情况经取代杂芳基(例如，5-至6-元单环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、 二、三或四个原子独自为氮、氧或硫；或经取代或未经取代9-至10-元双 环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫)。 在某些实施例中，至少一R^D1a为氮保护基(例如，苄基(benzyl，Bn)、 叔丁氧羰基(t-butyl carbonate，BOC或Boc)、胺基甲酸苄酯(benzylcarbamate，Cbz)、9-芴甲氧羰基(9-fluorenylmethyl carbonate，Fmoc)、三 氟乙酰基(trifluoroacetyl)、三苯甲基(triphenylmethyl)、乙酰基(acetyl)、 对-甲苯磺酰胺(p-toluenesulfonamide，Ts))。在某些实施例中，两个R^D1a与介于其间的原子一起形成经取代或未经取代的杂环(例如，经取代或未 经取代的5-至10-元单环或双环杂环，其中在杂环中的一或两原子独自为 氮、氧或硫)或经取代或未经取代的杂芳环(例如，经取代或未经取代的 5-至10-元单环杂芳基，其中在杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独 自为氮、氧或硫；或经取代或未经取代9-至10-元双环杂芳基，其中杂芳 环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫)。

在一些实施例中，式(I)包括0或更多取代基R²。在一些实施例中， 式(I)包括0个取代基R²。在一些实施例中，式(I)包括一或多个取代 基R²。在某些实施例中，n为0。在某些实施例中，n为1。在某些实施例 中，n为2。在某些实施例中，n为3。在某些实施例中，n为4。在某些 实施例中，至少一R²为卤素(例如F、Cl、Br或I)。

在某些实施例中，至少一R²为视情况经取代酰基(例如，-C(＝O)(烷 基))。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)OR^2a、-C(＝O)N(R^2b)₂或 -(CH_H)_xOR^2a，且x为0、1、2、3、4、5或6；R^2a为氢、视情况经取代烷 基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情 况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基或氧保护基； 每一R^2b为氢、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔 基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视 情况经取代杂芳基或氮保护基。在某些实施例中，x为0。在某些实施例 中，x为1。在某些实施例中，x为2。在某些实施例中，x为3。在某些实施例中，x为4。在某些实施例中，x为5。在某些实施例中，x为6。 在某些实施例中，R^2a为氢、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视 情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经 取代芳基、视情况经取代杂芳基或氧保护基(例如，甲基、甲氧基甲基 (methoxylmethyl，MOM)、三甲基硅基(trimethylsilyl，TMS)、三乙基 硅基(triethylsilyl，TES)、三异丙基硅基(triisopropylsilyl，TIPS)、二甲 基异丙基硅基(dimethylisopropylsilyl，IPDMS)、二乙基异丙基硅基 (diethylisopropylsilyl，DEIPS)、二甲基叔己基硅基(dimethylthexylsilyl)、 叔丁基二甲基硅基(t-butyldimethylsilyl，TBDMS)、叔丁基二苯基硅基 (t-butyldiphenylsilyl，TBDPS)、甲磺酸酯(methanesulfonate，mesylate)、 苄基磺酸酯(benzylsulfonate)或甲苯磺酰基(tosylate，Ts))。

在某些实施例中，R^2a为氢。在某些实施例中，R^2a为视情况经取代烷 基(例如，经取代或未经取代C_1-6烷基)。在某些实施例中，R^2a为视情况 经取代烯基(例如，经取代或未经取代C_2-6烯基)。在某些实施例中，R^2a为视情况经取代炔基(例如，经取代或未经取代C_2-6炔基)。在某些实施 例中，R^2a为视情况经取代碳环基(例如，经取代或未经取代的3-至7-元 单环碳环基，其在碳环的环系统中包含0、一或两个双键)。在某些实施例 中，R^2a为视情况经取代杂环基(例如，经取代或未经取代的5-至10-元单 环或双环杂环，其中在杂环中的一或两原子独自为氮、氧或硫)。在某些 实施例中，R^2a为视情况经取代芳基(例如，经取代或未经取代的6-至10- 元芳基)。在某些实施例中，R^2a为苄基。在某些实施例中，R^2a为视情况 经取代苯基。在某些实施例中，R^2a为视情况经取代杂芳基(例如，5-至 6-元单环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、 氧或硫；或经取代或未经取代9-至10-元双环杂芳基，其中杂芳环系统中 的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫)。在某些实施例中，R^2a为氧 保护基(例如，甲基、甲氧基甲基(methoxylmethyl，MOM)、三甲基硅 基(trimethylsilyl，TMS)、三乙基硅基(triethylsilyl，TES)、三异丙基硅 基(triisopropylsilyl，TIPS)、二甲基异丙基硅基(dimethylisopropylsilyl， IPDMS)、二乙基异丙基硅基(diethylisopropylsilyl，DEIPS)、二甲基叔己 基硅基(dimethylthexylsilyl)、叔丁基二甲基硅基(t-butyldimethylsilyl， TBDMS)、叔丁基二苯基硅基(t-butyldiphenylsilyl，TBDPS)、甲磺酸酯(methanesulfonate，mesylate)、苄基磺酸酯(benzylsulfonate)或甲苯磺 酰基(tosylate，Ts))。在某些实施例中，至少一R^2b为氢。在某些实施例 中，至少一R^2b为视情况经取代烷基(例如，经取代或未经取代C_1-6烷基)。在某些实施例中，至少一R^2b为视情况经取代烯基(例如，经取代或未经 取代C_2-6烯基)。在某些实施例中，至少一R^2b为视情况经取代炔基(例如， 经取代或未经取代C_2-6炔基)。在某些实施例中，至少一R^2b为视情况经取 代碳环基(例如，经取代或未经取代的3-至7-元单环碳环基，其在碳环的 环系统中包含0、一或两个双键)。在某些实施例中，至少一R^2b为视情况 经取代杂环基(例如，经取代或未经取代的5-至10-元单环或双环杂环， 其中在杂环中的一或两原子独自为氮、氧或硫)。在某些实施例中，至少 一R^2b为视情况经取代芳基(例如，经取代或未经取代的6-至10-元芳基)。 在某些实施例中，至少一R^2b为苄基。在某些实施例中，至少一R^2b为视 情况经取代苯基。在某些实施例中，至少一R^2b为视情况经取代杂芳基(例 如，5-至6-元单环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独 自为氮、氧或硫；或经取代或未经取代9-至10-元双环杂芳基，其中杂芳 环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫)。在某些实施例中， 至少一R^2b为氮保护基(例如，苄基(benzyl，Bn)、叔丁氧羰基(t-butyl carbonate，BOC或Boc)、胺基甲酸苄酯(benzyl carbamate，Cbz)、9-芴 甲氧羰基(9-fluorenylmethyl carbonate，Fmoc)、三氟乙酰基(trifluoroacetyl)、 三苯甲基(triphenylmethyl)、乙酰基(acetyl)、对-甲苯磺酰胺 (p-toluenesulfonamide，Ts))。

在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)OR^2a，且R^2a为氢、视情况经取 代烷基、视情况经取代烯基或视情况经取代炔基。在某些实施例中，至少 一R²为-C(＝O)OR^2a，且R^2a为氢或视情况经取代的C_1-6烷基。在某些实 施例中，至少一R²为-C(＝O)OH、-C(＝O)OMe、-C(＝O)OEt、-C(＝O)O(iPr)、 -C(＝O)(OCH₂CH₂)₃OH或-C(＝O)(OCH₂CH₂)₄OH。在某些实施例中，至少一 R²为-C(＝O)OH。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)O(未经取代C_1-6烷基)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)OMe。在某些实施例中，至 少一R²为-C(＝O)OEt。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)O(丙基)。在 某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)O(正丙基)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)O(异丙基)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)O(丁基)。 在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)O(正丁基)。在某些实施例中，至少 一R²为-C(＝O)O(戊基)。在某些实施例中，至少一R²为 -C(＝O)(OCH₂CH₂)_zO(R^2c)，其中z为1、2、3、4、5或6，且R^2c为氢、 视情况经取代烷基、视情况经取代烯基或视情况经取代炔基。在某些实施 例中，z为1。在某些实施例中，z为2。在某些实施例中，z为3。在某些 实施例中，z为4。在某些实施例中，z为5。在某些实施例中，z为6。在 某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)(OCH₂CH₂)_zO(R^2c)，其中z为2、3、4、 5或6，且R^2c为氢或视情况经取代C_1-6烷基。在某些实施例中，至少一 R²为-C(＝O)(OCH₂CH₂)₃-OH。在某些实施例中，至少一R²为 -C(＝O)(OCH₂CH₂)₄OH。

在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)N(R^2b)₂，且每一R^2b独自为氢、 视情况经取代烷基、视情况经取代烯基或视情况经取代炔基。在某些实施 例中，至少一R²为-C(＝O)NH(R^2b)，且R^2b为视情况经取代C_1-6烷基。在 某些实施例中，至少一R²为-C(＝＝O)NH(R^2b)，且R^2b为未经取代C_1-6烷 基。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)NH(Me)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)NH(Et)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)NH(正丙 基)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)NH(异丙基)。在某些实施例中， 至少一R²为-C(＝O)NH(丁基)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)NH(正 丁基)。在某些实施例中，至少一R²为-C(＝O)NH(戊基)。

在某些实施例中，至少一R²为-(CH₂)_xOR^2a，且x为1、2、3、4或5， 且R^2a为视情况经取代C_1-6烷基。在某些实施例中，至少一R²为-(CH₂)_xOR^2a， x为1、2、3、4或5，且R^2a为未经取代C_1-6烷基。在某些实施例中，至 少一R²为-(CH₂)OMe。在某些实施例中，至少一R²为-(CH₂)OEt。在某些 实施例中，至少一R²为-(CH₂)O(丙基)。在某些实施例中，至少一R²为 -(CH₂)O(正丙基)。在某些实施例中，至少一R²为-(CH₂)O(异丙基)。在某 些实施例中，至少一R²为-(CH₂)O(丁基)。在某些实施例中，至少一R²为-(CH₂)O(正丁基)。在某些实施例中，至少一R²为-(CH₂)O(戊基)。

在某些实施例中，至少一R²为视情况经取代烷基(例如，视情况经 取代C_1-6烷基)。在某些实施例中，至少一R²为视情况经取代C_1-6烷基(例 如，视情况经取代的甲基、乙基或丙基)。在某些实施例中，至少一R²为 视情况经取代烯基(例如，视情况经取代C₂-C₆烯基)。在某些实施例中， 至少一R²为视情况经取代炔基(例如，视情况经取代C₂-C₁₀炔基(例如，视情况经取代丙炔基或丁炔基))。在某些实施例中，至少一R²可为视情 况经取代碳环基(例如，经取代或未经取代的3-至7-元单环碳环基，其在 碳环的环系统中包含0、一或两个双键)。在一些实施例中，至少一R²可 为视情况经取代杂环基(例如，经取代或未经取代的5-至10-元单环或双 环杂环，其中在杂环中的一或两原子独自为氮、氧或硫)。在一些实施例 中，至少一R²可为视情况经取代芳基(例如，苯基或苄基)。在一些实施 例中，至少一R²可为视情况经取代杂芳基(例如，5-至7-元单环杂芳基， 其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫；或视情况 经取代8-至10-元双环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原 子独自为氮、氧或硫)。在一些实施例中，至少一R²可为-CN。在某些实施例中，至少一R²为-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1，且R^D1如本文所定义。在 一些实施例中，至少一R²可为-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1，其中R^D1为氢、 视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取 代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、 视情况经取代杂芳基、当接至氧原子时的氧保护基或当接至硫原子时的硫 保护基；每一R^D1a为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况 经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂 环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基或氮保护基；或R^D1a中任 选两者与介于其间的原子一起形成经取代或未经取代的杂环或经取代或 未经取代的杂芳环。在一些实施例中，至少一R²可为-OR^D1(例如，-OH 或-OMe)。在一些实施例中，至少一R²可为-N(R^D1a)₂(例如，-NH₂或-NMe₂)。 在一些实施例中，至少一R²可为-SR^D1(例如，-SH或-SMe)。

式(I)包括取代基R³。在一些实施例中，R³为氢。在一些实施例中， R³为视情况经取代烷基。在一些实施例中，R³为视情况经取代C_1-6烷基。 在某些实施例中，R³为视情况经卤素(例如，F、Cl、Br或I)取代的C₁-C₆烷基。在一些实施例中，R³为未经取代烷基。在一些实施例中，R³为未经 取代C₁-C₆烷基(例如，未经取代甲基、未经取代乙基、未经取代丙基、 未经取代丁基)。在某些实施例中，R³为未经取代甲基。在某些实施例中， R³为未经取代乙基。在一些实施例中，R³为氮保护基(例如，苄基(benzyl， Bn)、叔丁氧羰基(t-butyl carbonate，BOC或Boc)、胺基甲酸苄酯(benzyl carbamate，Cbz)、9-芴甲氧羰基(9-fluorenylmethylcarbonate，Fmoc)、三 氟乙酰基(trifluoroacetyl)、三苯甲基(triphenylmethyl)、乙酰基(acetyl)、 对-甲苯磺酰胺(p-toluenesulfonamide，Ts))。

在一些实施例中，式(I)包括0或更多取代基R⁴。在一些实施例中， 式(I)包括0个取代基R⁴。在一些实施例中，式(I)包括一或多个取代 基R⁴。在某些实施例中，p为0。在某些实施例中，p为1。在某些实施例 中，至少一R⁴卤素(例如F、Cl、Br或I)。在某些实施例中，至少一R⁴为 视情况取代酰基(例如，-C(＝O)(烷基))。

在某些实施例中，至少一R⁴为视情况经取代烷基(例如，视情况经 取代C_1-6烷基)。在某些实施例中，至少一R⁴为视情况经取代C_1-6烷基 (例如，视情况经取代甲基、乙基或丙基)。在某些实施例中，至少一R⁴为视情况经卤素取代烯基(例如，视情况经取代C₂-C₆烯基)。在某些实施 例中，至少一R⁴为视情况经取代炔基(例如，视情况经取代C₂-C₁₀炔基 (例如，经取代丙炔基或丁炔基))。在某些实施例中，至少一R⁴可为视 情况经取代碳环基(例如，经取代或未经取代的3-至7-元单环碳环基，其 在碳环的环系统中包含0、一或两个双键)。在某些实施例中，至少一R⁴可为视情况经取代杂环基(例如，经取代或未经取代的5-至10-元单环或 双环杂环，其中在杂环中的一或两原子独自为氮、氧或硫)。在一些实施 例中，至少一R⁴可为视情况经取代芳基(例如，苯基或苄基)。在一些实 施例中，至少一R⁴可为视情况经取代杂芳基(例如，5-至7-元单环杂芳基， 其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原子独自为氮、氧或硫；或视情况 经取代8-至10-元双环杂芳基，其中杂芳环系统中的一、二、三或四个原 子独自为氮、氧或硫)。在一些实施例中，至少一R⁴可为-CN。在某些实 施例中，至少一R⁴为-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1，且R^D1如本文所定义。在 一些实施例中，至少一R⁴可为-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1，其中R^D1为氢、 视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取 代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、 视情况经取代杂芳基、当接至氧原子时的氧保护基或当接至硫原子时的硫 保护基；每一R^D1a为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情 况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代 杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、氮保护基；或R^D1a中任选两者与介于其间的原子一起形成经取代或未经取代的杂环或经取 代或未经取代的杂芳环。在一些实施例中，至少一R⁴可为-OR^D1(例如， -OH或-OMe)。在一些实施例中，至少一R⁴可为-N(R^D1a)₂(例如，-NH₂或-NMe₂)。在一些实施例中，至少一R⁴可为-SR^D1(例如，-SH或 -SMe)。

在一些实施例，本文所述的化合物如式(I)所示：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中：

每一R¹独自为卤素、-C(＝O)(视情况经取代烷基)、视情况经取代烷基、 视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经 取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、 -N(R^D1a)₂或-SR^D1；

每一R²独自为卤素、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情 况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代 杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1；

R³为氢、视情况经取代烷基或氮保护基；

每一R⁴独自为卤素、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情 况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代 杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1；

R^D1为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯 基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视 情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、当接至氧原子时的氧保护基或当 接至硫原子时的硫保护基；

每一R^D1a为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取 代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、 视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基或氮保护基，或R^D1a中任选两者 与介于其间的原子一起形成经取代或未经取代的杂环或经取代或未经取 代的杂芳环；

m为0、1、2、3、4或5；

n为0、1、2、3或4；且

p为0或1。

在一些实施例中，m与n中至少一者不为0。

在一些实施例中，式(I)化合物可为下式的一者：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

在一些实施例中，式(I)化合物可为下式的一者：：

或其医药上可接受的盐。

本文提供式(I)的示例性化合物。在一些实施例中，式(I)化合物 为任一实施例1-2的化合物。在一些实施例中，式(I)化合物为表3的化 合物。在一些实施例中，式(I)化合物为表7的化合物。在一些实施例 中，式(I)化合物可为下式的一者：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构 物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富 集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

在一些实施例中，式(I)化合物可为下式的一者：

或其医药上可接受的盐。

在一些实施例中，式(I)化合物可为下式的一者：

可使用本领域已知的方法从容易获得的起始原料制备本文所述的化 合物。应当理解，在提供一般或优选的工艺条件(即反应温度、时间、反 应物的摩尔比、溶剂及压力等)的情况下，除非另有说明，否则亦可使用 其他工艺条件。最优反应条件可依所使用的特定反应物或溶剂而变化，但 此等条件可由本领域技术人员通过常规最优化程序来确定。以下合成途径 中所使用的化学物质可包括，例如溶剂、试剂、催化剂、保护基及去保护 基试剂。下文描述的方法也可在本文具体描述的步骤之前或之后，额外包 括添加或去除合适保护基的步骤，以使化合物最终得以合成。此外，可以 交替的顺序或次序进行各种合成步骤，以得到所需化合物。用于合成适用 化合物的合成化学转化及保护基方法(保护及去保护)为本领域所知悉， 其包括例如《R.Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCHPublishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in OrganicSynthesis，3^rd Ed.，John Wiley and Sons(1999)；L.Fieser and M. Fieser，Fieser andFieser’s ReagentsforOrganic Synthesis，John Wiley and Sons(1994)；及L.Paquette，ed.，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1995)》及其后续版中所记载。

本文提供的式(I)化合物可使用以下一般方法及步骤从容易获得的 起始原料制备。以下实施例部分提供用于合成本文所述化合物的示例性示 意图。在提供一般或优选工艺条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、 溶剂、压力等)情况下，除非另有说明，否则也可使用其他工艺条件。最 优反应条件可依所使用的特定反应物或溶剂而变化，但此等条件可由本领 域技术人员通过常规最优化程序来确定。

医药组合物及套组

本发明提供医药组合物，其包括本文所述的化合物或或其医药上可接 受的盐以及视情况包括医药上可接受的赋形剂。在某些实施例中，本文所 述的医药组合物包括本文所述的化合物或或其医药上可接受的盐、以及视 医药上可接受的赋形剂。本文所述的医药组合物可用于治疗目标疾病，例 如增殖性疾病，如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头 部癌、颈部癌、头颈癌或血癌的癌症(例如，对一或多种抗微管药物治疗 有抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有 抗性的癌症)(对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治 疗有抗性的癌症))。本文所述的医药组合物可用于治疗、延缓和/或预防增 殖性疾病，例如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部 癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的 癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的癌 症)(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗 有抗性的癌症))、和/或抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本的癌细胞 微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合及因而诱导组织、生物样本或 个体对多种药物具抗性的癌细胞的凋亡。

在某些实施例中，本文所治疗的个体为动物。该动物可以是任何性别， 且也可处于任何发育阶段。在某些实施例中，该个体为人。在某些实施例 中，该个体为哺乳动物(例如，非人类哺乳动物)。在某些实施例中，该 个体为驯养动物，例如狗、猫、牛、猪、马、绵羊或山羊。在某些实施例 中，该个体为伴生动物，例如狗或猫。在某些实施例中，该个体为家畜动 物，例如牛、猪、绵羊或山羊。在某些实施方式中，该个体为动物园动物。 在另一实施例中，该个体为实验动物，例如啮齿动物(例如，小鼠、大鼠)、 狗、猪或非人类的灵长类动物。在某些实施方式中，该个体为基因改造动 物。在某些实施例中，该个体为基因转殖或基因改造动物(例如，基因转 殖小鼠或基因转殖猪)。在某些实施例中，该个体患有或被疑似患有增殖 性疾病，例如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、 颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的癌症 (例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的癌症) (例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗 性的癌症))。

在某些实施例中，与有效量的本文所述化合物或医药组合物接触的细 胞是位于体外。在某些实施例中，接触的细胞是位于活体外。在某些实施 例中，本文所述的细胞是位于体内。

在某些实施例中，本文所述的化合物以有效量提供于医药组合物中。 在某些实施例中，该有效量为医药有效量(例如，有效治疗增殖性疾病的 量，例如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈 部癌、头颈癌或血癌(例如，所需个体中对一或多种抗微管药物治疗有抗 性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性 的癌症)(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱) 治疗有抗性的癌症))。在某些实施例中，该增殖性疾病为癌症，包括举例 如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌。在 某些实施例中，该增殖性疾病为肺癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为 乳癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为三阴性乳癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为颈部癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为肺癌、乳癌、 卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌。在某些实施例中， 该增殖性疾病为非小细胞肺癌。

在某些实施例中，该有效量为预防有效量(例如，有效预防、延缓增 殖性疾病的量，例如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、 头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗 性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性 的癌症)(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱) 治疗有抗性的癌症))。在某些实施例中，该有效量为医药有效量(例如， 有效治疗增殖性疾病的量，例如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、 前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药 物治疗有抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种 药物有抗性的癌症)(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗性的癌症))。

在某些实施例中，该有效量为有效抑制所需个体、或细胞、组织或生 物样本内的癌细胞微管聚合的量。在某些实施例中，该有效量为有效结合 所需个体、或细胞、组织或生物样本内的β-微管蛋白的量。在某些实施例 中，该有效量为有效抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本内的微管组 合的量。在某些实施例中，该有效量为有效诱发组织、生物样本或个体内 对多种药物有抗性的癌细胞凋亡的量。在某些实施例中，该有效量为有效 抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本内的癌细胞聚合、结合β-微管蛋 白、抑制微管组合，因而诱发组织、生物样本或个体内对多种药物有抗性 的癌细胞凋亡的量。

本文所述的医药组合物可通过药理学领域已知的任何方法制备。一般 而言，此等制备方法包括使本文所述的化合物(即“活性成分”)与载体 或赋形剂和/或一或多种其他辅助成分结合，接着，若必要和/或想要的话， 将产品塑造和/或包装为单一剂量或多剂量单位。

医药组合物可大量制备、包装和/或贩售为单一单位剂量和/或复数单 一单位剂量。一“单位剂量”(unit dose)是指包含预定量的活性成分的医 药组合物的个别量(discrete amount)。活性成分的量通常等于活性成分投 予至个体的剂量，和/或此一剂量的方便等分量，例如此一剂量的二分的一 或三分的一。

依据需投予治疗的个体的身分、体型和/或状况，以及依据投予组合物 的路径，可调整医药组合物中活性成分、医药上可接受的赋形剂和/或任何 额外成分的相对量。组合物可包含介于0.1％至100％(w/w，重量比)之 间的活性成分。

用于制备所提供的医药组合物的医药上可接受的赋形剂包含惰性稀 释剂、分散剂和/或粒化剂、界面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、结合剂、 防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。例如哥脂及栓剂蜡的赋形剂、着色剂、 包衣、甜味剂、调味剂及香味剂也可存在于该组合物中。

用于口服及非口服投予的液体剂型包含医药上可接受的乳剂、微乳剂、 溶液、悬浮液、糖浆及酏剂。除了活性成分，液体剂型也可包含相关领域 惯用的惰性稀释剂，例如，水或其他溶剂、增溶剂及乳化剂，例如乙醇、 异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、 二甲基甲酰胺、油(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖 麻油及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨醇的脂肪酸酯及 其混合物。除了惰性稀释剂，口服组合物可包含佐剂，例如润湿剂、乳化 剂及悬浮剂、甜味剂、调味剂及香味剂。在某些非口服投予的实施方式中， 其将本文所述的共轭物与增溶剂混合，例如

酒精、油、改性 油、二醇、聚山梨醇酯、环糊精、聚合物及其混合物。在某些实施例中， 本发明的组合物被包覆于载体媒介物(carrier vehicle)中，该载体媒介物 可以是刚性液胞(vesicle)、弹性液胞、单层液胞、多层液胞、微脂粒 (liposomes)、非离子体(niosomes)，前非离子体(proniosomes)、传递 体

醇脂体(ethosomes)、L-595-PEG-8-L液胞、纳米乳 剂、纳米微脂粒(nanosomes)、纳米颗粒或其组合。

可依据已知方法，利用适当的分散剂或润湿剂及悬浮剂来制备注射剂， 例如，无菌注射的水性或油质悬浮液。可利用无毒性的非口服可接受的稀 释剂或溶剂，将无菌注射剂制备为无菌的注射溶液、悬浮液或乳剂，举例 来说，1，3-丁二醇的溶液。可接受的载体及溶剂可以是水、林格氏液 (Ringer’s solution，U.S.P.)及等张氯化钠溶液。此外，通常可以无菌的 固定油作为溶剂或悬浮介质。据此，可使用任何温和的固定油，包括合成 单-或双-甘油酯。此外，还可使用脂肪酸(如油酸)以制备注射剂。

无菌注射剂型可通过如下举例来灭菌，利用细菌截留过滤器进行过滤， 或在无菌固体组合物(其在使用前可溶解或悬浮于无菌水或其他无菌注射 剂)中加入杀菌剂。

为了延长药物的作用时间，通常希望可减缓经由皮下或肌肉注射的药 物的吸收。此可通过利用水溶性不佳的晶质或非晶形材料的液体悬浮液来 达成。如此一来，药物的吸收率将取决于其溶离率，而其溶离率则取决于 结晶的大小及晶形。或者，可将药物溶解或悬浮于油性载体中，借以减缓 非口服投予药物剂型的吸收。

用于直肠或阴道投予的组合物通常为栓剂，其可通过混合本文所述的 共轭物及适当的无刺激性赋形剂或载体(例如可哥脂、聚乙二醇或栓剂用 蜡，其在常温为固体，在体温则为液体，因此可在直肠或阴道腔中融化并 释放活性成分)以制备该栓剂。

适用于口服投予的固体剂型包含胶囊、锭剂、丸剂、粉末及颗粒。固 体剂型是将活性成分与至少一惰性、医药上可接受赋形剂或载体混合，例 如柠檬酸钠或磷酸氢钙和/或(a)填充剂或持久剂(extender)，例如淀粉、 乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及硅酸、(b)结合剂，举例如羧甲基纤维素、 海藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶、(c)保湿剂，例 如甘油、(d)崩解剂，例如洋菜、碳酸钙、马铃薯或树薯淀粉、海藻酸、 某些硅酸盐及碳酸钠、(e)溶液阻滞剂，例如石蜡、(f)吸收促进剂，例 如季铵化合物、(g)润湿剂，举例如鲸蜡醇及甘油单硬脂酸酯、(h)吸收 剂，例如高岭土及皂土、以及(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸 镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物。当为胶囊、锭剂及丸剂时，该剂型可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物可作为软式及硬式填充明胶胶囊中的填充物， 其利用如乳糖及高分子量聚乙二醇及其类似物作为赋形剂。可用包衣 (coating)及壳层(例如肠衣(enteric coating)及药学领域已知的其他包 衣)来制备锭剂、糖衣片、胶囊、丸剂及颗粒的固体剂型。其可视情况地 包含乳浊剂(opacifying agent)，且可为仅在或优选在消化道的某些部分释 放活性成分(视情况地以延缓方式释放)的组合物。可使用的包覆组合物 的示例包含聚合物质及蜡。相似类型的固体组合物可作为软式及硬式填充 明胶胶囊中的填充物，其利用如乳糖及高分子量聚乙二醇及其类似物的赋 形剂。

活性成分可与一或多种上述赋形剂共同配制于微包覆剂型中。可以包 衣及壳层(例如肠衣、控制释放包衣及制药领域已知的其他包衣)来制备 锭剂、糖衣片、胶囊、丸剂及颗粒的固体剂型。固体剂型可将活性成分与 至少一种诸如蔗糖、乳糖或淀粉等惰性稀释剂混合。如一般制剂，该种剂 型可包含惰性稀释剂以外的其他物质，例如压锭润滑剂及诸如硬脂酸镁及 微晶质纤维素等其他压锭辅助物质。若为胶囊、锭剂及丸剂，则该剂型可 包含缓冲剂。其可视情况地包含乳浊剂，且可为仅在或优选在消化道的某 些部分释放活性成分(视情况地以延缓方式释放)的组合物。可使用的包 覆剂的示例包含聚合物质及蜡。

用于局部和/或经皮投予本文所述化合物的剂型可包含，软膏剂、糊剂、 乳膏剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂和/或贴剂。一般来 说，活性成分在无菌条件下与医药上可接受的载体或赋形剂和/或任何所需 防腐剂和/或需要的缓冲剂混合。此外，本发明可使用经皮贴剂，其通常具 有将活性成分可调控地递送至个体的附加优势。该种剂型可例如通过将活 性成分溶解和/或分散于适当的介质中以进行制备。或者或此外，可通过提供速率控制膜和/或将活性成分分散于聚合物基质和/或凝胶中以调控速率。

用于递送本文所述的皮内医药组合物的合适装置包括短针装置。可通 过限制针进入皮肤的有效穿透长度的装置来投予皮内组合物。或者或此外， 可以常规注射器以惯常孟陀法(mantoux method)来进行皮内投予。可使 用快速注射装置，其可通过液体喷射注射器和/或通过刺穿角质层以产生到 达真皮的射流的针，将液体制剂递送至真皮。可使用弹道粉末/颗粒递送装 置，其使用压缩气体以加速粉末形式的化合物穿过皮肤外层而到达真皮。

适用于局部投予的制剂包括，但不限于，液体和/或半液体制剂，例如 擦剂、洗剂、水包油和/或油包水乳剂，如乳膏剂、软膏剂、和/或糊剂、 和/或溶液和/或悬浮液。局部投予制剂举例可包含约1％至约10％(w/w) 活性成分，尽管该活性成分的浓度可高达该活性成分在该溶剂中的溶解度 极限。用于局部投予的制剂可还包含一或多种本文所述的额外成分。

本文所述的医药组合物可制成、包装成适用于通过口腔来肺部投予的 制剂，和/或依此进行贩售。该种制剂可包含有活性成分的干燥颗粒，其直 径介于约0.5至约7纳米，或介于约1至约6纳米。该种组合物为干燥粉 末，因此易于以包含干燥粉末贮存器的装置进行投予；该装置可将推进剂 流引导至所述干燥粉末贮存器中以分散该粉末，和/或是使用自推进溶剂/ 粉末分配容器来进行投予，例如包含在密闭容器中溶于和/或悬浮于低沸点推进剂中的活性成分的装置。该种粉末包含颗粒，其中至少98％(重量计) 的颗粒的直径大于0.5纳米，且至少95％(数量计)的颗粒的直径小于7 纳米。或者，至少95％(重量计)的颗粒的直径大于1纳米，且至少90％ (数量计)的颗粒的直径小于6纳米。干燥粉末组合物可包含固体细粉稀 释剂(例如糖)，且为便于提供的单位剂量形式。

低沸点推进剂通常包括在大气压下具有低于65°F沸点的液体推进剂。 一般来说，推进剂可构成50至99.9％(w/w)的组合物，且活性成分可 构成0.1至20％(w/w)的组合物。推进剂可还包含额外的成分，例如液 体非离子型和/或固体阴离子型表面活性剂和/或固体稀释剂(其可与包含 有活性成分的颗粒具有同量级的颗粒大小)。

本文所述用于肺部递送的医药组合物可提供溶液和/或悬浮液的液滴 形式的活性成分。此等制剂可以包含有活性成分的水性和/或稀释醇溶液和 /或悬浮液(任选地无菌)来制备、包装和/或贩售，且可使用任何雾化和/ 或雾化装置以便于施用。此等制剂可进一步包含一或多种额外成分，包括 但不限于，调味剂(例如糖精钠)、挥发油、缓冲剂、表面活性剂和/或防 腐剂(例如羟苯甲酸甲酯)。通过此给药途径提供的液滴可具有约0.1至约200纳米的平均直径。

本文所述可用于肺部递送的制剂可用于鼻内递送本文所述的医药组 合物。适于鼻内给药的另一制剂为包含有活性成分且平均颗粒约0.2至500 微米的粗粉。此等制剂通过从置于鼻腔附近的粉末容器经过鼻道快速吸入 来进行给药。

经鼻给药的制剂可例如包含约少至0.1％(w/w)至多达100％(w/w) 的活性成分，且可包含本文所述的一或多种其他成分。本文所述的医药组 合物可制备成、包装成用于口颊(buccal)给药的制剂和/或依此贩售。此 等制剂可例如为利用已知方法制备的锭剂(tablets)和/或口含片(lozenges) 形式，并可含有例如0.1至20％(w/w)的活性成分，余量则包含口腔可 溶解和/或可降解组合物，及视情况包含本文所述的一或多种额外成分。或者，用于口颊给药的制剂可包含有活性成分的粉末和/或雾化(aerosolized) 和/或雾化溶液(atomized solution)和/或悬浮液。此等粉状、雾化和/或雾 化制剂于分散时可具有约0.1至约200纳米的平均颗粒和/或液滴尺寸，且 可进一步包含一或多种本文所述的额外成分。

本文所述的医药组合物可制成、包装成用于眼内给药的制剂，和/或依 此进行贩售。此等制剂例如可为眼部滴液形式，其包含例如0.1-1.0％(w/w) 于水性或油性液体载体或赋形剂中的活性成分的溶液和/或悬浮液。该种滴 液可还包含缓冲剂、盐类和/或一或多种本文所述的其他额外成分。其他有 用的眼部给药制剂包括含有微晶形式和/或微脂体(1iposomal)制剂的活性 成分的制剂。本发明的保护范围还包含滴耳剂和/或滴眼剂。

虽然本文提供的医药组合物的叙述主要是关于适用于人类施用的医 药组合物，但此等组合物一般也适用于投予至各种动物。可完全理解可修 改适用于人类的医药组合物，借以使组合物适于投予至不同动物体内，且 具有通常知识的兽医药理学家可以惯常实验设计和/或进行这些修改。

本文提供的化合物通常是配制成剂量单位形式，以便于给药并使剂量 具有一致性。然而，可理解，医护人员可在合理的医学判断范围内，决定 本文所述组合物的总每日用量。对任一特定个体或生物的特定治疗有效量 将依不同因素而有所调整，包含所治疗的疾病、疾病的严重程度、所用的 特定活性成分的活性、所用的特定组合物、个体的年龄/体重/一般健康状 况/性别/及饮食习惯、给药时间、给药途径及所用的特定活性成分的排出 速度、治疗的持续时间、与所用的特定活性成分合并或共同使用的药物以 及医药领域已知的其他因素。

本发明还包含套组(例如医药包装)。所提供的套组可包含本文所述 的医药组合物或化合物，以及一容器(例如小瓶、安瓶、瓶罐、注射器和 /或分配器(dispenser)包装，或是其他适当的容器)。在一些实施例中， 所提供的套组可视情况地还包含一第二容器，其包含一医药赋形剂，用于 稀释或悬浮本文所述的医药组合物或化合物。在一些实施例中，提供于第 一容器及第二容器的本文所述的医药组合物或化合物可合并形成一单位 剂型。

在某些实施例中，本文所述的套组包括一第一容器，其包含有本文所 述的一化合物或医药组合物。在某些实施例中，本文所述的套组可用于治 疗增殖性疾病，例如癌症，举例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头 部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性 的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的 癌症(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治 疗有抗性的癌症)))。在某些实施例中，该疾病为癌症，举例包括肺癌、 乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌。在某些实施 例中，该增殖性疾病为肺癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为非小细胞 肺癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为乳癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为三阴性乳癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为颈部癌。在某些 实施例中，该增殖性疾病为肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈 部癌、头颈癌或血癌。

在一些实施例中，本文所述的化合物可用于治疗、延缓和/或预防增殖 性疾病的不良影响，例如癌症，举例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、 头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗 性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性 的癌症(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治 疗有抗性的癌症)))；和/或抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本内的 癌细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合及诱发组织、生物样本 或个体内对多种药物有抗性的癌细胞凋亡。

在某些实施例中，本文所述的套组还包含套组中所包含的化合物或医 药组合物的使用说明。本文所述的套组还可包含监管机构(如美国食品药 物管理局/FDA)所要求的信息。在某些实施例中，套组中所包含的信息为 处方信息。在某些实施例中，该些套组及说明提供用于治疗所需个体的增 殖性疾病，例如癌症，举例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、 颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的癌症 (例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的癌症(例 如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗性的 癌症)))、和/或治疗、延缓和/或预防个体、细胞、组织或生物样本的β- 增殖性疾病的不良影响，例如癌症，举例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列 腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治 疗有抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物 有抗性的癌症(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物 碱)治疗有抗性的癌症)))。在某些实施例中，该些套组及说明提供用于 抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本内的癌细胞微管聚合、结合β- 微管蛋白、抑制微管组合及诱发组织、生物样本或个体内对多种药物有抗 性的癌细胞凋亡。在某些实施例中，这些套组可用于诱发癌细胞(例如体 内或体外细胞)的凋亡。本文所述的套组可包括一或多种本文所述的额外 医药剂，以作为一分开的组合物。

治疗方法

如下实施例所示，本文所述的示例性化合物成功结合至β-微管蛋白的 秋水仙素结合口袋、诱导有丝分裂细胞周期停滞及诱导细胞凋亡，以治疗 对一或多种抗微管药物治疗有抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过 度表达有关的对多种药物有抗性的癌症，例如，对太平洋紫杉醇及敏克瘤 有抗药性)(例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头 颈癌或血癌))，并证实对癌细胞(例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、 头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌)的微管聚合及肿瘤生长有抑制作用。

据此，本发明提供治疗所需个体的增殖性疾病的方法，例如癌症，举 例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌 (例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白 (P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性的癌症(例如，对一或多种抗 微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治疗有抗性的癌症)))，该方法包括对该个体投予一有效量(例如，治疗有效量)的本文所述的化合物或 其医药组合物。本发明提供抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本的癌 细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合及诱导组织、生物样本或 个体对多种药物具抗性的癌细胞凋亡的方法。

本发明的另一实施方式涉及预防所需个体的增殖性疾病的方法，该方 法包括对该个体投予一有效量(例如，预防有效量)的本文所述的化合物 或其医药组合物。

本文所述的化合物及医药组合物可用于治疗、延缓和/或预防一所需个 体的增殖性疾病，例如癌症，举例包括肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、 头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗有抗 性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗性 的癌症(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱)治 疗有抗性的癌症)))；和/或抑制所需个体、或细胞、组织或生物样本的癌 细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合及诱导组织、生物样本或 个体对多种药物具抗性的癌细胞的凋亡。在某些实施例中，该增殖性疾病 为癌症。在某些实施例中，该增殖性疾病为对一或多种抗微管药物治疗有 抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关的对多种药物有抗 性的癌症(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇或长春花生物碱) 治疗有抗性的癌症)))。在某些实施例中，该癌症与P-糖蛋白(P-gp)过 度表达有关的对多种药物有抗性。在某些实施例中，该癌症对一或多种抗 微管药物治疗有抗性。在某些实施例中，该一或多种抗微管药物包括紫杉 醇或长春花生物碱。在某些实施例中，该癌症对紫杉醇和/或长春花生物碱 有抗药性。在某些实施例中，该紫杉醇为太平洋紫杉醇(paclitaxel)和/或伊沙匹隆(ixabepilone)。在某些实施例中，该长春花生物碱为敏克瘤 (vincristine)或敏毕瘤(vinblastine)。在某些实施例中，该癌症对太平洋 紫杉醇及敏克瘤有抗药性。在某些实施例中，该增殖性疾病为对一或多种 抗微管药物治疗有抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关 的对多种药物有抗性的癌症(例如，对一或多种抗微管药物(例如紫杉醇 或长春花生物碱)治疗有抗性的癌症)))及包括如肺癌、乳癌、卵巢癌、 前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌的癌症。在某些实施例中，该 增殖性疾病为肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌 或血癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为肺癌。在某些实施例中，该增 殖性疾病为小细胞肺癌(SCLC)。在某些实施例中，该增殖性疾病为非小 细胞肺癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为乳癌。在某些实施例中，该 增殖性疾病为复发性乳癌(recurring breast cancer)。在某些实施例中，该 增殖性疾病为基因突变乳癌(mutant breast cancer)。在某些实施例中，该 增殖性疾病为HER2+乳癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为HER2-乳 癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为三阴性乳癌。在某些实施例中，该 增殖性疾病为颈部癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为卵巢癌。在某些 实施例中，该增殖性疾病为头颈癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为结 肠癌。在某些实施例中，该增殖性疾病为前列腺癌。在某些实施例中，该 增殖性疾病为血癌。

在某些实施例中，本文所述的该方法还包括对该个体投予一额外医药 剂。在某些实施例中，本文所述的该方法还包括使该生物样本接触一额外 医药剂。在某些实施例中，本文所述的该方法还包括使该组织接触一额外 医药剂。在某些实施例中，本文所述的该方法还包括使该细胞接触一额外 医药剂。在某些实施例中，本文所述的该方法还包括治疗增殖性疾病(例 如癌症)。

本文提供的化合物及组合物可通过任何途径进行给药，包含肠道内 (例如口服)、非口服(parenteral)、静脉内(intravenous)、肌肉内(intramuscular)、动脉内(intra-arterial，)、颅内(intracranial)、髓内 (intramedullary)、鞘内(intrathecal)、皮下(subcutaneous)、脑室内 (intraventricular)、经皮(transdermal)、皮内(intradermal)、皮间 (interdermal)、直肠(rectal)、阴道内(intravaginal)、腹腔内(intraperitoneal)、局部(例如通过粉末、软膏、霜剂和/或滴剂)，通过任何有利于在体内/ 离体(ex vivo)运输本文所述的化合物或组合物进入或通过个体的组织/ 皮肤(例如离子导入法)、黏膜、鼻、口颊、舌下的方式；通过气管内滴 注、支气管滴注和/或吸入；和/或作为口服喷雾剂、鼻喷雾剂和/或气雾剂。 在一些实施例中，该医药组合物为口服或非口服给药。在一些实施例中，该医药组合物为口服给药。在一些实施例中，该医药组合物为非口服给药。 具体地说，预期途径为口服给药、静脉内给药(例如全身性静脉注射)、 输血、灌注、经血液和/或淋巴供给的局部给药、和/或直接给药至受侵部 位，例如肿瘤内。一般来说，最优的给药途径会随着各种因素而有所改变， 包含药剂的特性(例如其在肠胃道中的稳定度)、和/或个体的状况(例如 个体是否能够接受口服给药)。在某些实施例中，本文所述的化合物或医 药组合物适用于局部给药至个体的眼部。

化合物可达到有效量的准确量会随着个体的不同而改变，其决定于例 如个体的物种、年龄及一般状况、副作用或疾病的严重程度、特定化合物 的特性、给药模式及其类似者。有效量可包含于单一剂量(例如单一口服 剂量)或多剂量(例如口服多剂量)中。在某些实施例中，当多剂量投予 至个体或施用于生物样本、组织或细胞时，多剂量中的任二剂可包含不同 或实质上相同剂量的本发明化合物。在某些实施例中，当多剂量投予至个 体或施用于生物样本、组织或细胞时，多剂量投予至个体或多剂量施用于 组织或细胞的频率可以是每天3剂、每天2剂、每天1剂、每隔1天1剂、 每3天1剂、每周1剂、每2周1剂、每3周1剂或每4周1剂。在某些 实施例中，多剂量投予至个体或多剂量施用于组织或细胞的频率为每天1 剂。在某些实施例中，多剂量投予至个体或多剂量施用于组织或细胞的频 率为每天2剂。在某些实施例中，多剂量投予至个体或多剂量施用于组织 或细胞的频率为每天3剂。在某些实施例中，当多剂量投予至个体或施用 于生物样本、组织或细胞时，第一剂与最后一剂之间隔时间为1天、2天、4天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、6个月、9个 月、1年、2年、3年、4年、5年、7年、10年、15年、20年或个体、生 物样本、组织或细胞的存活期。在某些实施例中，多剂量的第一剂与最后 一剂的间隔时间为3个月、6个月或1年。在某些实施例中，多剂量的第 一剂与最后一剂的间隔时间为个体、生物样本、组织或细胞的存活期。在某些实施例中，本文所述的一剂(例如单一剂量或多剂量中的任一剂)可 分别包含介于0.1微克至1微克、介于0.001毫克至0.01毫克、介于0.01 毫克至0.1毫克、介于0.1毫克至1毫克、介于1毫克至3毫克、介于3 毫克至10毫克、介于10毫克至30毫克、介于30毫克至100毫克、介于 100毫克至300毫克、介于300毫克至1，000毫克，或是介于1公克至10 公克(包含各数值本身)的本发明化合物。在某些实施例中，本文所述的 一剂量可分别包含介于1毫克至3毫克(包含各数值本身)的本发明化合 物。在某些实施例中，本文所述的一剂量可分别包含介于3毫克至10毫 克(包含各数值本身)的本发明化合物。在某些实施例中，本文所述的一 剂量可分别包含介于10毫克至30毫克(包含各数值本身)的本发明化合 物。在某些实施例中，本文所述的一剂量可分别包含介于30毫克至100 毫克(包含各数值本身)的本发明化合物。

本文所述的剂量范围提供对成人投予本发明医药组合物的引导。举例 来说，医护从业人员或本发明所属领域普通技术人员可确定对孩童或青少 年的给药量，其可低于、高于或相同于对成人的给药量。

本文所述的化合物或组合物可与一或多种可用于的治疗所需个体的 增殖性疾病(例如癌症)的额外医药剂(例如治疗和/或预防活性剂)合并 给药。这些化合物或组合物可与具有下述作用的额外医药剂合并给药：改 善其在所需个体中治疗增殖性疾病(例如，癌症)的活性(例如，活性(例 如，效力和/或功效))；和/或治疗、延缓和/或预防增殖性疾病(例如所需 个体的癌症)的不良影响；改善生物利用度；改善安全性；降低抗药性； 减少和/或改变代谢；抑制排出；和/或改变于个体、生物样本、组织或细 胞中的分布。还应理解，所采用的疗法对于相同疾病、不同疾病可达到所 欲效果和/或可达到不同的效果。在某些实施例中，将本文所述包含本发明 化合物的医药组合物投予至所需患者，以有利地治疗一或多种疾病。在某 些实施例中，该一或多种疾病为增殖性疾病(例如，癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如， 对一或多种抗微管药物治疗具抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过 度表达相关的对多种药物有抗性的癌症))或其组合。在一较佳实施例中， 该一或多种疾病为皆对一或多种抗微管药物治疗有抗药性的肺癌、乳癌、 卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，与P-糖蛋 白(P-gp)过度表达相关的对多种药物有抗性的癌症)或其组合。

化合物或组合物可与一或多种额外医药剂同时或在其之前或之后给 药，其可用作例如联合疗法。在某些实施例中，本文所述的化合物或医药 组合物可投予至所需患者，其中该患者的癌症(例如肺癌、乳癌、卵巢癌、 前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌)对至少一医药剂有抗药性(例 如，对一或多种抗微管药物治疗具抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp) 过度表达相关的对多种药物有抗性的癌症))。在某些实施例中，该疾病为 癌症(例如，肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌 或血癌)，且该癌症(例如，肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、 颈部癌、头颈癌或血癌)对一或多种抗微管药物治疗有抗药性(例如，与 P-糖蛋白(P-gp)过度表达相关的对多种药物有抗性的癌症)，其包括但不 限于紫杉醇或长春花生物碱。在某些实施例中，对多种药物有抗性的癌症 与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关。在某些实施例中，对多种药物有抗性 的癌症与β-微管蛋白突变有关。

医药剂包括治疗活性剂。医药剂还包括预防活性剂。医药剂包括有机 分子，例如药物化合物(例如美国联邦法规(CFR)规定而经美国食品药 物管理局核准可供人类或动物使用的化合物)、肽、蛋白质、碳水化合物、 单糖、寡糖、多糖、核蛋白、黏蛋白、脂蛋白、合成多肽或蛋白、连接至 蛋白、糖蛋白、类固醇、核酸、DNA、RNA、核苷酸、核苷、寡核苷酸、 反义寡核苷酸、脂质、荷尔蒙、维生素及细胞的小分子。在某些实施例中， 该额外医药剂为可用于治疗增殖性疾病(如癌症)的医药剂。在某些实施 例中，该额外医药剂为可用于预防红血球增殖性疾病(如癌症)的医药剂。 在某些实施例中，该额外医药剂为可用于抑制所需个体、或细胞、组织或 生物样本内的癌细胞微管聚合、结合β-微管蛋白、抑制微管组合及诱发组 织、生物样本或个体内对多种药物有抗性的癌细胞凋亡的医药剂。在某些 实施例中，该额外医药剂是由监管机构(例如，美国FDA)批准用于治疗 和/或预防增殖性疾病(例如，癌症)的医药剂。在某些实施例中，该额外 医药剂是由监管机构(例如，美国FDA)批准用于治疗和/或预防肺癌(例 如，非小细胞肺癌)的医药剂。在某些实施例中，该额外医药剂是由监管 机构(例如，美国FDA)批准用于治疗和/或预防乳癌(例如，三阴性乳 癌)的医药剂。每一额外医药剂可依针对该医药剂所确定的剂量和/或时间 表来进行给药。该额外医药剂还可彼此一起和/或与本文所述的化合物或组 合物一起以单一剂量或不同剂量分开给药。疗程中所采用的特定组合将考 虑到本文所述化合物与额外医药剂的相容性和/或需达成的治疗和/或预防 效果。可预期额外医药剂在合并治疗所使用的剂量不会超过其各别使用时的剂量。在一些实施例中，合并使用的剂量是低于各别使用时的剂量。

在某些实施例中，该额外医药剂为抗增殖药剂(例如抗癌药剂)、抗 血管新生药剂、抗发炎药剂、免疫抑制剂、抗菌剂、抗病毒剂、心血管药 剂、降胆固醇药剂、抗糖尿病药剂、抗过敏药剂、止痛药或其组合。在某 些实施例中，本文所述的化合物或医药组合物可与抗癌疗法合并给药。在 某些实施例中，该额外医药剂为抗血癌药剂。在某些实施例中，该额外医 药剂为ABITREXATE(甲氨蝶呤)、ADE、阿霉素RDF(盐酸多柔比星)、 Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、ARRANON(奈拉滨)、ARZERRA(奥法木 单抗)、BOSULIF(博舒替尼)、BUSULFEX(白消安)、CAMPATH(阿 仑单抗)、CERUBIDINE(盐酸柔红霉素)、CLAFEN(环磷酰胺)、 CLOFAREX(氯法拉滨)、CLOLAR(氯法拉滨)、CVP、CYTOSAR-U(阿 糖胞苷)、CYTOXAN(环磷酰胺)、ERWINAZE(门冬酰胺酶菊欧文氏菌)、 FLUDARA(磷酸氟达拉滨)、FOLEX(甲氨蝶呤)、FOLEX PFS(甲氨蝶 呤)、GAZYVA(奥比妥球单抗)、GLEEVEC(甲磺酸伊马替尼)、 Hyper-CVAD、ICLUSIG(盐酸普纳替尼)、IMBRUVICA(依鲁替尼)、 LEUKERAN(苯丁酸氮芥)、LINFOLIZIN(苯丁酸氮芥)、MARQIBO(硫 酸长春新碱脂质体)、METHOTREXATE LPF(甲氨蝶呤)、MEXATE(甲 氨蝶呤)、MEXATE-AQ(甲氨蝶呤)、盐酸米托蒽醌、MUSTARGEN(盐 酸氮芥)、MYLERAN(白消安)、NEOSAR(环磷酰胺)、ONCASPAR(培 门冬酶)、PURINETHOL(巯基嘌呤)、PURIXAN(巯基嘌呤)、Rubidomycin (盐酸柔红霉素)、SPRYCEL(达沙替尼)、SYNRIBO(三尖杉酯碱)、 TARABINEPFS(阿糖胞苷)、TASIGNA(尼禄替尼)、TREANDA(盐酸 苯达莫司汀)、TRISENOX(三氧化二砷)、VINCASAR PFS(硫酸长春新 碱)、ZYDELIG(艾代拉里斯)或其组合。在某些实施方式中，该额外添 加的药剂是抗淋巴瘤药剂。在某些实施方式中，该额外添加的药剂是 ABITREXATE(甲氨蝶呤)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、ADCETRIS(本 妥昔单抗)、ADRIAMYCIN PFS(盐酸多柔比星)、ADRIAMYCIN RDF(盐 酸多柔比星)、AMBOCHLORIN(苯丁酸氮芥)、AMBOCLORIN(苯丁酸 氮芥)、ARRANON(奈拉滨)、BEACOPP、BECENUM(卡莫司汀)、 BELEODAQ(贝利司他)、BEXXAR(托西莫单抗及碘I131托西莫单抗)、 BICNU(卡莫司汀)、BLENOXANE(博莱霉素)、CARMUBRIS(卡莫司 汀)、CHOP、CLAFEN(环磷酰胺)、COPP、COPP-ABV、CVP、CYTOXAN (环磷酰胺)、DEPOCYT(阿糖胞苷脂质体)、DTIC-DOME(达卡巴嗪)、 EPOCH、FOLEX(甲氨蝶呤)、FOLEX PFS(甲氨蝶呤)、FOLOTYN(普 拉曲沙)、HYPER-CVAD、ICE、IMBRUVICA(依鲁替尼)、INTRON A(重 组干扰素α-2b)、ISTODAX(罗米地辛)、LEUKERAN(苯丁酸氮芥)、 LINFOLIzIN(苯丁酸氮芥)、洛莫司汀、MATULANE(盐酸丙卡巴肼)、 METHOTREXATE LPF(甲氨蝶呤)、MEXATE(甲氨蝶呤)、MEXATE-AQ(甲氨蝶呤)、MOPP、MOZOBIL(普乐沙福)、MUSTARGEN(盐酸氮 芥)、NEOSAR(环磷酰胺)、OEPA、ONTAK(地尼白介素2)、OPPA、 R-CHOP、REVLIMID(来那度胺)、RITUXAN(利妥昔单抗)、STANFORD V、TREANDA(bendamustine hydrochloride)、VAMP、VELBAN(硫酸长 春碱)、VELCADE(硼替佐米)、VELSAR(硫酸长春碱)、VINCASAR PFS (硫酸长春新碱)、ZEVALIN(替伊莫单抗)、ZOLINZA(伏立诺他)、 ZYDELIG(艾代拉里斯)或其组合。在某些实施方式中，该额外添加的药 剂是REVLIMID(来那度胺)、DACOGEN(地西他滨)、VIDAZA(阿扎 胞苷)、CYTOSAR-U(阿糖胞苷)、IDAMYCIN(伊达比星)、CERUBIDINE (柔红霉素)、LEUKERAN(苯丁酸氮芥)、NEOSAR(环磷酰胺)、 FLUDARA(氟达拉滨)、LEUSTATIN(克拉屈滨)或其组合。在某些实 施方式中，该额外添加的药剂是ABITREXATE(甲氨蝶呤)、ABRAXANE (紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、AC、AC-T、ADE、ADRIAMYCIN PFS(盐酸多柔比星)、ADRUCIL(氟尿嘧啶)、AFINITOR(依维莫司)、 AFINITOR DISPERZ(依维莫司)、ALDARA(咪喹莫特)、ALIMTA(培 美曲塞二钠)、AREDIA(帕米膦酸二钠)、ARIMIDEX(阿那曲唑)、 AROMASIN(依西美坦)、AVASTIN(贝伐单抗)、BECENUM(卡莫司 汀)、BEP、BICNU(卡莫司汀)、BLENOXANE(博莱霉素)、CAF、CAMPTOSAR(盐酸伊立替康)、CAPOX、CAPRELSA(凡德他尼)、 CARBOPLATIN-TAXOL、CARMUBRIS(卡莫司汀)、CASODEX(比卡 鲁胺)、CEENU(洛莫司汀)、CERUBIDINE(盐酸柔红霉素)、CERVARIX (重组HPV二价疫苗)、CLAFEN(环磷酰胺)、CMF、COMETRIQ(卡 博替尼-s-苹果酸盐)、COSMEGEN(放线菌素D)、CYFOS(异环磷酰胺)、 CYRAMZA(雷莫芦单抗)、CYTOSAR-U(阿糖胞苷)、CYTOXAN(环 磷酰胺)、DACOGEN(地西他滨)、DEGARELIX、DOXIL(盐酸多柔比 星脂质体)、盐酸多柔比星、DOX-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-DOME (达卡巴嗪)、EFUDEX(氟尿嘧啶)、ELLENCE(盐酸表柔比星)、 ELOXATIN(奥沙利铂)、ERBITUX(西妥昔单抗)、ERIVEDGE(维莫 德吉)、EVACET(盐酸多柔比星脂质体)、FARESTON(托瑞米芬)、 FASLODEX(氟维司群)、FEC、FEMARA(来曲唑)、FLUOROPLEx(氟 尿嘧啶)、FOLEX(甲氨蝶呤)、FOLEX PFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRI、 FOLFIRI-BEVACIZUMAB、FOLFIRI-CETUX顶AB、FOLFIRINOX、 FOLFOX、FU-LV、GARDASIL(重组人乳头状瘤病毒(HPV)四价疫苗)、 GEMCITABINE-CISPLATIN、GEMCITABINE-OXALIPLATIN、GEMZAR (吉西他滨盐酸盐)、GILOTRIF(二马来酸阿法替尼)、GLEEVEC(甲 磺酸伊马替尼)、GLIADEL(卡莫司汀植入物)、GLIADEL WAFER(卡 莫司汀植入物)、HERCEPTIN(曲妥珠单抗)、HYCAMTIN(盐酸拓扑 替康)、IFEX(异环磷酰胺)、IFOSFAMIDUM(异环磷酰胺)、INLYTA(阿 西替尼)、INTRONA(重组干扰素d-2b)、IRESSA(吉非替尼)、IXEMPRA (伊沙匹隆)、JAKAFI(磷酸卢梭替尼)、JEVTANA(卡巴他赛)、KADCYLA (曲妥珠单抗)、KEYTRUDA(pembrolizumab)、KYPROLIS(卡非佐米)、LIPODOX(盐酸多柔比星脂质体)、LUPRON(乙酸亮丙瑞林)、LUPRON DEPOT(乙酸亮丙瑞林)、LUPRON DEPOT-3MONTH(乙酸亮丙瑞林)、 LUPRONDEPOT-4MONTH(乙酸亮丙瑞林)、LUPRON DEPO孓PED(乙 酸亮丙瑞林)、MEGACE(乙酸甲地孕酮)、MEKINIST(曲美替尼)、 METHAZOLASTONE(替莫唑胺)、METHOTREXATE LPF(甲氨蝶呤)、MEXATE(甲氨蝶呤)、MEXATE-AQ(甲氨蝶呤)、盐酸米托蒽醌、 MITOZYTREX(丝裂霉素c)、MOZOBIL(普乐沙福)、MUSTARGEN(盐 酸氮芥)、MUTAMYCIN(丝裂霉素c)、MYLOSAR(阿扎胞苷)、 NAVELBINE(酒石酸长春瑞滨)、NEOSAR(环磷酰胺)、NEXAVAR(甲 苯磺酸索拉非尼)、NOLVADEX(柠檬酸他莫昔芬)、NOVALDEX(柠檬 酸他莫昔芬)、OFF、PAD、PARAPLAT(卡铂)、PARAPLATIN(卡铂)、 PEG-INTRON(聚乙二醇化干扰素α-2b)、培美曲塞二钠、PERJETA(帕 妥珠单抗)、PLATINOL(顺铂)、PLATINOL-AQ(顺铂)、POMALYST(泊 马度胺)、泼尼松、PROLEUKIN(阿地白介素)、PROLIA(地诺单抗)、 PROVENGE(西普鲁塞-t)、REVLIMID(来那度胺)、RUBIDOMYCIN(盐 酸柔红霉素)、SPRYCEL(达沙替尼)、STIVARGA(瑞戈非尼)、SUTENT (苹果酸舒尼替尼)、SYLATRON(聚乙二醇化干扰素α-2b)、SYLVANT (西妥昔单抗)、SYNOVIR(沙利度胺)、TAC、TAFINLAR(达拉非尼)、 TARABINE PFS(阿糖胞苷)、TARCEVA(盐酸埃罗替尼)、TASIGNA(尼 禄替尼)、TAXOL(紫杉醇)、TAXOTERE(多西紫杉醇)、TEMODAR(替 莫唑胺)、THALOMID(沙利度胺)、TOPOSAR(依托泊苷)、TORISEL (西罗莫司)、TPF、TRISENOX(三氧化二砷)、TYKERB(二甲苯磺酸 拉帕替尼)、VECTIBIX(帕尼单抗)、VEIP、VELBAN(硫酸长春碱)、VELCADE(硼替佐米)、VELSAR(硫酸长春碱)、VEPESID(依托泊苷)、 VIADUR(乙酸亮丙瑞林)、VIDAZA(阿扎胞苷)、VlNCASAR PFS(硫 酸长春新碱)、VOTRIENT(盐酸帕唑帕尼)、WELLCOVORIN(亚叶酸 钙)、XALKORI(克唑替尼)、XELODA(卡培他滨)、XELOX、XGEVA (地诺单抗)、XOFIGO(二氯化镭223)、XTANDI(恩扎鲁胺)、YERVOY (伊匹单抗)、ZALTRAP(ziv-阿柏西普)、ZELBORAF(威罗菲尼)、 ZOLADEX(醋酸戈舍瑞林)、ZOMETA(唑来膦酸)、ZYKADIA(色瑞替尼)、ZYTIGA(乙酸阿比特龙)、ENMD-2076、PCI-32765、AC220、多 韦替尼乳酸盐(TKI258，CHIR-258)、BIBW 2992(TOVOK^TM)、SGX523、 PF-04217903、PF-02341066、PF-299804、BMS-777607、ABT-869、MP470、 BIBF 1120

AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、 BMS-690154、CEP-11981、替沃扎尼(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、 XL-647和/或XL228)、蛋白酶抑制剂(例如，硼替佐米(Velcade))、mTOR 抑制剂(例如，雷帕霉素、西罗莫司(CCI-779)、依维莫司(RAD-001)、 雷帕霉素衍生物(ridaforolimus)、AP23573(Ariad)、AZD8055(AstraZeneca)、 BEZ235(Novartis)、BGT226(Norvartis)、XL765(SanofiAventis)、 PF-4691502(Pfizer)、GDC0980(Genetech)、SF1 126(Semafoe)及OSI-027(OSI))、奥利默森(oblimersen)、吉西他滨(gemcitabine)、洋红霉素 (carminomycin)、甲酰四氢叶酸(Ieucovorin)、培美曲塞(pemetrexed)、 环磷酰胺(cyclophosphamide)、达卡巴嗪(dacarbazine)、丙卡巴饼 (procarbizine)、泼尼龙(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、卡 普热新(campathecin)、普卡霉素(plicamycin)、天冬酰胺酶(asparaginase)、 氨基噪呤(aminopterin)、甲胺噪呤(methopterin)、泊非罗霉素(porfiromycin)、美法仑(melphalan)、异长春碱(Ieurosidine)、环氧长 春碱(Ieurosine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、曲贝替定(trabectedin)、 丙卡巴饼(procarbazine)、迪斯德莫来(discodermolide)、洋红霉素 (carminomycin)、氨基噪呤及六甲基三聚氰胺(hexamethyl melamine)或 其组合。

本发明还提供式(I)化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异 构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形 体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)、前 驱药或其组合物，用于治疗所需个体的增殖性疾病，例如癌症，包括举例 如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例 如，对一或多种抗微管药物治疗具抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达相关的对多种药物有抗性的癌症)(例如紫杉醇或长春花生物碱)。

本发明还提供式(I)化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异 构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形 体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)、前 驱药或其组合物的用途，用于制备治疗所需个体的增殖性疾病的药物，该 增殖性疾病例如癌症，包括举例如肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部 癌、颈部癌、头颈癌或血癌(例如，对一或多种抗微管药物治疗具抗性的癌症(例如，与P-糖蛋白(P-gp)过度表达相关的对多种药物有抗性的癌 症)(例如紫杉醇或长春花生物碱))。

在某些实施例中，其提供抑制所需个体的癌细胞微管聚合的方法，该 方法包括对该个体投予一治疗有效量的式(I)化合物或其医药上可接受的 盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂 合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，或本文所述的医药组合物。

在一些实施例中，其提供诱导组织、生物样本或个体对多种药物具抗 性的癌细胞凋亡的方法，该方法包括将一治疗有效量的式(I)化合物或其 医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物 (stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集 衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，或本文所述的医药组 合物投予至该个体或接触该细胞、组织或生物样本。在一些实施例中，这些方法还包括使该细胞、组织或生物样本接触一治疗有效量的额外医药剂 合并本发明化合物。

为了可更充分地理解本发明，阐述了以下实施例。此提供描述在本申 请中的合成及生物实施例，以举例说明本文提供的化合物、医药组合物及 方法，且不以任何方式解释为限制其范围。

[实施例1]分析示例性化合物的生物活性

在本研究中，对2百万种化合物进行两步高通量筛选(high-throughputscreening)，以寻找对肺癌具有治疗活性的新分子。本研究发现示例性化合 物4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(AS1712)在体外及体内具有 抗癌活性，且对癌症(而不对正常细胞)具有优异的治疗专一性(specificity)。 本研究发现ASl712抑制各种类型癌细胞的生长，包括肺癌、前列腺癌、 卵巢癌、乳癌、结肠癌、头颈癌及血癌。通过靶向β-微管蛋白的秋水仙素 结合位点，AS1712诱导有丝分裂细胞周期停滞及凋亡。值得注意的是，AS1712的独特微管蛋白结合位点可防止β-微管蛋白变异及P-gp过度表达 所引起的抗药性。

AS1712于体外及体内抑制肺癌细胞增殖并具有广泛的抗癌活性

利用两步高通量筛选程序，示例性化合物4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉 -6-羧酸乙酯(AS1712)呈现大幅降低许多不同肺癌细胞株的增殖，包括 EGFR TKI-抗药细胞株H1975及PC9/IR；临床分离株CL25、CL83、CL97、 CL100、CL141及CL152；以及ATCC细胞株PC-9。首先使用MTS分析， 以评估示例性化合物AS1712对不同非小细胞肺癌细胞株的细胞毒性作用， 其发现AS1712可在不同EGFR状态的细胞株中诱导细胞死亡，包括A549 (野生型EGFR)、CL1-0(野生型EGFR)、PC9(EGFR外显子19缺失 /EGFR exon 19deletion)及H1975(EGFR中T790M及L858R突变)。受 作用的细胞株的IC₅₀值范围为16至33nM(图1A)，此表示AS1712的细 胞毒性作用与肺癌细胞的EGFR状态无关。此外，AS1712对正常气管上 皮细胞(NBE)及人纤维母细胞(HFB)相对无毒性(IC₅₀＞10μM；图 1A)。示例性化合物AS1712呈现剂量依赖性地抑制CL1-0及H1975细胞 的群落形成能力(图1B-1E)。上述数据表示，AS1712可在体外抑制非小 细胞肺癌的增殖。

为了评估示例性化合物AS1712的体内抗肿瘤功效，对无胸腺BALB/c 裸鼠(每只均带有建立的皮下H1975肿瘤)进行每周三次腹膜内注射 DMSO(控制组)或4或8mg/kg AS1712达25天(每组n＝6)。在整个 治疗过程中，监测每只小鼠的肿瘤体积及体重。相较于控制组，AS1712 的处理明显降低H1975异位移植肿瘤的生长(平均肿瘤大小：DMSO治 疗为1749±234.5mm³，4mg/kg治疗为871.3±106mm³，8mg/kg治疗 为587.2±67mm³；所有均在第25天测量且两者p＜0.01；图1F、2A-2D及 表1)。体重及肝脏与肾脏功能的血清生化指标(包括ALT、AST、BUN 及Cre)在实验的第25天呈现无毒性影响(图2D及表1)。因此，AS1712 在体内以低毒性抑制肿瘤生长。

表1-肝及肾功能的血清生化指标ALT、AST、BUN及Cre(数据为平 均值±SEM)

还评估示例性化合物AS1712对各种类型癌细胞的细胞毒性，其发现 AS1712降低许多不同类型的恶性细胞的存活率，包括源自肺(A549、 CL1-0、PC9及H1975)、乳房(BT-549、Hs578t、MDA-MB-231、37T及 82T)、卵巢(SKOV-3、IGR-OV1及Ovcar-3)、头及颈(SAS、OECM1 及KB)、结肠(HCT116、HT-29、Colon205及SW620)、前列腺癌(Du-145 及PC-3)及血癌(Molt4及CCRF-CEM)。对于测试的23种癌细胞株，其 IC₅₀值范围在16至84nM(表2)，此呈现示例性化合物AS1712或示例性 化合物AS1712的衍生物可用于治疗各种类型的癌症。

表2-AS1712对不同癌细胞株或正常细胞株增殖的抑制活性

AS1712诱导凋亡及细胞周期停滞

为了评估示例性化合物AS1712的细胞毒性作用是否与凋亡细胞死亡 相关，以AS1712处理CL1-0、H1975及HFB细胞达24至72小时，接着 监测主要促凋亡蛋白(pro-apoptotic protein)的活化。本研究发现AS1712 呈现时间依赖性地诱导CL1-0及H1975细胞中的聚腺苷酸二磷酸核糖基聚 合酶(Poly ADP-ribose Polymerase，PARP)及半胱天冬酶-3(caspase-3) 裂解(cleavage)；正常HFB细胞中的PARP及半胱天冬酶-3(caspase-3)则不受AS1712影响(图3)。接着，研究可能已被AS1712活化的凋亡途 径蛋白，并发现AS1712呈现剂量依赖性地诱导两个内源性凋亡途径指标， 即半胱天冬酶-9(caspase-9)裂解及Bax表达(图4A)。相反地，AS1712 处理并未活化外源性凋亡途径指标半胱天冬酶-8(caspase-8)(图4A)。 还发现用AS1712进行24小时处理增加了细胞色素c(cytochrome c)的 细胞质内浓度(图4B)，而相同剂量的AS1712并未诱导HFB细胞凋亡或 细胞色素c释放(图5A及5B)。因此，AS1712仅诱导癌细胞中内源性凋 亡途径的活化。

接着，研究AS1712的凋亡作用是否由异常的细胞周期进程所引起。 通过流式细胞技术检测CL1-0、H1975及HFB细胞在细胞周期各期之间的 分布。AS1712处理呈现剂量依赖性地增加CL1-0及H1975细胞的亚倍体 (sub-G1，凋亡细胞群)及G2/M期细胞群(图4C)，而HFB细胞则无 此现象(图5C)。为了理清AS1712是否诱导G2或有丝分裂细胞周期停 滞，在CL1-0及H1975细胞的检查点对细胞周期进行表征，其发现AS1712 增加有丝分裂期指标的细胞周期蛋白B1(cyclin B1)及磷酸化组织蛋白 H3(phospho-histone H3，p-HH3)，但G2期指标的细胞周期蛋白A则没 有(图4D)。还使用高通量细胞影像(high-content imaging)，对特定的有 丝分裂期指标p-HH3进行染色，以测量有丝分裂指数(有丝分裂细胞比例)， 其发现AS1712处理导致CL1-0及H1975细胞呈现剂量依赖地累积于有丝 分裂期(图4E)。此外，使用α-微管蛋白免疫荧光染色法 (immunofluorescence staining)，直接评估纺锤丝(mitotic spindle)组织， 并观察到纺锤丝的排列受到AS1712处理的破坏(图4F)。上述数据表示 AS1712诱导有丝分裂细胞周期停滞。

AS1712直接抑制微管聚合

观察到AS1712处理会破坏纺锤丝组织即表示，该处理可能干扰动态 微管结合(association)和/或解离(dissociation)。因此，进行免疫荧光分 析，以检测经AS1712处理的CL1-0、H1975及HFB细胞中微管网络的状 态。AS1712处理CL1-0及H1975细胞导致其微管去聚合化 (depolymerization)(图6A)，而此等处理对HFB细胞中的微管则仅有很 小的影响(图7)。在通过离心将组合及拆解的微管分别分离成颗粒及可溶 收集层(fraction)之后，进行细胞内微管组合测定(microtubule assembly assay)。值得注意的是，AS1712实质上增加了可溶收集层(fraction)中α- 微管蛋白的量，此发现与诺考达唑(nocodazole)相似，但不同于太平洋 紫杉醇处理(图6B)。利用基于免疫荧光的微管聚合测定进一步证实，AS1712诱导微管的去聚合化。首先，用40nM AS1712处理H1975细胞 达1小时，接着置于低温环境中30分钟，随后移至37℃达不同时间。当 用AS1712处理时，微管在37℃下无法聚合(图6C)。接下来，用纯化的 微管蛋白进行体外微管蛋白聚合测定法，以检测AS1712是否直接干扰无 细胞系统中的微管组合。如预期地，发现参考药物诺考达唑及敏克瘤可抑 制微管蛋白聚合，而太平洋紫杉醇可增强聚合反应。还发现AS1712直接 抑制微管蛋白聚合(图6D)。进行体外微管成核分析(microtubule nucleation assay)，以测试AS1712是否直接抑制纯化中心体处的新微管组合。用 AS1712或DMSO培养纯化的中心体及微管蛋白。AS1712实质上抑制了 来自中心体的微管星体(microtubule aster)的形成(图6E，左图)。微管 纤维长度的定量分析亦显示AS1712与DMSO处理之间有显著差异(图 6E，右图)。上述数据表示，AS1712直接抑制微管聚合。

[实施例2]示例性化合物的合成

流程1-合成AS1712类似物2a-2m

AS1712的基于细胞的结构-活性关系(SAR)研究-鉴定出较有效的抗 癌化合物RJ-LC-15-8

利用H1975细胞及示例性AS1712类似物(具有4(1H)-喹诺酮骨架)， 进行SAR研究以找出具有增强抗癌活性的更有效的AS1712系列化合物。 如上流程1A及下表3所示，首先将AS1712水解为酸2a，其IC_s0＞5μM。 接着，将2a转化为乙酰胺2b(其IC₅₀＝3.7μM)。相较于AS1712，此两 种类似物对H1975细胞均具有明显较低的活性。而后，将重点移到4(iH) -喹诺酮骨架的C-2位置处苯基的结构优化。利用2c-2j探讨芳环的间位或 对位取代基的作用，其通过涉及3-芳基-3-氧基丙酸乙酯(ethyl 3-aryl-3-oxypropanoate)与4-氨基苯甲酸乙酯(ethyl 4-aminobenzoates)的 反应及所得的β-烯胺酯(β-enamino ester)1在热的二苯醚中进行环化而 合成(流程1B)。在苯基的对位位置处加上推电子基(2c，IC₅₀＝2.2μM)、 拉电子基(2d，IC₅₀＝2.1μM；2e，IC₅₀＝4.5μM)或羟基(2f，IC₅₀＝475 nM)导致对H1975细胞的抑制活性大幅降低。有趣的是，在探讨间位取 代基的作用时发现，具有间位-氟苯基基团的2h对H1975细胞有增强的抑 制活性(IC₅₀＝24nM)，而2i及2j(在苯环的间位位置上分别带有三氟甲 基及羟基)相较于AS1712则呈现明显降低的效力(分别为IC₅₀＝780nM 及1.95μM)。在尾端芳环上引入间位-甲氧基(2g)会稍微降低活性(IC₅₀＝44nM)。还通过以较小或较大立体障碍基团(分别为2k，IC₅₀＝207nM 及2l，IC₅₀＝48nM)取代乙基或是移除氧代基(2m，流程1C，IC₅₀＝810 nM)，以探讨4(1H)-喹诺酮骨架的6-位置上取代基的作用。结果呈现， 原本的碳酸乙酯是C-6位置处最优的取代基。总而言之，从SAR研究所 获得的数据表示，相较于AS1712，2h(称为RJ-LC-15-8)对H1975细胞 有较大的抗细胞增殖效力(IC₅₀＝24nM)。

表3-AS1712对于抑制H1975细胞的基于细胞的SAR研究

RJ-LC-15-8利用类似AS1712的机制抑制H1975肿瘤生长

为了验证RJ-LC-15-8的作用机理与AS1712类似，对H1975细胞进行 额外实验。免疫墨点法(immunoblot)显示，RJ-LC-15-8诱导PARP的裂 解，并增加有丝分裂期指标细胞周期蛋白B1(cyclin B1)及磷酸化组织蛋 白H3(p-HH3)的表达(图8A)。α-微管蛋白染色的原位免疫荧光显示， RJ-LC-15-8处理抑制了微管聚合(图8B)。体外微管蛋白聚合测定也呈现RJ-LC-15-8对微管聚合的直接抑制(图8C)。接着，使用H1975异位移植 模型评估RJ-LC-15-8的抗肿瘤能力，其数据显示，相较于控制组， RJ-LC-15-8可抑制肿瘤生长(在第21天的平均肿瘤大小：DMSO控制组 处理为2153±126.3mm³；4mg/kg处理为1333±121.9mm³；8mg/kgRJ-LC-15-8处理为972.5±52.3mm³；两者p＜0.01；图8D)。在实验结束 时，发现RJ-LC-15-8处理并未影响体重(图8E)。还评估RJ-LC-15-8对 三阴性乳癌(TNBC)的细胞毒性。本研究发现在不同TNBC细胞株中， RJ-LC-15-8比AS1712更有效，其IC₅₀值范围为21至35nM(表4)。MDA-MB-231异位移植模型显示，相较于控制组，RJ-LC-15-8可抑制 TNBC肿瘤生长(在第35天的平均肿瘤大小：DMSO控制组处理为218 ±20.9mm³；4mg为105±9.4mm³；8mg/kg RJ-LC-15-8处理为73.6± 8.2mm³；两者p＜0.05；图8F)。在MDA-MB-231异位移植模型中， RJ-LC-15-8处理不影响体重(图8G)。

表4-示例性化合物RJ-LC-15-8对不同三阴性乳癌细胞株的细胞毒性 作用(以RJ-LC-15-8处理细胞72小时，以MTS分析检测细胞存活率， 数据为三个测量值的平均值)

流程2-制备示例性化合物

AS1712结合β-微管蛋白的秋水仙素-结合口袋

示例性化合物AS1712对微管聚合的抑制表示AS1712可能直接靶向 微管蛋白。为了提供此种可能结果的证据，使用与AS1712结合的磁珠进 行拉下试验(pull-downassay)。首先，通过三步骤程序由3-(3-羟苯基) -3-氧代丙酸乙酯炔烃(ethyl3-(3-hydroxyphenyl)-3-oxopropanoatealkyne) 合成炔烃4(流程2A)，接着耦接至装有聚乙二醇₁₂-叠氮连接体(linker) 的磁珠上，以产生“磁珠-AS1712”(流程2B)。将H1975裂解物分别与磁 珠-AS1712(mag-beads-AS1712)或磁珠-控制组(mag-beads-control) 在4℃培养过夜后，免疫墨点法呈现mag-beads-AS1712仅拉下β-微管蛋白 (图9A)。接着，进行表面电浆共振(surface plasmon resonance)研究， 以测量微管蛋白-AS1712复合物的解离常数(K_D)值。将不同浓度的AS1712 注入微管蛋白固定的感测晶片表面，并监测复合物的形成。共振单元数量 (其反应出所形成的复合物量)呈现剂量依赖性地增加(图9B)。通过将 数据拟合至稳态模型，以确定该复合物的KD值为13.8μM。此数据表示 AS1712与微管蛋白直接相互作用。

利用蛋白质限制水解分析(limited proteolysis)进一步表征微管蛋白 上的AS1712-结合位点。对于微管去稳定剂(microtubule destabilizing agent)， 已知有两种不同的微管蛋白结合位点：长春花碱位点及秋水仙素位点。当 药物与微管蛋白结合时，其会诱导构形变化，此构形变化可通过胰蛋白酶 限制水解(limited trypsin digestion)分析进行探测(图9C及9D)。在胰 蛋白酶限制水解后，秋水仙素-位点药物诺考达唑会导致β-微管蛋白解构 (unfold)并产生增加量的βcol。相反地，相较于控制组水解反应(digestion)， 长春花碱-位点药物敏克瘤稳定了α-及β-微管蛋白的折叠，并减少产生的 βcol、αN及αC片段的数量。暴露于AS1712的微管蛋白样品在胰蛋白酶 作用后的产物型态类似于诺考达唑(图9C及9D)。使用秋水仙素及AS1712 进行秋水仙素位点的竞争测定，以确认AS1712结合于秋水仙素位点(图 9E)。如同于诺考达唑，AS1712的存在呈现剂量依赖性地降低秋水仙素 荧光，而敏克瘤则没有。

进行分子建模研究，以探讨AS1712在异质双体微管蛋白晶体结构的 秋水仙素口袋中的结合模式。以秋水仙素(为晶体结构中的原始配体)的 定位(orientation)作为参考。通过分子嵌合(docking)至秋水仙素结合 口袋中而产生的AS1712结合模式(bindingpose)可叠加于RMSD值为

的秋水仙素结构上(图9F)。AS1712复合物的嵌合能量(docking energy)值(-32.8706kcal/mol)高于秋水仙素复合物的嵌合能量值 (-4.47969kcal/mol)。在AS1712与α/β-微管蛋白二聚体之间发现各种距 离于

内的键(图9G)，包括AS1712与β-微管蛋白A1a250及Lys254 之间的氢键、AS1712与α-微管蛋白Gln11之间的氢键、AS1712与β-微管 蛋白Leu248、Lys254、Met259、Ala316及Lys352间的π-键(图9H)。此 等结果表示，AS1712结合于β-微管蛋白的秋水仙素结合口袋处。

示例性化合物AS1712克服P-糖蛋白介导的多重抗药性

MTA诱导MDR的主要机制是P-gp过度表达，其也是临床上与癌症 治疗相关的最常见的抗药机制。因此，测试AS1712及RJ-LC-15-8对KBtax、 KBvin及CEM/VBL癌细胞株(过度表达P-gp)的细胞毒性作用。通过 将人类口腔癌细胞株KB分别暴露于太平洋紫杉醇及敏克瘤，以建立 KBtax及KBvin细胞株。通过将人类T淋巴细胞白血病细胞株CCRF-CEM 暴露于太平洋紫杉醇，以建立CEM/VBL细胞。KBtax、KBvin及CEM/ VBL细胞对太平洋紫杉醇的抗药因子(RF)值分别为10、70及214，对 敏克瘤的抗药因子分别为32、163及440(表5)。此等结果证实，这些细 胞株对太平洋紫杉醇及敏克瘤具有抗性。相比之下，AS1712及RJ-LC-15-8 对这些细胞株具有细胞毒性，其对这些细胞的作用等于或大于对母细胞的 作用(表5)。值得注意的是，易莎平(ixabepilone)，用于晚期乳癌(不 再对可用的化学疗法产生反应)的第二线MTA，不能有效地抑制此等多 重抗药性细胞株的存活率(表5)。

表5-AS1712对KB、CCRF-CEM细胞及其多重抗药性子细胞株的细 胞毒性

^aRF：抗药因子(于抗药性细胞株的IC_s0/于母细胞株的IC₅₀)

还测试AS1712及RJ-LC-15-8对三阴性乳癌(TNBC)细胞株(HDPQ1) 及其太平洋紫杉醇-抗药性子细胞株(HDPQ1/TAX)的细胞毒性。HDPQ1 /TAX细胞对太平洋紫杉醇的RF值为167。AS1712及RJ-LC-15-8对 HDPQ1/TAX细胞具有细胞毒性，其对该些细胞的作用等于或大于对母细 胞的作用。

表6-AS1712及RJ-LC-15-8对HDPQ1细胞及其太平洋紫杉醇-抗药性 子细胞株的细胞毒性

^aRF：抗药因子(于抗药性细胞株的IC₅₀/于母细胞株的IC₅₀)

为了评估RJ-LC-15-8在体内对肿瘤存活率的活性，对BAtax/c小鼠 移植KBtax细胞，接着用DMSO、太平洋紫杉醇(15mg/kg)或RJ-LC-15-8 (8mg/kg)进行每周3次的腹膜内注射(每组n＝5)。处理21天后，相 较于太平洋紫杉醇及DMSO组，RJ-LC-15-8组呈现肿瘤生长显著降低(平 均肿瘤大小：DMSO为1109±128.3mm³；太平洋紫杉醇为868.7±121.4 mm³；RJ-LC-15-8为528.4±101.6mm³；图10A及11A)。肿瘤组织的TUNEL 染色显示RJ-LC-15-8处理诱导细胞凋亡(图10B)。在实验结束时，对体 重及肝及肾功能的血清生化指标没有负面影响(图11B和表7)。因此， RJ-LC-15-8低毒性地抑制MDR型癌症肿瘤的生长。

表7-对KBtax异位移植肿瘤的血清生化指标活性(数据为平均值± SEM、)

由于RJ-LC-15-8对KBtax细胞呈现抑制活性，因而试图确定其作用 是否与P-gp有关，即其是通过直接抑制或是由于其不是P-gp受质药物 (P-gp substrate)。因此，研究RJ-LC-15-8对P-gp排出活性及其表达的影 响。罗丹明排出(rhodamine efflux)分析显示，RJ-LC-15-8不能直接抑制 KBtax细胞中的泵活性，但已知的P-gp抑制剂维拉帕米(Verapamil)却 可以(图10C)。免疫墨点研究显示，RJ-LC-15-8不会影响KBtax细胞中 的P-gp表达，而会诱导凋亡指标PARP及半胱天冬酶-9(caspase-9)的 裂解，并增加有丝分裂期指标细胞周期蛋白B1(cyclin B1)及磷酸化组 织蛋白H3(p-HH3)(图10D)。α-微管蛋白的原位免疫荧光染色显示， RJ-LC-15-8处理会抑制微管聚合，并破坏纺锤丝组织(图10E)。RJ-LC-15-8 诱导多重抗药性细胞凋亡，而不直接干扰P-gp表达或活性，更广泛地讲， RJ-LC-15-8的细胞毒性机制与P-gp无关。

实验部分

[一般实验]在使用前，通过已知方法，对无水溶剂进行新干燥及纯化。 使用预先涂有silia gel 60F254(Merck)的TLC玻璃片，通过TLC检测所 有反应的进程。在

Si 60(Merck)上进行管柱层析。以Bruker AV-III 400MHz、Bruker N-600、Bruker AV-400或AV-500MHz光谱仪记录 ¹H及¹³C NMR光谱，并以δ(ppm)测量化学位移，且以残留溶剂峰作 为内标(CDCl₃，在¹H NMR中为δ7.26ppm，在¹³C NMR中为δ77ppm； CD₃OD，在¹HNMR中为δ3.31ppm，在¹³C NMR中为δ49.0ppm； DMSO-d₆，在¹H NMR中为δ2.50ppm，在¹³C NMR中为δ39.52ppm。 耦合常数(J)以赫兹(Hz)为单位，所用的分裂(splitting)缩写如下： s/单峰；d/二重峰；t/三重峰；d/四重峰。在Buchi 565设备上记录熔点。

抗PARP、半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-9、Bax及MDR-1 的抗体购自Cell Signaling。抗细胞周期蛋白B1、细胞周期蛋白A、GADPH 及MTCOl的抗体获自SantaCruz。抗α-微管蛋白、β-微管蛋白及β-肌动 蛋白的抗体来自Sigma Aldrich。抗细胞色素c的抗体制剂来自Abcam。抗 p-HH3(S10)的抗体制剂来自Merck Millipore。辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)标记抗小鼠及抗兔抗体购自Santa Cruz。异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate)标记抗小鼠抗体来自Thermo Fisher Scientific。培养基、DMEM培养基 (Dulbecco’s Modified Eagle medium)及胎牛血清购自GIBCO LifeTechnologies。原位细胞死亡测定(TUNEL)套组购自Roche。微管蛋白 聚合测定套组获自Cytoskeleton。BCA蛋白测定套组购自Pierce。S系列 感测晶片(Series S Sensor Chip)SA及HBS-EP+电泳缓冲液(running buffer) 购自GE Healthcare。

通过高通量筛选鉴定AS1712

通过高通量筛选，利用2百万个化合物的资料库来评估10μM浓度下 对H1975肺癌细胞的抗增殖活性。初步筛选的变异系数(CV％)及Z′值 分别确定为4.9％及0.58。在第一次筛选中，～6,800个小分子对H1975 细胞表现出＞80％的生长抑制。针对其他八种肺癌细胞，对这些化合物作 进一步筛选，包括临床分离株(CL25、CL83、CL97、CL100、CL141、CL152)、ATCC细胞株(PC-9)及其衍生抗药克隆(PC9/IR)。对所有测 试细胞进行IC₅₀≤6μM的标准过滤，仅保留232个小分子作进一步研究。 AS1712是这些分子中的其中一者，其在肺癌细胞上表现优异的细胞毒性 作用，及癌细胞与正常细胞之间显著的治疗窗(therapeuticwindow)。

细胞株及细胞培养

从一名分化不良腺癌(poorly differentiated adenocarcinoma)的64岁 男性患者中分离出CL1-0细胞。PC9细胞获自C.H.Yang博士(台湾大学 肿瘤医学研究所肿瘤研究中心)。Molt4血癌细胞获自Tang K.Tang博士 (中央研究院生物医学科学研究所)。KB、KBtax、KBvin、CCRF-CEM 及CEM/VBL细胞获自T.C.Lee博士(中央研究院生物医学科学研究所)。 KB细胞株最初源自于口腔表皮癌，且已被HeLa细胞污染。Hs578T、 MDA-MB-231、37T及82T细胞获自Y.S.Lu博士(台湾大学医学院内科 部)。37T及82T细胞是分离自乳癌患者，并于2％IH培养基中培养。 SKOV-3、IGR-OV1、Ovcar-3、HCT116、HT-29、Colon205、SW620、Du-145 及PC-3细胞获自S.L.Yu博士(台湾大学医学院-医学检验暨生物技术学 系)。NBE细胞供自ReenWu博士(加州大学戴维斯分校生理与细胞生物 学解剖学系)，并在气管上皮基底培养基(bronchial epithelial basal medium) 中培养。SAS及OECM1细胞获自C.Y.Chen博士(长庚科技大学民生学 院健康产业科技研究所/Graduate Institute of Health IndustryTechnology and Research Center for Industry of Human Ecology)。A549、H1975、BT-549 及HFB细胞购自美国典型培养物保藏中心ATCC(Rockville，MD，USA)。 通常，在5％CO₂及95％空气的氛围下，在潮湿培养箱中以RPMI 1640培 养基或DMEM(补充有10％热灭活胎牛血清及1％青霉素-链霉素)中培 养细胞。

细胞毒性分析

将细胞接种到96孔板的孔中(2000个细胞/孔)。过夜培养后，将细 胞用不同浓度的化合物处理72小时。使用CellTiter 96AQueous单溶液细 胞增殖检测(MTS)试剂测定细胞毒性。用化合物处理后，将20μL MTS 试剂添加至每孔中，并将板在37℃下培养1～4小时。接着，使用VersaMax 微量盘分析仪(Molecular Devices)测定各孔中培养基在490nm的吸光度。

细胞群落形成试验

将细胞接种到六孔板的孔中(1000细胞/孔)。过夜培养后，将细胞用 各种浓度的AS1712处理2周。接着，将每孔中的菌落用3.7％多聚甲醛固 定，用0.04％结晶紫(crystalviolet)染色，并溶于1ml DMSO中。使用 VersaMax微量盘分析仪读取各DMSO溶液在590nm处的吸光度。

细胞周期分析

处理后，将细胞用胰蛋白酶作用并在冰冷的70％乙醇中固定过夜。用 PBS洗涤固定的细胞，并用0.5mL的碘化丙锭(10μg/mL)/RNase(20μg/ mL)溶液染色30分钟。用FACSCanto流式细胞仪(Becton Dickinson) 分析细胞内DNA含量。

免疫沉淀法及免疫墨点法

收集细胞，并在具有蛋白酶抑制剂(Roche)的RIPA缓冲液(20mM Tris-HCl、150mMNaCl、1mM Na₂EDTA、1％脱氧胆酸钠、1％IGEPAL CA-630、0.1％SDS、pH 7.5)中裂解细胞。通过BCA测定法测量蛋白质 浓度。为了进行免疫沉淀，将蛋白质萃取物与磁珠-AS1712 (mag-beads-AS1712)或磁珠-控制组(mag-beads-control)在4℃培养过 夜，接着于进行免疫墨点之前用PBS洗涤五次。为了进行免疫墨点法，将 等量的变性蛋白通过SDS-PAGE凝胶分离，接着转渍至PVDF膜(Millipore)，其分别用含5％脱脂牛奶的PBS及0.1％Tween-20(SigmaAldrich)进行阻拦(blocking)1小时。接着，将各个膜与一抗在4℃下培 养过夜，随后与辣根过氧化物酶偶联的二抗在室温下培养1小时。通过增 强的化学发光检测(enhancedchemiluminescence detection)，直接观察信号， 并使用高感度自动冷光影像分析仪(UVPBiospectrum Imaging System)获 取影像。

免疫荧光染色法

以3.7％多聚甲醛固定细胞或微管星体(microtubule aster)，并用0.1％ TritonX-100进行透化(permeabilized)，且在4℃下用抗α-微管蛋白(1∶ 1000稀释)染色过夜，接着再与异硫氰酸荧光素偶联的二抗(1∶500)在 37℃下培养1小时。随后，用抗褪色封固剂(Prolong Gold Antifade Reagent) 将细胞固定并用DAPI(Thermo Fisher Scientific)染色，之后用LSM 700 激光扫描式共轭焦显微镜(Carl Zeiss)获取影像。

体内微管组合检测

用化合物处理细胞样本6小时，接着收集细胞并在20mM Tris-HCl、 1mM MgCl₂、2mM EGTA、0.5％IGEPAL CA-630、2mM PMSF、200U/ mL抑肽酶(aprotinin)及蛋白酶抑制剂混合物(protease inhibitor cocktail， pH 6.8)中进行裂解。在室温下将各裂解物以16,000rpm离心15分钟后， 将其含有可溶性单体微管蛋白的上清液与含有聚合微管蛋白的颗粒收集 层(fraction)分开进行免疫墨点法。

体外微管蛋白聚合检测

根据制造商的说明，使用微管蛋白聚合分析套组(Cytoskeleton公司) 中的试剂。将含纯化猪微管蛋白(4mg/mL；纯度＞99％)的G-PEM缓 冲液(80mM PIPES、2mM MgCl₂、0.5mM EGTA、1mM GTP、15％甘 油、pH 6.9)与各测试化合物混合于96孔板的孔中。接着，VersaMax微 量盘分析仪在37℃下每分钟记录A340值1小时。

体外微管成核检测

在37℃下，将纯化的中心体与猪微管蛋白(Cytoskeleton公司，在80 mM PIPES、1mM MgCl₂、1mM EGTA及1mM GTP中，pH 6.8)在含有 或不含AS1712下培养8分钟。将微管星体固定于1％戊二醛中，并沉渣 于经酸处理的盖玻片上，最后用抗α-微管蛋白进行免疫荧光。使用 MetaMorph影像分析软体测量微管星体的纤维长度(n＝20/组)。

结合亲合性分析

利用表面等离子体共振技术，分析AS1712对微管蛋白的结合亲合力。 对S系列感测晶片SA进行三次连续1分钟注射1M NaCl(在50mM NaOH中)的处理，接着将50μg/mL生物素-微管蛋白(Cytoskeleton公 司)固定在Biacore T200系统(GE Healthcare)的感测晶片表面上，以达 到3,000个共振单位。保留晶片上的一个流动槽(flow cell)以作为负控制组。使用Biocytin(Sigma Aldrich)，以封闭(block)任何剩余的未修饰的 链霉亲合素(streptavidin)位点。在感测晶片表面上分别注入不同浓度的 AS1712(在10mM HEPES、150mM NaCl、3mMEDTA及0.05％表面活 性剂P20中，pH 7.4)，以在25℃下测量AS1712与微管蛋白的结合及解离。 使用数据分析软体(Biacore T200 Evaluation Software)中的稳态拟合模式 (steady-state fitting mode)来计算K_D值。

蛋白质限制水解(limited proteolysis)分析

微管蛋白(1mg/mL)分别与测试化合物于0.1M吗啉乙磺酸 (morpholinoethanesulfonic acid)、1mM MgCl₂、1mM EGTA、pH 6.9中 以30℃培养30分钟，接着将25μg/mL胰蛋白酶(经TPCK处理，Sigma Aldrich；1∶40[w/w]胰蛋白酶/微管蛋白)加入溶液，在4℃下进行10 分钟的消化作用(digestion)。样本通过15％SDS-PAGE凝胶进行电泳， 并用考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue)R250进行染色。使用高感度自 动冷光影像分析仪(UVP Biospectrum Imaging System)扫描并量化影像。

秋水仙素竞争分析

将微管蛋白(3M)及秋水仙素(3M)与各种浓度的AS1712、诺考 达唑或敏克瘤在80mM PIPES、2mM MgCl₂、0.5mM EGTA、pH 6.9中以 37℃培养1小时。使用Infinite M200plate reader(Tecan)记录荧光强度 (激发及放光波长分别于365及435nm处)。荧光值归一化(normalized) 至DMSO控制。

分子建模

使用DMA-秋水仙素-结合的微管蛋白异质双体晶体结构(PDB-ID： 1SA0)进行嵌合(docking)研究。使用Discovery Studio(Accelrys Inc.) 进行分子嵌合，以评估AS1712于微管蛋白的秋水仙素结合位点中的可能 结合模式。使用Discovery Studio中的PrepareProtein protocol(其对结构 进行质子化并插入missing loop区域)，以准备初始的晶体结构。利用 Discovery Studio中的CDOCKER docking protocol，基于格子为基础 (grid-based)的分子嵌合方法以及将结合能最小化的CHARMm力场来进 行嵌合。通过随机旋转及高温分子动力学，从每个初始配体结构产生随机 配体构形。通过格子为基础的模拟退火及最小化，对随机构形进行精修 (refine)。每个模式基于其最高docking score作选择，以进行进一步的交 互分析。使用Discovery Studio中的View Interactions工具执行嵌合后分析， 以鉴定出配体-蛋白质氢键、突起(bump)及π相互作用。

罗丹明(Rhodamine)排出测定

收集KBtax细胞(2.5×10⁵/测试)，并在含有5mM罗丹明的低温培 养基中在冰上放置1小时。接着，将细胞与一指定化合物重悬(resuspend) 于加热至37℃的培养基中，并在相同温度的水浴中培养1小时，以进行排 出测定。通过FACSCanto流式细胞技术以定量荧光强度。

异位移植模型

使用H1975、MDA-MB-231及KBtax异位移植模型，在6周龄BALB /c裸鼠(NARLabs，台湾台北)的右腹胁部进行接种后，建立肿瘤。形成 肿瘤后，将已溶于DMSO的赋形剂及测试化合物分别以每周三次腹膜内 注射至各别组动物中。在每次给药之前测量每只动物的体重及肿瘤体积。 肿瘤体积计算为0.5W²L(W为较小直径的宽度，L为较大直径的长度)。 根据中央研究院生物医学科学研究所实验动物照护及使用委员会 (Institutional Animal Careand Use Committee)所订的程序及指南进行动 物实验。

一般程序A：合成AS1712及其类似物

将4-苯胺(0.616mmol)、苯甲酰乙酸酯(0.71mmol)、TsOH·H₂O(0.03 mmol)及Na₂SO₄(6.16mmol)的CHCl₃(3ml)溶液搅拌回流48小时。 将反应混合物真空浓缩并用己烷或Et₂O洗涤。接着，收集滤液并蒸发以 获得亚胺。将亚胺溶于二苯醚(1ml)中，并加热至250℃达10分钟。 将反应混合物冷却至室温。以Et₂O进行溶提(trituration)后，进行过滤 收集产物。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 4-oxO-2-phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，AS1712)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率79％；熔点308-311℃； ¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ11.98(s，1H)，8.71(s，1H)，8.17(dd， J＝8.7Hz，J＝1.5Hz，1H)，7.87-7.83(m，3H)，7.61-7.58(m，3H)，6.43 (s，1H)，4.35(q，J＝7.1Hz，2H)，1.36(t，J＝7.2Hz，3H)；¹³C NMR(150 MHz，DMSO-d₆)δ177.1，165.8，151.4，144.1，134.4，132.0，131.2，129.5，128.0，127.5，124.8，124.6，120.0，108.7，61.3，14.7。

2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 2-(4-methoxyphenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2c)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率73％；熔点325-330℃； IR(neat)：3260，3159，2981，1697，1635，1574，1538，1486，1456，1395，1248， 1230，1191，1124，1022，820，786cm^-1；¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ 11.84(s，1H)，8.69(s，1H)，8.15(dd，J＝8.7Hz，J＝2.2Hz，1H)，7.95-7.90 (m，2H)，7.83(d，J＝8.5Hz，1H)，7.14(d，J＝8.5Hz，1H)，6.40(s，1H)，4.35(q，J＝7.2Hz，2H)，3.85(s，3H)，1.36(t，J＝7.1Hz，3H)； ¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ177.2，165.8，161.8，150.9，143.9，132.0， 129.5，127.5，126.3，124.7，124.5，119.7，114.9，108.0，61.3，56.0，14.7. ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₉H₁₆NO₄[(M)-]322.1079，测得值[(M) -]322.1084。

2-(4-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 2-(4-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2d)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率83％；熔点335-340℃； IR(neat)：3261，3145，3083，2979，2912，1711，1639，1552，1502，1487，1417， 1391，1257，1223，1130，1111，1027，923，844，774，761cm^-1；¹H NMR(600 MHz，DMSO-d₆)δ11.97(s，1H)，8.70(s，1H)，8.18(dd，J＝8.5Hz， J＝1.9Hz，1H)，7.95-7.90(m，2H)，7.83(d，J＝9.0Hz，1H)，7.44(t，J＝8.5Hz，1H)，6.42(s，1H)，4.35(q，J＝7.1Hz，2H)，1.36(t，J＝7.2 Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ177.2，165.8，164.8，163.2， 150.2，143.9，132.1，130.7，130.5，130.5，127.5，124.9，124.5，119.8，116.6， 116.4，108.9，61.3，14.7；ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₃NO₃F[(M) -]310.0879，测得值[(M)-]310.0871。

2-(4-溴苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 2-(4-bromo phenyl)-4-oxO-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2e)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率87％；熔点345-350℃； IR(neat)：3255，3140，3085，2976，1711，1638，1571，1491，1409，1364，1269， 1254，1074，1010，914，820，776，764cm^-1；¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆) δ11.99(s，1H)，8.70(s，1H)，8.18(dd，J＝8.6Hz，J＝1.9Hz，1H)， 7.85-7.79(m，5H)，6.45(s，1H)，4.35(q，J＝6.9Hz，2H)，1.37(t，J＝7.2Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ177.3，165.7，150.0，143.9， 133.4，132.5，132.2，130.1，127.5，124.9，124.8，124.6，119.8，109.0，61.3，14.7. ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₃NO₃Br[(M)-]370.0079，测得值[(M) -]370.0081。

2-(4-羟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl2-(4-hydroxyphenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2f)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率48％；熔点313-316℃； IR(neat)：3252，3148，3082，2986，2906，1715，1638，1557，1505，1496，1487， 1443，1262，1231，1174，1128，1028，965，898，839，804，789，772，755，705， 667cm^-1；¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ11.76(s，1H)，10.11(s，1H)， 8.69(s，1H)，8.14(dd，J＝9.0Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.83(d，J＝8.6Hz， 1H)，7.71(d，J＝8.7Hz，2H)，6.95(d，J＝8.9Hz，2H)，6.34(s，1H)， 4.35(q，J＝7.0Hz，2H)，1.36(t，J＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz， DMSO-d₆)δ176.6，165.3，159.9，150.7，143.4，131.4，129.0，127.0，124.1， 124.0，119.1，115.8，107.0，60.8，14.2.ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₄NO₄ [(M)-]308.0923，测得值[(M)-]308.0930。

2-(3-甲氧基苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 2-(3-methoxyphenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2g)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率85％；熔点277-280℃； IR(neat)：3140，3077，2968，1713，1643，1550，1504，1265，1235，1128，1032， 882，840，771，754，706，669cm^-1；¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ11.93 (s，1H)，8.71(s，1H)，8.18(dd，J＝9.0Hz，J＝1.5Hz，1H)，7.85(d， J＝8.5Hz，1H)，7.51(t，J＝8.2Hz，1H)，7.43-7.38(m，2H)，7.17(d， J＝8.5Hz，1H)，6.45(s，1H)，4.36(q，J＝7.1Hz，2H)，3.87(s，3H)， 1.36(t，J＝7.2Hz，3H)；¹³CNMR(150MHz，DMSO-d₆)δ177.3，165.8， 160.0，151.0，143.8，135.6，132.1，130.7，127.5，124.8，124.6，120.2，119.8， 116.9，113.4，108.9，61.3，55.9，14.7.ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₉H₁₆NO₄ [(M)-]322.1079，测得值[(M)-]322.1085。

2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2h)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率88％；熔点307-310℃； IR(neat)：3247，3143，3079，2981，2901，1715，1639，1583，1505，1486，1444， 1264，1233，1174，1130，1026，901，840，790，773，756，706cm^-1；¹H NMR (600MHz，DMSO-d₆)δ11.98(s，1H)，8.71(s，1H)，8.19(dd，J＝9.1 Hz，J＝2.4Hz，1H)，7.85(d，J＝8.7Hz，1H)，7.79-7.70(m，2H)，7.68-7.63 (m，1H)，7.45(t，J＝8.7Hz，1H)，6.48(s，1H)，4.37(q，J＝7.1Hz， 2H)，1.37(t，J＝7.2Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ177.3， 165.7，163.5，161.9，149.7，143.8，136.5，132.2，131.7，131.6，127.5，125.0， 124.6，124.2，119.9，118.0，117.9，115.1，114.9，109.2，61.3，14.7.ESI-HRMS (m/z)：计算值C₁₈H₁₃NO₃F[(M)-]310.0879，测得值[(M)-]322.0873。

4-氧代-2-(3-(三氟甲基)苯基)-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 4-oxo-2-(3-(trifluoromethyl)phenyl)-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2i)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率82％；熔点320-325℃； IR(neat)：3255，3140，3082，2984，2906，1715，1637，1582，1505，1486，1443， 1262，1174，1128，1111，1025，840，804，789，772，755，705，668cm^-1；¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ12.08(s，1H)，8.72(s，1H)，8.24-8.15 (m，3H)，7.97(d，J＝8.0Hz，1H)，7.84(t，J＝8.2Hz，2H)，6.52(s， 1H)，4.37(q，J＝7.1Hz，2H)，1.37＝8(t，J＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR(150 MHz，DMSO-d₆)δ177.3，165.7，149.6，143.9，135.3，132.3，130.7，130.5， 130.3，130.1，129.9，127.7，127.5，125.3，125.0，124.7，123.5，119.9，109.6， 61.3，14.7.ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₉H₁₃NO₃F₃[(M)-]360.0848，测 得值[(M)-]360.0842。

2-(3-羟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl2-(3-hydroxyphenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2j)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率27％；熔点268-309℃； IR(neat)：3204，1724，1583，1500，1488，1272，1135，833，759，711，683cm^-1； ¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ11.92(s，1H)，9.88(s，1H)，8.70(s， 1H)，8.17(dd，J＝1.4，8.7Hz，1H)，7.84(d，J＝8.7Hz，1H)，7.39(t，J＝7.9 Hz，1H)，7.24(d，J＝7.5Hz，1H)，7.18(s，1H)，6.99(d，J＝7.6Hz，1H)，6.33(s，1H)，4.36(q，J＝7.1Hz，2H)，1.36(t，J＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR (125MHz，DMSO-d₆)δ177.3，165.8，158.2，151.3，143.8，135.6，132.0， 130.7，127.5，124.8，124.6，119.8，118.6，118.1，114.6，108.6，61.3，14.7； ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₅NO₄[M+H]⁺310.1079，测得值310.1079。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸甲酯(methyl 4-oxo-2-phenyl- 1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2k)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率82％；熔点357-360℃； IR(neat)：3252，3143，3082，2978，1704，1636，1578，1489，1437，1395，1279， 1257，1236，1119，973，840，768，697，683，669cm^-1；¹H NMR(600MHz， DMSO-d₆)δ11.98(s，1H)，8.73(s，1H)，8.18(d，J＝8.9Hz，1H)， 7.89-7.83(m，3H)，7.64-7.59(m，3H)，6.42(s，1H)，3.91(s，3H)； ¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ177.3，166.3，151.3，143.9，134.3，132.0， 131.2，129.5，128.0，127.7，124.7，124.6，119.9，108.9，52.7.EI-HRMS(m/z)： 计算值C₁₇H₁₃NO₃[(M)-]279.0895，测得值[(M)-]279.0900。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸异丙酯(isopropyl 4-oxo-2- phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，2l)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率73％；熔点291-294℃； IR(neat)：3260，3146，3085，2973，1713，1644，1580，1549，1497，1266，1128， 838，750，690，683cm^-1；¹HNMR(600MHz，DMSO-d₆)δ11.97(s，1H)，8.70(s，1H)，8.18(dd，J＝8.5Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.88-7.84(m，3H)， 7.63-7.59(m，3H)，6.43(s，1H)，5.19(sept，J＝6.2Hz，1H)，1.37(d， J＝6.2Hz，6H)；¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ177.3，165.3，151.2， 143.9，134.3，132.1，131.2，129.5，128.0，127.5，125.2，124.6，119.8，108.8， 68.7，22.2.EI-HRMS(m/z)：计算值C₁₉H₁₇NO₃[(M)-]307.1208，测得 值[(M)-]307.1206。

2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸甲酯(methyl 2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，RJ-LC-15-22)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率71％；熔点370℃；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.98(s，1H)，8.71(d，J＝1.8Hz，1H)， 8.19(dd，J＝8.6Hz，J＝1.9Hz，1H)，7.84(d，J＝8.8Hz，1H)，7.78-7.70 (m，2H)，7.67-7.62(m，1H)，7.48-7.42(m，1H)，6.47(s，1H)，3.90 (s，3H)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ177.3，166.2，163.7，161.7， 149.7，143.9，136.5，132.1，131.7，131.6，127.6，124.7，124.2，119.9，118.1， 117.9，115.1，114.9，109.2，52.7；¹⁹F NMR(470MHz，DMSO-d₆)δ-111.9； FAB-HRMS(m/z)：计算值C₁₇H₁₃NO₃F[M+H]⁺298.0879，测得值[M+H]⁺ 298.0871。

2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸异丙酯(isopropyl 2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，RJ-LC-15-23)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率68％；熔点310℃；¹H NMR(500MHz，CDCl₃/CD₃OD)δ8.95(d，J＝1.9Hz，1H)，8.21(dd， J＝8.7Hz，J＝2.3Hz，1H)，7.68(d，J＝8.8Hz，1H)，7.55-7.44(m，3H)， 7.25-7.20(m，1H)，6.54(s，1H)，5.29-5.20(m，1H)，1.37(d，J＝6.3 Hz，6H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃/CD₃OD)δ179.7，166.2，164.2，162.2， 151.0，143.5，136.3，136.3，132.8，131.2，131.2，128.3，126.6，124.5，123.5， 123.5，118.9，118.1，117.9，114.8，114.6，109.3，69.4，22.0；¹⁹F NMR(470 MHz，CDCl₃/CD₃OD)δ-111.7；FAB-HRMS(m/z)：计算值C₁₉H₁₇NO₃F [M+H]⁺326.1192，测得值[M+H]⁺326.1196。

2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸苯基酯(phenyl 2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，RJ-LC-15-24)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率65％；熔点322℃；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ12.06(s，1H)，8.88(d，J＝1.2Hz，1H)， 8.33(dd，J＝8.9Hz，J＝2.1Hz，1H)，7.92(d，J＝8.8Hz，1H)，7.81-7.73 (m，2H)，7.69-7.63(m，1H)，7.53-7.43(m，3H)，7.36-7.31(m，3H)， 6.53(s，1H)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ176.8，164.1，163.2，161.2， 150.7，149.4，143.9，136.0，132.1，131.2，131.2，129.6，128.0，126.0，124.2， 123.8，123.8，123.5，122.0，119.8，117.6，117.5，114.7，114.5，108.9；¹⁹F NMR (470MHz，CDCl₃/CD₃OD)δ-111.8；FAB-HRMS(m/z)：计算值 C₂₂H₁₅NO₃F[M+H]⁺360.1036，测得值[M+H]⁺360.1031。

2-(3-溴苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 2-(3-bromo phenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，RJ-LC-15-25)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率88％；熔点325℃；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ12.00(s，1H)，8.70(d，J＝2.1Hz，1H)， 8.18(dd，J＝8.9Hz，J＝2.1Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.88-7.78(m，3H)， 7.54(t，J＝7.9Hz，1H)，6.45(s，1H)，4.36(q，J＝6.9Hz，2H)，1.36(t， J＝7.2Hz，3H)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ176.8，165.2，149.1，143.4，136.1，133.4，131.6，131.1，130.0，127.0，126.8，124.5，124.1，122.2， 119.4，108.8，60.9，14.2；FAB-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₅NO₃Br [M+H]⁺372.0235，测得值[M+H]⁺372.0232。

2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基4-氧代-2-苯 基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸酯(2-(2-(2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy)ethoxy)ethyl 4-oxo-2-phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，RJ-LC-15-3)

将含有SM(10mg，1eq.)及CDI(6.4mg，1.05eq.)的除水DMF (0.05M，0.8mL)加至干燥且氮气充填的10mL Schlenk烧瓶(装有搅拌 棒及橡皮塞(septum))中，并在室温下搅拌4小时。加入K₂CO₃(7.8μL， 1.5eq.)及TEG(9.8μL，1.5eq.)，使反应混合物在室温搅拌过夜。反应完成后，抽真空移除DMF，且粗固体通过管柱层析进行纯化，以得到 固体产物(10mg，60％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.90(s，1H)， 8.10(d，J＝7.1Hz 1H)，7.82-7.60(m，3H)，7.39(br，3H)，6.36(s， 1H)，4.43(t，J＝4.5Hz，2H)，3.79(t，J＝4.6Hz，2H)，3.73-3.59(m，10H)，3.55(t，J＝4.6Hz，2H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)178.7，165.9， 151.3，143.2，133.9，132.4，130.7，129.1，128.4，127.2，125.2，124.3，118.8， 109.1，72.5，70.7，70.6，70.5，70.3，69.2，64.3。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸(4-oxo-2-phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylic acid，2a)

AS1712(50mg，0.17mmol)、1：9EtOH/H₂O(1.9ml)及NaOH(70 mg，1.71mmol)加至装有搅拌棒及橡皮塞的试管中。所得的混合物在40℃ 下搅拌4小时。抽真空移除EtOH后，以10％HCl酸化混合物并收集白色 沉淀物。产率99％；熔点285-290℃；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ 12.06(s，1H)，8.70(s，1H)，8.16(d，J＝8.7Hz，1H)，7.91-7.84(m， 3H)，7.62-7.58(m，3H)，6.40(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆) δ177.4，167.3，151.1，143.7，134.3，132.3，131.1，129.5，128.0，127.7，125.8， 124.6，119.6，108.7。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸钠(sodium 4-oxo-2-phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，RJ-LC-15-21)

将化合物2a(20mg，0.075mmol)、1：1EtOH/H₂O(0.5ml)及 NaOH(3mg，0.075mmol)加至装有搅拌棒及橡皮塞的试管中。所得的 混合物在室温搅拌10分钟。抽真空移除溶剂，以得到产物。产率93％； IR(neat)：3152，1604，1577，1545，1492，1403，765em^-1；¹H NMR(400MHz，CD₃OD)8.93(d，J＝1.8Hz，1H)，8.27(dd，J＝8.6Hz，J＝2.0Hz， 1H)，7.83-7.78(m，2H)，7.71(d，J＝8.7Hz，1H)，7.60-7.55(m，3H)， 6.54(s，1H)；¹³C NMR(150MHz，CD₃OD)δ179.6，172.8，152.1，141.8， 134.1，133.9，133.0，130.5，128.9，127.1，126.2，123.8，117.5，107.4；HRMS (ESI)(m/z)：计算值C₁₆H₁₁NO₃Na₂[M+Na]⁺310.0450，测得值310.0451。

2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸(2-(3-fluorophenyl)-4- oxo-1，4-dihvdroquinoline-6-carboxylic acid，RJ-LC-15-26)

将RJ-LC-15-8(200mg，0.64mmol)、1∶9EtOH/H₂O(7.1ml) 及NaOH(256mg，0.64mmol)加至装有搅拌棒及橡皮塞的试管中。所 得的混合物在40℃下搅拌4小时。抽真空移除EtOH后，以10％HCl酸化 混合物并收集白色沉淀物。产率99％；熔点＞400℃；¹H NMR(500MHz， DMSO-d₆)δ12.15(s，1H)，12.04(s，1H)，8.70(d，J＝2.1Hz，1H)， 8.17(dd，J＝8.7Hz，J＝2.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.8Hz，1H)，7.80-7.71 (m，2H)，7.67-7.62(m，1H)，7.48-7.42(m，1H)，6.51(s，1H)；¹³C NMR (125MHz，DMSO-d₆)δ176.6，166.8，163.2，161.2，149.4，143.3，136.1， 131.9，131.2，131.1，127.1，125.6，123.9，123.8，123.8，119.4，117.6，117.4，114.7，114.5，108.4；¹⁹F NMR(470MHz，DMSO-d₆)δ-111.9；FAB-HRMS (m/z)：计算值C₁₆H₁₁NO₃F[M+H]⁺284.0723，测得值[M+H]⁺284.0722。

2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸2-乙基丁基酯(2-ethyl butyl 2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate)

将含有RJ-LC-15-26(50mg，0.18mmol)及CDI(30mg，0.19mmol) 的无水DMF溶液(5ml)加至干燥且经N₂充填的10mL Schlenk烧瓶(装 有搅拌棒及橡皮塞)中。反应混合物在室温下搅拌1.5小时，接着用K₂CO₃ (26mg，0.19mmol)、2-乙基丁醇(19mg，0.19mmol)处理并搅拌过夜。 反应完成后，抽真空移除DMF，并通过管柱层析进行纯化，以得到固体 产物。¹HNMR(500MHz，CDCl₃/CD₃OD)δ8.95(d，J＝2.1Hz，1H)， 8.24(dd，J＝8.9Hz，J＝1.9Hz，1H)，7.75(d，J＝8.6Hz，1H)，7.59-7.49 (m，3H)，7.30-7.25(m，1H)，6.56(s，1H)，4.29(d，J＝5.8Hz，2H)， 1.74-1.65(m，1H)，1.54-1.44(m，4H)，0.96(t，J＝7.4Hz，6H)；¹³C NMR(125MHz，CDCl₃/CD₃OD)δ180.1，167.1，164.7，162.7，151.8，144.1， 136.7，136.7，133.2，131.7，131.7，128.6，126.7，124.9，124.0，123.9，119.6， 118.5，118.3，115.2，115.0，109.6，68.0，41.3，24.0，11.3；¹⁹F NMR(470MHz， CDCl₃/CD₃OD)δ-112.3。

N-乙基-4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酰胺(N-ethyl-4-oxo-2- phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxamide，2b)

将RJ-LC-15-01(10mg，0.038mmol)及CDI(6.4mg，0.04mmol) 的无水DMF溶液(0.8ml)加至干燥且经N₂充填的10mL Schlenk烧瓶(装 有搅拌棒及橡皮塞)中。反应混合物在室温下搅拌4小时，接着用TEA(7.9 μL，0.057mmol)、乙胺盐酸盐(ethylaminehydrochloride，4.6mg，0.057mmol) 处理并搅拌过夜。反应完成后，抽真空移除DMF，并通过管柱层析进行 纯化，以得到固体产物。产率64％；熔点330-340℃；IR(neat)：3561， 3271，3070，2969，1629，1577，1494，1295，1253，1149，1081，1048，969，914， 836，803，765，692，681cm^-1；¹H NMR(600MHZ，CD₃OD/CDCl₃)δ8.59 (s，1H)，8.15(d，J＝8.8Hz 1H)，7.76-7.71(m，3H)，7.56-7.52(m， 3H)，6.59(s，1H)，3.46(q，J＝7.4Hz，2H)，1.26(t，J＝7.4Hz，3H)； ¹³CNMR(150MHz，CD₃OD/CDCl₃)δ179.4，167.5，152.4，142.3，133.9， 131.6，130.9，130.1，129.1，127.3，123.9，123.5，118.9，108.6，35.0，14.3. ESI-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₇N₂O₂[(M)-]293.1290，测得值[(M) -]293.1287。

N-乙基-2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酰胺 (N-ethyl-2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxamide， RJ-LC-15-27)

将RJ-LC-15-26(50mg，0.18mmol)及CDI(30mg，0.18mmol)的 无水DMF溶液(3.5ml)加至干燥且经N₂充填的10mL Schlenk烧瓶(装 有搅拌棒及橡皮塞)中。反应混合物在室温下搅拌4小时，接着用TEA(26 μL，0.18mmol)、乙胺盐酸盐(15mg，0.18mmol)处理并搅拌过夜。反 应完成后，抽真空移除DMF，并通过管柱层析进行纯化，以得到固体产 物。产率82％；熔点358℃；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ11.87(s， 1H)，8.70(t，J＝5.5Hz，1H)，8.64(d，J＝2.0Hz，1H)，8.13(dd，，J ＝8.7Hz，，J＝2.1Hz，1H)，7.81-7.70(m，3H)，7.67-7.61(m，1H)，7.47-7.41(m，1H)，6.45(s，1H)，3.32(m，2H)，1.14(t，J＝7.4Hz， 3H)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)δ177.1，165.2，163.2，161.2，148.9， 142.0，136.2，131.2，131.1，130.7，129.5，124.0，123.7，118.8，117.4，117.3， 114.6，114.4，108.3，34.1，14.8；¹⁹F NMR(470MHz，DMSO-d₆)δ-112.0； FAB-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₆N₂O₂F[M+H]⁺311.1196，测得值[M+H]⁺311.1187。

6-(乙氧基甲基)-2-苯基喹啉-4(1H)-酮(6-(ethoxymethyl)-2-phenylquinolin-4(1H)-one，2m)

将AS1712(100mg，0.341mmol)的无水THF(0.7ml)加至装有 搅拌棒及橡皮塞的烧瓶中，接着在冰浴及N₂氛围下滴加DIBAL-H(0.85ml， 1.2M于甲苯中)。在0℃下搅拌1小时后，用MeOH淬熄溶液并进行蒸发， 以得到粗产物。粗产物通过快速管柱层析(MeOH/DCM)进行纯化，以 得到伯醇。接着，将伯醇(80mg，0.318mmol)悬浮于无水Et₂O(1.1ml) 上，并在N2氛围上用PBr₃(30μL，0.318mmol)缓慢处理。回流2小时 后，用H₂O淬熄混合物，并过滤收集固体产物。最后，将溴化苄(100mg， 0.318mmol)悬浮于EtOH(10.6ml)上，并用DIPEA(498μL，2.86mmol) 处理。在室温下搅拌过夜后，澄清溶液进行蒸发除去溶剂，并通过快速管 柱层析(MeOH/DCM)进行纯化，以得到RJ-LC-15-16。产率46％；熔 点218-222℃；IR(neat)：3059，2966，2925，2853，1649，1594，1577，1543， 1500，1252，1097，1084，800，773，696，684，664，560，516em^-1；¹H NMR (600MHz，CDCl₃)δ10.08(s，1H)，8.24(s，1H)，7.69-7.64(m，4H)，7.46-7.43(m，3H)，6.43(s，1H)，4.57(s，2H)，3.54(q，J＝7.2Hz，2H)， 1.23(t，J＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ178.9，150.8，140.1， 134.4，132.0，130.4，129.0，127.2，124.9，124.4，118.9，108.2，72.3，65.8，15.2. EI-HRMS(m/z)：计算值C₁₈H₁₇NO₂[(M)-]279.1259，测得值[(M) -]279.1253。

3-氧代-3-(3-(戊-4-炔基-1-氧基)苯基)丙酸乙酯(Ethyl 3-oxo-3-(3-(pent-4-yn-1-yloxy)phenyl)propanoate，3)

3-(3-羟苯基)-3-氧代丙酸乙酯(ethyl 3-(3-hydroxyphenyl)-3-oxopropanoate，30mg，0.144mmol)及Cs₂CO₃(47mg，0.144mmol) 的乙腈(1mL)混合物在室温下加入戊-4-炔基对甲苯磺酸酯 (pent-4-yn-1-yl 4-methylbenzene sulfonate，35mg，0.144mmol)的乙腈溶 液，并加热至50℃达26小时。将反应混合物冷却，通过棉过滤，蒸发溶剂，并用EA萃取。合并的有机层经Na₂SO₄除水，接着进行过滤及真空浓 缩，以得到粗产物，随后通过管柱层析(50％CH₂Cl₂/正己烷)进行纯化， 以得到乙基3-氧代-3-(3-(戊-4-炔基)-1-氧基)苯基)丙酸酯(ethyl 3-oxo-3-(3-(pent-4-yn-1-yloxy)phenyl)propanoate)的无色液体(含酮-烯醇 互变异构体)。产率48％；¹H NMR(600MHz，CDCl₃)δ12.56(s，0.2H， 烯醇型)，7.49(m，2H)，7.37(t，J＝7.9Hz，1H)，7.13(dd，J＝2.2，8.2Hz， 1H)，5.65(s，0.2H，烯醇型)，4.26(q，J＝7.0Hz，0.4H，烯醇型)，4.21(q， J＝7.2Hz，2H)，4.12(t，J＝6.0Hz，2.4H，酮+烯醇，3.97(s，2H)，2.41(td， J＝2.4，7.0Hz，2.4H，酮+烯醇)，2.02(quin，J＝6.5Hz，2.6H，酮+烯醇)，1.98

(t，J＝2.5Hz，1H)，1.33(t，J＝7.1Hz，0.6H)，1.26(t，J＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ192.3，173.2(烯醇型)，171.3(烯醇型)， 167.5，159.3，159.0(烯醇型)，137.4，134.9(烯醇型)，129.8，129.6(烯 醇型)，121.2，120.7，118.5(烯醇型)，117.8(烯醇型)，113.3，111.9(烯 醇型)，87.6(烯醇型)，83.4(烯醇型)，83.2，69.1，69.0(烯醇型)，66.4， 66.3(烯醇型)，61.5，60.3(烯醇型)，46.1，28.1(烯醇型)，28.0，15.1， 14.3(烯醇型)，14.1；HRMS(ESI+)：计算值C₁₆H₁₈O₄[M+H]⁺275.1283， 测得值275.1283。

2-(3-(丁-3-炔基-1-氧基)苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯(ethyl 2-(3-(but-3-yn-1-yloxy)phenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate，4)

通过上述一般程序A制得目标化合物。产率53％；熔点223-229^℃； IR(neat)：3300，3145，3085，2987，1711，1646，1581，1506，1491，1266，1236， 1126，1042，841，792，758，711cm^-1；¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ11.93 (s，1H)，8.72(d，J＝1.8Hz，1H)，8.19(dd，J＝1.8，8.7Hz，1H)，7.86(d， J＝8.7Hz，1H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，7.42(d，J＝8.6Hz，2H)，7.18(dd， J＝1.9，7.8Hz，1H)，6.45(s，1H)，4.37(q，J＝7.0Hz，2H)，4.17(t，J＝6.2 Hz，2H)，2.84(t，J＝2.5Hz，1H)，2.38(td，J＝2.5，7.2Hz，2H)，1.95(quin， J＝6.6Hz，2H)，1.38(t，J＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆) δ177.1，165.8，159.2，151.2，144.1，135.9，131.9，130.7，127.5，124.7，124.6， 120.2，117.1，113.9，108.8，84.1，72.2，66.7，61.3，28.2，15.0，14.7；ESI-HRMS (m/z)：计算值C₂₃H₂₁NO₄[M-H]^-374.1392，测得值374.1390。

1，1，1，2，2，3，3，4，4，5，5，6，6-十三氟-8-(戊-4-炔基-1-氧基)辛烷 (1，1，1，2，2，3，3，4，4，5，5，6，6-tridecafluoro-8-(pent-4-yn-1-yloxy)octane)

将全氟1-辛醇(perfluro-1-octanol，48μL，0.218mmol)、戊-4-炔基 对甲苯磺酸酯(pent-4-yn-1-yl 4-methylbenzene sulfonate，52mg，0.218 mmol)、KOH(600mg，10.7mmol)及TBAI(10mg，0.03mmol)溶 于9∶1的THF/H₂O(1ml)中，接着回流过夜。抽真空移除THF后， 用DCM萃取溶液并通过管柱层析进行纯化，以得到液体产物(50mg， 53％)。¹HNMR(600MHz，CDCl₃)δ3.72(t，J＝6.9Hz，2H)，3.55(t， J＝6.2Hz，2H)，2.45-2.34(m，2H)，2.31-2.26(m，2H)，1.94(t，J＝2.6 Hz，1H)，1.78(quint，J＝6.7Hz，2H)，3.54(q，J＝7.2Hz，2H)，1.23(t， J＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，CDCl₃)δ83.6，69.4，68.5，62.7，31.7， 31.5，31.4，28.4，15.1；¹⁹F NMR(564MHz，CDCl₃)δ-127.2，-124.7，-123.9， -122.9，-114.4，-81.9。

叠氮-(聚乙二醇)₁₂-磁珠(Azido-PEG₁₂-MBs)

将羧化的磁珠(10mg)分散到MES(50mM，pH6.0，300μL)中。 将N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide，NHS，3.5mg，0.03mmol) 及1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride，EDC·HCl，5.7mg， 0.03mmol)加至溶液中，并在室温下搅拌1.5小时。所得的珠子用PBS(50 mM，pH7.0，300μLx 2)洗涤，以移除过量的NHS及EDC·HCl。将200 μL、1mM的羧化-PEG₁₂-胺(在50mMHEPES中，pH 7.8)添加至珠 子中，接着在室温下搅拌6小时。用磁铁分离后，用MES(50mM，pH6.0)洗涤珠子，以得到羧基-PEG₁₂-磁珠。将羧基-PEG₁₂-磁珠(10mg)分 散至MES(50mM，pH6.0，300μL)中。将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS， 3.5mg，0.03mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐 (EDC·HCl，5.7mg，0.03mmol)加至溶液中，并在室温下搅拌1.5小时。 所得的珠子用PBS(50mM，pH 7.0，300μLx 2)洗涤，以移除过量的NHS 及EDC·HCl。将200μL、1mM的3-叠氮基-1-丙胺(3-azidopropan-1-amine， 在50mM PBS中，pH 7.0)添加至珠子，接着在室温下搅拌16小时。用 磁铁分离后，用MES(50mM，pH 6.0)洗涤珠子，以得到叠氮-PEG₁₂- 磁珠。

磁珠-控制组(Mag-beads-control)

叔丁醇/dd-H₂O(0.3mL，1/1，v/v)加至叠氮-PEG₁₂-磁珠(10mg)、 1，1，1，2，2，3，3，4，4，5，5，6，6-十三氟-8-(戊-4-炔基-1-氧基)辛烷(1.72mg，4.0 μmol)、CuSO₄(0.1M dd-H₂O，6.6μL)及抗坏血酸钠(0.1M dd-H₂O，1.3μL)的溶液中，并置于微波条件下：100W、60℃达30分钟。用磁体 分离后，用MES(50mM，pH 6.0)洗涤珠子，以得到磁珠-控制组。

磁珠-AS1712(Mag-beads-AS1712)

叔丁醇/dd-H₂O(0.3mL，1/1，v/v)加至叠氮-PEG₁₂-磁珠(10mg)、 RJ-LC-15-12(1.5mg，4.0μmol)、CuSO₄(0.1M dd-H₂O，6.6μL)及抗 坏血酸钠(0.1M dd-H₂O，1.3μL)的溶液中，并置于微波条件下：100W、 60℃达30分钟。用磁铁分离后，用MES(50mM，pH 6.0)洗涤珠子， 以得到磁珠-AS1712。

一般程序B-合成RJ-LC-15-17及RJ-LC-15-18

搅拌3-氨基苯甲酸乙酯(0.605mmol)、苯甲酰乙酸酯(0.96mmol)、 TsOH·H₂O(0.15mmol)及Na₂SO₄(6.16mmol)的DCM(3.3ml)溶 液，并回流72小时。在真空下浓缩反应混合物，并用己烷洗涤。接着， 将滤液过滤并蒸发以获得亚胺。将亚胺溶于二苯醚(1ml)中，并加热至 250℃达10分钟。将反应混合物冷却至室温。用Et₂O溶提后，过滤收 集产物，并通过快速管柱层析(DCM/ACN/MeOH)进行纯化，以分离 出RJ-LC-15-17及RJ-LC-15-18。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-5-羧酸乙酯(ethyl 4-oxo-2-phenyl-1，4 -dihydroquinoline-5-carboxylate，RJ-LC-15-17)

通过上述一般程序B制得目标化合物。产率16％；熔点220℃；IR (neat)：3067，2396，1718，1627，1577，1507，1500，1277，1147，1124，1089， 1028，1028，765，697cm^-1；¹HNMR(600MHz，CD₃OD/CDCl₃)δ7.75-7.55 (m，4H)，7.50-7.42(m，3H)，7.20(d，J＝7.4Hz，3H)，6.42(s，1H)， 4.42(q，J＝7.1Hz，2H)，1.37(t，J＝7.2Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz， CD₃OD/CDCl₃)δ177.8，171.5，151.5，140.8，133.9，133.2，131.4，130.6， 129.0，127.2，122.2，121.5，119.7，108.2，61.9，13.7。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-7-羧酸乙酯(ethyl 4-oxo-2-phenyl-1，4-dihydroquinoline-7-carboxylate，RJ-LC-15-18)

通过上述一般程序B制得目标化合物。产率14％；熔点271℃；IR (neat)：2961，1723，1638，1594，1583，，1552，1499，1462，1366，1272， 1245，1211，1031，760，744，687cm^-1；¹H NMR(600MHz，CD₃OD/CDCl₃) δ7.39-7.29(m，2H)，7.92(d，J＝8.6Hz，1H)，7.77-7.69(m，2H)，7.55-7.49 (m，3H)，6.58(s，1H)，4.41(q，J＝7.1Hz，2H)，1.41(t，J＝6.9Hz， 3H)；¹³CNMR(150MHz，CD₃OD/CDCl₃)δ178.4，165.6，152.3，139.6， 133.3，133.1，130.4，128.6，126.8，126.7，125.1，123.3，120.2，108.1，61.3，13.4。

一般程序C-合成RJ-LC-15-19及RJ-LC-15-20

用MsOH(0.068mmol)处理AS1712或化合物2h(0.068mmol) 的MeOH/DCM(1∶1)(1.4ml)溶液，并在室温下搅拌30分钟。接着， 在真空下浓缩溶液，以得到RJ-LC-15-19或RJ-LC-15-20。

4-氧代-2-苯基-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯甲磺酸盐(ethyl 4-oxo-2-phenyl-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate methanesulfonate， RJ-LC-15-19)

通过上述一般程序C制得目标化合物。产率99％；熔点245℃；IR (neat)：3093，2497，1714，1645，1231，1085，1037，1027，917，771，762cm^-1； ¹H NMR(600MHz，CD₃OD/CDCl₃)9.08(d，J＝1.5Hz，1H)，8.56(dd， J＝9.0Hz，J＝2.0Hz，1H)，8.22(d，J＝8.8Hz，1H)，7.98-7.93(m，2H)， 7.77-7.66(m，3H)，4.48(q，J＝7.3Hz，2H)，2.71(s，3H)，1.46(t，J ＝7.1Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ171.5，164.9，157.4，142.2，134.3，132.9，131.5，129.7，129.4，128.3，126.3，120.2，119.6，105.0，61.9，38.5， 13.6。

2-(3-氟苯基)-4-氧代-1，4-二氢喹啉-6-羧酸乙酯甲磺酸盐(ethyl 2-(3-fluorophenyl)-4-oxo-1，4-dihydroquinoline-6-carboxylate methanesulfonate，RJ-LC-15-20)

通过上述一般程序C制得目标化合物。产率99％；熔点258℃；IR (neat)：3088，2499，1715，1586，1228，1136，1040，878，794，774，763cm^-1； ¹H NMR(600MHz，CD₃OD/CDCl₃)9.06(d，J＝1.6Hz，1H)，8.55(dd， J＝9.0Hz，J＝2.0Hz，1H)，8.24(d，J＝8.9Hz，1H)，7.81-7.63(m，3H)， 7.48-7.41(m，1H)，4.47(q，J＝7.3Hz，2H)，2.73(s，3H)，1.46(t，J ＝7.0Hz，3H)；¹³C NMR(150MHz，DMSO-d₆)δ171.8，164.8，164.3，161.8， 155.7，142.2，134.5，133.5，131.7，129.5，126.4，124.4，120.3，119.8，119.6， 115.5，115.3，105.3，61.9，38.6，13.7。

表8-示例性化合物的IC₅₀

在H1975及MDA-MB-231中，类似物RJ-LC-15-23呈现较AS1712 及RJ-LC-15-8更优异的抗增殖能力。RJ-LC-15-23对人纤维母细胞(HFB) 也相对无毒(IC₅₀＞10μM)。此数据表示RJ-LC-15-23具有强大的癌症治 疗潜力。

表9-RJ-LC-15-23的IC₅₀

IC<sub>50</sub>(nM)	AS1712	RJ-LC-15-8	RJ-LC-15-23
				H1975	33±4.86	24±1.12	6±2.16
MDA-MB-231	55±6.83	35±1.45	10±0.5
				HFB	＞10uM	＞10μM	＞10μM

讨论

癌症是全球第二大死亡原因，约占全球人口的40％。肺癌、乳癌，结 肠直肠癌及前列腺癌是最常见的类型，约占所有癌症死亡人数的46％，其 中肺癌是导致死亡人数最多的原因。MTA被广泛用于治疗晚期癌症，但 MTA的长期治疗因癌症的抗药性而降低其临床疗效。因此，目前仍持续 努力开发改善药物功效并克服抗药性的新药。本文公开的研究呈现示例性 化合物AS1712具有治疗各种类型癌症的潜力，且能够克服由MTA引起 的MDR，具备良好的功效及良好的治疗窗。

癌细胞仰赖于微管，以通过有丝分裂及迅速分裂而发展，此使得微管 在超过50年的癌症治疗中成为重要的治疗标靶。当MTA改变微管动力学 时，它们会导致有丝分裂停滞并触发线粒体介导的内在凋亡。本发明已证 明示例性化合物AS1712可抑制微管聚合及成核并破坏纺锤丝组织。 AS1712还可诱导有丝分裂停滞，接着触发细胞色素c释放及caspase-9裂 解，以活化几种癌细胞珠的内在凋亡。AS1712还具有良好的体内抗肿瘤 生长活性，其无明显毒性。示例性化合物AS1712的抗癌活性与目前临床 上使用的MTA相似，但AS1712具有不同的微管蛋白结合位点。

微管蛋白上至少有四个具稳定或去稳定功能的结合位点。秋水仙素结 合位点位于β-微管蛋白与α-微管蛋白的交界处。秋水仙素结合位点抑制剂 (CBSIs)使得微管组合不稳定，并展现抗血管新生及血管破坏的活性， 而其他功能位点的抑制剂则未发现。不同于紫杉醇及长春花生物碱，CBSI 可以抵抗β-微管蛋白同种型过度表达的作用，而MDR机制对CBSI活性 的影响很小。结果显示，AS1712与β-微管蛋白的秋水仙素结合口袋直接 相互作用，此表示AS1712应该被归类为CBSI，并暗示由于其结合位点， AS1712可能不易因突变导致β-微管蛋白构形改变而引起抗药性。

由于秋水仙素及其衍生物对人类有毒性，目前尚无任何CBSI被批准 用于癌症治疗。然而，示例性化合物AS1712对于此处分析的细胞株展现 超过100倍的治疗窗，且在用于癌细胞的最高治疗剂量下并未抑制HFB 细胞中的微管聚合、细胞周期停滞或凋亡。AS1712在动物模型中也呈现 无明显毒性。因此，AS1712可能是毒性低的CBSI，并具有作为进一步开 发抗癌药物的先导化合物的潜力。

MDR是各种癌症疗法中治疗失败的主要原因。P-gp的过度表达是 MTA诱导抗药性的主要MDR机制，原因在于，大多数MTA，包括太平 洋紫杉醇、敏克瘤、敏毕瘤及欧洲紫杉醇(docetaxel)，都是通过P-gp从 细胞输出。P-gp从癌细胞中泵出许多不同类型的细胞毒性药物，从而降低 细胞内药物的浓度并导致治疗失败。AS1712抑制过度表达P-gp的KBtax、KBvin及CEM/VBL细胞增殖，其IC₅₀值相当于其相应的母细胞株(控 制组)。结果显示，AS1712直接抑制P-gp活性或是不作为P-gp受质，因 而可对抗过度表达P-gp的癌细胞。罗丹明排出测定及免疫墨点研究排除 了AS1712直接抑制P-gp泵活性或P-gp表达的可能性，其支持了AS1712 不是P-gp受质的假设。虽然其他P-gp抑制剂(例如维尔宁(verapamil)、 环孢灵(cyclosporine)及伐司扑打(valspodar))可逆转癌细胞的MDR表 现型(phenotype)，但涉及这些抑制剂的临床试验显示出毒性副作用，且 未能改善临床结果。由于无法作为P-gp受质，AS1712为MDR癌症提供 了不同的治疗策略。伊沙匹隆是用于治疗对现有化学疗法不再有反应的晚 期乳癌的二线MTA；然而，已发现某些MDR细胞株对伊沙匹隆治疗有抗 性，因而限制了其临床应用。相反地，AS1712具有治疗各种类型癌症的 潜力，包括首先在临床上以紫杉醇或长春花生物碱治疗的肺癌、乳癌、卵 巢癌、前列腺癌、头颈癌及血癌。结果显示，示例化合物AS1712或如 RJ-LC-15-8的示例性衍生物可抵制各种类型癌症的多重抗药性。

结论

本发明研究显示，示例性化合物AS1712可直接靶向β-微管蛋白的秋 水仙素结合位点，以分解微管，其随后诱导有丝分裂停滞并活化细胞凋亡。 示例性化合物AS1712可克服MTA诱导的续发性抗药性，包括β-微管蛋 白改变及P-gp介导的多重抗药性。示例性化合物AS1712及如RJ-LC-15-8 的示例性衍生物具有强大的癌症治疗潜力。

均等用语与范围

除非另有所指，否则在本文及权利要求书中诸如“一”及“该”等词 汇均涵盖一或多个。本文及权利要求书所述的群组中的一或多个元素间包 含“或”(or)一词时，除非另有所指，否则视为有一(个、者)、一个(或 一者)以上或所有的群组元素皆包含于、使用于或相关于一给定产物或流 程。本发明包含了该群组的一特定元素包含于、使用于或相关于一给定产 物或流程的实施方式。本发明包含了多于一个群组元素或所有群组元素包 含于、使用于或相关于一给定产物或流程的实施方式。

此外，本发明包含所有变化、组合及排列，其中一或多个权利要求所 述的一或多个限制、元素、字词及叙述性字语皆可引用至另一权利要求中。 举例来说，任何依附于另一权利要求的权利要求可修饰为包含依附于相同 请求基础的任何其他权利要求所述的一或多个限制条件。当以例如马库西 群组形式(Markush group format)方式条列元素时，也包含元素的每个次 群组，且可将任何元素由该群组中移除。当理解，一般来说，当本发明内容或所述的实施方式指的是包含特定元素和/或特征时，本文所述的某些实 施例或实施方式是由这些元素和/或特征所组成或基本上由这些元素和/或 特征所组成。为求简洁，本发明内容不再具体阐述这些实施方式。“包含”、 “包括”及“含有”应当被理解为开放式用词，其允许包含额外的元素或 步骤。当给予一范围时，该范围应包含其端点值。此外，除非另有所指， 且本发明所属技术领域普通技术人员当可理解，在不同实施方式中，以范 围表示的数值可为该范围内的任何特定数字或次范围，至该范围下限单位 的十分之一。

本申请包含不同的核准专利、公开专利申请案、期刊文献及其他公开 文件，这些文件在此一并纳入全文以供参照。若参照文献及本案说明书有 任何冲突矛盾之处，应以本案说明书公开内容为准。此外，若本发明的特 定实施方式落入前案的公开范围，可由一或多项权利要求中明确排除该内 容。基于这些实施方式应视为本发明所属技术领域普通技术人员所熟知的 内容，即使本文未明确排除，也可排除这些内容。无论是否与前案的公开内容相关，本案权利要求可基于任何理由排除本发明的特定实施方式。

本发明所属技术领域中普通技术人员无须过度实验，即可了解或查明 本文所描述的特定实施方式的许多均等方式。本发明具体实施例的范围并 非用于限于上述【实施方式】，而是如随附权利要求书中所述。在不悖离 如随附权利要求书所定义的本发明精神及保护范围下，本发明所属技术领 域中普通技术人员当可理解，可对该描述进行各种改变和修改。

Claims (43)

1.一种化合物，其为下式(I)：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，其中：

每一R¹独自为卤素、-C(＝O)(视情况经取代烷基)、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1；

每一R²独自为卤素、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1；

R³为氢、视情况经取代烷基或氮保护基；

每一R⁴独自为卤素、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、-CN、-OR^D1、-N(R^D1a)₂或-SR^D1；

R^D1为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基、当接至氧原子时的氧保护基或当接至硫原子时的硫保护基；

每一R^D1a为氢、视情况经取代酰基、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基或氮保护基，或R^D1a中任选两者与介于其间的原子一起形成经取代或未经取代的杂环或经取代或未经取代的杂芳环；

m为0、1、2、3、4或5；

n为0、1、2、3或4；且

p为0或1，

但m与n中至少一者不为0。

2.如权利要求1所述的化合物，其中m为0。

3.如权利要求1所述的化合物，其中m为1。

4.如权利要求1或3所述的化合物，其中至少一R¹为卤素。

5.如权利要求1或3所述的化合物，其中至少一R¹为氟或溴。

6.如权利要求1或3所述的化合物，其中至少一R¹为视情况经取代的烷基。

7.如权利要求6所述的化合物，其中至少一R¹为-CF₃。

8.如权利要求1或3所述的化合物，其中至少一R¹为-OR^D1，且-OR^D1为氢或视情况经取代的烷基。

9.如权利要求8所述的化合物，其中至少一R¹为-OH、-OMe或如下式所示：

10.如权利要求1所述的化合物，其中R³为氢。

11.如权利要求1所述的化合物，其中n为1。

12.如权利要求11所述的化合物，其中该化合物为下式(IA)、(IB)或(IC)：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

13.如权利要求1-3及10-12中任一项所述的化合物，其中至少一R2为-C(＝O)OR^2a、-C(＝O)N(R^2b)₂或-(CH₂)_xOR^2a；且x为0、1、2、3、4、5或6；其中

R^2a为氢、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基或氧保护基；且

每一R^2b独自为氢、视情况经取代烷基、视情况经取代烯基、视情况经取代炔基、视情况经取代碳环基、视情况经取代杂环基、视情况经取代芳基、视情况经取代杂芳基或氮保护基。

14.如权利要求13所述的化合物，其中至少一R²为-C(＝O)OR^2a，且R^2a为氢或视情况经取代C_1-6烷基。

15.如权利要求14所述的化合物，其中至少一R²为-C(＝O)OH、-C(＝O)OMe、-C(＝O)OEt、-C(＝O)O(ⁱPr)、-C(＝O)(OCH₂CH₂)₃OH或-C(＝O)(OCH₂CH₂)₄OH。

16.如权利要求13所述的化合物，其中至少一R²为-C(＝O)NH(R^2b)，且R^2b为视情况经取代C_1-6烷基。

17.如权利要求13所述的化合物，其中至少一R²为-C(＝O)NH(Et)。

18.如权利要求13所述的化合物，其中至少一R²为-(CH₂)_xOR^2a，x为0、1、2、3、4或5，且R^2a为视情况经取代C_1-6烷基。

19.如权利要求18所述的化合物，其中至少一R²为-(CH₂)OEt。

20.如权利要求1所述的化合物，其中p为0。

21.如权利要求13所述的化合物，其中该化合物为下式：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

22.如权利要求1所述的化合物，其中该化合物为下式：

或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

23.如权利要求22所述的化合物，其中该化合物为下式：

24.一种医药组合物，其包括如权利要求1至23中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，且视情况还包括一医药上可接受的赋形剂。

25.如权利要求24所述的医药组合物，其中该医药组合物包括用于治疗一所需个体的疾病的一治疗有效量的该化合物。

26.如权利要求25所述的医药组合物，其中该疾病为增殖性疾病。

27.一种化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该医药组合物用于投予至一所需个体，且包括一治疗有效量的如权利要求1至23中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enrichedderivative)或前驱药。

28.如权利要求27所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该增殖性疾病为癌症。

29.如权利要求28所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该癌症为肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、头部癌、颈部癌、头颈癌或血癌。

30.如权利要求29所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该肺癌为非小细胞肺癌。

31.如权利要求29所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该乳癌为三阴性乳癌。

32.如权利要求28至31中任一项所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该癌症对一或多种抗微管药物治疗具抗性。

33.如权利要求32所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该一或多种抗微管药物包含紫杉醇或长春花生物碱。

34.如权利要求33所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该紫杉醇为太平洋紫杉醇(paclitaxel)或伊沙匹隆(ixabepilone)。

35.如权利要求33所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该长春花生物碱为敏克瘤(vincristine)或敏毕瘤(vinblastine)。

36.如权利要求32所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该一或多种抗微管药物包含太平洋紫杉醇或敏克瘤。

37.如权利要求28所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中该癌症对多种药物有抗性。

38.如权利要求37所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中对多种药物有抗性的该癌症与P-糖蛋白(P-gp)过度表达有关。

39.如权利要求37所述的化合物用于制备治疗增殖性疾病的医药组合物的用途，其中对多种药物有抗性的该癌症与β-微管蛋白突变有关。

40.一种化合物用于制备抑制细胞、组织、生物样本或所需个体中癌细胞微管聚合的医药组合物的用途，其中该医药组合物用于投予至该所需个体或接触该细胞、该组织或该生物样本，且包括一治疗有效量的如权利要求1至23中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

41.如权利要求40所述的化合物用于制备抑制细胞、组织、生物样本或所需个体中癌细胞微管聚合的医药组合物的用途，其中该化合物结合β-微管蛋白的秋水仙素结合口袋。

42.一种化合物用于制备诱发组织、生物样本或个体内对多种药物有抗性的癌细胞凋亡的医药组合物的用途，其中该医药组合物用于投予至该个体或接触该细胞、该组织或该生物样本，且包括一治疗有效量的如权利要求1至23中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药。

43.一种套组，包括：

如权利要求1至23中任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，或如权利要求24至26中任一项所述的医药组合物；以及

将该化合物或其医药上可接受的盐、共晶体、互变异构物(tautomer)、立体异构物(stereoisomer)、溶剂合物、水合物、多形体(polymorph)、同位素富集衍生物(isotopically enriched derivative)或前驱药，或该医药组合物投予至一个体或接触一生物样本的说明。

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