CN114456191B - 山药地上部分生育酚衍生物的提取方法和应用 - Google Patents

山药地上部分生育酚衍生物的提取方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种山药地上部分生育酚衍生物的提取方法和应用，该方法将山药地上部分粗粉用乙醇渗漉提取并浓缩，提取物用有机溶剂萃取，然后经大孔吸附树脂、硅胶、葡聚糖糖凝胶等柱层析分离得到五种生育酚衍生物。本发明从山药地上部分中制备得到的五种生育酚衍生物对α‑葡萄糖苷酶均有显著的抑制活性，在相同条件下均优于降血糖药阿卡波糖的活性。

Description

山药地上部分生育酚衍生物的提取方法和应用
技术领域
本发明属于山药地上部分有效成分的分离及应用技术领域，具体涉及一种山药地上部分生育酚衍生物的提取方法及应用。
背景技术
由于人民生活水平的提高、饮食结构的改变以及少动多坐的生活方式等诸多因素，全球糖尿病发病率增长迅速，糖尿病已经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病。此外，糖尿病是心血管疾病、失明、肾衰竭、中风和四肢截肢的主要原因。我国糖尿病的患病率为11.6％，远远超过世界平均水平，其中约90％的糖尿病患者被诊断为II型糖尿病。糖尿病的发病过程中最先出现的症状往往是餐后高血糖，即糖尿病的早期征兆，特别是II型糖尿病病人，餐后高血糖不仅极易诱发各种并发症，还会极大地提高糖尿病的死亡率。所以，降低餐后血糖是预防糖尿病、减少并发症和降低死亡率的重要措施之一。α-葡萄糖苷酶是碳水化合物消化过程的一种关键酶，能催化膳食碳水化合物释放葡萄糖，从而提高血糖水平，它是控制餐后血糖的主要靶酶之一。抑制α-葡萄糖苷酶的活性就能延缓食物中碳水化合物的分解，从而减少葡萄糖的摄入，达到抑制餐后血糖升高的目的，α-葡萄糖苷酶抑制剂的研发对II型糖尿病的治疗有重要意义。目前临床上的此类药物有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇，均存在胃肠道副作用。现有的α-葡萄糖苷酶抑制剂种类较少，并伴有肠道副作用，因此人们仍不断致力于开发新型α-葡萄糖苷酶抑制剂。
山药为薯蓣科薯蓣(Disocorea opposita Thunb.)的干燥根茎，具有补脾养肺，固肾益精之功效，临床上广泛用于治疗消渴症、慢性腹泻和虚劳咳嗽等症状，是我国传统的药食同源中药之一，自古以河南焦作(古怀庆府)所产最为地道，故称“怀山药”，为著名的“四大怀药”之一。2006年河南省武陟县获批山药GAP种植基地，解决了野生山药资源短缺，资源可持续利用发展等问题。山药以地下根茎入药，地上部分常作为废弃物被遗弃，导致资源的极大浪费。目前对于山药的研究主要集中于地下根茎(入药部位)的研究，药理研究显示其具有降血糖、降血脂、抗氧化和抗肿瘤等活性。然而对于山药地上部分的研究非常少，造成资源的巨大浪费，从山药地上部分挖掘天然α-葡萄糖苷酶抑制剂具有重要的意义。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供了一种山药地上部分生育酚衍生物的提取方法和应用，该方法将山药地上部分粗粉用乙醇渗漉提取并浓缩，提取物用有机溶剂萃取，然后经大孔吸附树脂、硅胶、葡聚糖糖凝胶柱层析或制备液相色谱仪分离得到山药地上部分生育酚衍生物，分离提取的五种生育酚衍生物对α-葡萄糖苷酶均具有显著的抑制作用。
本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，山药地上部分生育酚衍生物的提取方法，其特征在于具体步骤为：
步骤S1：将阴干的山药地上部分粉碎后用体积分数90％-95％乙醇渗漉提取，合并提取液，减压浓缩得到山药地上部分乙醇提取物，将该山药地上部分乙醇提取物悬浮于蒸馏水中，用石油醚萃取，收集石油醚萃取液，并减压浓缩得到石油醚萃取物；
步骤S2：将步骤S1得到的石油醚萃取物经大孔吸附树脂柱层析，依次用体积分数80％和90％乙醇洗脱，收集体积分数90％乙醇洗脱液减压浓缩得到90％乙醇洗脱产物，将90％乙醇洗脱产物经常压硅胶柱色谱分离，以体积比为50:1、15:1和10:1的石油醚-丙酮溶剂系统依次进行洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到初始目标组分Fr.1-Fr.3，将初始目标组分Fr.3继续经常压硅胶柱色谱分离，以体积比为3.5:1、2:1、1:1和1:2的环己烷-二氯甲烷溶剂系统依次进行洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到中间目标组分Fr.3A-Fr.3D；
步骤S3：将步骤S2得到的中间目标组分Fr.3C经葡聚糖凝胶柱色谱和制备液相色谱仪Pre-HPLC纯化得到化合物1，其中葡聚糖凝胶柱色谱的洗脱液为体积比为1:1的二氯甲烷-甲醇溶剂系统，制备液相色谱仪Pre-HPLC的流动相为体积比为95:5的乙腈-水溶剂系统，该化合物1的结构式为
Figure GDA0004104653900000021
步骤S4：将步骤S2得到的中间目标组分Fr.3D经常压硅胶柱色谱分离，以体积比为200:1、100:1、70:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1和15:1的石油醚-丙酮溶剂系统依次进行洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到中间目标组分Fr.3Da-Fr.3Di，将中间目标组分Fr.3Db经制备液相色谱仪Pre-HPLC分离，以乙腈为流动相得到化合物2和化合物3，其中化合物2的结构式为
Figure GDA0004104653900000022
化合物3的结构式为
Figure GDA0004104653900000031
将中间目标组分Fr.3Dc经制备液相色谱仪Pre-HPLC分离，以体积比为96:4的乙腈-水溶剂系统为流动相得到化合物4，该化合物4的结构式为
Figure GDA0004104653900000032
将中间目标组分Fr.3Dh经葡聚糖凝胶柱色谱和制备液相色谱仪Pre-HPLC纯化得到化合物5，其中葡聚糖凝胶柱色谱的洗脱液为体积比为1:1的二氯甲烷-甲醇溶剂系统，制备液相色谱仪Pre-HPLC的流动相为乙腈，该化合物5的结构式为
Figure GDA0004104653900000033
进一步优选，步骤S2中所述大孔吸附树脂为Diaion HP-20型大孔吸附树脂；步骤S3和S4中所述葡聚糖凝胶均为Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶；步骤S3和S4中所述制备液相色谱仪Pre-HPLC所用色谱柱均为YMC ODS-A色谱柱。
本发明所述的山药地上部分生育酚衍生物在制备降血糖药物或辅助降血糖保健品中的应用。
本发明所述的山药地上部分生育酚衍生物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物中的应用。
本发明通过体外α-葡萄糖苷酶抑制活性研究发现山药地上部分提取的五种生育酚衍生物对α-葡萄糖苷酶均有显著的抑制作用，其IC50分别为8.46±0.92μM、8.12±0.72μM、10.63±0.45μM、6.06±0.03μM和6.67±0.90μM，明显强于阳性对照药阿卡波糖的活性(IC50为149.33±7.48μM)，并且对α-葡萄糖苷酶的抑制率均呈剂量依赖性。
附图说明
图1为实施例中山药地上部分生育酚衍生物对α-葡萄糖苷酶抑制率随药物浓度的变化图，其中1-化合物1，2-化合物2，3-化合物3，4-化合物4，5-化合物5。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
化合物1的制备
取阴干的山药地上部分17Kg，粉碎后用体积分数95％乙醇渗漉提取，合并提取液，减压浓缩得到山药地上部分乙醇提取物1.97Kg，将该山药地上部分乙醇提取物悬浮于2倍量的蒸馏水中，用6倍量石油醚萃取，收集石油醚萃取液，并减压浓缩得到石油醚萃取物544.8g。将石油醚萃取物经Diaion HP-20型大孔吸附树脂柱层析，依次用体积分数80％和90％乙醇洗脱，收集体积分数90％乙醇洗脱液减压浓缩得到体积分数90％乙醇洗脱产物223.1g；将体积分数90％乙醇洗脱产物经常压硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮(体积比为50:1、15:1和10:1)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到3个组分(Fr.1-Fr.3)；将组分Fr.3继续经常压硅胶柱色谱分离，以环己烷-二氯甲烷(体积比为3.5:1、2:1、1:1和1:2)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到4个组分(Fr.3A-Fr.3D)；Fr.3C经SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱色谱(体积比为1:1的二氯甲烷-甲醇溶剂系统洗脱)和制备液相色谱仪Pre-HPLC(流动相：体积比为95:5的乙腈-水溶剂系统)纯化得到化合物1(5.5mg)，该化合物1的结构式为：
Figure GDA0004104653900000041
化合物1的波谱数据：α-tocospirosA(1)：ESIMS m/z:485[M+Na+]；1H NMR(400MHz,CDCl3):δH4.73(1H,s,4-OH),2.43(1H,dt,J＝12.4,7.1Hz,Hβ-7),2.02(3H,s,H3-3a),1.91(1H,dt,J＝11.5,7.1Hz,Hα-8),1.84(3H,s,H3-6a),1.83(3H,s,H3-5a),1.79(1H,dt,J＝12.4,7.1Hz,Hα-7),1.70(1H,dt,J＝11.5,7.1Hz,Hβ-8),1.61(2H,dd,J＝9.0,6.9Hz,H2-10),1.05(3H,s,H3-9a),0.86(6H,d,J＝6.7Hz,H3-21aand H3-22)0.85(3H,d,J＝6.7Hz,H3-13a),0.84(3H,d,J＝6.7Hz,H3-17a).13C NMR(100MHz,CDCl3)δC207.3(C-3),205.1(C-1),163.2(C-5),139.5(C-6),92.3(C-2),89.2(C-4),87.2(C-9),41.6(C-10),39.5(C-20),37.7(C-12),37.63(C-14),37.62(C-16),37.4(C-18),36.3(C-8),33.0(C-13),32.95(C-7),32.9(C-17),28.1(C-21),25.6(C-9a),25.0(C-15),24.95(C-3a),24.6(C-19),22.9(C-22),22.8(C-21a),22.6(C-11),19.9(C-13a),19.8(C-17a),12.0(C-5a),8.9(C-6a)。
实施例2
化合物2和化合物3的制备
取阴干的山药地上部分17Kg，粉碎后用体积分数95％乙醇渗漉提取，合并提取液，减压浓缩得到山药地上部分乙醇提取物1.97Kg，将该山药地上部分乙醇提取物悬浮于2倍量的蒸馏水中，用6倍量石油醚萃取，收集石油醚萃取液，并减压浓缩得到石油醚萃取物544.8g。将石油醚萃取物经Diaion HP-20型大孔吸附树脂柱层析，依次用体积分数80％和90％乙醇洗脱，收集体积分数90％乙醇洗脱液减压浓缩得到体积分数90％乙醇洗脱产物223.1g；将体积分数90％乙醇洗脱产物经常压硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮(体积比为50:1、15:1和10:1)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到3个组分(Fr.1-Fr.3)；将组分Fr.3继续经常压硅胶柱色谱分离，以环己烷-二氯甲烷(体积比为3.5:1、2:1、1:1和1:2)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到4个组分(Fr.3A-Fr.3D)；Fr.3D经常压硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮(体积比为200:1、100:1、70:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1和15:1)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到9个组分(Fr.3Da-Fr.3Di)；Fr.3Db经制备液相色谱仪Pre-HPLC分离(乙腈为流动相)得到化合物2(6.1mg)和化合物3(4.9mg)，其中化合物2的结构式为：
Figure GDA0004104653900000051
化合物3的结构式为：
Figure GDA0004104653900000052
化合物2的波谱数据：5-formyl-γ-tocopherol(2)：ESIMS m/z:467[M+Na+]；1HNMR(400MHz,CDCl3):δH 12.11(1H,s,6-OH),10.20(1H,s,H-5a),3.03(2H,t,J＝6.8Hz,H2-4),1.83(2H,m,H2-3),2.17(3H,s,H3-7a),2.15(3H,s,H3-8a),1.26(3H,s,H3-2a),0.86(6H,d,J＝6.6Hz,H3-22a and H3-23),0.85(3H,d,J＝6.6Hz,H3-14a),0.84(3H,d,J＝6.6Hz,H3-18a).13C NMR(100MHz,CDCl3)δC 194.0(C-5a),155.8(C-6),144.0(C-9),138.5(C-8),124.2(C-10),117.6(C-7),114.5(C-5),75.2(C-2),39.5(C-11),39.4(C-21),37.5(C-13),37.4(C-15),37.4(C-17),37.3(C-19),32.8(C-14),32.7(C-18),30.8(C-3),28.0(C-22),24.8(C-20),24.5(C-16),23.7(C-2a),22.8(C-22a),22.7(C-23),21.0(C-12),19.8(C-14a),19.7(C-18a),18.4(C-4),13.2(C-8a),11.1(C-7a)。
化合物3的波谱数据：7-formyl-β-tocopherol(3)：ESIMS m/z:467[M+Na+]；1H NMR(400MHz,CDCl3):δH 11.83(1H,s,6-OH),10.29(1H,s,H-7a),2.67(2H,t,J＝6.9Hz,H2-4),1.82(2H,m,H2-3),2.41(3H,s,H3-8a),2.11(3H,s,H3-5a),1.25(3H,s,H3-2a),0.86(6H,d,J＝6.6Hz,H3-22a and H3-23),0.85(3H,d,J＝6.6Hz,H3-14a),0.83(3H,d,J＝6.6Hz,H3-18a).13C NMR(100MHz,CDCl3)δC 195.6(C-7a),154.2(C-6),144.2(C-9),132.3(C-10),125.6(C-8),121.8(C-5),117.0(C-7),75.3(C-2),39.7(C-11),39.5(C-21),37.6(C-13),37.5(C-15),37.5(C-17),37.4(C-19),32.9(C-14),32.8(C-18),31.2(C-3),28.1(C-22),25.0(C-20),24.6(C-16),24.0(C-2a),22.9(C-22a),22.8(C-23),22.0(C-4),21.1(C-12),19.9(C-14a),19.8(C-18a),14.3(C-8a),10.3(C-5a)。
实施例3
化合物4的制备
取阴干的山药地上部分17Kg，粉碎后用体积分数95％乙醇渗漉提取，合并提取液，减压浓缩得到山药地上部分乙醇提取物1.97Kg，将该山药地上部分乙醇提取物悬浮于2倍量的蒸馏水中，用6倍量石油醚萃取，收集石油醚萃取液，并减压浓缩得到石油醚萃取物544.8g。将石油醚萃取物经Diaion HP-20型大孔吸附树脂柱层析，依次用体积分数80％和90％乙醇洗脱，收集体积分数90％乙醇洗脱液减压浓缩得到体积分数90％乙醇洗脱产物223.1g；将体积分数90％乙醇洗脱产物经常压硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮(体积比为50:1、15:1和10:1)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到3个组分(Fr.1-Fr.3)；将组分Fr.3继续经常压硅胶柱色谱分离，以环己烷-二氯甲烷(体积比为3.5:1、2:1、1:1和1:2)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到4个组分(Fr.3A-Fr.3D)；Fr.3D经常压硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮(体积比为200:1、100:1、70:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1和15:1)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到9个组分(Fr.3Da-Fr.3Di)；Fr.3Dc经制备液相色谱仪Pre-HPLC纯化，以体积比为96:4的乙腈-水溶剂系统为流动相得到化合物4(6.5mg)，该化合物4的结构式为：
Figure GDA0004104653900000061
化合物4的波谱数据：(-)-α-tocospirone(4)：ESIMS m/z:485[M+Na+]；1H NMR(400MHz,CDCl3):δH 3.83(1H,s,3-OH),2.064(3H,s,H3-6a),2.058(3H,s,H3-5a),2.03(1H,m,Hb-7),1.94(1H,m,Hb-8),1.70(1H,m,Ha-7),1.66(1H,m,Hb-10),1.62(1H,m,Ha-8),1.59(1H,m,Ha-10),1.37(3H,s,H3-3a),1.33(3H,s,H3-9a),0.86(3H,d,J＝6.7Hz,H3-22),0.85(3H,d,J＝6.7Hz,H3-21a),0.84(3H,d,J＝6.7Hz,H3-13a),0.83(3H,d,J＝6.7Hz,H3-17a).13C NMR(100MHz,CDCl3)δC 201.9(C-4),199.0(C-1),147.1(C-6),142.2(C-5),93.5(C-2),87.2(C-9),81.4(C-3),41.5(C-10),39.5(C-20),37.7(C-12),37.6(C-14),37.5(C-16),37.4(C-18),36.6(C-8),32.94(C-13),32.87(C-17),32.2(C-7),28.1(C-21),25.9(C-9a),25.0(C-15),24.6(C-19),24.4(C-3a),22.9(C-22),22.8(C-21a),22.5(C-11),19.91(C-13a),19.87(C-17a),13.6(C-6a),13.2(C-5a)。
实施例4
化合物5的制备
取阴干的山药地上部分17Kg，粉碎后用体积分数95％乙醇渗漉提取，合并提取液，减压浓缩得到山药地上部分乙醇提取物1.97Kg，将该山药地上部分乙醇提取物悬浮于2倍量的蒸馏水中，用6倍量石油醚萃取，收集石油醚萃取液，并减压浓缩得到石油醚萃取物544.8g。将石油醚萃取物经Diaion HP-20型大孔吸附树脂柱层析，依次用体积分数80％和90％乙醇洗脱，收集体积分数90％乙醇洗脱液减压浓缩得到体积分数90％乙醇洗脱产物223.1g；将体积分数90％乙醇洗脱产物经常压硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮(体积比为50:1、15:1和10:1)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到3个组分(Fr.1-Fr.3)；将组分Fr.3继续经常压硅胶柱色谱分离，以环己烷-二氯甲烷(体积比为3.5:1、2:1、1:1和1:2)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到4个组分(Fr.3A-Fr.3D)；Fr.3D经常压硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮(体积比为200:1、100:1、70:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1和15:1)溶剂系统洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到9个组分(Fr.3Da-Fr.3Di)；Fr.3Dh经Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱(体积比为1:1的二氯甲烷-甲醇溶剂系统洗脱)和制备液相色谱仪Pre-HPLC(流动相：乙腈)纯化得到化合物5(4.5mg)，该化合物5的结构式为：
Figure GDA0004104653900000071
化合物5的波谱数据：α-tocopherylquinone(5)：ESIMS m/z:592[M+Na+]；1H NMR(400MHz,CDCl3):δH 2.54(2H,m,H2-7),2.03(3H,s,H3-3a),2.01(6H,s,H3-5a and H3-6a),1.23(3H,s,H3-9a),0.86(6H,d,J＝6.7Hz,H3-21a and H3-22)0.85(3H,d,J＝6.7Hz,H3-13a),0.84(3H,d,J＝6.7Hz,H3-17a).13C NMR(100MHz,CDCl3)δC 187.9(C-4),187.4(C-1),144.6(C-2),140.7(C-6),140.6(C-5),140.3(C-3),72.8(C-9),42.4(C-10),40.4(C-8),39.5(C-20),37.7(C-12),37.6(C-14),37.6(C-16),37.4(C-18),33.0(C-13),32.9(C-17),28.1(C-21),26.7(C-9a),25.0(C-19),24.6(C-15),22.9(C-22),22.8(C-21a),21.6(C-11),21.5(C-7),19.90(C-13a),19.85(C-17a),12.54(C-6a),12.46(C-5a),12.1(C-3a)。
实施例5
本实施例为上述实施例提取的化合物1-5对α-葡萄糖苷酶的抑制活性测试。
方法：微孔板法。
仪器：酶标仪，恒温培养箱，分析天平，各种型号移液枪。
试剂：α-葡萄糖苷酶、4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷、阿卡波糖、磷酸盐缓冲液和二甲基亚砜、碳酸钠。
测试方法：取96孔板，每孔加入2.0mmol/L的PNPG溶液(PBS溶解)80μL，再分别加入10μL不同浓度样品溶液(DMSO溶解)，以DMSO为空白对照组，每组设3个平行孔，在恒温培养箱中放置10min，在酶标仪405nm下测定背景组吸光度(A值)。然后再加入10μL 1U/mLα-葡萄糖苷酶溶液(PBS溶解)，置于恒温培养箱中，在37℃下恒温孵育30min，加入浓度为0.2mM的Na2CO380μL，405nm下测定试验组吸光度(A值)。抑制率(％)用以下公式计算：
抑制率(％)＝(ΔA空白-ΔA样品)/ΔA空白×100％
ΔA空白为空白组酶与底物反应后A值-背景A值；
ΔA样品为样品组酶与底物反应后A值-背景A值。
化合物1-5对α-葡萄糖苷酶的抑制活性结果如下(表1)：
表1化合物1-5对α-葡萄糖苷酶的抑制活性
Figure GDA0004104653900000081
从表1可以看出，实施例1-4提取的化合物1-5对α-葡萄糖苷酶的抑制活性均强于阳性对照药阿卡波糖的活性，远优于阳性对照药阿卡波糖的活性，其中化合物4的活性最强。
以上显示和描述了本发明的基本原理，主要特征和优点，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围。

Claims (4)

1.山药地上部分生育酚衍生物的提取方法，其特征在于具体步骤为：
步骤S1：将阴干的山药地上部分粉碎后用体积分数90％-95％乙醇渗漉提取，合并提取液，减压浓缩得到山药地上部分乙醇提取物，将该山药地上部分乙醇提取物悬浮于蒸馏水中，用石油醚萃取，收集石油醚萃取液，并减压浓缩得到石油醚萃取物；
步骤S2：将步骤S1得到的石油醚萃取物经大孔吸附树脂柱层析，依次用体积分数80％和90％乙醇洗脱，收集体积分数90％乙醇洗脱液减压浓缩得到90％乙醇洗脱产物，将90％乙醇洗脱产物经常压硅胶柱色谱分离，以体积比为50:1、15:1和10:1的石油醚-丙酮溶剂系统依次进行洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到初始目标组分Fr.1-Fr.3，将初始目标组分Fr.3继续经常压硅胶柱色谱分离，以体积比为3.5:1、2:1、1:1和1:2的环己烷-二氯甲烷溶剂系统依次进行洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到中间目标组分Fr.3A-Fr.3D；
步骤S3：将步骤S2得到的中间目标组分Fr.3C经葡聚糖凝胶柱色谱和制备液相色谱仪Pre-HPLC纯化得到化合物1，其中葡聚糖凝胶柱色谱的洗脱液为体积比为1:1的二氯甲烷-甲醇溶剂系统，制备液相色谱仪Pre-HPLC的流动相为体积比为95:5的乙腈-水溶剂系统，该化合物1的结构式为
Figure FDA0004104653880000011
步骤S4：将步骤S2得到的中间目标组分Fr.3D经常压硅胶柱色谱分离，以体积比为200:1、100:1、70:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1和15:1的石油醚-丙酮溶剂系统依次进行洗脱，经TLC鉴定合并相同组分得到中间目标组分Fr.3Da-Fr.3Di，将中间目标组分Fr.3Db经制备液相色谱仪Pre-HPLC分离，以乙腈为流动相得到化合物2和化合物3，其中化合物2的结构式为
Figure FDA0004104653880000012
化合物3的结构式为
Figure FDA0004104653880000013
将中间目标组分Fr.3Dc经制备液相色谱仪Pre-HPLC分离，以体积比为96:4的乙腈-水溶剂系统为流动相得到化合物4，该化合物4的结构式为
Figure FDA0004104653880000021
将中间目标组分Fr.3Dh经葡聚糖凝胶柱色谱和制备液相色谱仪Pre-HPLC纯化得到化合物5，其中葡聚糖凝胶柱色谱的洗脱液为体积比为1:1的二氯甲烷-甲醇溶剂系统，制备液相色谱仪Pre-HPLC的流动相为乙腈，该化合物5的结构式为
Figure FDA0004104653880000022
2.根据权利要求1所述的山药地上部分生育酚衍生物的提取方法，其特征在于：步骤S2中所述大孔吸附树脂为Diaion HP-20型大孔吸附树脂；步骤S3和S4中所述葡聚糖凝胶均为Sephadex LH-20型葡聚糖凝胶；步骤S3和S4中所述制备液相色谱仪Pre-HPLC所用色谱柱均为YMC ODS-A色谱柱。
3.根据权利要求1或2所述的提取方法制得的山药地上部分生育酚衍生物在制备降血糖药物或辅助降血糖保健品中的应用。
4.根据权利要求1或2所述的提取方法制得的山药地上部分生育酚衍生物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物中的应用。
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