CN111727039A

CN111727039A - 大肠炎改善剂

Info

Publication number: CN111727039A
Application number: CN201980013241.0A
Authority: CN
Inventors: 高阶道德; 小川真; 小林郁; 西田康弘; 中川亚希子; 藤田岳; 小林学史; 篠原龙马; 岩野雄次; 森泉圣孝; 前田沙知; 坂田亮; 横山富久
Original assignee: Asta Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Asta Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2018-02-13
Filing date: 2019-02-12
Publication date: 2020-09-29
Also published as: US20210052537A1; JPWO2019159868A1; EP3753559A1; WO2019159868A1

Abstract

本发明提供一种新型的大肠炎改善剂。其为含有式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐的大肠炎改善剂。(式中，m₁、m₂、n₁和n₂分别相同或不同地表示1～6的整数。)。

Description

大肠炎改善剂

技术领域

本发明涉及一种含有虾青素衍生物的大肠炎改善剂。

背景技术

大肠炎是大肠的炎症性疾病的总称。(1)根据发病期间可分为急性和慢性，急性大肠炎大多是感染性大肠炎，慢性大肠炎大多情况下为溃疡性大肠炎、克罗恩病(Crohn'sdisease)等非特异性大肠炎。(2)根据部位或扩散形态，可分为弥漫性和局部性，弥漫性大肠炎的代表例有溃疡性大肠炎，局部性大肠炎的代表例有克罗恩病、肠结核。(3)根据感染的有无，可分为感染性和非感染性。感染性大肠炎几乎为细菌性痢疾(shigellosis)、肠伤寒(typhoid)、沙门氏菌肠炎(salmonella enteritis)等由细菌感染引起的急性大肠炎，但是，肠结核和阿米巴病(amebiasis)等中是慢性发展。(4)根据病因可分为特异性和非特异性。特异性大肠炎是有明确病因的病症的总称，包括肠结核、细菌性痢疾、沙门氏菌肠炎等。非特异性大肠炎的病因不明，又被称作特发性大肠炎，其代表例有溃疡性大肠炎、克罗恩病。(5)除此之外，还有在子宫癌的放射线治疗后可见的难治性的放射线性大肠炎、由于投予抗生物质所引起的菌交替现象导致的大肠炎、与动脉硬化或糖尿病等并发的缺血性大肠炎、食物中毒引起的传染性大肠炎等。

如上所述，大肠炎的原因各种各样，因此，目前用于治疗的药剂也会根据原因、症状而选择各种药剂，并未确立根本性的治疗。其中，关于溃疡性大肠炎等部分大肠炎，直到最近都未发现有效的药剂，被认为是难以治疗的难治性疾病。从数年前开始，在临床上能够使用5－氨基水杨酸(5－ASA)制剂，与之前的情况相比，可以说治疗稍微变得容易了一些，但关于该疾病，依然期待具有更充分效果的药剂。

出于这样的状况，依然希望开发出效果更优异的大肠炎治疗药。

另一方面，虾青素具有优异的抗氧化活性，已知在光障碍疾病领域、眼科疾病领域、皮肤科疾病领域、炎症性疾病领域、免疫疾病领域、心脏疾病领域、恶性肿瘤疾病领域、肝脏疾病领域、肾脏疾病领域、神经变性疾病领域、中毒性疾病领域、过敏性疾病领域、胰岛素抵抗性疾病领域、糖尿病疾病领域、高血脂症疾病领域、心功能疾病领域、血管系统疾病领域等中是有用的(非专利文献1和2)。作为保持与该虾青素同等以上的抗氧化活性并且改善虾青素的水溶性和经口吸收性的化合物，已知下述式(I)的化合物(专利文献1)，

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂分别相同或不同地表示1～6的整数)。

在专利文献1中，虽然作为式(I)的化合物有可能显示效果的疾病例示了炎症性肠炎，但完全没有对于大肠炎的公开或对其的具体的效果的报告，当然更没有该化合物对于溃疡性大肠炎等难治性大肠炎的改善效果的公开，其效果并不为人知。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2015/178404号说明书

非专利文献

非专利文献1：Alternative Medicine Review,2000,16(4),355－364

非专利文献2：Trends in Biotechnology,2003,21(5),210－216

发明内容

发明要解决的技术问题

本发明的主要目的在于，提供一种能够替代大肠炎的代表性治疗药5－ASA、并且具有与该药剂同等或其以上的效果的大肠炎改善剂。

用于解决技术问题的技术方案

本发明的发明人为了找到能够作为改善大肠炎的治疗药的新型治疗药，经过锐意研究，结果发现，式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐对于大肠炎、其中尤其对于溃疡性大肠炎具有优异的改善效果，以至于完成了本发明。

即，本发明提供以下的发明〔1〕～〔4〕。

〔1〕一种大肠炎改善剂，其含有：式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐。

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂分别相同或不同地表示1～6的整数。)

〔2〕上述式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐在制造大肠炎改善剂中的使用。

〔3〕用于改善大肠炎的上述式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐。

〔4〕一种用于改善大肠炎的治疗方法，其特征在于，投予有效量的上述式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐。

发明的效果

本发明的式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐对于人、狗、猫、马等各种动物整体的大肠炎具有优异的有效性，含有式(I)所示的虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐的医药组合物作为大肠炎改善剂是优异的。

对于作为本发明的改善对象疾病的大肠炎，如上所述，根据发病期间、部位或扩散、原因等进行分类，其中，作为能够期待本发明的效果的疾病，可以列举慢性大肠炎，作为能够期待更好的效果的疾病，可以列举溃疡性大肠炎、大肠克罗恩病等非特异性大肠炎。

附图说明

图1是示出实施例中体重平均值的变动的图。

图2是示出实施例中血便评分平均值的变动的图。

图3是示出实施例中各试验动物组的大肠长度的图。

图4是示出实施例中各试验动物组的大肠重量的图。

具体实施方式

本发明的大肠炎改善剂含有上述式(I)所示的反式－虾青素衍生物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐作为有效成分。

可以通过本发明进行处置的对象包括：包括人的恒温动物，例如狗、猫、马、猴、兔、大鼠或小鼠，但不限于这些。

上述式(I)的化合物之中，优选m₁和m₂分别为整数1，n₁和n₂分别为整数3。

式(I)所涉及的化合物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物以及它们的光学异构体由于分子内具有羧，能够与所希望的碱物质或者碱化合物进行通常的盐形成反应，来形成药学上可接受的盐。作为这样的盐，例如可以列举：钠盐、钾盐、锂盐这样的碱金属盐；钙盐、镁盐这样的碱土金属盐；赖氨酸盐、鸟氨酸盐、精氨酸盐这样的氨基酸盐，其中优选举出钠盐，赖氨酸盐。

式(I)的化学结构式中，虾青素基本骨架中的中段碳链部分的双键部分在化学构造上可以为反式和顺式的几何异构体构造。关于本发明所涉及的有效成分，不仅是式(I)的反式体，以下式(Ia)、式(Ib)所代表的顺式体也能够作为本发明所涉及的大肠炎改善剂的有效成分而举出。另外，对于本发明的大肠炎改善剂，也包括式(I)的反式体和作为其几何异构体的顺式体的各种混合比的混合物作为有效成分。

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂与上述含义相同。)

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂与上述含义相同。)

另外，式(I)的化合物、其几何异构体和这些几何异构体的混合物可以包含以下所代表的光学异构体(IA)，其对映体或这些的混合物、非对映体也全部包含在本发明所涉及的大肠炎改善剂的有效成分之中。

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂与上述含义相同。)

在式(I)的化合物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物和它们的光学异构体之中，优选上述的化学式(IA)的反式体的化合物。

另外，在上述式(IA)的反式体的化合物之中，优选m₁和m₂分别代表整数1并且n₁和n₂分别代表整数3的化合物。

如上所述，更优选式(IA)所示的光学活性反式－虾青素衍生物或其盐，进而更优选实质上不含有与式(IA)所示的光学活性反式－虾青素衍生物对应的光学活性顺式－虾青素衍生物和其盐的、高纯度的光学活性反式－虾青素衍生物或其盐。这里，所谓以“高纯度”含有本发明所涉及的大肠炎改善剂的有效成分，是指该有效成分中的纯度至少为95％以上、优选为98％以上的情况。

本发明所涉及的化学式(I)的化合物、其几何异构体、它们的光学异构体和它们的盐能够通过国际公开第2015/178404号说明书所记载的制造方法、或者通过适当组合该方法与公知的方法来制造。在这些制造方法中，关于式(I)的化合物的几何异构体、这些光学异构体的制造方法，以上述式(IA)的光学异构体的制造方法作为代表，在下面进行说明。

(1A)脱保护反应

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂与上述含义相同，R表示保护基。)

通过使作为原料化合物的化学式(II)的化合物的保护基脱落，能够制造作为目的的式(IA)的光学活性的反式－虾青素衍生物。

该脱落反应能够利用保护基的常规的脱落反应，具体而言，可以举出利用酸的脱落反应。

作为保护基，可以列举叔丁基、三甲基甲硅烷基、四氢吡喃基等，作为优选的保护基，可以列举叔丁基、三甲基甲硅烷基等。

采用利用酸的脱落反应时，通过将式(II)的化合物在非活性的溶剂中、添加酸来进行反应，能够制造作为目的的式(IA)的化合物。

所使用的溶剂只要是对于本反应是非活性的溶剂，就没有特别限定，例如可以列举：己烷、庚烷、里格罗因(ligroin)、石油醚这样的脂肪族烃类；苯、甲苯、二甲苯这样的芳香族烃类；氯仿、二氯甲烷、1,2－二氯乙烷、四氯化碳这样的卤化烃类；乙腈、丙腈这样的腈类；甲酸乙酯、甲酸异丙酯、甲酸异丁酯、乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸丁酯这样的有机酸酯类；二乙醚、二异丙醚、四氢呋喃、二噁烷、二甲氧基乙烷、二乙二醇二甲醚这样的醚类；二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、六甲基磷酸三酰胺这样的酰胺类；甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇这样的醇类；三氟乙酸、甲酸、乙酸、丙酸这样的有机酸类；水；或这些溶剂的混合溶剂，优选卤化烃类、腈类、醚类、醇类、有机酸类、酰胺类、水或这些溶剂的混合溶剂，进一步优选卤化烃类、腈类、醇类、有机酸类、醚类、水或这些溶剂的混合溶剂，最优选卤化烃类、乙腈、水、甲醇、乙醇、异丙醇、甲酸、二噁烷、四氢呋喃或水与这些有机溶剂的混合溶剂(保护基为C1－C6烷基的情况)。

作为可以使用的酸，只要是在常规的反应中，作为酸使用的物质就没有特别限定，例如可以是盐酸、氢溴酸、硫酸、高氯酸、磷酸这样的无机酸；乙酸、甲酸、草酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸这样的有机酸；氯化锌、四氯化锡、三氯化硼、三氟化硼、三溴化硼这样的路易斯酸；或酸性离子交换树脂，优选无机酸或有机酸，最优选可以举出盐酸、乙酸、甲酸和三氟乙酸。

反应温度根据反应的原料化合物、所使用的酸、溶剂等而不同，但通常为－20℃至150℃，优选为0℃至100℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，但通常为30分钟至10天，优选为30分钟至5天。关于溶剂的使用量，通常相对于式(II)的化合物的使用重量，使用10倍至50倍容量即可，优选使用30倍容量。关于酸的使用量，相对于作为原料的式(II)的化合物，如果是无机酸，则通常使用5倍至50倍摩尔量、优选使用10倍至30倍摩尔量即可；如果是有机酸，则通常使用100倍至1000倍摩尔量、优选使用200倍至600倍摩尔量即可。

通过以上的脱保护反应得到的生成物会含有上述的9－顺式体、13－顺式体等几何异构体，因此，通过根据目的适当组合柱色谱法、再沉淀、结晶化等的分离、精制手段，能够分离、去除这些几何异构体，能够以高纯度分离、制造作为目的的式(IA)的光学活性的反式－虾青素衍生物。

另外，所分离的上述顺式体能够如上所述通过适当组合精制、分离方法来分离获得。

(1B)从顺式体向反式体的变换方法

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂与上述含义相同。)

本制造法中使用的代表性的顺式体为如上所述的式(IAa)和(IAb)的化合物，它们可以作为单独的原料化合物，或者作为顺式体的混合物，或者作为过剩地含有顺式体的与反式体的混合物，溶解于非活性的溶剂后，通过使用碘等转换试剂进行反应，从而制造作为目的的式(IA)的高纯度的光学活性反式－虾青素衍生物。

所使用的溶剂只要是在本反应中非活性的溶剂就没有特别限定，例如可以列举四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、水等。

作为优选用作上述转换试剂的物质，可以列举碘。

反应温度根据反应的原料化合物、所使用的转换试剂、溶剂等而不同，通常为－20℃至150℃，优选为10℃至100℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，通常为30分钟至10天，优选为30分钟至5天。关于溶剂的使用量，通常相对于式(IAa)或式(IAb)的化合物的使用重量，通常使用10倍至50倍容量即可，优选使用30倍容量即可。转换试剂使用量相对于作为原料的式(IAa)或式(IAb)的化合物，通常使用0.01倍摩尔量以上即可，优选使用0.1倍摩尔量以上即可。

作为在通过以上转换反应得到的生成物中分离上述9－顺式体、13－顺式体等几何异构体的方法，可以列举柱色谱法、再沉淀或结晶化等方法，通过根据目的适当组合这些方法，能够分离上述几何异构体，以高纯度分离、制造作为目的的式(IA)的光学活性的反式－虾青素衍生物。

另外，被分离的顺式体也能够通过组合使用上述分离手段，作为各顺式体进行分离、制造。

接着，以下说明上述原料化合物(II)的代表性的制造方法。

(2A)使侧链部分整体与3S,3’S－虾青素直接结合的方法

(式中，m₁和n₁与上述含义相同，R表示保护基(例如，叔丁基)。)

将3S,3’S－虾青素溶解于非活性的溶剂后，在缩合试剂的存在下，使相当于式(I)的化合物中的侧链部分的式(III)的化合物与其反应，从而能够制造式(II)的化合物。

作为溶剂，可以列举二氯甲烷、氯仿、四氯化碳等有机溶剂。

作为缩合试剂，能够使用常规的用于缩合反应的试剂，作为具体例，可以列举水溶性碳二亚胺盐酸盐(例如1－(3－二甲基氨基丙基)－3－乙基碳二亚胺盐酸盐)、N,N－二异丙基碳二亚胺、羰基二咪唑、二环己基碳二亚胺等。关于缩合试剂的使用量，相对于作为原料的3S,3’S－虾青素，通常使用2倍摩尔量以上、优选使用2.5倍摩尔量～20倍摩尔量即可。

关于相当于侧链部分的式(III)的化合物，相对于3S,3’S－虾青素，通常使用2倍摩尔量以上、优选使用2.5倍摩尔～20倍摩尔量即可。

反应温度根据进行反应的原料化合物和所使用的缩合试剂、溶剂等而不同，通常为－20℃至150℃，优选为－10℃至100℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，通常为30分钟至10天，优选为30分钟至5天。关于溶剂的使用量，相对于3S,3’S－虾青素的使用重量，通常使用10倍至50倍容量即可，优选使用30倍容量即可。

所得到的式(II)的化合物通常能够通过适当组合柱色谱法、再沉淀、再结晶等精制手段来进行精制、分离。

另外，侧链部分整体能够通过以下的方法制造。

(2A－1)

通过向式(IV)的化合物依次反应羰基二咪唑(V)和式(VII)的化合物，能够制造作为目的的式(III)的化合物。

具体而言，将式(IV)的化合物在非活性的溶剂中，与羰基二咪唑(V)在碱等试剂的存在下或者非存在下进行反应，由此能够得到作为中间产物的式(VI)的化合物。进一步，使式(VII)的化合物在碱等试剂的存在下与氯化三甲基硅烷发生反应，之后与式(VI)的化合物发生反应，能够制造作为目的的式(III)的化合物。

在获得式(VI)的化合物的工序中，作为溶剂，可以列举氯仿、二氯甲烷等有机溶剂，这些有机溶剂的使用量相对于式(IV)的化合物的使用重量，通常使用5倍至30倍容量、优选使用15倍容量即可。

作为碱试剂，能够使用常规的用于缩合反应的试剂，作为具体例，可列举三乙胺、N,N－二异丙基乙胺、吡啶、N,N－二甲基氨基吡啶等。

反应温度根据进行反应的原料化合物、所使用的试剂、溶剂等而不同，通常为－20℃至150℃，优选为0℃至30℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，通常可以列举15分钟至10天，优选举出30分钟至2天。

在得到作为目的的式(III)的化合物的工序中，作为使氯化三甲基硅烷与式(VII)的化合物反应的溶剂，可以列举氯仿、二氯甲烷、吡啶等有机溶剂，这些有机溶剂的使用量相对于式(VII)的化合物的使用重量，通常使用5倍至50倍容量、优选使用20倍容量即可。

作为碱，能够使用常规的用于缩合反应的物质，作为具体例，可以列举三乙胺、N,N－二异丙基乙胺、吡啶、N,N－二甲基氨基吡啶等。碱、试剂的使用量相对于作为原料的式(VI)的化合物通常使用2倍摩尔以上、优选使用2.5倍摩尔至5.0倍摩尔即可。

反应温度根据进行反应的原料化合物、所使用的试剂、溶剂等而不同，通常为－20℃至100℃，优选为0℃至30℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，通常可以举出15分钟至5天，优选举出30分钟至2天。之后加入式(VI)的化合物，进行反应时的反应温度根据所反应的原料化合物、所使用的试剂、溶剂等而不同，通常为－20℃至150℃，优选为10℃至60℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，通常可以举出30分钟至10天，优选举出30分钟至4天。

(2B)对于3S,3’S－虾青素依次结合成为侧链部的部分的方法

(式中，m₁、m₂、n₁和n₂与上述含义相同，R表示保护基(例如，叔丁基或者三甲基甲硅烷基)。)

关于本制造方法，基本上，通过使通式(VII)所示的化合物与羰基二咪唑(V)反应得到的侧链部的部分(VIII)与3S,3’S－虾青素结合，之后，使所得到的生成物(IX)与侧链部的部分(XI)结合，由此能够达成。

在使用羰基二咪唑(V)的工序中，与在上述(2A－1)的制造法中示出的各种反应条件同样地使用即可。

作为溶剂，可以列举氯仿、二氯甲烷等有机溶剂，这些有机溶剂的使用量相对于式(VII)的化合物的使用重量，通常使用2倍至30倍容量、优选使用7倍容量即可。

反应温度根据进行反应的原料化合物、所使用的试剂，溶剂等而不同，通常为－20℃至150℃，优选为－10℃至100℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，通常可以举出30分钟至10天，优选举出30分钟至5天。碱可以列举三乙胺、N,N－二异丙基乙胺、吡啶、N,N－二甲基氨基吡啶等。

关于所得到的侧链部的部分(VIII)与3S,3’S－虾青素的结合反应，通过与上述2A的反应同样地进行反应，能够制造式(IX)的化合物。

得到作为目的的通式(II)的工序，能够通过使在上述得到的具有通式(IX)的化合物与通式(XI)发生反应来达成。本反应能够参照制造上述通式(VIII)的方法进行。

反应温度根据所反应的原料化合物、所使用的试剂，溶剂等而不同，通常为－20℃至100℃，优选为0℃至40℃。反应时间根据原料化合物、溶剂、反应温度等而不同，通常可以举出30分钟至10天，优选举出30分钟至30小时。

另外，制造具有通式(XI)的化合物的方法，(1)在R为叔丁基时，能够参照通常已知的合成氨基酸的叔丁酯的方法达成，(2)在R为三甲基甲硅烷基时，能够通过使具有通式(X)的化合物与氯化三甲基硅烷在非活性溶剂中、在碱的存在下进行反应来达成(参照制作上述通式(III)的化合物的方法来达成)。(2)的反应能够通过通常已知的将羟基、羧基进行甲硅烷基化的方法达成。另外，在通式(XI)中的R为三甲基甲硅烷基时，通过在生成通式(II)的反应的后处理中使用水或弱酸性水，能够容易地使三甲基甲硅烷基脱落。

对于所得到的生成物通过适当组合使用常规的柱色谱法、再沉淀、再结晶等精制手段，能够制造作为目的的式(II)的化合物。

本发明涉及的式(I)的化合物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐能够以口服剂、注射剂、栓剂或者从肛门直接注入药剂的注肠剂的方式进行给药。

饮剂、注射剂、注肠剂等液体剂根据有效成分而在pH调节剂、缓冲剂、溶解剂、悬浊剂等、等渗剂、稳定剂、防腐剂等的存在下使用常规的制剂化技术进行制造即可。作为pH制备剂，例如可以列举盐酸、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺等。作为缓冲剂，例如可以列举磷酸钠、乙酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、天冬氨酸钠等。作为悬浊剂，例如可以列举聚山梨酯80、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、阿拉伯胶、粉末黄芪胶、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油酯等。作为溶解剂，例如可以列举聚山梨酯80、氢化聚氧乙烯蓖麻油、烟酸酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、聚乙二醇(macrogol)、蓖麻油脂肪酸乙酯、凡士林、甘油、丙二醇等。作为稳定剂，例如可以列举亚硫酸钠、偏亚硫酸钠、柠檬酸钠、乙二胺四乙酸钠、单乙醇胺等。作为防腐剂，例如可以列举对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、苯甲酸钠、山梨酸、苯酚、甲酚、氯甲酚、苯扎氯铵、对羟基苯甲酸酯等。

对于固体的口服剂，可以以片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂等任意的形态进行给药，也可以将有效成分与药学上可接受的赋形剂、崩解剂、结合剂等医药添加剂适宜混合，通过常规的制剂化技术来制造。

对于栓剂，能够将有效成分与凡士林等常规的栓剂基剂组合并通过使用常规的制剂化技术来制造。

将本发明所涉及的式(I)的化合物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐进行给药的情况下，依照症状、患者的年龄、体重、性别或通常的健康状态，适当选择给药方法和给药制剂即可。例如，对于体重约70kg的恒温动物经口或者从肛门投予时，每1天将0.01～1000mg，优选将1～100mg，较优选将5～20mg以1天1次或其以上、例如以1～6次进行投予即可。另外，作为注射剂进行投予的情况下，通常对于成人每1天将5.0～80.0mg向静脉内进行投予即可，依照症状适当增减即可。

本发明所涉及的式(I)的化合物、其几何异构体、这些几何异构体的混合物、它们的光学异构体或它们的盐在上述的给药量的范围内，在安全性方面上没有特别的问题。

实施例

以下，对于本发明的实施例进行说明。但是，本发明的范围不受下述实施例的任何限定。

实施例1

本实施例中，作为大肠炎模型，对使用硫酸葡聚糖盐(DSS)的小鼠模型进行说明。将DSS混合在小鼠的饮水中进行投予，能够制作在抑制体重的增加、血便和贫血等症状以及大肠内的糜烂的形成以及欠缺小肠病变等方面与人类溃疡性大肠炎类似的实验性溃疡性大肠炎模型(非专利文献3)。研究了在作为大肠炎的代表试验模型的该模型中，化合物X对于大肠炎的抑制效果。作为研究项目，研究了大肠炎所导致的腹泻和从体重减少的恢复、以及大肠的长度和重量，这是由于已被广泛知晓会发生因DSS诱发性大肠炎导致的大肠的性状变化。

另外，在本实施例中，作为式(I)的化合物的代表，使用了以下的化合物。在以下的本实施例中，记为化合物X。

化合物X：

4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－羧丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸二赖氨酸盐

(1)模型制作

处置依照已有报告(非专利文献2)从CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN,INC.购买C57BL/6J雄性小鼠，将在检疫·驯化期间中的一般状态下未见异常的5周龄的小鼠用于实验。驯化后，将各动物以1笼中放1只的方式分开。用于实验的DSS是从MP Bio Japan购买的分子量36,000～50,000Da的DSS。为了引发大肠炎，向自来水中添加DSS使其达到3％，并进行悬浊。3天制备1次，作为供水，让各个小鼠自由摄取。另外，向作为非病态的对照组，作为供水供给了除去DSS的溶液。

(2)处置

经过5天的DSS处置后，确认血便以及腹泻的症状，对病态进行打分，均等地如以下表1所示那样分成各组。作为试验的阳性对照，依照非专利文献2，使用5－氨基水杨酸(以下记为5－ASA，东京化成株式会社)。分组后，将表1的各被试验物质在0.5％羧甲基纤维素钠(以下记为CMC，NACALAI TESQUE)溶液中、以成为表1的各处置的方式悬浊，1天1次经口投予。将未进行DSS处置也没有进行化合物X和5－ASA两种被试验物质的投予的对象作为对照组Sham组，将仅进行DSS处理而未进行化合物X和5－ASA两种被试验物质的投予的对象作为DSS组。这些对照组的组1和2是使用0.5％CMC溶液作为介质，将被试验物质进行经口投予。

另外，分组后的饮水为常规的饮用水。

[表1]

实验处置组

[表2]

(3)测定和结果

组No.1以6只、组No.2～6以各组10只开始试验。处置开始后，在组No.2～6中观察到了被认为是因DSS肠炎原因引起的动物的死亡，最终将组No.1和2中的6只，组No.3～6中的5只动物用于解析。

(3.1)体重的测定

在DSS投予开始日(day－5)、DSS投予最终日(day0)、被试验物质投予的第3天、第5天、第8天和第10天进行了体重的测定。以下，将结果示于表3和图1。如图1所示，未投予DSS的组No.1的Sham组可见到缓缓的体重的增加，与此相对，进行了DSS处置的组都直至被试验物质投予的第3天为止观察到了体重减少。其后，在全部组中都观察到了从病态的恢复导致的体重的增加。作为阳性对照组的组No.6的5－ASA投予组与仅投予DSS的情况相比，体重的恢复较大，在100mg/kg/day的化合物X投予组中，体重的恢复更大。因此，暗示了化合物X存在对于DSS导致的大肠炎具有治疗效果的可能性。

[表3]

体重变动(单位：g，平均值±标准偏差)

(3.2)血便评分

仅看体重的恢复的话，有可能是单纯地促进了因成长带来的体重增加，因此，通过观察肠炎导致的血便的变动，来评价治疗效果。在DSS投予开始日(day－5)、DSS投予最终日(day0)、被试验物质投予的第3天、第5天、第8天和第10天观察小鼠粪便，基于表2的基准进行了打分。

以下，将结果示于表4和图2。未进行DSS投予的Sham组只有正常便，完全未见异常，与此相对，进行了DSS处置的组都在直至被试验物质投予第3～5天为止确认到了血便评分的恶化。然而，与体重的恢复同样，观察到了其后迅速的恢复。作为阳性对照组的5－ASA在血便评分的时间序列上的变动上与DSS投予并无变化，与此相对，在100mg/kg/day的化合物X投予组中，在被试验物质投予的第5天确认到了血便评分的改善。因此，从血便的观察数据也证明了化合物X具有对于DSS导致的大肠炎的治疗作用。

[表4]

血便评分平均值变动(平均值±标准偏差)

(3.3)大肠长度和重量

作为普遍认可的公知事实，由于DSS处置，会发生大肠的长度变短、同时重量增加等大肠的组织性的变化。在评价化合物X的治疗效果时，测定了大肠的长度和重量。在被试验物质投予的第10天在麻醉下进行安乐死后，进行解剖取出小鼠的大肠。迅速测量取出的大肠在放松状态下的长度。其后，去除肠管内的粪便，使用磷酸缓冲生理盐水(和光纯药)充分洗涤后，测定了湿重量。将大肠的长度示于表5和图3，将大肠的湿重量示于表5和图4。

[表5]

DSS模型小鼠中的大肠长度和湿重量(平均值±标准偏差)

No.	试验组	长度(cm)	湿重量(g)
				1	Sham	6.62±0.11	184.3±5.3
2	DSS	5.40±0.21	269.2±13.5
				3	DSS+化合物X 1mg/kg	6.72±0.28	269.0±8.4
4	DSS+化合物X 10mg/kg	6.32±0.16	255.0±12.4
				5	DSS+化合物X 100mg/kg	6.80±0.12	238.6±11.3
6	DSS+5-ASA 50mg/kg	6.54±0.29	246.6±14.1

通过测量大肠的长度，与组No.1的Sham组(平均6.62cm)相比较发现，组No.2的DSS组(5.40cm)较短。组No.3-5的化合物X组和组No.6的5-ASA组如表5和图3所示那样，大肠的长度均长于DSS组。组No.3-5的化合物X的1和100mg/kg/day投予组中，大肠长度的平均值分别为6.72cm、6.80cm，5-ASA中为6.54cm。因此，证明了化合物X在大肠的长度方面具有与5-ASA同等或更好的效果。关于大肠的湿重量，与Sham组(平均184.3mg)相比较，DSS组(269.2mg)也示出了更重的重量。化合物X组和5-ASA组如表5和图4所示，与DSS组相比较，抑制了重量增加。化合物X的100mg/kg/day投予组和5-ASA组分别为238.6、246.6mg，证明了化合物X在大肠的重量方面具有与5-ASA同等或更好的效果。通过以上的情况，证明了化合物X在DSS大肠炎导致的大肠的形态变化方面显示出了与5-ASA同等或更好的抑制作用。

(4)总结

由于以上的结果，示出了化合物X对于DSS诱发性大肠炎的各种症状具有至少与5-ASA同等的改善作用，因此，具有对于DSS诱发性大肠炎的治疗作用是不言自明的。另外，在化合物X的高浓度组(100mg/kg/day投予组)中，在体重恢复、血便评分、大肠长度、大肠重量的改善方面均超过投予5-ASA的情况，证明了与作为现有治疗药的5－ASA相比，化合物X对DSS诱发性大肠炎显示出了优异的治疗效果。

(非专利文献3－1)

木村伊佐美,永滨忍,川崎真规,神谷明美,片冈美纪子,《关于大鼠中硫酸葡聚糖诱发溃疡性大肠炎模型的基础的研究(第2报)―关于药物的治疗效果评价方法的研究―》,日本药理学杂志,105卷(1995)3号,p145－152

(非专利文献3－2)

Moul DeyEmail author,Peter Kuhn,David Ribnicky,VummidiGiridharPremkumar,Kenneth Reuhl and Ilya Raskin,Dietary phenethylisothiocyanateattenuates bowel inflammation in mice,BMC Chemical Biology201010:4

实施例2

本实施例中，作为大肠炎模型，对于使用了噁唑酮(4－乙氧基亚甲基－2－苯基－2－噁唑啉－5－酮，以下记为Oxa)的小鼠模型进行说明。首先，将Oxa涂布于皮肤，其后，经过一定期间后，通过将Oxa向肠内投予，能够制作在抑制体重的增加、血便和贫血等症状以及形成大肠内的糜烂、溃疡，并且不仅是症状，参与的免疫细胞也与人类溃疡性大肠炎类似的实验性溃疡性大肠炎模型(非专利文献4)。作为显示更接近溃疡性大肠炎的病态的试验模型，在该模型中，对化合物X对于大肠炎的抑制效果进行研究。作为研究项目，在该模型中也研究大肠的长度和重量，这是由于已被广泛知晓会发生大肠的性状变化。

(1)模型制作

处置依照已有报告(非专利文献5)，从CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN,INC.购买Balb/c雄性小鼠，将在检疫·驯化期间中的一般状态里未见异常的8周龄的小鼠用于实验。驯化后，将各动物以1笼中放1只的方式分开。用于实验的Oxa从Sigma购买。

在麻醉下将颈背部的毛剃去1.5x1.5cm，对于肩部间的皮肤利用滴管添加并涂抹3％(wt/vol)Oxa 150μL(100％乙醇溶液)引发过敏(Day1)。将其在常规的饲育环境下进行饲育，在从Day7起禁食(继续供水)16小时之后，在Day8在麻醉下使用导管经过肛门向直肠内(从肛门起3.5cm)投予1％(wt/vol)Oxa的50％乙醇溶液100μL。将以上的处置在以下记为Oxa处理。处置后进行了常规的喂食饲育。

(2)处置

在Oxa的直肠内投予的次日开始进行了被试验物质的经口投予(1天1次，共6天)。另外，作为试验的阳性对照，使用了作为用于治疗溃疡性大肠炎的抗炎剂的5-氨基水杨酸(以下记为5-ASA，东京化成株式会社)和泼尼松龙(prednisolone)(以下记为PSL，Sigma)。分组后，将表6的各被试验物质在0.5％羧甲基纤维素钠(以下记为CMC，NACALAI TESQUE)溶液中、以成为表6的各处置的方式进行悬浊，进行1天1次经口投予。将未进行Oxa处置而且也未进行化合物X和作为阳性对象的被试验物质的投予的组作为对照组Sham组(组No.1)，将仅进行Oxa处理但不进行化合物X和5-ASA两种被试验物质的投予的组作为Vehicle组(组No.2)。这些对照组的组1和2中，将作为介质使用的0.5％CMC溶液作为被试验物质进行经口投予。

[表6]

组	试验组	投予	投予途径	0xa处置
					1	Sham	0.5％CMC溶液	经口	无
2	Vehicle	0.5％CMC溶液	经口	有
					3	化合物X低用量	化合物X，3mg/kg/day	经口	有
4	化合物X高用量	化合物X，10mg/kg/day	经口	有
					5	5-ASA	5-ASA，50mg/kg/day	经口	有
6	PSL	PSL，5mg/kg/day	经口	有

(3)测定和结果

组No.1以6只、组No.2～6以各组9只开始试验。处置开始后，在组No.2～6中观察到被认为是因Oxa处置导致的肠炎引起的动物的死亡，最终将组No.1和3中的6只、组No.2和6中的5只、组No.4和5中的7只动物用于解析。

(3.1)大肠长度和重量

作为普遍认可的公知事实，由于Oxa处置，会发生大肠的长度变短、同时重量增加等大肠的组织性的变化。在评价化合物X的治疗效果时，测定了大肠的长度和重量。在Oxa处置后第7天在麻醉下进行安乐死后，进行解剖取出小鼠的大肠。迅速测量取出的大肠在放松状态下的长度。其后，去除肠管内的粪便，使用磷酸缓冲生理盐水(和光纯药)充分洗涤后，测定了湿重量。将大肠的长度和每单位长度的大肠的湿重量示于表7。

[表7]

Oxa模型小鼠中的大肠长度和单位长度的湿重量(平均值±标准偏差)

组	试验组	大肠长度(cm)	大肠重量(mg/mm)
				1	Sham	9.00±0.25	2.31±0.23
2	Vehicle	7.18±0.35	4.21±0.55
				3	化合物X低用量	8.72±0.50	3.44±0.45
4	化合物X高用量	8.74±0.48	2.80±0.43
				5	5-ASA	7.41±0.37	4.12±0.56
6	PSL	8.20±0.52	3.37±0.36

通过测量大肠的长度，与组No.1的Sham组(平均9.00cm)相比较发现，组No.2的Vehicle组(7.18cm)较短，观察到了Oxa处置导致的大肠的形态变化。组No.3-4的化合物X组和组No.5的5-ASA组和组No.6的PSL组如表7所示那样，大肠的长度长于Vehicle组。组No.3-4的化合物X的3mg/kg/day投予组和10mg/kg/day投予组中，大肠长度的平均值分别为8.72cm、8.74cm、5-ASA为7.41cm、PSL为8.20cm。因此，证明了化合物X在大肠的长度方面具有5-ASA以上且与PSL同等或更好的效果。关于大肠的湿重量，与Sham组(平均2.31mg)相比较，Vehicle组(4.21mg)显示出更重的重量。组No.3-4的化合物X组和组No.5的5-ASA组和组No.6的PSL组如表7所示那样，与Vehicle组相比较，抑制了重量增加。化合物X的3mg/kg/day投予组和10mg/kg/day投予组、5-ASA组以及PSL处置组分别为3.44、2.80、4.12、3.37mg/mm，由此，证明了化合物X在大肠的重量方面具有5-ASA以上且与PSL同等或更好的效果。通过以上的情况，证明了化合物X在Oxa处置导致的大肠炎中的大肠的形态的变化方面显示出了与5-ASA、PSL同等或更好的抑制作用。

(4)总结

由于以上的结果，示出了化合物X对于Oxa诱发性大肠炎的各种症状具有至少与5－ASA、PSL同等或更好的改善作用，因此，具有对于Oxa诱发性大肠炎的治疗作用是不言自明的。另外，在化合物X的各浓度组(3和10mg/kg/day投予组)中，大肠长度、大肠重量的改善均超过了投予了5－ASA的情况，与作为类甾醇的PSL相比也为同等或更好，证明了与作为现有治疗药的5－ASA、PSL相比，化合物X对于Oxa诱发性大肠炎示出更优异的治疗效果。

(非专利文献4)

Heller F,Fuss IJ,Nieuwenhuis EE,Blumberg RS,Strober W.,Oxazolonecolitis,a Th2colitis model resembling ulcerative colitis,is mediated by IL－13－producing NK－T cells.,Immunity.17(5):629－38(2002)

(非专利文献5)

Wirtz S,Popp V,Kindermann M,Gerlach K,Weigmann B,Fichtner－Feigl S,Neurath MF.,Chemically induced mouse models of acute and chronic intestinalinflammation.,Nat Protoc.12(7):1295－1309(2017).(化合物X的制造例)

关于以下记载中的化学结构式中的虾青素骨架中段碳链部分中的几何异构体，为了方便，以全反式体的化学结构式示出。

(3.1)合成4－(咪唑－1－基羰基氨基)丁酸叔丁基(本化学名中，t表示叔。以下也是同样。)：

向羰基二咪唑(9.95kg)中加入二氯甲烷(79.6kg)，进行搅拌，将4－氨基丁酸叔丁基盐酸盐(8.0kg)的二氯甲烷(53.1kg)溶液在－5～5℃加入，将反应混合物在该温度搅拌30分钟。加温至15～25℃，在该温度搅拌1小时。向反应混合物中加入水(40kg)，进行搅拌，将有机层分离。将所得到的溶液用5％盐水(42.1kg)洗涤，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩，得到了标记粗生成物(浓缩残余成分，10.4kg)。

NMR光谱(δppm，CDCl₃)：8.22(1H，s)，7.92(1H，br)，7.28(1H，d，J＝0.8Hz)，7.05(1H，d，J＝0.8Hz)，3.45(2H，dt，J＝6.0，6.0Hz)，2.40(2H，t，J＝6.4)，1.92(2H，tt，J＝6.4，6.4Hz)，1.44(9H，s)。

质谱(+ESI，m/z)：254.00(M+H)⁺。

(3.2)合成4－(3－羧甲基脲基)丁酸叔丁基：

向4－(咪唑－1－基羰基氨基)丁酸叔丁基(上述(3.1)的化合物)(10.4kg)中加入二氯甲烷(185.7kg)、甘氨酸(7.4kg)、三乙胺(8.3kg)，进行搅拌，在－5～5℃加入氯三甲基硅烷(8.9kg)，将该反应混合物在15～30℃搅拌60小时。将反应混合物在减压下浓缩，加入乙酸乙酯(208kg)、盐酸(5.66kg)和20％盐水(106kg)的混合液，进行搅拌，将有机层分离。将所得到的溶液用盐酸(5.66kg)和20％盐水(106kg)的混合液进行洗涤。将水层利用乙酸乙酯(57.4kg)进行萃取，将有机层与萃取液合在一起。将所得到的溶液用20％盐水(100kg)洗涤，用无水硫酸镁干燥，在减压下浓缩。加入乙酸乙酯(14.4kg)，进行搅拌，在45～55℃制成均匀溶液。将该溶液冷却至20～30℃，滴入正庚烷(108.7kg)，确认到结晶的析出后，搅拌1小时。过滤获取析出的结晶，以白色结晶得到目标化合物(7.98kg，纯度99.2％)。

另外，生成物的纯度是使用高效液相色谱法(色谱柱：株式会社YMC制YMC－TriartC18 ExRS和流动相：乙腈/pH8的磷酸盐缓冲液＝3/7，流速：1mL/min，检测波长：210nm)测定。

NMR光谱(δppm，CDCl₃)：6.16(1H，t，J＝5.6Hz)，6.01(1H，t，J＝5.6Hz)，3.67(2H，d，J＝6.0Hz)，2.97(2H，dt，J＝6.4，6.4Hz)，2.17(2H，t，J＝7.2Hz)，1.56(2H，tt，J＝7.2，7.2Hz)，1.39(9H，s)。

质谱(+ESI，m/z)：260.92(M+H)⁺。

(3.3)合成4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－叔丁氧基羰丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸叔丁基：

向3(S),3’(S)－虾青素(1.8kg)、4－(3－羧甲基脲基)丁酸叔丁基(上述(3.2)的化合物)(2.75kg)中加入N,N－二甲基－4－氨基吡啶(2.95kg)和二氯甲烷(71.6kg)，进行搅拌，制成溶液。向该溶液中在－5～5℃加入1－(3－二甲基氨基丙基)－3－乙基碳二亚胺盐酸盐(4.63kg)，在该温度搅拌4小时。向反应混合物中加入水(3.6kg)，进行搅拌，进一步加入乙酸乙酯(48.4kg)，进行搅拌，在减压下进行浓缩。向浓缩残渣中加入乙酸乙酯(48.4kg)、水(45kg)，进行搅拌，将有机层分离。将所得到的溶液利用盐酸水溶液(0.3M，46.4kg)洗涤3次，之后用10％盐水(45.9kg)、碳酸氢钠水溶液(约7％，48.2kg)、20％盐水(45kg)顺次洗涤，用无水硫酸镁干燥，在减压下进行浓缩固化，得到目标化合物(浓缩残渣，3.26kg，纯度98.1％)。

另外，生成物的纯度使用高效液相色谱法(色谱柱：株式会社YMC制YMC－TriartC18 ExRS和流动相：添加了0.025％三氟乙酸的乙腈/0.025％三氟乙酸水＝30～98/70～2，流速：1mL/min，检测波长：474nm)进行确定。

NMR光谱(δppm，CDCl₃)：6.18－6.72(14H，m)，5.56(2H，dd，J＝6.4，13.2Hz)，5.04(2H，t，J＝5.3Hz)，4.81(2H、t、5.7Hz)，4.25(2H，dd，J＝18.1，6.6Hz)，4.03(2H，dd，J＝18.3，4.6Hz)，3.19－3.26(4H，m)，2.29(4H，t，J＝7.3Hz)，2.02－2.13(4H，m)，1.99(12H，s)，1.90(3H，s)，1.76－1.83(4H，m)，1.44(18H，s)，1.34(6H，s)，1.23(6H，s)。

质谱(+ESI，m/z)：1081.88(M+H)⁺，1103.67(M+Na)⁺。

(3.4)合成4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－羧丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸：

向4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－叔丁氧基羰丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸叔丁基(上述(3.3)的化合物)(18.12g)中加入甲酸(272mL)，在25～35℃搅拌1小时。向反应混合物中加入水(1087mL)，进行搅拌，加入乙酸乙酯(1087mL)，进行搅拌，将有机层分离。将有机层利用水(543mL)洗涤2次，利用10％盐水(543.4g)洗涤2次，用无水硫酸镁干燥，在减压下进行浓缩。将浓缩残渣溶解于四氢呋喃(81.1mL)、水(8.11mL)，向该溶液中滴入乙腈(486.8mL)，确认了固体的析出后，搅拌1小时。过滤获取析出的固体，进行干燥，以暗紫～暗红色固体得到目标化合物(4.48g，纯度90.7％)。

另外，生成物的纯度是使用高效液相色谱法(色谱柱：株式会社YMC制YMC－TriartC18 ExRS和流动相：添加了0.025％三氟乙酸的乙腈/0.025％三氟乙酸水＝30～98/70～2，流速：1mL/min，检测波长：474nm)确定。

(3.5)合成4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－羧丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸：

向4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－羧丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸(上述(3.4)的粗生成物)(4.0g)中，加入四氢呋喃(18.4mL)、水(2.0mL)，进行搅拌，将其溶解。向该溶液滴入乙腈(60mL)，确认固体的析出后，搅拌1小时。过滤获取析出的固体，进行干燥，得到了暗紫～暗红色固体(3.31g，纯度96.9％)。向所得到的固体(3.26g)中加入四氢呋喃(15.0mL)、水(1.6mL)，进行搅拌，将其溶解。向该溶液滴入乙腈(49mL)，确认固体的析出后，搅拌1小时。过滤获取析出的固体，进行干燥，得到了暗紫～暗红色固体(2.93g，纯度98.9％)。向所得到的固体(2.38g)中加入四氢呋喃(10.9mL)、水(1.2mL)，进行搅拌，将其溶解。向该溶液滴入乙腈(36mL)，确认固体的析出后，搅拌1小时。过滤获取析出的固体，进行干燥，以暗紫～暗红色固体得到目标化合物(2.18g，纯度99.3％)。

另外，生成物的纯度使用高效液相色谱法(色谱柱：株式会社YMC制YMC－TriartC18 ExRS和流动相：添加了0.025％三氟乙酸的乙腈/0.025％三氟乙酸水＝30～98/70～2，流速：1mL/min，检测波长：474nm测定。

(3.6)合成4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－羧丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸二赖氨酸盐；化合物X：

向4－(3－{4－[18－(4(S)－[3－(3－羧丙基)脲基乙酰氧基]－2,6,6－三甲基－3－氧环六－1－烯基)－3,7,12,16－四甲基十八烷基－1(E),3(E),5(E),7(E),9(E),11(E),13(E),15(E),17(E)－壬烯基]－3,5,5－三甲基－2－氧环六－3－烯基－1(S)－氧羰甲基}脲基)丁酸(上述(3.5)的化合物)(0.50g，)中加入乙醇(10mL)、水(0.5mL)并搅拌。向该悬浊溶液中在室温加入L－赖氨酸1水合物(0.174g，)的水(2mL)溶液。向该反应混合物中加入水(7.5mL)，进行搅拌，将其溶解。向该反应混合物中在室温滴入乙醇(32mL)，确认固体的析出后，搅拌1小时。过滤获取析出的固体，进行干燥，以暗紫～暗红色固体得到目标化合物(0.47g，纯度98.6％，光学纯度99.0％de)。

另外，生成物的纯度与上述同样，使用高效液相色谱法来确定。光学纯度使用高效液相色谱法(色谱柱：株式会社YMC制YMC CHIRAL ART Amylose·SA(5μm,4.6mmI.D.x250mm)，色谱柱温度：25℃和流动相：THF/水/TFA(40﹕60﹕0.1)，流速：1mL/min，检测波长：474nm，色谱柱保持时间：15.4分(S，S)，17.6分(meso)，20.6分(R，R))确定。