CN111349135A

CN111349135A - 一种绞股蓝皂苷xlix的提取方法和治疗糖尿病和高血脂症的药物

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Publication number: CN111349135A
Application number: CN201811576824.8A
Authority: CN
Inventors: 徐世明; 高海; 彭勇
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-12-23
Filing date: 2018-12-23
Publication date: 2020-06-30

Abstract

本发明一种绞股蓝皂苷XLIX的提取方法和治疗糖尿病和高血脂症的药物，属于医药化工技术领域，提出一种从绞股蓝总皂苷中提取、纯化制备出一种单一活性组分绞股蓝皂苷XLIX的药物；并将提取的股蓝皂苷XLIX制成用于治疗糖尿病和心血管疾病患者的药物，该药物疗效确切，安全无毒副作用。提取股蓝皂苷XLIX的方法是以绞股蓝总皂苷为原料，经柱层析后，回收溶剂，得绞股蓝皂苷XLIX粗品，粗品经甲醇溶解、采用制备型液相色谱法纯化，再反复重结晶得90%以上的绞股蓝皂苷XLIX。治疗糖尿病和高血脂症的药物，由含量为90%以上的绞股蓝皂苷XLIX添加医用辅料制备而成。本发明采用现代化提取纯化技术，提取的绞股蓝皂苷XLIX纯度达到90%以上；绞股蓝皂苷XLIX制成的药物治疗病症包括：一型糖尿病、二型糖尿病和糖尿病肾病。

Description

一种绞股蓝皂苷XLIX的提取方法和治疗糖尿病和高血脂症的药物

技术领域

本发明属于医药化工技术领域，具体地说是一种绞股蓝皂苷XLIX的提取方法和治疗糖尿病和高血脂症的药物。

背景技术

糖尿病一种严重危害人类健康的慢性代谢性疾病，在我国有着很高的患病率。糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体，导致机体胰岛功能减退、胰岛素抵抗，从而引发机体内糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合症。典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。

糖尿病的基本病理特征主要表现为胰岛素分泌不足和分泌缺陷、机体对胰岛素的作用不敏感，临床表现主要有Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病，Ⅰ型糖尿病的主要矛盾的胰岛素的分泌不足，所以外源性补充胰岛素是其主要的治疗方法；Ⅱ型糖尿病早期以胰岛素抵抗为主，随着病程的延长，胰岛素的分泌缺陷逐渐成为主要矛盾。

目前各种降糖药物可分为非促进胰岛素分泌的药物、促胰岛素分泌的药物、胰岛素。非促进胰岛素分泌的常用药物包括双胍类、格列酮类（胰岛素增敏剂）、α-糖苷酶抑制剂等。双胍类目前最常用的就是二甲双胍，主要作用机制在于抑制肝脏葡萄糖的产生和输出，但其最严重的副作用乳酸性酸中毒死亡率很高，目前许多国家已经停用；格列酮类主要有罗格列酮、吡格列酮等，近几年对该类药物增加心血管风险的争议很大，引发了广大糖尿病患者及一些临床医师对罗格列酮应用的担忧。促胰岛素分泌的常用药物包括磺脲类促分泌剂、格列奈类促分泌剂的药物，费用较高，临床使用时间较短，临床疗效和安全性还有待进一步的验证。胰岛素适应症Ⅰ型糖尿病患者、强化治疗的糖尿病患者、Ⅱ型糖尿病患者有急慢性并发症者、各种应急状态（手术、感染、外伤等）的糖尿病患者患者，使用胰岛素肯定比口服药物更容易出现低血糖和体重的增加。

中成药在缓解症状、减轻胰岛素抵抗、改善体质、协同西药更好的发挥降糖作用和防治慢性并发症上有较好综合调理的疗效，在降糖方面还是处于一个辅助的地位，临床中确实有一些中药或方剂有一定的降糖作用，所以糖尿病的治疗应该各取中西医之长，避其之短，合理应用，以求最佳疗效。

绞股蓝皂苷XLIX是绞股蓝中活性最强的组分，在降低和控制血糖的同时还可治疗高血脂症，并对正常血糖无影响，在有效控制血糖的同时可有效抑制肾小球细胞凋亡，改善肾小球功能，对长期服用药物的患者，这些特殊效果弥补了西药严重副作用的弊端。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提出一种绞股蓝皂苷XLIX的提取方法和治疗糖尿病和高血脂症的药物，绞股蓝皂苷XLIX的提取方法是从绞股蓝总皂苷中提取、纯化制备出一种单一活性组分绞股蓝皂苷XLIX的药物；并将提取的股蓝皂苷XLIX制成用于治疗糖尿病和心血管疾病患者的药物，该药物疗效确切，安全无毒副作用。

本发明解决其技术问题的技术方案是：

本发明绞股蓝皂苷XLIX的提取方法是：

以绞股蓝总皂苷为原料，经柱层析后，回收溶剂，得绞股蓝皂苷XLIX粗品，粗品经甲醇溶解、采用制备型液相色谱法纯化，再反复重结晶得90%以上的绞股蓝皂苷XLIX。

本发明绞股蓝皂苷XLIX的提取方法所述的柱层析，其方法是取绞股蓝总皂苷粗品，以甲醇溶解，与100～200目的硅胶混合拌样，挥干甲醇，上100～200目干法硅胶层析柱，以氯仿-甲醇混合溶液，混合溶液比例从8:1→3:1进行梯度洗脱，配合薄层层析检查，以比例为4：1：5的正丁醇-乙酸-水混合溶液的上层液为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，显色，收集合并含绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，回收溶剂后得绞股蓝皂苷XLIX粗品。

本发明绞股蓝皂苷XLIX的提取方法所述的制备型液相色谱法纯化，其方法是取绞股蓝皂苷XLIX粗品，用甲醇溶解成150～250mg/ml溶液，采用制备型高效液相，以粒径为20μm～40μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以10%→90%甲醇水混合溶液为流动相进行洗脱，收集绞股蓝皂苷XLIX组分，浓缩得绞股蓝皂苷XLIX。

本发明绞股蓝皂苷XLIX的提取方法所述的重结晶，其方法是将制备型高效液相色谱法纯化的绞股蓝皂苷XLIX溶解在混合有机溶剂中，反复进行重结晶，直到纯度达到90%以上，在整个纯化过程中要避免光照与高温，采用冷冻干燥。

本发明治疗糖尿病和高血脂症的药物，由含量为90%以上的绞股蓝皂苷XLIX添加医用辅料制备而成，药物中每单位含有绞股蓝皂苷XLIX的剂量为30～360mg；所述的90%以上的绞股蓝皂苷XLIX为本发明绞股蓝皂苷XLIX的提取方法的提取物。

本发明治疗糖尿病和高血脂症的药物，所述的药物可以制备为供临床使用的不同的注射剂和口服制剂。

本发明治疗糖尿病和高血脂症的药物，所述的制剂为供临床使用的不同的注射剂和口服制剂，包括有水针、冻干粉针、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、糖丸剂、散剂、口服溶液剂和糖浆剂。

本发明的有益效果：

1、在现有绞股蓝总皂苷原料药的基础上，经过科学的药理药效基础研究，从总皂苷的136种皂苷中筛选出含量最高及活性最强的组分-绞股蓝皂苷XLIX，并将该化合物降糖降脂的作用机制进行了深入研究，结果表明绞股蓝皂苷XLIX是一种天然的选择性过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）-α激活剂，证明治疗动脉粥样硬化、炎症、心血管疾病以及糖尿病肾病的作用机制是通过PPAR-α-依赖途径，抑制细胞因子诱导的VCAM-1过度表达式和人类内皮细胞的活性而产生的。为开发利用绞股蓝皂甙XLIX治疗多种疾病提供了科学依据。技术方案是采用现代化提取纯化技术，将绞股蓝皂苷XLIX纯度达到90%以上，各项指标符合现行版中国药典的要求和规定。

绞股蓝皂苷XLIX制成的药物治疗病症包括：一型糖尿病、二型糖尿病和糖尿病肾病。由高血脂症引发的心脑血管系统的疾病，如冠心病（冠状动脉粥样硬化导致心绞痛、心肌梗死、猝死）；脑动脉粥样硬化症（导致的脑血栓、脑出血、脑萎缩、痴呆）；肠动脉粥样硬化症（症状为消化不良、肠道张力减低、便秘、腹痛等。血栓形成时，产生的剧烈腹痛、腹胀和发热。肠壁坏死引起的便血、麻痹性肠梗阻以及休克等症状）；肾动脉粥样硬化症（导致的顽固性高血压）；四肢动脉粥样硬化症（导致的下肢发凉、麻木、间歇性跛行等）。

以下通过试验例来进一步阐述本发明提取物的有益效果：

方法：选择糖尿病患者60例，分为两组，30例采用本发明的绞股蓝皂苷XLIX制剂；30例采用绞股蓝总皂甙提取物制剂。比较两组降血糖和降血脂总疗效以及两组治疗前后患者空腹血糖（FBG）和血脂指标变化值。结果：本发明绞股蓝皂苷XLIX制剂总有效率94.11%，原绞股蓝总皂甙提取物制剂总有效率65.0%，前者组总有效率明显高于后者组（P<0.05）；治疗前后检查指标比较，除指标HDL-C治疗后明显升高外，TC、TG、LDL-C治疗后明显降低（P<0.01或P<0.05），同时，前者组TC、TG降低程度明显多于后者组（P<0.05）。60例受试者用药前后血、尿、便常规以及心、肝、肾功能检查未发现异常。

表1 两组血糖血脂总疗效比较

表2 绞股蓝皂苷XLIX制剂组治疗前后检查数值变化比较（X±SD）

表3 绞股蓝总皂甙提取物制剂组治疗前后检查数值变化比较（X±SD）

表4 两组治疗前后检查指标变化值组间比较（X±SD）

FBG: 空腹血糖; TC: 总胆固醇; TG: 甘油三酯; LDL：低密度脂蛋白;HDL: 高密度脂蛋白

由上述研究结果表明，本发明与现有绞股蓝总皂甙制剂技术相比，治疗患者血糖和高血脂效果明显，治愈率显著提高，而且安全，值得临床推广。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明：

实施例1

取绞股蓝总皂苷10kg，以甲醇溶解，与20kg100目的硅胶混合拌样，挥干溶剂，上120kg100目的干法硅胶层析柱，以氯仿-甲醇混合溶液，混合溶液比例从8:1→3:1进行梯度洗脱，配合薄层层析检查，以比例为4：1：5的正丁醇-乙酸-水混合溶液的上层液为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，显色，收集合并含绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，回收溶剂后，得绞股蓝皂苷XLIX粗品。

取绞股蓝皂苷XLIX粗品，以甲醇配制成150mg/ml的溶液，注入制备型高效液相，以粒径为20μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水=70:30为流动相进行洗脱，收集绞股蓝皂苷XLIX组分，浓缩得绞股蓝皂苷XLIX。

取浓缩的绞股蓝皂苷XLIX溶解在甲醇-异丙醇中，反复进行重结晶，整个纯化过程中要避免光照与高温，采用冷冻干燥，直到纯度达到90%以上，收得500g绞股蓝皂苷LIX。

取上述方法提取的绞股蓝皂苷XLIX，用90%以上的绞股蓝皂苷XLIX，加入药用淀粉，分装胶囊，每粒含绞股蓝皂苷XLIX30mg。

实施例2

取绞股蓝总皂苷15kg，以甲醇溶解，与35kg160目的硅胶混合拌样，挥干溶剂，上90kg160目的干法硅胶层析柱，以氯仿-甲醇混合溶液，混合溶液比例从8:1→3:1进行梯度洗脱，配合薄层层析检查，以比例为4：1：5的正丁醇-乙酸-水混合溶液的上层液为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，显色，收集合并含绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，回收溶剂后，得绞股蓝皂苷XLIX粗品。

取绞股蓝皂苷XLIX粗品，以甲醇配制成200mg/ml的溶液，注入制备型高效液相，以粒径为25μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水=70:30混合溶液为流动相进行洗脱，收集绞股蓝皂苷XLIX组分，浓缩得绞股蓝皂苷XLIX。

取浓缩的绞股蓝皂苷XLIX溶解在正丁醇-丙酮-三氯甲烷中，反复进行重结晶，整个纯化过程中要避免光照与高温，采用冷冻干燥，直到纯度达到90%以上，收得750g绞股蓝皂苷XLIX。

取上述方法提取的绞股蓝皂苷XLIX，用90%以上的绞股蓝皂苷XLIX，加入药用糊精，压制成片，每片含绞股蓝皂苷XLIX60mg。

实施例3

取绞股蓝总皂苷10kg，以甲醇溶解，与15kg200目的硅胶混合拌样，挥干溶剂，上80kg200目的干法硅胶层析柱，以氯仿-甲醇混合溶液，混合溶液比例从8:1→3:1进行梯度洗脱，配合薄层层析检查，以比例为4：1：5的正丁醇-乙酸-水混合溶液的上层液为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，显色，收集合并含绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，回收溶剂后，得绞股蓝皂苷XLIX粗品。

取绞股蓝皂苷XLIX粗品，以甲醇配制成250mg/ml的溶液，注入制备型高效液相，以粒径为25μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水=70:30为流动相进行洗脱，收集绞股蓝皂苷XLIX组分，浓缩得绞股蓝皂苷XLIX。

取浓缩的绞股蓝皂苷XLIX溶解在乙酸乙酯-石油醚-甲醇中，反复进行重结晶，整个纯化过程中要避免光照与高温，采用冷冻干燥，直到纯度达到90%以上，收得500g绞股蓝皂苷XLIX。

取上述方法提取的绞股蓝皂苷XLIX，用90%以上的绞股蓝皂苷XLIX，加入药用可溶性淀粉、环拉酸钠，制成颗粒，分装成袋，每袋含绞股蓝皂苷XLIX60mg。

实施例4

取绞股蓝总皂苷20kg，以甲醇溶解，与40kg120目的硅胶混合拌样，挥干溶剂，上100kg120目的干法硅胶层析柱，以氯仿-甲醇混合溶液，混合溶液比例从8:1→3:1进行梯度洗脱，配合薄层层析检查，以比例为4：1：5的正丁醇-乙酸-水混合溶液的上层液为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，显色，收集合并含绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，回收溶剂后，得绞股蓝皂苷XLIX粗品。

取绞股蓝皂苷XLIX粗品，以甲醇配制成160mg/ml的溶液，注入制备型高效液相，以粒径为35μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：水=70:30为流动相进行洗脱，收集绞股蓝皂苷XLIX组分，浓缩得绞股蓝皂苷XLIX。

取浓缩的绞股蓝皂苷XLIX溶解在正丁醇-乙醚中，反复进行重结晶，整个纯化过程中要避免光照与高温，采用冷冻干燥，直到纯度达到90%以上，收得1000g绞股蓝皂苷XLIX。

取上述方法提取的绞股蓝皂苷XLIX，用90%以上的绞股蓝皂苷XLIX，加入药用PEG600，制成滴丸，每丸含绞股蓝皂苷XLIX30mg。

本发明绞股蓝皂苷XLIX的提取方法获取物质的通用名：绞股蓝皂苷 XLIX，英文名：gypenoside XLIX，汉语拼音： Jiaogulan Zaogan XLIX，

中文化学名：19-氧-3β, 20S, 21-三羟基-24-达玛烯-3-O-{[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]

[β-D-吡喃木糖基(1→3)]-α-L-吡喃阿拉伯糖苷}-21-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

英文化学名：19–oxo-3β, 20S, 21-trihydroxydammar-24-ene-3-O-{[α-L-rhamnopyrano-

syl(1→2)][β-D-xylopyranosyl(1→3)]-α-L-arabinopyranoside}-21-O-β-D--glucopyranoside

结构式与分子式

结构式：

分子式：C₅₂H₈₆O₂₁

分子量：1046

绞股蓝皂苷XLIX属达玛烷型四环三萜皂苷。其分子结构特点是分子中C₈位有β构型的角甲基。C₁₃位有β氢，C₁₀位有β醛基，C₁₄位有α甲基，C₁₇位有β侧链，C₂₀位为S构型，苷元的C₃位连有鼠李糖、木糖和阿拉伯糖构成的糖链，C₂₀位连有葡萄糖。

治疗糖尿病和高血脂症的临床有效使用剂量为120mg～360mg/日/人，每日2～3次。七天一个疗程，亦可长期服用，安全无毒副作用。

Claims

1.一种绞股蓝皂苷XLIX的制取方法，其特征是：以绞股蓝总皂苷为原料，经柱层析后，回收溶剂，得绞股蓝皂苷XLIX粗品，粗品经甲醇溶解、采用制备型液相色谱法纯化，再反复重结晶得90%以上的绞股蓝皂苷XLIX。

2.根据权利要求1所述的制取方法，其特征是：所述的柱层析，其方法是取绞股蓝总皂苷粗品，以甲醇溶解，与100～200目的硅胶混合拌样，挥干甲醇，上100～200目干法硅胶层析柱，以氯仿-甲醇混合溶液，混合溶液比例从8:1→3:1进行梯度洗脱，配合薄层层析检查，以比例为4：1：5的正丁醇-乙酸-水混合溶液的上层液为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂，显色，收集合并含绞股蓝皂苷XLIX的洗脱液，回收溶剂后得绞股蓝皂苷XLIX粗品。

3.根据权利要求1所述的制取方法，其特征是：所述的制备型液相色谱法纯化，其方法是取绞股蓝皂苷XLIX粗品，用甲醇溶解成150～250mg/ml溶液，采用制备型高效液相，以粒径为20μm～40μm的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以10%→90%甲醇水混合溶液为流动相进行洗脱，收集绞股蓝皂苷XLIX组分，浓缩得绞股蓝皂苷XLIX。

4.根据权利要求1所述的制取方法，其特征是：法所述的重结晶，其方法是将制备型高效液相色谱法纯化的绞股蓝皂苷XLIX溶解在混合有机溶剂中，反复进行重结晶，直到纯度达到90%以上，在整个纯化过程中要避免光照与高温，采用冷冻干燥。

5.一种治疗糖尿病和高血脂症的药物，其特征是：由含量为90%以上的绞股蓝皂苷XLIX添加医用辅料制备而成，药物中每单位含有绞股蓝皂苷XLIX的剂量为30～360mg；所述的90%以上的绞股蓝皂苷XLIX为本发明绞股蓝皂苷XLIX的提取方法的提取物。

6.根据权利要求5所述的治疗糖尿病和高血脂症的药物，其特征是：所述的药物可以制备为供临床使用的不同的注射剂和口服制剂。

7.根据权利要求6所述的治疗糖尿病和高血脂症的药物，其特征是：所述的制剂为供临床使用的不同的注射剂和口服制剂，包括有水针、冻干粉针、片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、糖丸剂、散剂、口服溶液剂和糖浆剂。