CN111748596A - 一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽 - Google Patents
一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111748596A CN111748596A CN201911342820.8A CN201911342820A CN111748596A CN 111748596 A CN111748596 A CN 111748596A CN 201911342820 A CN201911342820 A CN 201911342820A CN 111748596 A CN111748596 A CN 111748596A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mulberry
- freeze
- later use
- drying
- antioxidant peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 101800000068 Antioxidant peptide Proteins 0.000 title claims abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 title claims abstract description 20
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 claims abstract description 76
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 claims abstract description 61
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 32
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 28
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 16
- 241000218231 Moraceae Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 21
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 15
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 3
- BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N Tert-Butylhydroquinone Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(O)=CC=C1O BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N butylated hydroxyanisole Chemical compound COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000004250 tert-Butylhydroquinone Substances 0.000 description 2
- 235000019281 tert-butylhydroquinone Nutrition 0.000 description 2
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 2
- 208000021959 Abnormal metabolism Diseases 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N Carnosic acid Natural products CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C(O)=O)C1=C2C=C(C(C)C)C(O)=C1O QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N 0.000 description 1
- 108010087806 Carnosine Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 206010065559 Cerebral arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010008132 Cerebral thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 201000001429 Intracranial Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N N-beta-alanyl-L-histidine Natural products NCCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N carnosine Chemical compound [NH3+]CCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC=N1 CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 229940044199 carnosine Drugs 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 201000002676 cerebral atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000013557 cerebral hemisphere cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000008860 cerebrum cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 201000005851 intracranial arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000378 teratogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003390 teratogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/011—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Botany (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,属于抗氧化肽提取技术领域,包括以下步骤:S1、桑葚制干:将新鲜采摘的桑葚冷冻干燥机内冻干,制得桑葚制干产品,待用;S2、粉碎:将桑葚制干产品置于粉碎机中充分粉碎后过筛,制得桑葚粉末,待用;S3、制备混合液:向桑葚粉末中添加氯化钠溶液,制得混合液,待用;S4、制备桑葚酶解产物:用碱性蛋白酶酶解混合液,待用;S5、分离:利用Sephadex G‑25凝胶色谱进行分离,待用;S6、进一步分离;待用;S7、冷冻干燥,便于从桑葚中有效制备抗氧化肽,具有良好的肝损伤保护作用,为实现桑葚中药现代化和开发新型、高效、安全的健康食品提供科学依据。
Description
技术领域
本发明涉及抗氧化肽提取技术领域,更具体地说,涉及一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽。
背景技术
桑葚,又作桑椹,为桑科植物桑树的果穗,又名桑椹子、桑蔗、桑枣、桑果、桑泡儿,乌椹等,味甜汁多,是人们常食的水果之一,桑葚每年4-6月果实成熟时采收,去杂质,晒干或略蒸后晒干食用,也可来泡酒,具体成熟时间各地不一样,南方早一点,北方稍迟一点,成熟的桑葚质油润,酸甜适口,以个大、肉厚、色紫红、糖分足者为佳,其性味甘寒,具有补肝益肾、生津润燥、乌发明目、利尿,保健,消暑等功效。
在正常情况下,机体产生的活性氧自由基ROS能被自身的抗氧化酶系统(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶等)以及内源性抗氧化剂(VE、VC、肌肽、谷胱甘肽等)作用下维持在较低的水平,保护机体不受自由基的伤害,然而,当内源性或外源性刺激促使机体代谢异常而产生大量活性氧自由基,或随着年龄的增长,机体的抗氧化物与氧化剂之间的平衡失常时,就会导致氧化应激,严重的情况会造成氧化损伤,破坏细胞内DNA、蛋白质以及细胞膜,诱导细胞凋亡,加速人体衰老,同时,自由基过多,也会诱发一系列疾病,如老年痴呆症、脑血栓、动脉粥样硬化和癌症等,因此,我们需要寻求外源性抗氧化剂来清除体内过多的自由基,以维持机体的健康,人工合成的抗氧化剂如2,6-二叔羟基对甲酚(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)、特丁基对苯二酚(TBHQ)和没食子酸(PG)等虽然具有较强的抗氧化作用,但由于其对人体肝、脾、肺有害,且存在潜在的致畸、致癌作用,各国政府纷纷对其强制规定了ADI(每日允许摄入量)值,控制其过量添加,于是人们把目光逐步转向从各种植物和动物组织中提取天然抗氧化剂,抗氧化活性多肽由于低毒、高效等特点,作为食品和机体的抗氧化剂,被认为是人工合成抗氧化剂的理想替代者,抗氧化肽能有效地清除体内过剩的活性氧自由基,保护细胞和线粒体的正常结构和功能,防止脂质过氧化的发生,帮助机体抵御疾病,同时将抗氧化肽作为食品添加剂可以防止含脂肪食品氧化,作为功能因子可用于保健食品及化妆品等的开发,对提高我国农产品深加工的附加值具有重要作用。
目前国内外对桑葚的研究少之又少,对其副产物中富含的蛋白质开发和利用研究较少,对其活性多肽或其药理研究国内外几乎没有报道,因此,有必要充分利用我国十分丰富的桑葚资源,对其进行深入系统研究,为实现桑葚中药现代化和开发新型、高效、安全的健康食品提供科学依据。
发明内容
1.要解决的技术问题
针对现有技术中存在的问题,本发明的目的在于提供一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,它便于从桑葚中有效制备抗氧化肽,具有良好的肝损伤保护作用,为实现桑葚中药现代化和开发新型、高效、安全的健康食品提供科学依据。
2.技术方案
为解决上述问题,本发明采用如下的技术方案:
一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,包括以下步骤:
S1、桑葚制干:将新鲜采摘的桑葚冷冻干燥机内冻干,制得桑葚制干产品,待用;
S2、粉碎:将桑葚制干产品置于粉碎机中充分粉碎后过筛,制得桑葚粉末,待用;
S3、制备混合液:向桑葚粉末中添加氯化钠溶液,制得混合液,待用;
S4、制备桑葚酶解产物:用碱性蛋白酶酶解混合液,待用;
S5、分离:利用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离,待用;
S6、进一步分离:以蒸馏水为洗脱液,流速0.5-0.8mL/min,收集洗脱组分并测定214nm波长处的吸光值,绘制洗脱曲线,收集洗脱峰,将具有抗氧化活性的峰,利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离,待用;
S7、冷冻干燥:在真空下冷冻干燥,制得抗氧化肽,便于从桑葚中有效制备抗氧化肽,具有良好的肝损伤保护作用,为实现桑葚中药现代化和开发新型、高效、安全的健康食品提供科学依据。
作为本发明的一种优选方案,在步骤S1中,所述冷冻温度为10-15℃,冷冻干燥时间为10-12h。
作为本发明的一种优选方案,在步骤S2中,粉碎后过60目筛。
作为本发明的一种优选方案,在步骤S3中,所述桑葚粉末和氯化钠溶液按照重量份为1:2的比例添加,所述氯化钠溶液的浓度为1.0%。
作为本发明的一种优选方案,在步骤S4中,所述酶解条件为:pH8.0-9.0、酶添加量3500-5000 U/g、底物浓度4%-5%w/v、解酶时间6-8h,沸水浴20-35min灭活,经8000-9000rpm离心20-30min,取上清液冷冻干燥,即为桑葚酶解产物。
作为本发明的一种优选方案,在步骤S5中,所述RP-HPLC的洗脱梯度为65-80min、10%-20% V乙腈,收集保留时间为40min的洗脱峰。
作为本发明的一种优选方案,在步骤S6中,所述真空度为0-1.0MPa,冷冻干燥温度为10-20℃,冷冻干燥时间为18-20h。
3.有益效果
相比于现有技术,本发明的优点在于:
本方案便于从桑葚中有效制备抗氧化肽,具有良好的肝损伤保护作用,为实现桑葚中药现代化和开发新型、高效、安全的健康食品提供科学依据。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,包括以下步骤:
S1、桑葚制干:将新鲜采摘的桑葚冷冻干燥机内冻干,冷冻温度为10℃,冷冻干燥时间为12h,制得桑葚制干产品,待用;
S2、粉碎:将桑葚制干产品置于粉碎机中充分粉碎后过60目筛,制得桑葚粉末,待用;
S3、制备混合液:向桑葚粉末中添加氯化钠溶液,桑葚粉末和氯化钠溶液按照重量份为1:2的比例添加,氯化钠溶液的浓度为1.0%,制得混合液,待用;
S4、制备桑葚酶解产物:用碱性蛋白酶酶解混合液,酶解条件为:pH8.0、酶添加量3500U/g、底物浓度5%w/v、解酶时间8h,沸水浴35min灭活,经8000rpm离心30min,取上清液冷冻干燥,即为桑葚酶解产物,待用;
S5、分离:利用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离,RP-HPLC的洗脱梯度为65min、20% V乙腈,收集保留时间为40min的洗脱峰,待用;
S6、进一步分离:以蒸馏水为洗脱液,流速0.5mL/min,收集洗脱组分并测定214nm波长处的吸光值,绘制洗脱曲线,收集洗脱峰,将具有抗氧化活性的峰,利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离,待用;
S7、冷冻干燥:在真空度为0-1.0MPa的真空下冷冻干燥,冷冻干燥温度为10℃,冷冻干燥时间为20h,制得抗氧化肽。
实施例2:
一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,包括以下步骤:
S1、桑葚制干:将新鲜采摘的桑葚冷冻干燥机内冻干,冷冻温度为13℃,冷冻干燥时间为11h,制得桑葚制干产品,待用;
S2、粉碎:将桑葚制干产品置于粉碎机中充分粉碎后过60目筛,制得桑葚粉末,待用;
S3、制备混合液:向桑葚粉末中添加氯化钠溶液,桑葚粉末和氯化钠溶液按照重量份为1:2的比例添加,氯化钠溶液的浓度为1.0%,制得混合液,待用;
S4、制备桑葚酶解产物:用碱性蛋白酶酶解混合液,酶解条件为:pH8.5、酶添加量4000U/g、底物浓度4.5%w/v、解酶时间7h,沸水浴30min灭活,经8500rpm离心25min,取上清液冷冻干燥,即为桑葚酶解产物,待用;
S5、分离:利用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离,RP-HPLC的洗脱梯度为70min、15% V乙腈,收集保留时间为40min的洗脱峰,待用;
S6、进一步分离:以蒸馏水为洗脱液,流速0.7mL/min,收集洗脱组分并测定214nm波长处的吸光值,绘制洗脱曲线,收集洗脱峰,将具有抗氧化活性的峰,利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离,待用;
S7、冷冻干燥:在真空度为0-1.0MPa的真空下冷冻干燥,冷冻干燥温度为15℃,冷冻干燥时间为19h,制得抗氧化肽。
实施例3:
一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,包括以下步骤:
S1、桑葚制干:将新鲜采摘的桑葚冷冻干燥机内冻干,冷冻温度为15℃,冷冻干燥时间为10h,制得桑葚制干产品,待用;
S2、粉碎:将桑葚制干产品置于粉碎机中充分粉碎后过60目筛,制得桑葚粉末,待用;
S3、制备混合液:向桑葚粉末中添加氯化钠溶液,桑葚粉末和氯化钠溶液按照重量份为1:2的比例添加,氯化钠溶液的浓度为1.0%,制得混合液,待用;
S4、制备桑葚酶解产物:用碱性蛋白酶酶解混合液,酶解条件为:pH9.0、酶添加量3500U/g、底物浓度4%w/v、解酶时间6h,沸水浴20min灭活,经9000rpm离心20min,取上清液冷冻干燥,即为桑葚酶解产物,待用;
S5、分离:利用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离,RP-HPLC的洗脱梯度为80min、10% V乙腈,收集保留时间为40min的洗脱峰,待用;
S6、进一步分离:以蒸馏水为洗脱液,流速0.8mL/min,收集洗脱组分并测定214nm波长处的吸光值,绘制洗脱曲线,收集洗脱峰,将具有抗氧化活性的峰,利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离,待用;
S7、冷冻干燥:在真空度为0-1.0MPa的真空下冷冻干燥,冷冻干燥温度为20℃,冷冻干燥时间为18h,制得抗氧化肽。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其改进构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,包括以下步骤:
S1、桑葚制干:将新鲜采摘的桑葚冷冻干燥机内冻干,制得桑葚制干产品,待用;
S2、粉碎:将桑葚制干产品置于粉碎机中充分粉碎后过筛,制得桑葚粉末,待用;
S3、制备混合液:向桑葚粉末中添加氯化钠溶液,制得混合液,待用;
S4、制备桑葚酶解产物:用碱性蛋白酶酶解混合液,待用;
S5、分离:利用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离,待用;
S6、进一步分离:以蒸馏水为洗脱液,流速0.5-0.8mL/min,收集洗脱组分并测定214nm波长处的吸光值,绘制洗脱曲线,收集洗脱峰,将具有抗氧化活性的峰,利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离,待用;
S7、冷冻干燥:在真空下冷冻干燥,制得抗氧化肽。
2.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S1中,所述冷冻温度为10-15℃,冷冻干燥时间为10-12h。
3.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S2中,粉碎后过60目筛。
4.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S3中,所述桑葚粉末和氯化钠溶液按照重量份为1:2的比例添加,所述氯化钠溶液的浓度为1.0%。
5.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S4中,所述酶解条件为:pH8.0-9.0、酶添加量3500-5000 U/g、底物浓度4%-5%w/v、解酶时间6-8h,沸水浴20-35min灭活,经8000-9000rpm离心20-30min,取上清液冷冻干燥,即为桑葚酶解产物。
6.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S5中,所述RP-HPLC的洗脱梯度为65-80min、10%-20% V乙腈,收集保留时间为40min的洗脱峰。
7.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S7中,所述真空度为0-1.0MPa,冷冻干燥温度为10-20℃,冷冻干燥时间为18-20h。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911342820.8A CN111748596A (zh) | 2019-12-24 | 2019-12-24 | 一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911342820.8A CN111748596A (zh) | 2019-12-24 | 2019-12-24 | 一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111748596A true CN111748596A (zh) | 2020-10-09 |
Family
ID=72672921
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201911342820.8A Pending CN111748596A (zh) | 2019-12-24 | 2019-12-24 | 一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111748596A (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102647920A (zh) * | 2009-11-30 | 2012-08-22 | 科学发展实验室 | 大穗金合欢种子提取物和含有大穗金合欢种子提取物的组合物 |
CN103627760A (zh) * | 2013-10-16 | 2014-03-12 | 华南理工大学 | 一种用核桃粕制备具有降尿酸功效的生物活性肽的方法 |
CN107119097A (zh) * | 2017-05-23 | 2017-09-01 | 华南理工大学 | 一种桑叶免疫活性肽及其制备方法 |
CN109497367A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-03-22 | 天津科技大学 | 一种蛋清低聚肽果汁饮料及其制备方法 |
-
2019
- 2019-12-24 CN CN201911342820.8A patent/CN111748596A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102647920A (zh) * | 2009-11-30 | 2012-08-22 | 科学发展实验室 | 大穗金合欢种子提取物和含有大穗金合欢种子提取物的组合物 |
CN103627760A (zh) * | 2013-10-16 | 2014-03-12 | 华南理工大学 | 一种用核桃粕制备具有降尿酸功效的生物活性肽的方法 |
CN107119097A (zh) * | 2017-05-23 | 2017-09-01 | 华南理工大学 | 一种桑叶免疫活性肽及其制备方法 |
CN109497367A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-03-22 | 天津科技大学 | 一种蛋清低聚肽果汁饮料及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JINTANAPORN WATTANATHORN ET AL.: ""Encapsulated Mulberry Fruit Extract Alleviates Changes in an Animal Model of Menopause with Metabolic Syndrome"", 《OXIDATIVE MEDICINE AND CELLULAR LONGEVITY》 * |
张婉迎 等: ""响应面法优化桑葚水溶性蛋白提取工艺"", 《食品工业》 * |
朱翠玲 等: ""桑葚提取物体外抗炎作用及机制的研究"", 《现代食品科技》 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Zhao et al. | Antidiabetic effect of a newly identified component of Opuntia dillenii polysaccharides | |
CN102742801B (zh) | 罗汉果高膳食纤维素果粉及其制备方法 | |
CN108653064B (zh) | 雪茶提取物及其制备方法和应用 | |
KR100604073B1 (ko) | 삼칠 추출물, 첨과 추출물 및 석곡 추출물 중에서 선택된 1 종을 함유하는 화장료 조성물 | |
CN104945365A (zh) | 一种从黑米中提取花青素的工艺 | |
CN111748596A (zh) | 一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽 | |
CN111643392A (zh) | 一种具有多效美白抗敏作用的生物寡肽精华液及其制备方法 | |
CN111714423A (zh) | 一种具有抗衰舒敏功效的中药组合提取物及其制备方法和应用 | |
CN109498470A (zh) | 一种亮肤补水修护喷雾及其制备方法 | |
CN106188329A (zh) | 一种扇贝多糖的提取方法和制品 | |
CN110959861A (zh) | 一种含有sod组份的美白口服液及其制备方法 | |
CN110577937A (zh) | 一种祛斑美肤sod复合酶及其制备方法 | |
KR101421615B1 (ko) | 헛개나무 열매로부터 암페롭신을 분리하는 방법 | |
CN115677873A (zh) | 一种银耳多糖及其制备延缓衰老组合物的用途 | |
JP2015117230A (ja) | バナナ由来組成物の製造方法、及び、バナナ由来組成物を含有する生理活性物質 | |
CN109938068B (zh) | 一种降低曲奇中晚期糖基化终末产物的方法 | |
CN110845557A (zh) | 一种微波辅助提取三种小浆果复合果浆中花色苷的方法 | |
CN115400054B (zh) | 一种基于桑资源的美白抗氧化组合物的制备方法和应用 | |
CN116355435B (zh) | 一种用于抗氧化应激的南瓜果皮色素及其应用 | |
CN105566446B (zh) | 一种蒲公英籽抗氧化肽及其制备方法与应用 | |
CN111789256B (zh) | 一种具有平衡胰岛素作用的火龙果花多糖组合物 | |
KR102489680B1 (ko) | 여주 분말을 주성분으로 하는 건강식품 조성물 | |
KR102546027B1 (ko) | 꽃게 유래 저분자 펩타이드를 함유하는 조성물 | |
KR102445710B1 (ko) | 센나 추출물을 함유하는 블루라이트 차단용 조성물 | |
CN114150035A (zh) | 一种桑叶抗氧化肽及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20201009 |