CN111808916A - 胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法、应用和胰蛋白酶检测试剂盒 - Google Patents

胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法、应用和胰蛋白酶检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法、应用和胰蛋白酶检测试剂盒，涉及胰蛋白酶检测技术领域。该胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，包括以下步骤：提供聚合物薄膜基材；将所述聚合物薄膜基材浸没于染料中，使染料附着于聚合物薄膜基材，得到胰蛋白酶检测薄膜。本发明的制备方法操作简单，成本低，技术门槛低，对检测和操作人员要求低，本发明能够缓解现有技术中胰蛋白酶检测存在的技术难度大、测试复杂、高成本等问题。

Description

胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法、应用和胰蛋白酶检测试 剂盒
技术领域
本发明涉及胰蛋白酶检测技术领域，尤其涉及一种胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法、应用和胰蛋白酶检测试剂盒。
背景技术
胰蛋白酶是胰液的一种成分，是一种重要的蛋白质消化酶，能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。胰蛋白酶是特异性最强的蛋白酶，能够切断多肽链中赖氨酸与精氨酸残基中的羟基侧，是蛋白质分解中最重要的消化酶之一。在临床检测、治疗和研究中，胰蛋白酶的含量也是胰腺类相关疾病的临床诊断的一个重要标志物，胰蛋白酶的分泌、活化、抑制以及循环的不平衡会导致急性或慢性的胰腺疾病，严重的例如胰腺癌。胰蛋白酶的检测对于人体健康、生产质量控制等领域有着重要的作用。因此，胰蛋白酶的检测就显得尤为重要了。
传统的检测胰蛋白酶含量的方法主要为分光光度法，但此方法检测胰蛋白酶的步骤较多，操作繁琐，而且检测灵敏度较低。而目前发展起来的测定胰蛋白酶的方法主要有紫外分光光度法、比色法、荧光法、免疫法、放射性元素标记法、质谱法(MS)、液相色谱法(HPLC)、电泳法等。其中，紫外法和比色法操作简单，但灵敏度低，重现性差。免疫法灵敏度高，但由于单克隆抗体的使用使得成本也高，且需要一定的操作技术，因此普及难度较高。放射性元素标记法需要对底物进行标记，制备复杂并且有一定的安全性问题等。质谱法中的质谱仪器昂贵，对样品的纯度要求高；色谱以及电泳法也需要比较复杂的操作和较长的检测时间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法、应用和胰蛋白酶检测试剂盒，具有容易操作、时间短、成本低、技术门槛低等优势，能够克服上述问题或者至少部分地解决上述技术问题。
为实现上述目的，本申请采用的技术方案为：
根据本申请的一个方面，本申请提供一种胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，包括以下步骤：
提供聚合物薄膜基材；
将所述聚合物薄膜基材浸没于染料中，使染料附着于聚合物薄膜基材，得到胰蛋白酶检测薄膜。
其中，所述染料适于与胰蛋白酶相互作用，在胰蛋白酶浓度不同的环境，所述染料的颜色不同；所述染料包括溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、三芳甲烷类染料、二甲酚橙染料或金属络合物类染料中的至少一种。
在一种可能的实现方式中，所述染料的浓度为0.25～2.5mg/mL，优选为1～2mg/mL；
优选地，所述染料的溶剂包括水和/或醇类溶剂；
优选地，将聚合物薄膜基材浸没于染料中的温度为20～40℃，优选为25～35℃；和/或，将聚合物薄膜基材浸没于染料中的时间为15～30min，优选为18～22min。
在一种可能的实现方式中，所述聚合物薄膜基材的制备方法，包括以下步骤：
提供基板组件，所述基板组件包括基板和设置于所述基板上的第一润滑剂；
将所述聚合物薄膜基材的成膜液置于所述基板组件上，将带有第二润滑剂的盖板覆盖在所述成膜液上，其中，所述成膜液分别与所述第一润滑剂和所述第二润滑剂接触；
所述成膜液中的各原料发生聚合反应后，分离所述聚合物薄膜基材与所述基板组件与所述盖板，得到所述聚合物薄膜基材；
优选地，所述基板组件还包括锡纸，所述锡纸设置于所述基板上，所述第一润滑剂设置于所述锡纸上。
在一种可能的实现方式中，所述第一润滑剂和所述第二润滑剂各自独立地选择白凡士林、硅油、石蜡、矿物油或润滑脂中的至少一种。
在一种可能的实现方式中，所述聚合反应在紫外光的照射下进行；其中，紫外光的波长优选为250～400nm；和/或，紫外光照射的时间优选为10～30min；
优选地，在紫外光照射之后，再于固化箱内放置5～10min。
在一种可能的实现方式中，分离所述聚合物薄膜基材与所述基板组件与所述盖板的方式包括：去除所述基板组件，将附着有所述聚合物薄膜基材的所述盖板置于静置溶液中，静置10～30min，去除所述盖板，得到所述聚合物薄膜基材；或者，去除所述盖板，将附着有所述聚合物薄膜基材的基板组件置于溶液中，静置10～30min，去除所述基板组件，得到所述聚合物薄膜基材；
优选地，去除所述基板，将附着有所述聚合物薄膜基材的所述盖板和所述锡纸置于静置溶液中，静置10～30min，去除所述锡纸，得到所述聚合物薄膜基材；
优选地，分离所述聚合物薄膜基材与所述基板组件和所述盖板之后，还包括对所述聚合物薄膜基材进行清洗的步骤，所述清洗包括依次在清水、醇类溶液和清水中进行超声清洗。
在一种可能的实现方式中，制备所述成膜液的方法包括：
将离子液体单体和基膜单体混合均匀，加入交联剂和引发剂，然后进行第二超声处理，得到所述成膜液；
优选地，所述第二超声处理的时间为10～30min；
优选地，制备所述成膜液的方法还包括将所述离子液体单体进行第一超声处理，所述第一超声处理的时间为10～30min；
优选地，所述成膜液包括咪唑类离子液体、吡啶类离子液体、季铵盐类离子液体、季膦类离子液体或吡咯烷类离子液体中的至少一种；
优选地，所述离子液体单体包括溴丁烷和乙烯基咪唑；优选地，溴丁烷和乙烯基咪唑的摩尔比为2∶1至1∶1；
优选地，所述基膜单体包括丙烯腈；优选地，丙烯腈的质量大于或等于溴丁烷与乙烯基咪唑的质量之和；
优选地，所述交联剂包括N,N-亚甲基双丙烯酰胺；优选地，交联剂的质量为以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的8wt％～12wt％；
优选地，所述引发剂包括2,4,6-(三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦；优选地，引发剂的质量为以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的1wt％～4wt％。
根据本申请的另一个方面，本申请提供一种胰蛋白酶检测薄膜，由如上所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法制备得到。
根据本申请的另一个方面，本申请提供一种所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法制备得到的检测薄膜或所述的胰蛋白酶检测薄膜在检测胰蛋白酶中的应用，检测方法包括：
将所述胰蛋白酶检测薄膜置于待测液中，使所述胰蛋白酶检测薄膜中的染料与所述待测液接触或相互作用。
在一种可能的实现方式中，所述检测方法还包括：观察所述胰蛋白酶检测薄膜的颜色变化。
在一种可能的实现方式中，所述检测方法还包括：在包含胰蛋白酶浓度不同的所述待测液环境中，所述胰蛋白酶检测薄膜的颜色不同，依据所述胰蛋白酶检测薄膜显示出的不同颜色，判断所述胰蛋白酶浓度。
根据本申请的另一个方面，本申请还提供一种胰蛋白酶检测试剂盒，包括如上所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法制备得到的检测薄膜或如上所述的胰蛋白酶检测薄膜。
在一种可能的实现方式中，所述胰蛋白酶检测试剂盒还包括胰蛋白酶检测标准比色卡。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案可以达到以下有益效果。
本发明提供的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，具有合成简便、制备周期短、易操作、成本低、技术门槛低等特点，易于实现规模化生产及使用。并且，经过该方法制备得到的胰蛋白酶检测薄膜可以大规模应用在胰蛋白酶检测中，从而缓解现有的胰蛋白酶检测方式存在的技术难度大、检测时间长、高成本、无法满足现如今的需求的问题。
本发明的胰蛋白酶检测试剂盒，具有前面所述的胰蛋白酶检测薄膜的所有特点和优点，在此不再赘述。
应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性的，并不能限制本发明。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明一种实施方式提供的胰蛋白酶检测薄膜RGB色彩值对比关系表。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例，对本申请的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请提供的技术方案及所给出的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
需要说明的是，本文中使用的术语“和/或”或者“/”仅仅是一种描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。在本申请实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值或单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围。
如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。除非另有定义或说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。
如背景技术所言，现有的胰蛋白酶检测方法或多或少还存在一定的缺陷。例如，现有技术公开了一种检测胰蛋白酶的生物传感器及其制备方法和在检测胰蛋白酶中的应用，该生物传感器包括磁性金电极、磁性纳米粒子、多肽链1和多肽链2，磁纳米粒子的表面修饰有羧基，多肽链2的表面加载有银纳米颗粒，多肽链1和多肽链2的一个末端序列均为VIA，多肽链1中含有精氨酸残基；磁性金电极的检测端表面通过磁性吸附磁纳米粒子，多肽链1通过末端的氨基与磁纳米颗粒表面修饰的羧基反应固定在磁纳米颗粒上，多肽链2通过末端序列VIA自组装在多肽链1上。该传感器和方法虽然可实现对胰蛋白酶的检测，但过程繁琐、制备困难、且易受干扰。再如，现有技术公开了一种用于胰蛋白酶检测的荧光探针及其制备方法，该荧光探针是由荧光标记聚合物与吸附在荧光标记聚合物表面的细胞色素C组成的复合物水溶液，复合物水溶液的重量百分浓度为0.0005％-0.05％，通过对疏水性染料芘进行亲水性聚合物修饰，所获得的水溶性荧光标记聚合物作为荧光发射的能量给体，细胞色素C作为胰蛋白酶的底物，通过细胞色素C在荧光标记聚合物表面的吸附，得到胰蛋白酶检测的荧光探针，通过荧光强度的改变来实现酶活性的检测。该探针虽然可实现对胰蛋白酶的检测，但过程繁琐、吸附率低、制备困难、且抗干扰性弱、荧光易淬灭、同时荧光强度的检测需要专门设备。再如，现有技术公开了一种快速测定胰蛋白酶的比色分析方法，首先检测银纳米粒子的UV-Vi s(紫外可见光谱)，然后将胰蛋白酶与多肽修饰银纳米粒子进行显色反应，待显色反应结束再检测反应产物的紫外光谱，然后通过计算银纳米粒子和反应产物的吸光值峰值的差值，将差值与预定的标准曲线比对，从而得到胰蛋白酶的含量。此检测方法虽然具有较高的灵敏度，检测限较低，无须进行复杂的化学修饰或信号标记，但对检测人员要求较高、需要专门设备、并且银纳米粒子易氧化，保存不易。
因此，鉴于现有的胰蛋白酶检测方法，存在技术难度大、测试复杂、高成本且功能单一、无法满足现如今的需求等缺点。本发明实施例的技术方案提供一种胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法、应用和胰蛋白酶检测试剂盒。本发明通过一种简单高效的制备方法进行胰蛋白酶检测薄膜的制备，具有合成简单便捷、制备周期短、技术门槛低、且能重复使用等优点。
第一方面，在一些实施例中提供一种胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，包括以下步骤：
提供聚合物薄膜基材；
将聚合物薄膜基材浸没于染料中，使染料附着于聚合物薄膜基材，得到胰蛋白酶检测薄膜；
其中，染料适于与胰蛋白酶相互作用，在胰蛋白酶浓度不同的环境，染料的颜色不同；染料包括但不限于溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、三芳甲烷类染料、二甲酚橙染料或金属络合物类染料中的至少一种。
该方法制备简单、易操作、成本低、易于规模化生产及使用。
具体地，该胰蛋白酶检测薄膜制备方法是一种简单、便捷、高效的制备方法，具有制备简单、易操作、技术门槛低、成本低、对检测和操作人员要求低以及易于规模化生产及使用等优点。通过该方法制备得到的胰蛋白酶检测薄膜能够应用于胰蛋白酶检测中，具有操作简单便捷、成本低、安全等优势，可以根据颜色判断胰蛋白酶的浓度，因而具有很大的应用潜力。
该胰蛋白酶检测薄膜中，聚合物薄膜基材可以为聚离子薄膜，即可以为聚离子液体型薄膜，其兼具离子液体和聚合物的优良性能，并能克服离子液体的流动性，具有独特的理化性质，可以很好的应用于医用检测领域中。
该胰蛋白酶检测薄膜中，染料为本身具有一定的颜色，并能使其他物质获得鲜明或较明显色泽的化合物。本申请实施例中，染料检测到胰蛋白酶能够变色，且染料和聚合物薄膜基材能够形成良好的稳定配合。具体地，聚合物薄膜基材可以吸附染料，或染料可以良好的附着于聚合物薄膜基材上，由于二者之间具有较强的离子相互作用，从而能够使染料很好的保持在聚合物薄膜基材上。
相比于现有技术，本申请实施例利用染料与胰蛋白酶进行结合或者发生反应(相互作用)进行显色，具有操作简单、技术门槛低、显色变化明显、成本低、检测快等优点。
具体地，该胰蛋白酶检测薄膜的具体形状可以是多种类型的，例如，可以是圆形、方形、多边形或其他不规则形状等任意形状，或者可以为片状、条状等，本申请实施例对于胰蛋白酶检测薄膜的具体形状不作限定。
具体地，该胰蛋白酶检测薄膜的尺寸也可以根据实际情况而进行调整，本申请实施例对于胰蛋白酶检测薄膜的具体尺寸不作限定。
具体地，染料适于与胰蛋白酶相互作用，在胰蛋白酶浓度不同的环境，染料的颜色不同。也就是，当胰蛋白酶浓度不同时，该染料具有不同的颜色。由此，利用染料与胰蛋白酶的相互作用进行显色，通过观察胰蛋白酶检测薄膜的颜色变化，即可得到检测结果。此外，可以通过染料混合或改变染料的浓度来达到不同的显色效果。
具体地，染料包括但不限于溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、三芳甲烷类染料、二甲酚橙染料或金属络合物类染料中的至少一种。
需要指出的是，该染料可以选用溴甲酚紫染料，或者3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料，或者二甲酚橙染料，或者三芳甲烷类染料，或者金属络合物类染料，或者上述染料的混合染料等，但不限于此。更一般地，该染料可以为满足以下三个条件的任何染料：(1)能够与聚合物薄膜基材稳定结合；(2)能够与胰蛋白酶结合或相互作用；(3)满足生物安全性要求。
以溴甲酚紫染料为例，其属于一种生物染色剂，安全无毒，该溴甲酚紫染料可以与胰蛋白酶以非共价键结合，胰蛋白酶的疏水核与溴甲酚紫染料的非极性基团结合。并且，结合后的聚集体体积大于溴甲酚紫染料自身的体积，使得结合后的摩尔吸光系数发生变化，光散射信号发生变化，进而显示出不同颜色。且由于其信号强度与单位体积内的粒子数目成正比例关系，也就是与胰蛋白酶浓度成比例关系，因此可通过观察颜色实现对胰蛋白酶浓度的检测。检测过程中，胰蛋白酶检测薄膜中的溴甲酚紫染料对不同浓度的胰蛋白酶浓度显现出不同的颜色，可以通过颜色变化对胰蛋白酶浓度进行定量检测。
具体地，该胰蛋白酶检测薄膜中，一方面，聚合物薄膜基材可以为染料的载体或平台。由于聚合物薄膜基材与染料尤其是溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、二甲酚橙染料等之间具有较强的离子相互作用，可使得染料很好的保持或附着于聚合物薄膜基材上，即染料可以与聚合物薄膜基材稳定结合。另一方面，染料尤其是溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、二甲酚橙染料等安全、无毒，能够与胰蛋白酶结合进而使胰蛋白酶检测薄膜的颜色发生变化，例如可由蓝色转变为黄色，且根据胰蛋白酶的浓度的不同，颜色变化的深浅(色调)不同，由此可以通过颜色变化对胰蛋白酶情况进行定量检测。当然，本申请的其他实施例中，染料还可以因胰蛋白酶与染料之间发生其他类型的物理或化学反应而变色，在此不再赘述。
以上可以看出，本申请实施例直接利用染料例如溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、二甲酚橙染料等染料与胰蛋白酶相结合或反应，实现染料颜色改变的目的，从而达到检测效果。并且，可通过检测前后的变化程度而判断胰蛋白酶浓度，如通过颜色深浅(色调)变化判断胰蛋白酶在液体环境中的浓度，从而辅助检查及相应的治疗。该胰蛋白酶检测薄膜应用于胰蛋白酶的检测中，具有操作简单、显色变化明显、检测快、效率高、对于检测人员的要求较低等特点。
在一些实施方式中，聚合物薄膜基材包括含有离子液体的聚离子液体薄膜(聚离子薄膜)。
优选地，离子液体包括但不限于咪唑类离子液体、吡啶类离子液体、季铵盐类离子液体、季膦类离子液体或吡咯烷类离子液体中的至少一种。可以理解，根据离子液体发挥的功能，制备该聚合物薄膜基材所采用的离子液体可以选用本领域常用的功能化离子液体。示例性的，离子液体可以为咪唑类离子液体，可以为吡啶类离子液体，可以为季铵盐类离子液体，也可以为吡咯烷类离子液体等。本申请实施例对于离子液体的具体类型不作限定，其可以采用以上所列出的几种离子液体，也可以采用本领域已知的其他类型的离子液体。
优选地，形成聚离子液体薄膜的离子液体单体包括溴丁烷和乙烯基咪唑。可以理解，溴丁烷和乙烯基咪唑能够发生反应，并形成离子液体单体。
优选地，形成聚离子液体薄膜的基膜单体包括但不限于丙烯腈。该基膜单体可以为丙烯腈，也可以为丙烯腈和苯乙烯的混合物等，还可以为本领域常用的其他具有类似功能或作用的基膜单体。
优选地，形成聚离子液体薄膜的交联剂包括但不限于N,N-亚甲基双丙烯酰胺(N,N'-methanediylbisprop-2-enamide，简称MBA)。该MBA作为交联剂，在分子单体间起架桥作用，分子相互键合交联成网状结构，促进聚合物分子链间键结。此外，交联剂还可以为本领域常用的其他具有类似性质或功能作用的交联剂。
优选地，形成聚离子液体薄膜的引发剂包括但不限于2,4,6-(三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦(Diphenyl(2,4,6-trimethylbenzoyl)phosphineoxide，简称，TPO)。TPO属于光引发剂，淡黄色固体，主要起光固化作用，是一种高效的通用型紫外光引发剂，可用于引发不饱和预聚体系的UV聚合反应。此外，引发剂还可以为本领域常用的其他具有类似性质或功能作用的引发剂。例如，引发剂可以是本领域常用的引发剂，如光引发剂907、光引发剂184、偶氮二异丁腈、苯偶姻及其衍生物等。本领域技术人员可以根据离子液体单体、基膜单体等的具体类型选择适当的引发剂。
需要说明的是，本申请实施例对于上述离子液体的具体类型、基膜单体的具体类型、交联剂的具体类型、引发剂的具体类型等不作限定，可以采用本领域常用的各种类型，只要不对本发明的目的以及应用场景产生限制即可。为了方便描述，本申请实施例主要以MBA为交联剂，TPO为引发剂，丙烯腈为基膜单体，溴丁烷和乙烯基咪唑形成的离子液体单体为例对胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法做具体阐述。然而，本领域技术人员将理解，本发明公开的原理可以在任何适当的聚合物薄膜基材原料中实现。此外，为了清楚和简洁，可以省略对公知功能或作用的描述。
优选地，染料的浓度为0.25～2.5mg/mL，优选为1～2mg/mL；典型但非限制性的，例如可以为0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL等。采用适宜浓度范围的染料，可以使最终的显示效果更好，更有益于准确检测胰蛋白酶浓度。
优选地，染料的溶剂包括水和/或醇类溶剂。例如，该溶剂可以为低碳醇，进一步可以为乙醇等醇类溶剂。也就是说，可以将溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、二甲酚橙染料等溶于水或溶于醇类溶剂中形成染料溶液。
优选地，将聚合物薄膜基材浸入染料中的温度为20～40℃，优选为25～35℃。该浸入温度可以为室温，例如可以为20℃、25℃、30℃、40℃等。
优选地，将聚合物薄膜基材浸入染料中的时间为15～30min，优选为18～22min。典型但非限制性的，例如可以为15min、20min、22min、25min、30min等。由此，在适宜的时间和温度范围下，可以使聚合物薄膜基材与染料更好的结合，且不会使染料的性质发生变化，得到的胰蛋白酶检测薄膜性能好，效率高。
在一些实施方式中，聚合物薄膜基材的制备方法，包括以下步骤：
提供基板组件，基板组件包括基板和设置于基板上的第一润滑剂；
将聚合物薄膜基材的成膜液置于基板组件上，将带有第二润滑剂的盖板覆盖在成膜液上，其中，成膜液分别与第一润滑剂和第二润滑剂接触；
成膜液中的各原料发生聚合反应后，分离聚合物薄膜基材与基板组件与盖板，得到聚合物薄膜基材。
可以理解，在发生聚合反应之后和在分离之前，所得到的是包含聚合物薄膜基材、盖板和基板组件的组合结构，然后，经过分离步骤，将聚合物薄膜基材与盖板和基板组件分开，得到聚合物薄膜基材。
在一些实施例中，基板组件还包括锡纸，锡纸设置于基板上，第一润滑剂设置于锡纸上。应理解，该基板组件可以包括基板和第一润滑剂，或者也可以包括基板、锡纸和第一润滑剂。当基板组件包括锡纸时，需要将锡纸平整地铺设在基材上，或使锡纸平整的包裹基板，而后可以将第一润滑剂设置于锡纸上，这样更有益于聚合物薄膜基材的制备。
本发明实施例提供的聚合物薄膜基材的制备方法，具有产物率高、反应速率快、节约能耗的特点。同时，整个过程操作简单、便捷，对实验设备要求低，加工安全性大。并且，由该制备方法制得的聚合物薄膜基材结构稳定，易剥离，刺激性低。
该聚合物薄膜基材的制备方法，通过锡纸和润滑剂的使用，在成膜液与盖板和/或基板之间形成了阻隔，成膜前的成膜液与基板和/或盖板无法直接接触，减少了成膜过程中盖板和/或基板对成膜品质的影响，从而保证了聚合物薄膜基材的完整性与厚度的均一性，并且能够大大缩短聚合物薄膜基材分离所需要的时间。
具体地，基板可以为玻璃板、不锈钢板或紫外光不容易透过的硬质塑料板等。在这几种基板中，较佳的，基板为玻璃板。玻璃板具有原料易得，成本低廉的优势，并且，玻璃板耐热性好，紫外光照射发生聚合反应后，容易冷却，从而缩短了操作的时间。
具体地，盖板可以为玻璃板或硬质塑料板等。较佳的，盖板可以为透明玻璃板或透明硬质塑料板。使用透明的玻璃板或透明硬质塑料板可以使聚合反应在紫外的照射下进行，加快反应的速率，为聚合反应的进行提供了一种可选的方案。
具体地，所采用的润滑剂如第一润滑剂或第二润滑剂，需要对紫外光是惰性的且对紫外光不产生干扰。第一润滑剂和第二润滑剂可以采用相同的类型，也可以采用不同的类型。
在一些实施方式中，第一润滑剂和第二润滑剂各自独立地选自白凡士林、硅油、石蜡、矿物油或润滑脂中的至少一种；示例性的，第一润滑剂可以为白凡士林、可以为硅油、可以为矿物油等，第二润滑剂可以为白凡士林、可以为硅油、可以为润滑脂等。
在医疗器械领域，所采用的上述润滑剂需要无毒，无腐，无残留且涂覆透明。特别是对安全性要求高的领域，如传感器和药物控缓释等，对润滑剂具有更高的要求，可以采用常见的医用级别的润滑剂或食品级的润滑剂。
具体地，该聚合物薄膜基材的制备方法中，可以预先制备成膜液。而后将锡纸平整地铺在基板上，或使锡纸平整地包裹基板，或可以用无尘布擦拭至锡纸无褶皱，该锡纸的光滑面朝上，然后在锡纸上涂抹第一润滑剂如白凡士林，继续用无尘布擦拭至表面光滑。而后将制备的成膜液覆盖在带有第一润滑剂的锡纸上，涂覆均匀，再将预先涂有第二润滑剂的盖板覆盖在载有成膜液的锡纸上；可以理解，其中的成膜液的上下表面可以分别与第二润滑剂和第一润滑剂相接触。
可选的，将锡纸铺在基板上之前，使用润湿溶液将基板润湿。将基板润湿的目的是为了排除基板与锡纸之间的空气。并且，通过润湿溶液与锡纸的贴合性来增加基板与锡纸的结合力，更容易将锡纸抚平，从而提高锡纸表面的平整度。将基板润湿的润湿溶液可以有多种，但是从来源、成本和环保的角度，该润湿溶液优选为水、乙醇或其混合溶液。
另外，在其他实施例中，基板组件可以只包括基板。具体地，该聚合物薄膜基材的制备方法中，可以预先制备成膜液，而后在基板上涂抹第一润滑剂如白凡士林，用无尘布擦拭第一润滑剂至表面光滑。之后以将制备的成膜液覆盖在带有第一润滑剂的基板上，涂覆均匀，再将预先涂有第二润滑剂的盖板覆盖在载有成膜液的基板上。可以理解，其中的成膜液的上下表面可以分别与第二润滑剂和第一润滑剂相接触。
具体地，在一些实施方式中，制备成膜液的方法包括：
将离子液体单体和基膜单体混合均匀，加入交联剂和引发剂，然后进行第二超声处理，得到成膜液；
优选地，第二超声处理的时间为10～30min；典型但非限制性的，例如可以为10min、15min、20min、25min、30min等。
优选地，制备成膜液的方法还包括将离子液体单体进行第一超声处理，第一超声处理的时间为10～30min；典型但非限制性的，例如可以为10min、15min、20min、25min、30min等。
在成膜液的制备中，与现有的“两步法”制备离子液体相比，本申请实施例提供的制备方法通过使用超声波法可以显著提高成膜液的制备效率，极大缩短制备时间，而且容易操作，可控性好。因此，采用上述成膜液制备方法还可以进一步提高聚合物薄膜基材以及胰蛋白酶检测薄膜的制备效率。
根据本发明实施例，可以根据不同的需求选择不同的成膜液。成膜液中离子液体的成分，可以为咪唑类离子液体、吡啶类离子液体、季铵盐类离子液体、季膦类离子液体或吡咯烷类离子液体中的一种或多种，或者还可以为本领域熟知的其他类型的离子液体。
优选地，离子液体单体包括溴丁烷和乙烯基咪唑。
优选地，基膜单体包括丙烯腈。
优选地，交联剂包括N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)。
优选地，引发剂包括2,4,6-(三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦(TPO)。
具体地，成膜液的制备中，溴丁烷和乙烯基咪唑的摩尔比可以为2∶1至1∶1，例如可以为1∶1。为确保反应完全，丙烯腈的质量需要大于或等于溴丁烷与乙烯基咪唑的质量之和。考虑到三者反应配比、转化率、用量及后续的清洗处理过程，丙烯腈的质量优选为溴丁烷与乙烯基咪唑质量之和。交联剂的质量为以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的8wt％～12wt％，例如可以为8wt％、9wt％、10wt％、12wt％等。引发剂的质量为以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的1wt％～4wt％；例如可以为1wt％、1.5wt％、2wt％、3wt％、4wt％等。应理解，以上各原料的比例，并不限于此，还可以根据实际工艺情况进行适当的调整。
具体地，该成膜液的制备可以包括如下步骤。
将等摩尔比的溴丁烷和乙烯基咪唑混合，将得到的混合液进行超声处理15min，直至两者充分混合；
去除杂质后加入与溴丁烷和乙烯基咪唑二者的质量之和相等的丙烯腈；
而后加入以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的质量比为8wt％的MBA以及以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的质量比为1wt％的TPO，加完后超声处理15min，得到成膜液，其中，所得到的成膜液为澄清透明液。
在该制备步骤中，超声处理可以为溴丁烷和乙烯基咪唑的混合液增加能量场，从而加速反应的进行。
进一步，该胰蛋白酶检测薄膜的制备方法中，使成膜液中的各原料发生聚合反应，在一些实施方式中，聚合反应在紫外光的照射下进行。
其中，紫外光的波长优选为250～400nm；典型但非限制性的，例如可以为250nm、300nm、325nm、400nm等。
紫外光照射的时间优选为10～30min；典型但非限制性的，例如可以为10min、20min、30min等。
可选的，聚合反应在紫外光照射下进行的同时，可在加热的条件下进行。其中，加热的温度可以为20～60℃，典型但非限制性的，例如可以为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃等。
在此条件下进行聚合反应，有助于得到性能优异的聚合物薄膜基材，而且效率较高。
该聚合反应可以由引发剂引发。引发剂可以是本领域常用的引发剂，例如光引发剂907、光引发剂184、偶氮二异丁腈、苯偶姻及其衍生物等，本领域技术人员可以根据成膜液的具体成分选择适当的引发剂。
进一步，该胰蛋白酶检测薄膜的制备方法中，使成膜液中的各原料发生聚合反应之后，进行分离(例如使聚合物薄膜基材从盖板和/或基板组件上分离)。在一些实施方式中，分离的方式包括：去除基板组件，将附着有聚合物薄膜基材的盖板置于静置溶液中，静置10～30min，使得聚合物薄膜基材与盖板在静置溶液中自动分离，从而得到聚合物薄膜基材；
或者，去除盖板，将附着有聚合物薄膜基材的基板组件置于静置溶液中，静置10～30min，使得聚合物薄膜基材与基板组件在静置溶液中分离，去除基板组件，得到聚合物薄膜基材。
更进一步地，在分离聚合物薄膜基材与基板组件时，由于聚合物薄膜基材与基板之间存有锡纸及第一润滑剂作为阻隔，因此能够轻易分离基板与贴附有聚合物薄膜基材的锡纸。与分离基板与聚合物薄膜基材相比，锡纸自身的厚度非常薄且与聚合物薄膜基材之间存有第一润滑剂，使得锡纸与聚合物薄膜基材更容易分离。具体地，在分离聚合物薄膜基材与锡纸的过程中，既可以将锡纸与聚合物薄膜基材放在溶液中，通过溶液使两者自然分离，也可以通过机械分离(如人工剥离锡纸等)的方式使两者分离，从而得到完整的聚合物薄膜基材。
可选的，上述静置溶液可以为水或者其他溶剂。
通过这种方式，可以使聚合物薄膜基材自动地从盖板或基板或锡纸上分离，操作简单，同时也提高了良品率，而且也提高了生产效率。
可选的，将分离得到的聚合物薄膜基材进行清洗，例如可以依次在清水、无水乙醇、清水中进行超声清洗。
以上可以看出，根据本发明实施例的制备方法，通过锡纸、第一润滑剂和第二润滑剂的使用，不仅能够保证聚合物薄膜基材的完整性和膜厚的均一稳定性，而且能够使聚合物薄膜基材更易于分离，即实现了聚合物薄膜基材自动剥离，极大缩短了分离所需的时间。同时，采用超声波法进行成膜液的制备，也极大缩短了制备成膜液的时间，操作简单、高效。因此，该聚合物薄膜基材的制备方法相比于现有的薄膜制备方法具有简单、高效、用时短等特点。
由此，本申请实施例提供的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法具有合成简便、容易操作、技术门槛低、聚合物薄膜基材易于分离、制备用时短、制备效率高、易于实现规模化生产等优点，是一种简单、便捷、高效的制备方法，易于规模化生产及应用。
第二方面，在一些实施例中，提供了一种胰蛋白酶检测薄膜，由前述胰蛋白酶检测薄膜的制备方法所制备得到。
该胰蛋白酶检测薄膜，包括：
聚合物薄膜基材；和
附着于聚合物薄膜基材的染料。
在一些实施方式中，染料适于与胰蛋白酶相互作用，在胰蛋白酶浓度不同的环境，染料的颜色不同。
在一些实施方式中，染料包括但不限于溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、三芳甲烷类染料、二甲酚橙染料或金属络合物类染料中的至少一种。
在一些实施方式中，聚合物薄膜基材包括含有离子液体的聚离子液体薄膜。
优选地，离子液体包括但不限于咪唑类离子液体、吡啶类离子液体、季铵盐类离子液体、季膦类离子液体或吡咯烷类离子液体中的至少一种；
优选地，形成聚离子液体薄膜的离子液体单体包括但不限于溴丁烷和乙烯基咪唑；
优选地，形成聚离子液体薄膜的基膜单体包括但不限于丙烯腈；
优选地，形成聚离子液体薄膜的交联剂包括但不限于N,N-亚甲基双丙烯酰胺；
优选地，形成聚离子液体薄膜的引发剂包括但不限于2,4,6-(三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦。
应理解，第二方面的胰蛋白酶检测薄膜与第一方面的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法中相同或类似的部分，可以参照前述对于第一方面的蛋白酶检测薄膜的制备方法的阐述，在此不再赘述。
第三方面，在一些实施例中，提供了一种前述胰蛋白酶检测薄膜的制备方法所制备的检测薄膜或胰蛋白酶检测薄膜在检测胰蛋白酶中的应用。其检测方法包括：
将胰蛋白酶检测薄膜置于待测液中，使胰蛋白酶检测薄膜中的染料与待测液接触或相互作用。
在一些实施方式中，检测方法还包括：观察胰蛋白酶检测薄膜的颜色变化。
在一些实施方式中，检测方法还包括：在包含胰蛋白酶浓度不同的待测液环境中，胰蛋白酶检测薄膜的颜色不同，依据胰蛋白酶检测薄膜显示出的不同颜色，判断胰蛋白酶浓度。
需要说明的是，胰蛋白酶检测薄膜颜色的显示也会与浸入时间或浸入温度有关。具体地讲，例如，在将聚合物薄膜基材浸入染料中的时间相同的情况下，以及在将聚合物薄膜基材浸入染料中的温度相同的情况下，胰蛋白酶检测薄膜在检测前后的颜色变化，受到胰蛋白酶浓度的影响。而在将聚合物薄膜基材浸入染料中的时间不同的情况下，或在将聚合物薄膜基材浸入染料中的温度不同的情况下，胰蛋白酶检测薄膜在检测前后的颜色变化，可能会受到胰蛋白酶浓度以及浸入时间或浸入温度的综合影响。因此，需要使聚合物薄膜基材浸入染料中的时间和温度在适宜的范围内，或者在检测系列胰蛋白酶浓度时，需要使聚合物薄膜基材浸入染料中的时间和温度均相同，以尽可能减少浸入时间和浸入温度对于胰蛋白酶检测薄膜颜色变化的影响。
将本发明实施例的胰蛋白酶检测薄膜应用于胰蛋白酶检测中，具有操作简单便捷、检测前后变化明显、检测快、效率高等优点，能够缓解现有的胰蛋白酶检测方法存在的设备复杂、技术要求高、检测复杂、成本较高等缺点。
应理解，第三方面的胰蛋白酶检测薄膜的应用中与前述第一方面和第二方面的胰蛋白酶检测薄膜及制备方法中相同或类似的部分，可以参照前述对于胰蛋白酶检测薄膜及制备方法的阐述，在此不再赘述。
第四方面，在一些实施例中提供一种胰蛋白酶检测试剂盒，包括前述胰蛋白酶检测薄膜。
以上可知，本发明实施例的胰蛋白酶检测试剂盒，包括前述的胰蛋白酶检测薄膜，因而至少具有与前述胰蛋白酶检测薄膜及其制备方法和应用相同的优势，在此不再赘述。该胰蛋白酶检测试剂盒的作用原理，主要是利用胰蛋白酶检测薄膜中的染料与胰蛋白酶相结合或反应，进行显色，在胰蛋白酶浓度不同时，胰蛋白酶检测薄膜具有不同的颜色，由此可通过检测前后胰蛋白酶检测薄膜的颜色的变化程度来判断胰蛋白酶浓度。
在一些实施方式中，胰蛋白酶检测试剂盒还包括胰蛋白酶检测标准比色卡，或者胰蛋白酶检测标准色阶。
进一步，胰蛋白酶检测试剂盒还可以包括包装盒和使用说明书。
该胰蛋白酶检测试剂盒可以具有包装盒，在包装盒内可以放置胰蛋白酶检测薄膜和标准比色卡，还可以放置使用说明书等。其中，胰蛋白酶检测薄膜的数量可以不作限定，例如可以放置1-5片胰蛋白酶检测薄膜或更多片胰蛋白酶检测薄膜。
根据本发明的实施例，利用该试剂盒进行胰蛋白酶检测时，包括：
在制备完成胰蛋白酶检测薄膜后，可以通过图片拍摄的方式记录检测之前的胰蛋白酶检测薄膜的颜色，或者将胰蛋白酶检测薄膜与试剂盒上的标准色进行对比记录；
然后将胰蛋白酶检测薄膜浸没于胰蛋白酶溶液中，数秒钟之后可以慢慢观察到胰蛋白酶检测薄膜的颜色发生变化，例如可以由蓝色变化为绿色，待颜色稳定后，将胰蛋白酶检测薄膜取出，记录检测之后的胰蛋白酶检测薄膜的颜色，与检测之前的胰蛋白酶检测薄膜的颜色对比分析判断，或可与颜色卡号进行对比印证，或可与试剂盒中的标准色阶或标准比色卡进行对比，颜色的深浅变化对应着不同的胰蛋白酶浓度。
其中，胰蛋白酶检测标准色阶或标准比色卡可以采用如下方法制成：
配制一系列浓度的胰蛋白酶溶液，例如一系列胰蛋白酶浓度的溶液为0ug/mL、0.5ug/mL、5ug/mL、10ug/mL、25ug/mL、100ug/mL；
分别取上述各个浓度的胰蛋白酶溶液分别置于比色容器中，分别加入相同的胰蛋白酶检测薄膜，静置一定时间，待颜色稳定后，将胰蛋白酶检测薄膜取出，可以用相机等图像采集设备记录检测之后的胰蛋白酶检测薄膜显色结果，采集图片后，用具有颜色梯度的图片组成胰蛋白酶标准色阶或(经电脑处理)打印制成胰蛋白酶检测标准比色卡。
另外，若对颜色不敏感，可以采用色彩分析软件分析胰蛋白酶检测薄膜的颜色，例如可以用MATLAB软件中的HSI RGB数值(数值受环境等因素影响会有一定的波动)，胰蛋白酶检测薄膜的颜色可以用色彩空间知识进行量化处理。其中，胰蛋白酶检测薄膜RGB色彩值对比关系如图1所示。
从图1中数据可以看出，RGB值变化较明显，可清楚地反应经过不同浓度的胰蛋白酶染色后胰蛋白酶检测薄膜的颜色变化，从而能够判断胰蛋白酶的浓度。
可以理解，RGB模型是目前常用的一种彩色信息表达方式，它使用红、绿、蓝三原色的亮度来定量表示颜色。该模型也称为加色混色模型，即一种以RGB三色光互相叠加来实现混色的方法，任何一种颜色在RGB颜色空间中都可以用三维空间中的一个点来表示。因此可以通过RGB值去量化该色彩变化，并加以判断。采集到胰蛋白酶检测薄膜的图片后，可用RGB颜色分析器或者将图片导入到颜色分析软件，如MATLAB，进行量化色彩值以进行比较，此时可不需要标准比色卡。或者，也可以提前制备标准比色卡进行比对，不需要进行导入分析，只需与标准比色卡进行比对即可。
为了便于理解本发明，下面结合具体实施例，对本发明作进一步说明。以下具体实施例中，如无特别说明，所用的原材料均可商购获得。
实施例1
胰蛋白酶检测薄膜的制备，包括以下步骤：
取等摩尔比例的溴丁烷和乙烯基咪唑置于玻璃瓶中，超声震荡处理15min至两者充分混合。之后，去除杂质后加入与溴丁烷和乙烯基咪唑二者的质量相等的丙烯腈溶液，再加入占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为10％的MBA和占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为2％的TPO，然后超声震荡处理30min，形成澄清透明的成膜液。
准备一块玻璃板，将玻璃板先用水润湿，后将锡纸贴在玻璃板的表面，锡纸的光滑面朝上，用无尘布擦拭至无褶皱为止。在锡纸上涂抹第一润滑剂白凡士林，继续用无尘布擦拭至表面光滑。而后，(可以用移液枪)将成膜液置于带有白凡士林的锡纸上(可以通过调控所加成膜液的体积来调整最终所合成的薄膜的厚度)，然后再将接触面均匀涂抹有第二润滑剂白凡士林的玻璃盖板缓慢压上。
然后在聚合反应室内用250nm的紫外光照射15min，使成膜液发生聚合反应，形成透明薄膜。在固化箱内放置5min后取出，并在室温下放置15min。然后，去除基板组件，将带有透明薄膜的玻璃盖板放入水中(加入水没过透明薄膜)，放置20min，使透明薄膜自动地从玻璃盖板上分离，完整的透明薄膜漂浮在水面上。将得到的透明薄膜依次在清水、无水乙醇和清水进行超声清洗，得到聚合物薄膜基材。
将聚合物薄膜基材浸没于1mg/mL的溴甲酚紫染料(染料的溶剂为无水乙醇)中，在30℃下放置20min之后取出，此时该膜呈蓝色，而后再用清水-无水乙醇-清水进行超声清洗，得到染料为溴甲酚紫的胰蛋白酶检测薄膜，并室温保存。
实施例2
胰蛋白酶检测薄膜的制备，与实施例1的区别仅在于：
将聚合物薄膜基材浸没于2mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料(染料的溶剂为质量浓度为80％的乙醇溶液)中，在35℃下放置15min之后取出薄膜，此时薄膜呈无色，而后再用清水-无水乙醇-清水进行超声清洗，室温保存。
实施例3
胰蛋白酶检测薄膜的制备，与实施例1的区别仅在于：
将聚合物薄膜基材浸没于2.5mg/mL的溴甲酚紫染料和二甲酚橙染料的混合染料(二者的比例可以为1:1、1:2、1:3或1:4)(染料的溶剂为质量浓度为80％的乙醇溶液)中，在28℃下放置22min之后取出薄膜，此时薄膜呈紫黑色，而后再用清水-无水乙醇-清水进行超声清洗，而后在40℃烘箱下干燥15min，备用。
实施例4
胰蛋白酶检测薄膜的制备，包括以下步骤：
取摩尔比为2:1溴丁烷和乙烯基咪唑置于玻璃瓶中，超声震荡处理20min至两者充分混合。去除杂质后加入与溴丁烷和乙烯基咪唑二者的质量相等的丙烯腈溶液，再加入占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为8％的MBA和占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为1％的TPO，然后超声震荡处理30min，形成澄清透明的成膜液。
准备一块玻璃板，将玻璃板先用水润湿，后将锡纸贴在玻璃板的表面，锡纸的光滑面朝上，用无尘布擦拭至无褶皱为止。在锡纸上涂抹第一润滑剂白凡士林，继续用无尘布擦拭至表面光滑。而后，(可以用移液枪)将成膜液置于带有白凡士林的锡纸上(可以通过调控所加成膜液的体积来调整最终所合成的薄膜的厚度，例如可以为20～50μm)，然后再将接触面均匀涂抹有第二润滑剂白凡士林的玻璃盖板缓慢压上。
然后在聚合反应室内用300nm的紫外光照射15min，使成膜液发生聚合反应，形成透明薄膜。然后在固化箱内放置10min，然后取出在室温下放置15min。之后，去除基板组件，将带有透明薄膜的玻璃盖板放入水中(加入水没过透明薄膜)，放置25min，使透明薄膜自动地从玻璃盖板上分离，完整的透明薄膜漂浮在水面上。将得到的透明薄膜依次在清水、无水乙醇和清水进行超声清洗，得到聚合物薄膜基材。
将聚合物薄膜基材浸没于1mg/mL的溴甲酚紫染料(染料的溶剂为无水乙醇)中，在30℃下放置20min之后取出薄膜，此时薄膜呈蓝色，而后再用清水-无水乙醇-清水进行超声清洗，室温保存。
实施例5
胰蛋白酶检测薄膜的制备，包括以下步骤：
取摩尔比为1.2:1的溴丁烷和乙烯基咪唑，置于玻璃瓶中，超声震荡处理25min至两者充分混合。去除杂质后加入与溴丁烷和乙烯基咪唑二者的质量相等的丙烯腈溶液，再加入占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为12％的MBA和占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为4％的TPO，然后超声震荡处理20min，形成澄清透明的成膜液。
准备一块玻璃板，将玻璃板先用水润湿，后将锡纸贴在玻璃板的表面，锡纸的光滑面朝上，用无尘布擦拭至无褶皱为止。在锡纸上涂抹第一润滑剂硅油，继续用无尘布擦拭至表面光滑。而后，(可以用移液枪)将成膜液置于带有硅油的锡纸上，然后再将接触面均匀涂抹有第二润滑剂白凡士林的玻璃盖板缓慢压上。
然后在聚合反应室内用265nm的紫外光照射18min，使成膜液发生聚合反应，形成透明薄膜；然后在固化箱内放置7min，然后取出在室温下放置15min。然后，去除基板组件，将带有透明薄膜的玻璃盖板放入水中(加入水没过透明薄膜)，放置20min，使透明薄膜自动地从玻璃盖板上分离，完整的透明薄膜漂浮在水面上。将得到的透明薄膜依次在清水、无水乙醇和清水进行超声清洗，得到聚合物薄膜基材。
将聚合物薄膜基材浸没于2mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料(染料的溶剂为质量浓度为80％的乙醇溶液)中，在30℃下放置20min之后取出薄膜，此时薄膜呈无色，而后再用清水-无水乙醇-清水进行超声清洗，室温保存。
实施例6
胰蛋白酶检测薄膜的制备，包括以下步骤。
取摩尔比为1:1的溴丁烷和乙烯基咪唑，置于玻璃瓶中，超声震荡处理15min至两者充分混合。去除杂质后加入与溴丁烷和乙烯基咪唑的总质量1.2倍的丙烯腈溶液，再加入占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为10％的MBA和占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为3％的TPO，然后超声震荡处理30min，形成澄清透明的成膜液。
准备一块光滑的不锈钢板，将不锈钢板先用水润湿，后将锡纸贴在不锈钢板的表面，锡纸的光滑面朝上，用无尘布擦拭至无褶皱为止。在锡纸上涂抹第一润滑剂白凡士林，继续用无尘布擦拭至表面光滑。而后，(可以用移液枪)将成膜液置于带有白凡士林的锡纸上，然后再将接触面均匀涂抹有第二润滑剂润滑脂的盖板缓慢压上。
然后在聚合反应室内用400nm的紫外光照射15min，使成膜液发生聚合反应，形成透明薄膜；然后在固化箱内放置5min，然后取出在室温下放置15min。之后，去除玻璃盖板和基板，将带有透明薄膜的锡纸放入水中(加入水没过透明薄膜)，放置30min，使透明薄膜自动地从锡纸上分离，完整的透明薄膜漂浮在水面上，将得到的透明薄膜依次在清水、无水乙醇和清水进行超声清洗，得到聚合物薄膜基材。
将聚合物薄膜基材浸没于0.5mg/mL的溴甲酚紫染料(染料的溶剂为无水乙醇)中，在30℃下放置20min之后取出薄膜，此时薄膜呈淡蓝色，而后再用清水-无水乙醇-清水进行超声清洗，室温保存。
实施例7
胰蛋白酶检测薄膜的制备，包括以下步骤。
取等摩尔比例的溴丁烷和乙烯基咪唑置于玻璃瓶中，超声震荡处理15min至两者充分混合。之后，去除杂质后加入与溴丁烷和乙烯基咪唑二者的质量相等的丙烯腈溶液，再加入占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为10％的MBA和占溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量的质量比为2％的TPO，然后超声震荡处理30min，形成澄清透明的成膜液。
准备一块玻璃板作为基板，在基板上涂抹第一润滑剂白凡士林，继续用无尘布擦拭至表面光滑。而后，(可以用移液枪)将成膜液置于带有白凡士林的基板上(可以通过调控所加成膜液的体积来调整最终所合成的薄膜的厚度)，然后再将接触面均匀涂抹有第二润滑剂白凡士林的玻璃盖板缓慢压上。
其余均与实施例1相同。本实施例与实施例1的主要区别在于，本实施例中，基板组件不包括锡纸。
应用例1
将上述实施例制得的胰蛋白酶检测薄膜应用到实际的胰蛋白酶检测中，以实施例1为例，将实施例1得到的胰蛋白酶检测薄膜应用于胰蛋白酶检测时，检测的具体方法包括：
将得到的检测薄膜进行裁剪，可以裁剪成传统肠镜检查的镜头大小，环状结构，具体大小可以根据镜头散射角度及镜筒而定，一般在尽量不影响肠镜光学检查，同时可观察到检测薄膜即可；
将检测薄膜固定在镜头上后，随着插管进行人体内部进行检测；
到达相应区域后，首先观察检测薄膜是否变化，若相应区域出现疾病，其内部环境，如酸碱值发生变化，胰蛋白酶的活性会发生变化，甚至失活，此时薄膜检测不出变化；若薄膜的颜色有变化，可根据变化值与胰蛋白酶检测标准比色卡进行比较，从而判断此时胰蛋白酶浓度。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
需要指出的是，本专利申请文件的一部分包含受著作权保护的内容。除了对专利局的专利文件或记录的专利文档内容制作副本以外，著作权人保留著作权。

Claims (13)

1.一种胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，用于胰蛋白酶检测，其特征在于，包括以下步骤：
提供聚合物薄膜基材；
将所述聚合物薄膜基材浸没于染料中，使所述染料附着于所述聚合物薄膜基材，得到胰蛋白酶检测薄膜；
其中，所述染料适于与胰蛋白酶相互作用，在胰蛋白酶浓度不同的环境，所述染料的颜色不同；所述染料包括溴甲酚紫染料、3,3',5,5'-四甲基联苯胺染料、三芳甲烷类染料、二甲酚橙染料或金属络合物类染料中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，其特征在于，所述染料的浓度为0.25～2.5mg/mL，优选为1～2mg/mL；
优选地，所述染料的溶剂包括水和/或醇类溶剂；
优选地，将所述聚合物薄膜基材浸没于所述染料中的温度为20～40℃，优选为25～35℃，将所述聚合物薄膜基材浸没于所述染料中的时间为15～30min，优选为18～22min。
3.根据权利要求1所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，其特征在于，所述聚合物薄膜基材的制备方法，包括以下步骤：
提供基板组件，所述基板组件包括基板和设置于所述基板上的第一润滑剂；
将所述聚合物薄膜基材的成膜液置于所述基板组件上，将带有第二润滑剂的盖板覆盖在所述成膜液上，其中，所述成膜液分别与所述第一润滑剂和所述第二润滑剂接触；
所述成膜液中的各原料发生聚合反应后，分离所述聚合物薄膜基材与所述基板组件与所述盖板，得到所述聚合物薄膜基材；
优选地，所述基板组件还包括锡纸，所述锡纸设置于所述基板上，所述第一润滑剂设置于所述锡纸上。
4.根据权利要求3所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，其特征在于，所述第一润滑剂和所述第二润滑剂各自独立地选择白凡士林、硅油、石蜡、矿物油或润滑脂中的至少一种。
5.根据权利要求3所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，其特征在于，所述聚合反应在紫外光的照射下进行；其中，所述紫外光的波长优选为250～400nm；和/或，所述紫外光照射的时间优选为10～30min；
优选地，在紫外光照射之后，再于固化箱内放置5～10min。
6.根据权利要求3所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，其特征在于，分离所述聚合物薄膜基材与所述基板组件与所述盖板的方式包括：去除所述基板组件，将附着有所述聚合物薄膜基材的所述盖板置于静置溶液中，静置10～30min，去除所述盖板，得到所述聚合物薄膜基材；或者，去除所述盖板，将附着有所述聚合物薄膜基材的基板组件置于溶液中，静置10～30min，去除所述基板组件，得到所述聚合物薄膜基材；
优选地，去除所述基板，将附着有所述聚合物薄膜基材的所述盖板和所述锡纸置于静置溶液中，静置10～30min，去除所述锡纸，得到所述聚合物薄膜基材；
优选地，分离所述聚合物薄膜基材与所述基板组件和所述盖板之后，还包括对所述聚合物薄膜基材进行清洗的步骤，所述清洗包括依次在清水、醇类溶液和清水中进行超声清洗。
7.根据权利要求3～6任一项所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法，其特征在于，制备所述成膜液的方法包括：
将离子液体单体和基膜单体混合均匀，加入交联剂和引发剂，然后进行第二超声处理，得到所述成膜液；
优选地，所述第二超声处理的时间为10～30min；
优选地，制备所述成膜液的方法还包括将所述离子液体单体进行第一超声处理，所述第一超声处理的时间为10～30min；
优选地，所述成膜液包括咪唑类离子液体、吡啶类离子液体、季铵盐类离子液体、季膦类离子液体或吡咯烷类离子液体中的至少一种；
优选地，所述离子液体单体包括溴丁烷和乙烯基咪唑；优选地，溴丁烷和乙烯基咪唑的摩尔比为2∶1至1∶1；
优选地，所述基膜单体包括丙烯腈；优选地，丙烯腈的质量大于或等于溴丁烷与乙烯基咪唑的质量之和；
优选地，所述交联剂包括N,N-亚甲基双丙烯酰胺；优选地，交联剂的质量为以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的8wt％～12wt％；
优选地，所述引发剂包括2,4,6-(三甲基苯甲酰基)二苯基氧化膦；优选地，引发剂的质量为以溴丁烷、乙烯基咪唑和丙烯腈三者的总质量计算的1wt％～4wt％。
8.一种胰蛋白酶检测薄膜，其特征在于，由权利要求1～7任一项所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法制备得到。
9.权利要求1～7任一项所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法制备得到的检测薄膜或权利要求8所述的胰蛋白酶检测薄膜在检测胰蛋白酶中的应用，其特征在于，检测方法包括：
将所述胰蛋白酶检测薄膜置于待测液中，使所述胰蛋白酶检测薄膜中的染料与所述待测液接触或相互作用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述检测方法还包括：观察所述胰蛋白酶检测薄膜的颜色变化。
11.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述检测方法还包括：在包含胰蛋白酶浓度不同的所述待测液环境中，所述胰蛋白酶检测薄膜的颜色不同，依据所述胰蛋白酶检测薄膜显示出的不同颜色，判断所述胰蛋白酶浓度。
12.一种胰蛋白酶检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～7任一项所述的胰蛋白酶检测薄膜的制备方法制备得到的检测薄膜或权利要求8所述的胰蛋白酶检测薄膜。
13.根据权利要求12所述的胰蛋白酶检测试剂盒，其特征在于，所述胰蛋白酶检测试剂盒还包括胰蛋白酶检测标准比色卡。
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