CN111759892A - 一种制附子的炮制工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种制附子的炮制工艺。该炮制工艺包括以下步骤：(1)取姜，加水煎煮，得姜汁；(2)在生附片中加入步骤(1)所得姜汁，闷润6～12小时，蒸制1～3小时，干燥后即得制附子炮制品。在本发明特定的炮制工艺下，配合特定的炮制参数(特别是姜与生附片的用量比例、闷润时间和蒸制时间)，得到了毒性显著降低，且活性成分含量显著提高的制附子炮制品。本发明的炮制工艺简单、耗时较短、适合扩大生产，具有广阔的应用前景。

Description

一种制附子的炮制工艺
技术领域
本发明属于中药饮片炮制领域，具体涉及一种制附子的炮制工艺。
背景技术
附子是毛茛科植物乌头(Aconitum carmichaelii Debx.)的侧根(子根)，始载于《神农本草经》，被誉为“回阳救逆第一品药”，临床药效卓越。附子味辛、甘，大热；有毒。归心、肾、脾经。其具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪的功效。用于亡阳虚脱，肢冷脉微，阳痿，宫冷，心腹冷痛，虚寒吐泻，阴寒水肿，寒湿痹痛。但是，。其性刚烈迅捷，历代医家及本草著作皆言附子“有毒”，用之不当，易出现严重的毒副作用，在临床方面主要表现为明显的心脏毒性和神经毒性，此外在胚胎和肾脏方面也有一定的毒性，故附子临床宜炮制入药。
关于附子炮制工艺，早在宋代就有记载以姜为辅料，《博济方》首先提出了姜制附子的方法：去皮，生切作四块，用生姜半劬，用水一碗同煮附子，汁尽为度，取附子培干为末。明代《本草正》中也提到：“惟姜汁一制颇通，第其以辛助辛，似欠和平，若果直中阴寒等证，欲用其热，此法为良，至若常用，而欲补齐性质，不必用此”，说明古人使用生姜炮制附子的目的是“以热制热”，即借助生姜的辛热之性增强附子补火助阳的功效。
双酯型生物碱(如乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等)是导致附子中毒的主要成分，但同时也是其强心、抗炎和镇痛的主要活性物质。这类成分性质不稳定，在湿热过程中其C8位上的乙酰基易发生水解，得到相应的苯甲酰单酯型生物碱，如苯甲酰乌头碱、苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱等，同时毒性逐渐降低，但药理作用也逐渐减弱。姜制附子也可以利用该方法来促进双酯型生物碱水解，从而达到降毒的目的，其炮制方法较多，如生姜煮汁制、干姜煮汁制、生姜榨汁制、生姜片拌蒸制、干姜片拌蒸制等。
中国专利申请CN107007662A公开了中药附子的三种炮制方法，分别得到了三种附子炮制品：附子煨附片、附子阴附片、附子阳附。通过其炮制方法得到的附子炮制品的毒性比生品降低了很多，特别是通过以下炮制方法得到的附子阴附片：取药材100g，洗漂方法同煨附片，取出，晾干，置容器内，加入15g生姜榨汁，拌匀闷润12h，取出；入木甑内，待锅中水沸，隔水坐锅，110℃连续蒸8h，取出；摊凉至七成干，切成3mm薄片，晾晒至干，即得。该附子阴附片中总生物碱含量为生品的56.25％，酯碱含量为生品的12.89％，乌头碱含量为生品的20.35％。但是，该炮制方法耗时较长，步骤繁琐，所得炮制品毒性也还有待进一步降低。
因此，亟需研究出一种耗时更短、操作简便、每一步骤稳定可控，所得附子炮制品药效更高、毒性更小的炮制工艺。
发明内容
本发明的目的在于提供一种耗时更短、操作更简便的制附子炮制工艺，使所得制附子炮制品药效更高、毒性更小。
本发明提供了一种制附子的炮制工艺，所述炮制工艺包括以下步骤：
(1)取姜，加水煎煮，得姜汁；
(2)在生附片中加入步骤(1)所得姜汁，闷润6～12小时，蒸制1～3小时，干燥后即得制附子炮制品。
进一步地，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的24％～36％。
进一步地，步骤(2)中，所述闷润温度为20～30℃，优选为25～30℃，更优选为23℃。
进一步地，步骤(2)中，所述蒸制温度为105～120℃，优选为110～115℃，更优选为113℃。
进一步地，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的36％，步骤(2)所述闷润时间为9小时，蒸制时间为3小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的30％，步骤(2)所述闷润时间为12小时，蒸制时间为1小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的30％，步骤(2)所述闷润时间为12小时，蒸制时间为3小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的24％，步骤(2)所述闷润时间为6小时，蒸制时间为2小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的33％，步骤(2)所述闷润时间为9小时，蒸制时间为1.7小时。
进一步地，步骤(1)中，所述姜为干姜，优选为干姜饮片。
进一步地，步骤(1)中，所述煎煮的次数为1～3次，优选为2次；所述煎煮的时间为每次0.5～2小时，优选为每次1小时。
进一步地，步骤(1)中，所述姜与水的重量比为1：(5～20)，优选为1：12。
进一步地，步骤(1)中，所述姜汁为浓缩后的姜汁，该浓缩后的姜汁的浓度以原料姜计算为0.10～0.50g/mL，优选为0.33g/mL。
本发明还提供了上述炮制工艺制得的制附子炮制品。
实验结果表明，在本发明特定的炮制方法下，配合特定的炮制参数(特别是姜与生附片的用量比例、闷润时间和蒸制时间)，得到了毒性显著降低，且活性成分含量显著提高的制附子炮制品。本发明的炮制工艺简单、耗时较短、适合扩大生产，具有广阔的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
其中，干姜(姜科植物姜Zingiber o.officinale Rose.的干燥根茎)饮片购自四川新荷花中药饮片有限公司，批号为1901037。生附片购自四川江油附子种植区。乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱对照品均购自成都普菲德生物技术有限公司(批号：17022702、17031401、17011302、150622、141109、17060104)，6-姜辣素对照品购于成都曼斯特生物科技有限公司，批号为MUST-190210。其他试剂均为分析纯。
实施例1：本发明的制附子炮制工艺
(1)制备干姜汁
取干姜饮片，加入12倍重量的蒸馏水，煎煮1h，煎煮2次，合并两次的滤液，浓缩成浓度为0.33g/mL(以原料干姜饮片计)的液体，即得干姜汁。
(2)炮制制附子
取生附片100g，加入步骤(1)所得干姜汁，控制步骤(1)中干姜饮片的用量为生附片重量的33％，然后先在23℃下闷润9小时，再在113℃下蒸制1.7小时，取固体干燥、粉碎，过3号筛，即得制附子炮制品。
实施例2：本发明的制附子炮制工艺
(1)制备干姜汁
取干姜饮片，加入12倍重量的蒸馏水，煎煮1h，煎煮2次，合并两次的滤液，浓缩成浓度为0.33g/mL(以原料干姜饮片计)的液体，即得干姜汁。
(2)炮制制附子
取生附片100g，加入步骤(1)所得干姜汁，控制步骤(1)中干姜饮片的用量为生附片重量的36％，然后先在20℃下闷润9小时，再在111℃下蒸制3小时，取固体干燥、粉碎，过3号筛，即得制附子炮制品。
实施例3：本发明的制附子炮制工艺
(1)制备干姜汁
取干姜饮片，加入12倍重量的蒸馏水，煎煮1h，煎煮2次，合并两次的滤液，浓缩成浓度为0.33g/mL(以原料干姜饮片计)的液体，即得干姜汁。
(2)炮制制附子
取生附片100g，加入步骤(1)所得干姜汁，控制步骤(1)中干姜饮片的用量为生附片重量的30％，然后先在21℃下闷润12小时，再在112℃下蒸制1小时，取固体干燥、粉碎，过3号筛，即得制附子炮制品。
实施例4：本发明的制附子炮制工艺
(1)制备干姜汁
取干姜饮片，加入12倍重量的蒸馏水，煎煮1h，煎煮2次，合并两次的滤液，浓缩成浓度为0.33g/mL(以原料干姜饮片计)的液体，即得干姜汁。
(2)炮制制附子
取生附片100g，加入步骤(1)所得干姜汁，控制步骤(1)中干姜饮片的用量为生附片重量的30％，然后先在24℃下闷润12小时，再在114℃下蒸制3小时，取固体干燥、粉碎，过3号筛，即得制附子炮制品。
实施例5：本发明的制附子炮制工艺
(1)制备干姜汁
取干姜饮片，加入12倍重量的蒸馏水，煎煮1h，煎煮2次，合并两次的滤液，浓缩成浓度为0.33g/mL(以原料干姜饮片计)的液体，即得干姜汁。
(2)炮制制附子
取生附片100g，加入步骤(1)所得干姜汁，控制步骤(1)中干姜饮片的用量为生附片重量的24％，然后先在25℃下闷润6小时，再在115℃下蒸制2小时，取固体干燥、粉碎，过3号筛，即得制附子炮制品。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1：本发明制附子炮制工艺的筛选
1、实验材料
参照实施例1的制备方法，按照表1所示参数分别改变干姜饮片用量(即干姜饮片占生附片重量的比例、闷润时间和/或蒸制时间(其余条件同实施例1)，得到1～18号制附子炮制品。
取生附片100g，干燥、粉碎，过3号筛，得生附子粉末，作为对照样品。
表1制附子炮制工艺的筛选条件
编号 干姜饮片用量％ 闷润时间(h) 蒸制时间(h)
1 36 12 2
2 36 9 3
3 30 9 2
4 30 6 1
5 30 9 2
6 30 12 1
7 24 12 2
8 30 12 3
9 30 9 2
10 24 9 3
11 30 9 2
12 30 6 3
13 24 9 1
14 36 9 1
15 36 6 2
16 30 9 2
17 24 6 2
18 33 9 1.7
2、实验方法
分别测试1～18号制附子炮制品、生附子对照样品中生物碱含量和6-姜辣素含量，然后进行综合评分。
(1)生物碱含量测试
本实验测定的生物碱包括3种双酯型生物碱(乌头碱、次乌头碱、新乌头碱)和3种单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)。
色谱条件：色谱柱：Wondasil C18柱(5μm，4.6mm×250mm)；流动相：乙腈(A)-0.04mol/L乙酸铵(氨水调pH 8.5，B)，梯度洗脱(0～45min：30％-45％)；流速：0.8mL/min；检测波长：235nm；柱温：25℃。
标准曲线的绘制：取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱对照品适量，精密称定，各加入0.05％盐酸甲醇，制成每1mL各含0.4mg的溶液，即得单个标准品原液。再取上述适量原液，混合配制成含苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的混合标准品。精密量取对照品溶液适量按倍数关系稀释成6种不同质量浓度的溶液。按照上述色谱条件分别进样10μL分析，以峰面积和进样浓度进行线性回归。
供试品的制备：取待测样品粉末(过3号筛)约2g，精密称量，分别置150mL具塞锥形瓶中，加浓氨水3mL润湿，再加入异丙醇-乙酸乙酯(1:1)50mL，超声提取30min，滤过，取续滤液25mL，40℃减压干燥，加入0.05％盐酸甲醇溶解残渣并定容至3mL，摇匀，临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
测定方法：取标准品、供试品各10μL，注入高效液相色谱柱进行检测。
(2)6-姜辣素含量测试
色谱条件：Wondasil C18柱(5μm，4.6mm×250mm)柱；以乙腈-甲醇-水(40:5:55)为流动相；检测波长为280nm。理论塔板数以6-姜辣素计算应不低于5000。
标准曲线的制备：取6-姜辣素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含的0.1mg的溶液，作为对照品溶液。取上述对照品溶液，分别精密量取10、8、6、4、2、1、0.8、0.6、0.4、0.2mL放入10mL的容量瓶内，加甲醇到容量瓶的刻度线，按照上述色谱条件测定，进样体积为10μL，以浓度作横坐标，峰面积作纵坐标，绘制曲线。标准曲线为y＝7285x-4807.7，R2为0.9997，线性范围为2.96-118.4μg/mL。
供试品制备：取待测样品粉末(过3号筛)2g，精密称定，加入放到有具塞锥形瓶，加20mL 75％甲醇，超声40min，冷却，用天平称准重量，损失减少的质量加用75％甲醇补足，摇晃均匀，澄清后过滤，取续滤液，过0.22μm微孔滤膜，即得。
测定方法：取标准品、供试品各10μL，注入高效液相色谱柱进行检测。
(3)综合评分
双酯型生物碱既是有毒成分，又是有效成分。《中国药典》规定附子中双酯型生物碱总和不得过0.02％，本实验规定只要双酯型生物碱总和小于0.02％(即0.2mg/g)赋值均为20分，单酯型生物碱赋值总分40分，6-姜辣素赋值总分40分。所以本实验综合评分公式为：
Y＝20+40×Ai/Amax+40×Bi/Bmax，
其中，Ai为每个样品各自的单酯型生物碱总和，Amax为所有被测试样品中单酯型生物碱总和最大的那个样品对应的单酯型生物碱总和，Bi为每个样品各自的6-姜辣素的值，Bmax为所有被测试样品中6-姜辣素值最大的那个样品对应的6-姜辣素的值。
综合评分结果如表2所示。
3、实验结果
表2综合评分结果
Figure BDA0002647667550000061
表2中：苯新即苯甲酰新乌头原碱，苯乌即苯甲酰乌头原碱，苯次即苯甲酰次乌头原碱，新乌即新乌头碱，次乌即次乌头碱，乌头即乌头碱。
可以看出，不同的炮制条件对制附子炮制品的综合评分影响很大。与生附子相比，本发明上述炮制工艺下制得的制附子炮制品中有毒成分双酯型生物碱含量显著降低(均低于0.2mg/g)，活性成分6-姜辣素和单酯型生物碱的含量显著提高。其中，2、6、8、17、18号制附子炮制品的综合评分最高，均高达93.97分以上。
说明在本发明特定的炮制工艺，特别是2、6、8、17、18号所采用的特定炮制工艺下制得的制附子炮制品在降低有毒成分双酯型生物碱含量的同时，还能显著提高活性成分6-姜辣素和单酯型生物碱的含量，综合性能优异。
综上，本发明提供了一种制附子的炮制工艺。在本发明特定的炮制方法下，配合特定的炮制参数(特别是姜与生附片的用量比例、闷润时间和蒸制时间)，得到了毒性显著降低，且活性成分含量显著提高的制附子炮制品。本发明的炮制工艺简单、耗时较短、适合扩大生产，具有广阔的应用前景。

Claims (10)

1.一种制附子的炮制工艺，其特征在于：所述炮制工艺包括以下步骤：
(1)取姜，加水煎煮，得姜汁；
(2)在生附片中加入步骤(1)所得姜汁，闷润6～12小时，蒸制1～3小时，干燥后即得制附子炮制品。
2.根据权利要求1所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的24％～36％。
3.根据权利要求2所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(2)中，所述闷润温度为20～30℃，优选为25～30℃，更优选为23℃。
4.根据权利要求3所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(2)中，所述蒸制温度为105～120℃，优选为110～115℃，更优选为113℃。
5.根据权利要求1～4任一项所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的36％，步骤(2)所述闷润时间为9小时，蒸制时间为3小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的30％，步骤(2)所述闷润时间为12小时，蒸制时间为1小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的30％，步骤(2)所述闷润时间为12小时，蒸制时间为3小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的24％，步骤(2)所述闷润时间为6小时，蒸制时间为2小时；
或，步骤(1)所述姜的重量为步骤(2)所述生附片的33％，步骤(2)所述闷润时间为9小时，蒸制时间为1.7小时。
6.根据权利要求1～5任一项所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(1)中，所述姜为干姜，优选为干姜饮片。
7.根据权利要求1～5任一项所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(1)中，所述煎煮的次数为1～3次，优选为2次；所述煎煮的时间为每次0.5～2小时，优选为每次1小时。
8.根据权利要求1～5任一项所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(1)中，所述姜与水的重量比为1：(5～20)，优选为1：12。
9.根据权利要求1～5任一项所述的炮制工艺，其特征在于：步骤(1)中，所述姜汁为浓缩后的姜汁，该浓缩后的姜汁的浓度以原料姜计算为0.10～0.50g/mL，优选为0.33g/mL。
10.权利要求1～9任一项所述的炮制工艺制得的制附子炮制品。
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