CN111789873A - 高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法 - Google Patents

高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111789873A
CN111789873A CN202010773268.4A CN202010773268A CN111789873A CN 111789873 A CN111789873 A CN 111789873A CN 202010773268 A CN202010773268 A CN 202010773268A CN 111789873 A CN111789873 A CN 111789873A
Authority
CN
China
Prior art keywords
methanol
triterpenic acid
sea buckthorn
extract
aqueous solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010773268.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111789873B (zh
Inventor
王洪伦
苏晨玉
胡娜
董琦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhongke Aijia Tianjin Medical Food Co ltd
Original Assignee
Northwest Institute of Plateau Biology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northwest Institute of Plateau Biology of CAS filed Critical Northwest Institute of Plateau Biology of CAS
Priority to CN202010773268.4A priority Critical patent/CN111789873B/zh
Publication of CN111789873A publication Critical patent/CN111789873A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111789873B publication Critical patent/CN111789873B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法，本发明通过热水溶解、过滤的前处理步骤就可得到三萜酸含量大于40％的粗提取物，且回收率高达98％；再经C18填料富集后，三萜酸含量高达93％，可高效得到高品质的沙棘三萜酸提取物。另外，本发明不同洗脱剂得到的多种沙棘三萜酸提取物均能有效抑制α‑葡萄糖苷酶的活性，抑制能力均优于现有的α‑葡萄糖苷酶抑制剂，可用于制备调节糖化学代谢紊乱、降低餐后血糖、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的产品，还可用于制备预防和/或治疗肥胖症、高血压、慢性乙肝、艾滋病、肿瘤等以α‑葡萄糖苷酶为靶点的疾病的产品，安全高效。

Description

高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法
技术领域
本发明涉及沙棘中有效物质的提取领域，特别是涉及高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法。
背景技术
沙棘(拉丁学名：Hippophae rhamnoides Linn.)，是一种胡颓子科、沙棘属落叶性灌木，其特性是耐旱、抗风沙，可以在盐碱化土地上生存，因此被广泛用于水土保持。中国西北部大量种植沙棘，用于沙漠绿化。
沙棘果实营养丰富，据测定其果实中含有多种维生素、黄酮类化合物、三萜类化合物、油和脂肪酸、酚类、挥发油类、微量元素、磷脂类、5-羟色胺等活性物质和人体所需的各种氨基酸和蛋白质。
其中的三萜类化合物，可抗氧化、抗癌、延缓衰老、抗原发性高血压、抗炎、抗菌、抗病毒、促进吞噬功能，可降低胆固醇、强心，镇静、抗糖尿病、溃疡、降血糖，还有保肝，抗肝炎、降血脂、抗动脉粥样硬化的功效。
因此，提取沙棘中的三萜类化合物如三萜酸的方法被广泛研究，但仍然存在着步骤繁琐、提取物中三萜酸含量低、回收率低等问题，这直接导致了此类产品的生产成本偏高，亟需改进。
另外，目前沙棘广泛应用于沙棘果汁、沙棘原浆液的生产，在生产过程中，将沙棘榨汁后会产生大量的沙棘果渣，往往会被当作废料丢弃，或生产成干粉当作饲料，价格非常低廉。倘若能更多的开发出沙棘果渣的利用价值，将具有极大的经济意义。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法，回收率高，步骤简单。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：
提供一种提取沙棘中三萜酸的方法，包括下列内容：将沙棘浸膏与水混合，加热至浸膏完全溶解，静置沉淀，固液分离得固形物；进一步地，加热至浸膏完全溶解的温度为50～80℃，优选60～70℃，更优选65℃。
进一步地，沙棘浸膏：水的料液比为1g：(1～6)mL；进一步为1g：(2～5)mL；更进一步为1g：(3～4)mL。
为了进一步提高提取物中三萜酸的含量，将固形物进行柱层析，以体积分数为10～90％的甲醇水溶液、甲醇为流动相，以流动相中甲醇浓度依次增大的顺序进行洗脱。
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：10～30％甲醇水溶液，50～70％甲醇水溶液，70～90％甲醇水溶液，甲醇；其中，甲醇洗脱时呈现2个以上的色带，至少单独收集第一个色带的洗脱液；
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：20％甲醇水溶液，60％甲醇水溶液，80％甲醇水溶液，甲醇。
所述“至少单独收集第一个色带的洗脱液”，是指，可以是，只单独收集甲醇洗脱出的第一个色带的洗脱液，得到三萜酸含量最高的一部分提取物；也可以是，除了单独收集甲醇洗脱出的第一个色带的洗脱液以外，对10～30％甲醇水溶液、50～70％甲醇水溶液、70～90％甲醇水溶液、甲醇洗脱的第二个色带中一种或几种等得到的洗脱液各自单独收集；最后，将收集到的各个洗脱液移除溶剂后，可得到不同的沙棘三萜酸提取物。
总之，甲醇洗脱出的第一个色带的洗脱液是肯定收集的，才能得高含量的沙棘三萜酸提取物，从本发明的具体实施例中可以看出，各个洗脱剂得到的沙棘三萜酸提取物中三萜酸含量不同，其中由甲醇洗脱出的第一个色带得到的提取物三萜酸含量最高，高达93.23％，且具有优异的降血糖活性。
更进一步地，每个浓度的甲醇水溶液的用量为2～3个柱体积，甲醇用量为6～8个柱体积。
或者，为了进一步提高提取物中三萜酸的含量，将固形物进行柱层析，以体积分数为10～90％的甲醇水溶液为流动相，以流动相中甲醇浓度依次增大的顺序进行洗脱。
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：10～30％甲醇水溶液，50～70％甲醇水溶液，70～90％甲醇水溶液；其中，至少单独收集70～90％甲醇水溶液的洗脱液；
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：20％甲醇水溶液，60％甲醇水溶液，80％甲醇水溶液。
更进一步地，每个浓度的甲醇水溶液的用量为2～3个柱体积。
所述“至少单独收集70～90％甲醇水溶液的洗脱液”，是指，可以是，只单独收集70～90％甲醇水溶液的洗脱液，得到对应部位的提取物；也可以是，除了单独收集70～90％甲醇水溶液的洗脱液以外，对10～30％甲醇水溶液、50～70％甲醇水溶液洗脱中一种或两种得到的洗脱液各自单独收集；最后，将收集到的各个洗脱液移除溶剂后，可得到不同的沙棘三萜酸提取物。
总之，70～90％甲醇水溶液洗脱出的洗脱液是肯定收集的，才能得具有显著的降血糖活性的沙棘三萜酸提取物，且三萜酸含量较高，从本发明的具体实施例中可以看出，各个洗脱剂得到的沙棘三萜酸提取物中三萜酸含量不同，其中由70～90％甲醇水溶液洗脱出的提取物三萜酸含量为63.24％，且具有优异的降血糖活性，活性与甲醇洗脱得到第一个色带的提取物相当。
进一步地，所述柱层析的柱填料为C18填料。
进一步地，所述柱层析采用干法上样；
进一步地，所述干法上样是将样品或样品溶液与柱填料混合后上样，采用样品溶液与柱填料混合时，将溶剂移除后再上样，干法上样中柱填料的质量用量为样品质量的1～1.5倍。
进一步地，所述沙棘浸膏是通过乙醇提取沙棘得到。
进一步地，所述沙棘为沙棘果渣。
本发明通过实验验证了本发明沙棘三萜酸提取物可抑制α-葡萄糖苷酶的活性，效果优于阿卡波糖，可用于制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类产品，也可用于制备预防和/或治疗以α-葡萄糖苷酶为靶点的疾病的产品，如治疗糖耐量受损、糖尿病、高血压、肥胖症、慢性乙肝、艾滋病、肿瘤等疾病的产品。
糖耐量受损即糖尿病前期，主要包括空腹血糖受损(impaired fasting glucose,IFG)和糖耐量减低(impaired glucose tolerance,IGT)。本发明沙棘三萜酸提取物可有效改善糖调节受损，预防和/或治疗糖耐量受损和/或糖尿病，同时也可预防或改善糖尿病并发症，可用于制备相关产品。
本发明的有益效果是：
(1)本发明前处理方法简单快捷，仅通过热水溶解、过滤的前处理步骤就可得到三萜酸含量大于40％的粗提取物，且回收率高，大于93％；未使用有害的有机溶剂，经济环保。
(2)本发明前处理方法得到的粗提取物经C18填料富集后，三萜酸含量高达98％，可高效得到高品质的沙棘三萜酸提取物，且填料对样品死吸附较少，并可反复利用，降低了柱填料使用成本。
(3)本发明通过粗提取、柱层析梯度洗脱，可以从废弃的沙棘果渣中提取出多种不同的沙棘三萜酸提取物，通过试验验证了其都可抑制α-葡萄糖苷酶的活性，效果优于阿卡波糖，可用于制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类产品，也可用于制备预防和/或治疗以α-葡萄糖苷酶为靶点的疾病的产品，如治疗糖耐量受损、糖尿病、高血压、肥胖症、慢性乙肝、艾滋病、肿瘤等疾病的产品，实现了废物利用，变废为宝。
(4)本发明提取方法步骤简单，简便快捷，原料利用率高，可有效降低沙棘三萜酸有关产品的成本，值得推广。
附图说明
图1为齐墩果酸标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中三萜酸的含量测定均采用常规的香草醛-冰醋酸法：
对照品溶液制备：
精密称取齐墩果酸对照品1.0mg置于5mL容量瓶中，无水乙醇溶解并定容至刻度，配制置成0.2mg/mL的溶液备用。
分别吸取齐墩果酸对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL置于10mL试管中，置于沸水浴挥干，加入1.6mL高氯酸，0.4mL 5％香草醛-冰醋酸溶液，放置于70℃水浴15min，冷却至室温，然后再加入冰醋酸溶液，迅速混匀。以空白对照调零，使用BioTek酶标仪，在547nm处检测。以齐墩果酸的浓度(mg/mL)作为横坐标，吸光度值(OD)作为纵坐标，建立相应的标准曲线。
2、标准曲线的绘制
标准曲线见图1：以对照品的浓度(mg/mL)为横坐标，吸光值(OD)为纵坐标，作线性方程进行线性回归分析Y＝2.8358X-0.019，R2＝0.9988。
实施例1
1、浸膏的提取：
将干燥的沙棘果渣粉碎后用95％乙醇溶液热回流提取(温度70℃、提取时间1.5h/次，提取三次、料液比1:12g:mL)，移除溶剂，冷冻保存。
2、浸膏的初处理：
(1)称取含有部分水分的沙棘浸膏30.9g(含水率17.83％，含三萜酸2.6g)，加水100mL，加热至浸膏完全溶解(约65℃左右)。
(2)静置沉淀，过滤分离得到滤渣。
(3)将滤渣在自然条件下进行干燥后得到沙棘三萜酸粗提物，用香草醛-冰醋酸法测定其三萜含量：粗提物质量为6.2g，三萜含量达41.3％，三萜回收率为98％。
3、C18填料富集三萜酸：
(1)取一定量甲醇将沙棘三萜酸粗提物溶解并过滤。
(2)将步骤(1)过滤后的溶液用少量C18填料进行拌样(填料：样品质量比为1:1～1:1.5)，并旋干溶剂。
(3)取一定量的C18填料(YMC C18规格：ODS-A S-50um 12nm)装柱(上样体积：未上样体积≥1:3)，上样前用20％的甲醇冲柱。
(4)上样后在填料顶部加塞棉花，防止填料飞溅。
(5)依次用20％甲醇水溶液(v/v)、60％甲醇水溶液(v/v)、80％甲醇水溶液(v/v)、纯甲醇冲柱，每个浓度的甲醇水溶液的冲柱体积为2～3个柱体积，纯甲醇部分共冲洗8个柱体积。
(6)纯甲醇冲柱时，可看出柱中存在三个颜色不同的条带，分别按照被洗脱出的先后顺序收集前两个色带为100％-1、100％-2。
(7)最后用10％的甲醇-氯仿溶液(v/v)进行洗脱，将吸附物质冲干净即可。
(8)再用纯甲醇替换柱中的氯仿，最后将填料保存在甲醇溶液中即可。
(9)将收集到的不同浓度的样品干燥后测定各个提取物三萜含量：
20％甲醇洗脱部分三萜含量为4.34％；
40％、60％甲醇洗脱部分三萜含量分别为17.61％、13.50％；
80％甲醇洗脱部位三萜含量为63.24％；
100％-1洗脱部分三萜含量为93.23％；
100％-2(红色色带)洗脱部分三萜含量为10.18％；
氯仿甲醇洗脱部分三萜含量为27.46％。
可见，100％-1得到的提取物中三萜酸含量最高，其质量为1.848g，三萜部位回收率为67.3％，该部分即为本发明方法提取得到的高含量沙棘三萜酸提取物。
实施例2
本实施例实施方式同实施例1，区别在于浸膏质量为2050g，最终得到100％-1的提取物120.3g(三萜含量为90％，回收率为62.86％)，说明本发明提取方法放大后实施提取效果仍然很好。
对比例1
称取样品30.5g，加水100mL在90℃中水浴1.5h。冷却后加入无水乙醇，使乙醇浓度为50％。4℃下静置2h。离心分离，上清再加入无水乙醇使乙醇浓度达到60％，静置2h，沉淀部分干燥后测定三萜含量进行对比。沉淀部位总三萜含量为46.96％，回收率86.20％。
对比例为水提醇沉法提取样品中的三萜酸，与实施例中的直接用水沉淀进行处理进行比较，对比例的操作更复杂，三萜酸回收率较低。实施例具有更环保、操作简洁、成本较低等优点。
试验例1
1、试剂的配制
(1)甲液的配置：NaH2PO4·2H2O称取15.603g，定容至500mL，4℃，棕色瓶保存，备用。
(2)乙液的配置：Na2HPO4·12H2O称取35.822g，定容至500mL，4℃，棕色瓶保存，备用。
(3)0.1M磷酸缓冲液的配置：量取甲液51mL，乙液49mL，加入100mL水，混匀，得pH值6.8的磷酸缓冲液，4℃，棕色瓶保存，备用。
(4)酵母α-葡萄糖苷酶：将100U/ml酶原液用磷酸缓冲液(pH 6.8)稀释为20U/mL的酶溶液，冷冻备用，使用前用磷酸缓冲液(pH 6.8)稀释为1U/mL，备用。
(5)底物pNPG配制：精密称取0.3766g pNPG，加入适量的磷酸钠缓冲液中溶解，再定容至50mL，配制成25mmol/L母液，使用前用磷酸钠缓冲液配制成0.5mmol/L，备用。
(6)阿卡波糖抑制剂配制：精密称取13.9mg阿卡波糖，用DMSO定容至1mL，配制成13.9mg/mL，备用。
(7)0.1mol/L的Na2CO3配制：称取1.06g Na2CO3于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL，4℃下保存，备用。
2、抑制剂的制备
精密称取10mg沙棘三萜酸提取物至1mL容量瓶中，用少量DMSO溶解后定容至刻度，并用DMSO稀释4倍浓度为2.5mg/mL作为母液，需要使用时再稀释至适当的浓度，即得系列不同浓度沙棘三萜酸提取物的抑制剂。
3、沙棘三萜酸提取物对α-葡萄糖苷酶的活性抑制效果实验
分别测定实施例1中提取到的不同三萜酸含量的提取物对α-糖苷酶活性的抑制作用，测定方法为本领域内常规的测定对α-糖苷酶活性的抑制效果的方法，如下：
试验过程：在96孔板上按表1所示步骤进行试验，每组3个平行，将待测试剂、磷酸缓冲液和酶溶液混合均匀，在恒温振荡器中37℃保温10min，结束后，取出，加入50μL0.5mmol/L pNPG溶液，充分混匀，于37℃水浴反应20min，结束后加入50μL 0.1mol/L的Na2CO3溶液中止反应，在405nm波长下测定吸光值，根据公式便可计算出各样品α-葡萄糖苷酶的抑制率及IC 50值。
公式:
Figure BDA0002617454750000081
其中，Ac为空白组吸光值，AB为对照组吸光值，As为样品组吸光值，ASB为样品空白组吸光值。
计算IC50值，测定结果见表1。
表1试验步骤及方法(单位：μL)
Figure BDA0002617454750000082
(酶溶液按原方法稀释完再稀释一半，浓度为0.5U/mL)
表2
Figure BDA0002617454750000083
阿卡波糖为一种α-葡萄糖苷酶抑制剂，可抑制各种α-葡萄糖苷酶如麦芽糖酶、异麦芽糖酶、葡萄糖淀粉酶及蔗糖酶的活性，使淀粉分解成寡糖如麦芽糖(双糖)、麦芽三糖及糊精(低聚糖)进而分解成葡萄糖的速度减慢，使蔗糖分解成葡萄糖和果糖的速度减慢，因此造成肠道葡萄糖的吸收减缓，从而缓解餐后高血糖，达到降低血糖的作用。长期服用，可降低空腹血糖和糖化血红蛋白的浓度。
从上述实验结果可以看出，通过本发明提取方法的不同洗脱剂得到的不同洗脱部位的沙棘三萜酸提取物，均能有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性，且效果均优于阿卡波糖。其中，甲醇洗脱得到的第一个色带100％-1的提取物抑制作用最强，对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度远低于阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度，效果显著，可用于制备α-葡萄糖苷酶抑制剂，也可用于制备治疗以α-葡萄糖苷酶为靶点的疾病的药物，如治疗糖耐量受损、糖尿病、高血压、肥胖症、慢性乙肝、艾滋病、肿瘤等疾病的药物。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，包括下列内容：将沙棘浸膏与水混合，加热至浸膏完全溶解，静置沉淀，固液分离得固形物。
2.根据权利要求1所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，加热至浸膏完全溶解的温度为50～80℃，优选60～70℃，更优选65℃。
3.根据权利要求1所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，沙棘浸膏：水的料液比为1g：1～6mL；进一步为1g：2～5mL；更进一步为1g：3～4mL。
4.根据权利要求1～3任一项所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，将固形物进行柱层析，以体积分数为10～90％的甲醇水溶液、甲醇为流动相，以流动相中甲醇浓度依次增大的顺序进行洗脱；
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：10～30％甲醇水溶液，50～70％甲醇水溶液，70～90％甲醇水溶液，甲醇；其中，甲醇洗脱时呈现2个以上的色带，至少单独收集第一个色带的洗脱液；
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：20％甲醇水溶液，60％甲醇水溶液，80％甲醇水溶液，甲醇；
更进一步地，每个浓度的甲醇水溶液的用量为2～3个柱体积，甲醇用量为6～8个柱体积。
5.根据权利要求1～3任一项所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，将固形物进行柱层析，以体积分数为10～90％的甲醇水溶液为流动相，以流动相中甲醇浓度依次增大的顺序进行洗脱；
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：10～30％甲醇水溶液，50～70％甲醇水溶液，70～90％甲醇水溶液；其中，至少单独收集70～90％甲醇水溶液的洗脱液；
进一步地，所述柱层析依次采用如下洗脱剂：20％甲醇水溶液，60％甲醇水溶液，80％甲醇水溶液。
6.根据权利要求5所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，每个浓度的甲醇水溶液的用量为2～3个柱体积。
7.根据权利要求4或5所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，所述柱层析的柱填料为C18填料。
8.根据权利要求4或5所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，所述柱层析采用干法上样；
进一步地，所述干法上样是将样品或样品溶液与柱填料混合后上样，采用样品溶液与柱填料混合时，将溶剂移除后再上样，干法上样中柱填料的质量用量为样品质量的1～1.5倍。
9.根据权利要求1所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，所述沙棘浸膏是通过乙醇提取沙棘得到。
10.根据权利要求9所述的提取沙棘中三萜酸的方法，其特征在于，所述沙棘为沙棘果渣。
CN202010773268.4A 2020-08-04 2020-08-04 高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法 Active CN111789873B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010773268.4A CN111789873B (zh) 2020-08-04 2020-08-04 高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010773268.4A CN111789873B (zh) 2020-08-04 2020-08-04 高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111789873A true CN111789873A (zh) 2020-10-20
CN111789873B CN111789873B (zh) 2022-05-27

Family

ID=72827629

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010773268.4A Active CN111789873B (zh) 2020-08-04 2020-08-04 高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111789873B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113325097A (zh) * 2021-05-13 2021-08-31 中国科学院西北高原生物研究所 从沙棘果渣中检测多个同分异构体化合物的方法
CN113336820A (zh) * 2021-05-13 2021-09-03 中国科学院西北高原生物研究所 从沙棘果渣中分离制备多个同分异构体化合物的方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1640885A (zh) * 2004-01-08 2005-07-20 中国科学院上海药物研究所 一种枇杷叶总三萜酸及其制备方法和用途
CN101974059A (zh) * 2010-09-10 2011-02-16 武汉巨惠绿色产业发展有限公司 一种齐墩果酸结构类似物的制备及其半合成齐墩果酸的方法
CN103417588A (zh) * 2013-08-23 2013-12-04 中国科学院新疆理化技术研究所 一种中亚沙棘有效部位的制备方法
CN104546875A (zh) * 2013-10-09 2015-04-29 上海医药工业研究院 三萜皂苷衍生物及其医药用途
CN106146449A (zh) * 2016-07-06 2016-11-23 贵州大学 沙棘果渣中异鼠李素的制备及其应用方法
CN109111496A (zh) * 2018-10-23 2019-01-01 青海清华博众生物技术有限公司 沙棘中三萜酸的提取纯化方法和三萜酸及三萜皂苷和应用
CN110279727A (zh) * 2019-06-21 2019-09-27 中国科学院西北高原生物研究所 一种沙棘三萜酸提取物及其制备方法
CN110368391A (zh) * 2019-06-21 2019-10-25 中国科学院西北高原生物研究所 三萜化合物在制备降血糖相关产品中的用途
CN110407906A (zh) * 2019-06-21 2019-11-05 中国科学院西北高原生物研究所 从沙棘提取物中分离和制备三萜化合物的方法
CN110441410A (zh) * 2019-06-21 2019-11-12 中国科学院西北高原生物研究所 沙棘提取物中化合物的色谱分析检测方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1640885A (zh) * 2004-01-08 2005-07-20 中国科学院上海药物研究所 一种枇杷叶总三萜酸及其制备方法和用途
CN101974059A (zh) * 2010-09-10 2011-02-16 武汉巨惠绿色产业发展有限公司 一种齐墩果酸结构类似物的制备及其半合成齐墩果酸的方法
CN103417588A (zh) * 2013-08-23 2013-12-04 中国科学院新疆理化技术研究所 一种中亚沙棘有效部位的制备方法
CN104546875A (zh) * 2013-10-09 2015-04-29 上海医药工业研究院 三萜皂苷衍生物及其医药用途
CN106146449A (zh) * 2016-07-06 2016-11-23 贵州大学 沙棘果渣中异鼠李素的制备及其应用方法
CN109111496A (zh) * 2018-10-23 2019-01-01 青海清华博众生物技术有限公司 沙棘中三萜酸的提取纯化方法和三萜酸及三萜皂苷和应用
CN110279727A (zh) * 2019-06-21 2019-09-27 中国科学院西北高原生物研究所 一种沙棘三萜酸提取物及其制备方法
CN110368391A (zh) * 2019-06-21 2019-10-25 中国科学院西北高原生物研究所 三萜化合物在制备降血糖相关产品中的用途
CN110407906A (zh) * 2019-06-21 2019-11-05 中国科学院西北高原生物研究所 从沙棘提取物中分离和制备三萜化合物的方法
CN110441410A (zh) * 2019-06-21 2019-11-12 中国科学院西北高原生物研究所 沙棘提取物中化合物的色谱分析检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KUKIN, T. P，等: "Bioactive Components of Sea Buckthorn Hippophae rhamnoides L. Foliage", 《RUSSIAN JOURNAL OF BIOORGANIC CHEMISTRY》 *
党权，等: "沙棘果实化学成分的分离与鉴定", 《沈阳药科大学学报》 *
周浩楠: "沙棘化学成分及药理作用的研究进展", 《华西药学杂志》 *
张小民: "沙棘叶三萜酸粗提取降血糖活性实验研究", 《山西大学硕士学位论文》 *
郝鹏飞，等: "《天然药物化学》", 31 July 2014, 吉林大学出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113325097A (zh) * 2021-05-13 2021-08-31 中国科学院西北高原生物研究所 从沙棘果渣中检测多个同分异构体化合物的方法
CN113336820A (zh) * 2021-05-13 2021-09-03 中国科学院西北高原生物研究所 从沙棘果渣中分离制备多个同分异构体化合物的方法
CN113336820B (zh) * 2021-05-13 2023-10-13 中国科学院西北高原生物研究所 从沙棘果渣中分离制备多个同分异构体化合物的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111789873B (zh) 2022-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111789873B (zh) 高含量沙棘三萜酸提取物的提取方法
Zhou et al. Separation and purification of α-glucosidase inhibitors from Polygonatum odoratum by stepwise high-speed counter-current chromatography combined with Sephadex LH-20 chromatography target-guided by ultrafiltration–HPLC screening
Jia et al. α-Glucosidase inhibitory activity and structural characterization of polysaccharide fraction from Rhynchosia minima root
Yang et al. A more ecological and efficient approach for producing diosgenin from Dioscorea zingiberensis tubers via pressurized biphase acid hydrolysis
CN111349135A (zh) 一种绞股蓝皂苷xlix的提取方法和治疗糖尿病和高血脂症的药物
Luo et al. Study on enhanced extraction and seasonal variation of secondary metabolites in Eucommia ulmoides leaves using deep eutectic solvents
CN102925497A (zh) 一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法
CN109694366B (zh) 一种分离提纯甘木通有效成分的方法
CN111773257B (zh) 沙棘提取物及其用途
CN101991578A (zh) 积雪草酸与羟基积雪草酸在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用
CN100435810C (zh) 一种山茱萸提取物及其制备工艺
CN100333753C (zh) 具有抗肿瘤作用的植物总生物碱提取物的提取工艺及制剂
CN101919901B (zh) 皂角总苷元在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用
CN101991567A (zh) 从银杏叶中提取的三种双黄酮单体成分在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用
AU2007357043B2 (en) Pharmaceutical composition for regulating blood sugar and fat, preparation and use thereof
CN114891058B (zh) 胡黄连葫芦烷型皂苷提取物及其在制备治疗便秘药物中的应用
CN103845396B (zh) 山核桃甾醇提取物及其制备方法和用途
CN111759869A (zh) 沙棘提取物和多步萃取的提取方法及其用途
CN106822071B (zh) 一种用于治疗冠心病、高脂血症的中药有效部位、制备方法及从中分离有效成分的方法
Rangari et al. 4-Hydroxyisoleucine: A potential antidiabetic agent from Trigonella foenum-graecum
CN103110680A (zh) 一种短葶飞蓬总酚酸的制备方法
CN105193824A (zh) 一种灵芝三萜酸活性部位及其制备方法和应用
CN114456191B (zh) 山药地上部分生育酚衍生物的提取方法和应用
CN112778323A (zh) 一种从光果甘草渣制备光甘草定和甘草多糖的方法
Zhang et al. Hipponorterpenes A and B, two new 14-noreudesmane-type sesquiterpenoids from the juice of Hippophae rhamnoides

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230817

Address after: Room 2-6151, Building A, No. 6 Huafeng Road, Huaming High tech Industrial Zone, Dongli District, Tianjin, 300000

Patentee after: Zhongke Aijia (Tianjin) Medical Food Co.,Ltd.

Address before: 810008 No. 59 Xiguan Street, Xining, Qinghai

Patentee before: Northwest Institute of Plateau Biology, Chinese Academy of Sciences

TR01 Transfer of patent right