JP7370109B2 - 新規化合物およびその自己免疫疾患の治療用途 - Google Patents

新規化合物およびその自己免疫疾患の治療用途 Download PDF

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Description

本発明は、新規化合物およびその自己免疫疾患の治療用途に関する。
ヒトは免疫反応により病原体から身体を保護する。ウイルスやバクテリアなどの外来微生物に対する生体防御機構は自然免疫（innate immunity）と特異免疫（specific immunity）に分けられ、これらは免疫関連細胞から主に分泌されるサイトカインによって媒介される。
免疫システムは、有害な外部物質である抗原（antigen）から身体を保護する役割を果たす。この抗原の種類としては、バクテリア、ウイルス、毒素、がん細胞や他種の血液及び組織が挙げられる。免疫システムはこれらの有害物質を破壊するために抗体を産生するが、自己免疫に異常が生じた場合には、免疫システムが自身の臓器と有害な抗原を区別できずに正常な組織を破壊してしまう。このような反応によって誘発される疾患が自己免疫疾患（autoimmune disease）である。
アリル炭化水素受容体（Aryl Hydrocarbon Receptor，AHR）は、ＰＥＲ－ＡＲＮＴ－ＳＩＭ（ＰＡＳ）スーパーファミリーに属するリガンド依存性転写因子であり、障壁組織の免疫細胞、上皮細胞、内皮細胞、基質細胞（stromal）で主に発現される。ＡＨＲは環境センサー（environmental sensor）であり、環境汚染物質（例えば、ダイオキシン）のような生体異物リガンド（xenobiotic ligand）だけでなく、細胞、微生物、食物から生成される生理的リガンドもまた感知する。
不活性化形態のＡＨＲは、細胞質でＨｓｐ９０：ＸＡＰ２：ｐ２３：Ｓｒｃシャペロン（chaperone）と複合体（AHR chaperone complex）を形成し、リガンドに対して高い親和力を持つ構造を維持している。リガンドの結合後にＡＨＲが活性化されると、複合体は核に移動し、ＡＨＲはシャペロン複合体から離れて、標的遺伝子の上流調節領域（upstream regulatory regions）に位置するＡＨＲ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ＤＮＡ ｅｌｅｍｅｎｔｓ（xenobiotic response elements，XRE）に結合して標的遺伝子の発現を調節する。生体内のＡＨＲを活性化できる無毒性の免疫調節リガンドは、新しい自己免疫疾患の治療薬として開発されることが期待される。
本発明は、新規化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を提供することを目的とする。
本発明は、自己免疫疾患の予防および治療に有用な新規化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を提供することを目的とする。
本発明は、新規化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む自己免疫疾患の予防または治療用薬学組成物を提供することを目的とする。
１．下記化学式１で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
（式中、Ｒ１～Ｒ４はそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり、Ｒ５及びＲ６は独立して水素またはＣ１～Ｃ５のアルキルであり、
ＡはＣ５～Ｃ１２の単環または二環基であり、
前記環基の各環は１～３個のヘテロ原子で置換されていてもよく、
前記環基はハロゲン、Ｃ１～Ｃ５のアルキルまたはＣ１～Ｃ５のアルコキシで置換されていてもよい。）
２．前記項目１において、前記Ａは以下の環基からなる群より選択される、化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
（式中、Ｑ１～Ｑ１５はそれぞれ独立してＣ、ＮまたはＳであり、Ｒ７～Ｒ３０はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシであり、Ｑ４がＮであると、Ｒ１１はない。）
３．前記項目１において、前記Ａは以下の環基からなる群より選択される、化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
（式中、Ｒ７～Ｒ３０はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
４．前記項目１において、前記Ａは以下の環基からなる群より選択される、化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
（式中、Ｒ７～Ｒ２４はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
５．前記項目１において、前記Ａは以下の環基からなる群より選択される、化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
（式中、Ｒ９～Ｒ１６はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
６．前記項目１において、Ｒ２及びＲ3がそれぞれ独立してＦ、ＣｌまたはＢｒである、化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
７．前記項目１において、以下の化合物からなる群より選択される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド；
Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）アセトアミド；
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（ピリジン－４－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（６－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（チアゾール－２－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（キノリン－２－イル）アセトアミド；および、
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（４，５，６，７－テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）アセトアミド
８．前記項目１～７のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を含む薬学組成物。
９．前記項目８において、自己免疫疾患の治療または予防用薬学組成物。
１０．前記項目８において、多発性硬化症、炎症性腸疾患、移植片対宿主疾患、喘息、アトピー、乾癬、関節リウマチ、全身紅斑ループスおよび１型糖尿病からなる群より選択されるいずれかの自己免疫疾患の治療または予防用薬学組成物。
１１．前記項目８において、癌の治療または予防用薬学組成物。
１２．前記項目１１において、前記癌は、黒色腫、大腸癌、肝癌、膠細胞腫、卵巣癌、大腸癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎細胞癌、胃癌、乳癌、転移癌、前立腺癌、胆嚢癌、膵臓癌、血液癌、皮膚癌および肺癌からなる群より選択される、癌の治療または予防用薬学組成物。
１３．前記項目１～７のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、自己免疫疾患の治療方法。
１４．前記項目１３において、前記自己免疫疾患は、多発性硬化症、炎症性腸疾患、移植片対宿主疾患、喘息、アトピー、乾癬、関節リウマチ、全身紅斑ループスおよび１型糖尿病からなる群より選択される、自己免疫疾患の治療方法。
１５．前記項目１～７のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを含む、ＡＨＲの活性誘導方法。
１６．前記項目１～７のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを含む、ＩＬ－６の産生抑制方法。
１７．前記項目１～７のいずれかに記載の化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、癌の治療方法。
１８．前記項目１７において、前記癌は、黒色腫、大腸癌、肝癌、膠細胞腫、卵巣癌、大腸癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎細胞癌、胃癌、乳癌、転移癌、前立腺癌、胆嚢癌、膵臓癌、血液癌、皮膚癌および肺癌からなる群より選択される、癌の治療方法。
本発明の新規化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、免疫調節転写因子であるＡＨＲの活性を誘導することにより、炎症の制御だけでなく、免疫バランスの調節および損傷組織を修復する効果がある。
本発明の新規化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、炎症因子であるＩＬ－６の産生を抑制することにより、過度の免疫反応、具体的には自己免疫反応を調節する効果がある。
本発明の新規化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性を誘導する効果がある。
また、本発明の新規化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、前記炎症因子の調節によって自己免疫疾患を予防および治療する効果がある。
図１は、本発明の化合物の細胞培養条件でＡＨＲリガンドであることを確認するために、ＣＹＰ１Ａ１の発現量を測定して示すものである。 図２は、本発明の化合物の細胞培養条件でＡＨＲリガンドであることを確認するために、ＣＹＰ１Ａ１の発現量を測定して示すものである。 図３は、本発明の化合物の炎症因子ＩＬ－６の産生抑制効果を示すものである。 図４は、本発明の化合物の炎症因子ＩＬ－６の産生抑制効果を示すものである。 図５は、本発明の化合物のＦｏｘｐ３＋調節Ｔ細胞の産生効果を示すものである。 図６は、本発明の化合物の炎症性腸疾患の治療効果をＤＳＳ（dextran sodium sulfate）誘導炎症性腸疾患動物モデルで示すものである。図６は、対照群（vehicle）に比べて重症指数が低いほど治療効果があることを意味するものである。 図７は、本発明の化合物の炎症性腸疾患の治療効果をＤＳＳ（dextran sodium sulfate）誘導炎症性腸疾患動物モデルで示すものである。図７は、大腸（colon）の長さに対して重量が少ないほど炎症性腸疾患の治療効果があることを意味するものである。 図８は、本発明の化合物の炎症因子（ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１７ａ、ＴＮＦ－α）の発現抑制および免疫調節因子（ＩＬ－１０、Ｆｏｘｐ３）の発現増加に及ぼす効果をＤＳＳ誘導炎症性腸疾患動物モデルで示すものである。 図９は、本発明の化合物の炎症因子（ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１７ａ、ＴＮＦ－α）の発現抑制および免疫調節因子（ＩＬ－１０、Ｆｏｘｐ３）の発現増加に及ぼす効果をＤＳＳ誘導炎症性腸疾患動物モデルで示すものである。 図１０は、本発明の化合物の粘膜治療効果を、ＦＩＴＣ－デキストラン（dextran）を用いてＤＳＳ誘導炎症性腸疾患動物モデルで示すものであり、検出程度が低いほど粘膜治療効果があることを意味する。 図１１は、本発明の化合物の炎症誘導大腸癌の予防効果をＡＯＭ／ＤＳＳ大腸癌動物モデルで示すものであり、大腸あたり腫瘍の数が少ないほど大腸癌の予防効果があることを意味する。 図１２は、本発明の化合物の多発性硬化症の治療効果をＥＡＥ（Experimental autoimmune encephalomyelitis）動物モデルで示すものである。多発性硬化症の治療効果を確認するために、重症指数を期間別グラフで示している。対照群に比べて重症指数が低いほど治療効果があることを意味する。 図１３は、本発明の化合物の炎症因子（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７ａ、ＩＬ－１β）の発現抑制および免疫調節因子（ＩＬ－１０、Ｆｏｘｐ３）の発現増加に及ぼす効果を図１２のＥＡＥ動物モデルで示すものである。 図１４は、本発明の化合物の炎症因子（ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７ａ、ＩＬ－１β）の発現抑制および免疫調節因子（ＩＬ－１０、Ｆｏｘｐ３）の発現増加に及ぼす効果を図１２のＥＡＥ動物モデルで示すものである。 図１５は、肺－移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）動物モデルにおける移植片対宿主疾患の治療効果を確認するために重症指数を測定してグラフで示すものである。 図１６は、前記図１５の動物モデルにおいて、本発明の化合物によるＩＬ－６、ＩＬ－１７ａ、ＩＬ－１０因子の発現程度を示すものである。
以下、本発明を詳細に説明する。
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語は、本発明の関連分野の通常の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。また、本明細書には好ましい方法または試料が記載されているが、類似または同等のものも本発明の範囲に含まれる。
本発明は、下記化学式１で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩に関するものである。
前記構造式において、置換基が必要な箇所であるにも拘らずいずれの置換基も記載されていない場合は、水素置換基を省略したことを意味する。これは本発明の全ての構造式において同様に適用される。
前記式中、Ｒ１～Ｒ４はそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり、具体的には水素、フルオールまたは塩素であってもよいが、これらに限定されるものではない。
前記式中、Ｒ５及びＲ６は独立して水素またはＣ１～Ｃ５のアルキルであってもよく、具体的には水素、メチルまたはエチルであってもよく、より具体的には水素またはメチルであってもよいが、これらに限定されるものではない。
前記式中、ＡはＣ５～Ｃ１２の単環または二環基であり、具体的にはシクロペンタ－１，３－ジエン、ベンゼン、シクロヘキサン、インデン、４，５，６，７－テトラヒドロインデン、ナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、１，６－ジヒドロペンタレンなどであってもよいが、これらに限定されるものではない。
前記環基の各環は１～３個のヘテロ原子で置換されていてもよく、例えば、それぞれ独立して１～３個の原子がＮ、Ｓ、Ｏなどで置換されてもよいが、これらに限定されるものではない。前記ヘテロ原子は、炭素や水素ではない原子を意味する。
また、前記ヘテロ原子が置換され得る位置は、具体的には下記に示す構造中のＱ１～Ｑ１５であってもよいが、これらに限定されるものではない。
前記構造式中、Ｑ４がＮであると、Ｑ４の位置にさらに置換されることはないので、Ｒ１１は存在しない場合と見ることができる。
前記環基は、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ５のアルキルまたはＣ１～Ｃ５のアルコキシで置換されていてもよく、例えば、Ｆ、Ｃｌ、メチル基、エチル基、メトキシ、エトキシなどであってもよいが、これらに限定されるものではない。
前記環基において、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ５のアルキルまたはＣ１～Ｃ５のアルコキシで置換され得る位置は、具体的にはＲ７～Ｒ３０であってもよいが、これらに限定されるものではない。
本発明の一実施形態によれば、前記Ａは以下の環基から選択することができる。
（式中、Ｒ７～Ｒ３０はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
本発明の一実施形態によれば、具体的には、前記Ａは以下の環基から選択することができる。
（式中、Ｒ７～Ｒ２４はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
また、本発明の一実施形態によれば、より具体的には、前記Ａは以下の環基から選択することができる。
（式中、Ｒ９～Ｒ１６はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
下記表１は、化学式１で表される化合物において、具体的にはＲ１～Ｒ６とＡの組み合わせにより化学式１で表される化合物構造の例を示すものである。



本発明は、以下の化合物からなる群より選択される化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩に関するものである。
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド；
Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）アセトアミド；
Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（ピリジン－４－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（６－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（チアゾール－２－イル）アセトアミド；
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（キノリン－２－イル）アセトアミド；および、
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（４，５，６，７－テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）アセトアミド
また、本発明は、前記化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む薬学組成物に関するものである。
前記薬学組成物は、自己免疫疾患の治療または予防用薬学組成物であってもよく、具体的には、多発性硬化症（Multiple sclerosis，MS）、炎症性腸疾患（Inflammatory Bowel Disease，IBD）、移植片対宿主疾患（graft－versus－host disease，GVHD）、喘息、アトピー、乾癬、関節リウマチ（rheumatoid arthritis，RA）、全身紅半ループス（Systemic lupus erythematosus，SLE）、１型糖尿病（Type １ diabetes mellitus，T1D）、ベーチェット病、シェーグレン症候群であってもよく、より具体的には、多発性硬化症、炎症性腸疾患、移植片対宿主疾患、喘息、アトピー、乾癬、関節リウマチ、全身紅斑ループス、１型糖尿病であってもよいが、これらに限定されるものではない。
本発明で「自己免疫疾患」とは、体液性免疫、細胞性免疫または両方によって細胞や組織に損傷を与えるものであって、免疫系が自己抗原（autoantigen）に対して不適切な反応を起こし、自己免疫反応が全身性または特定の臓器などに特異的に現れる疾患であり、慢性炎症を誘発し得る。
前記「多発性硬化症」とは、脳および脊髄の軸索突起を包む脂肪質髄鞘が損傷及び／又は消耗して生じる広義の徴候および症状であり、脱髄鞘（demyelination）および瘢痕形成を誘発する炎症性疾患を指す。多発性硬化症の種類には、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、二次性進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）、一次性進行型多発性硬化症（ＰＰＭＳ）、進行性再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）などがあるが、これらに限定されるものではない。
前記「炎症性腸疾患」とは、腸管内の異常な慢性炎症が好転と再発を繰り返す疾患であり、クローン病（Chron's disease）、潰瘍性大腸炎（ulcerative colitis）および腸管ベーチェット病（intestinal Bechet's disease）からなる群の１つ以上の疾患であってもよいが、これらに限定されるものではない。
前記「移植片対宿主疾患」とは、造血幹細胞の移植時に輸血されたリンパ球が免疫機能の低下した宿主を攻撃して発熱、発疹、肝機能異常などの症状を引き起こす疾患であり、皮膚、肺、腸、肝臓などに侵入し得るが、これらに限定されるものではない。
前記「喘息」とは、特定の誘発原因物質に曝露されたときに気管支の炎症によって咳、呼吸困難などの症状が繰り返し発生する疾患であり、感染、喫煙、アレルギー抗原などによって発生し得るが、これらに限定されるものではない。
前記「アトピー」とは、アトピー皮膚炎を意味する。慢性再発性の炎症性皮膚疾患であり、かゆみや皮膚乾燥などの症状が現れる代表的なアレルギー疾患である。
前記「乾癬」とは、免疫システムの異常により皮膚または関節に発生する炎症疾患であり、外観の悪化、角質の溜まり、紅斑性プラーク（erythematous plaques）が生じ、苦痛を伴うなどの問題を引き起こす。乾癬は、乾癬性関節炎、滴状乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、頭皮乾癬、爪乾癬、および付着部炎から選択されるいずれか１つ以上の疾患を含むことができる。
前記「関節リウマチ」とは、関節部位の慢性炎症によって特徴付けられる全身性自己免疫疾患を意味する。
前記「全身紅斑ループス」とは、「ループス」とも呼ばれる慢性炎症性の自己免疫疾患であり、結合組織や皮膚、関節、血液、腎臓などの身体の様々な器官に侵入する全身性疾患を意味する。正確な原因は知られていないが、これまでの研究によると、遺伝的要因が関連していると知られている。米国リウマチ学会議（American College of Rheumatology，ACR）では、ループスの診断をより容易にするために、他の疾患との区分に役立つ１１個の症状、徴候および検査所見を発表しており、１１個の項目のうち４個以上の症状があればループスと診断できる。
前記「１型糖尿病」とは、インスリン分泌β細胞が自己免疫反応によって破壊される免疫媒介疾患であり、原因としては多数の遺伝的及び環境的な要因が挙げられる。これはインスリン分泌β細胞に特異的に標的化された免疫細胞により、ランゲルハンス島の進行性炎症浸潤を伴い得る。
本発明の薬学組成物は、本発明の化合物である有効成分以外に、薬剤学的に適切でかつ生理学的に許容される助剤を用いて調製するか、または哺乳動物に投与することができる。前記助剤としては、賦形剤、崩解剤、甘味剤、結合剤、被覆剤、膨張剤、潤滑剤、滑沢剤または香味剤などを用いることができる。
また、本発明の薬学組成物は、投与のために、前記の薬学的に有効な量の有効成分以外に、さらに、薬剤学的に許容可能な担体を１種以上含み、薬剤学的組成物に好ましく製剤化することができる。
前記「薬学的に有効な量」とは、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効容量レベルは、疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路、及び排出比率、治療期間、同時に使用される薬物を含む要素及びその他の医学分野でよく知られている要素に応じて決定されてもよい。本発明の薬学組成物は、個々の治療薬として投与するか、または他の治療薬と併用して投与してもよい。従来の治療薬とは順次又は同時に投与されてもよく、単一又は多重投与されてもよい。前記要素をすべて考慮して副作用なく最小限の量で最大の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者によって容易に決定することができる。
具体的には、本発明の薬学組成物の有効量は、患者の年齢、性別、状態、体重、体内における活性成分の吸収度、不活性率及び排泄速度、疾病の種類、併用される薬物によって異なり得る。通常は、体重１ｋｇ当たり０．００１～１５０ｍｇ、好ましくは０．０１～１００ｍｇを毎日または隔日投与するか、または１日１～３回に分けて投与することができる。しかし、投与経路、肥満の重症度、性別、体重、年齢などによって増減され得るので、前記投与量はいかなる意味でも本発明の範囲を限定するものではない。
また、前記「薬剤学的に許容される」というのは、生理学的に許容され、かつヒトに投与時に通常、胃腸障害、めまいのようなアレルギー反応またはそれと類似した反応を引き起こさない組成物を指す。
前記担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート、および鉱物油が挙げられる。また、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤および防腐剤などをさらに含むことができる。
また、本発明の組成物は、ヒトを含む本発明の薬学組成物を必要とする個体に投与された後、活性成分の迅速、持続または遅延放出を提供できるように、当該分野で公知の方法を用いて剤形化することができる。剤形は、粉末、顆粒、錠剤、エマルジョン、シロップ、エアロゾル、軟質または硬質のゼラチンカプセル、滅菌注射用溶液、滅菌粉末であってもよい。
本発明は前記化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む自己免疫疾患の治療方法に関するものである。
また、本発明は前記化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを含む、ＡＨＲの活性誘導方法に関するものである。
具体的には、本発明の化合物は、免疫調節転写因子であるアリル炭化水素受容体（ＡＨＲ）を標的とし、ＡＨＲの活性を誘導するアゴニストとしての役割を果たして、炎症の制御、免疫バランスの調節及び損傷組織の修復を行って自己免疫疾患の治療用途に使用できるが、これらに限定されるものではない。従来のリガンドは、毒性、低い親和性及び構造安定性、高い標的非特異性のため、薬学組成物としての開発に適していない問題があった。これに対して、本発明の「Ｄｒｕｇ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ」を有する化合物でＡＨＲの活性を誘導すると、自己免疫疾患の治療および予防に効果的に使用できる。
本発明は前記化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を投与するステップを含む、ＩＬ－６の産生抑制方法に関するものである。
具体的には、本発明の化合物は、炎症因子であるＩＬ－６が自己免疫疾患を誘発することが知られているので、その産生を抑制するメカニズムにより自己免疫疾患の治療に使用することができる。実際、ＩＬ－６の抑制を治療目的とする自己免疫疾患の治療薬および関連論文が多数知られている。本発明の化合物もＩＬ－６の産生を抑制することが下記実験データから確認され、自己免疫反応を減少させる効果があると予想されるので、自己免疫疾患の治療及び予防に使用することができる。
さらに、本発明は前記化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む癌の予防または治療用組成物に関するものである。
本発明で「癌」とは、広範に宿主における最初の異常細胞成長部位の周囲組織およびその部位の遠位にある潜在的組織を侵襲する宿主自体細胞の制御されない異常成長を指し、上皮組織（例えば、皮膚、扁平細胞）の癌である癌腫；結合組織（例えば、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管など）の癌である肉腫；血液形成組織（例えば、骨髄組織）の癌である白血病；免疫細胞の癌であるリンパ腫および骨髄腫；脳および脊椎組織からの癌を含む中枢神経系の癌を含むことができる。
前記癌は、具体的には黒色腫、大腸癌、肝癌、膠細胞腫、卵巣癌、大腸癌、頭頸部癌、膀胱癌、腎細胞癌、胃癌、乳癌、転移癌、前立腺癌、胆嚢癌、膵臓癌、血液癌、皮膚癌、および肺癌からなる群より選択できるが、これらに限定されるものではない。
本発明は前記化合物、その立体異性体、またはその薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与するステップを含む癌の治療方法に関するものである。
前記治療方法では、癌診断を受けた患者に、前記化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を抗癌治療のいずれの段階でも投与することができ、特定の段階に限定されない。
また、前記化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩は、前記の薬学組成物の形態で投与できるが、これに限定されるものではない。
本発明の化学式１で表される化合物は、各種文献に知られている方法により製造することができる。下記の製造例では、前記表１に示す化合物の一部の合成方法を簡単に記載しているが、これらに限定されるものですない。
以下、本発明の製造例及び実施例により本発明を詳細に説明する。
製造例
１．Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物８）の合成
［反応式１］
室温で２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（１．００ｇ，４．７７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）溶液を撹拌しながら、５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－アミン（８９２ｍｇ，４．７７ｍｍｏｌ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール［４，５－ｂ］ピリジニウム－３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ，２．１８ｇ，５．７２ｍｍｏｌ）、およびトリメチルアミン（１．３３ｍＬ，９．５４ｍｍｏｌ）を順次滴加した。反応混合物を室温で３日間撹拌し、混合物に蒸留水（１０ｍＬ）を加えて反応を終了した。層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，ｈｅｘａｎｅｓ：ＥｔＯＡｃ＝４：１～２：１）で精製し、淡灰色の化合物（９７０ｍｇ，５４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．６７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｍ，２Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ）。
２．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物４０）の合成
［反応式２］
前記製造例１において、アミンをベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミンに変更した以外は同様な実験方法を実施し、白色の標題化合物（１．３１ｇ，８０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）：δ１２．５８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１１．２０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄｄ、Ｊ＝８．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｓ，２Ｈ）。
３．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド（化合物２６）の合成
［反応式３］
前記製造例１において、アミンを５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－アミンに変更した以外は同様な実験方法を実施し、淡黄色の標題化合物（５６０ｍｇ，３５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ８．３８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄｄ，Ｊ＝４．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝８．０，０．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ）。
４．Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物２）の合成
［反応式４］
前記製造例１において、酢酸を２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸に変更した以外は同様な実験方法を実施し、淡茶色の標題化合物（１０７ｍｇ，４４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ９．０９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｓ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ）。
５．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物４５）の合成
室温でＮ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（７０．０ｍｇ，０．２２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液をアルゴン雰囲気下で撹拌しながらｔ－ＢｕＯＫ（７４．０ｍｇ，０．４５６ｍｍｏｌ）を滴加し、５分間撹拌した。混合物にＭｅＩ（２８．４μＬ，０．４５６ｍｍｏｌ）を滴加し、３０分間撹拌した。混合物に蒸留水（１ｍＬ）を加えて反応を終了した。層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝４：１）で精製し、白色の標題化合物（３９．０ｍｇ，５１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｍ，３Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）：δ１７１．８７，１６０．２６，１４８．１９，１３７．０８，１３３．５９，１２７．７３，１２７．５６，１２６．０１，１２３．９２，１２２．２０，１２１．３６，１２１．１８，１１９．６１，１１８．７６，１０９．６０，１０５．７６，３５．７３，３２．９３，３２．８７。
６．Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物３５）の合成
（１）ステップ１：２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセチルクロリドの合成
０℃でインドール－３－酢酸（３９．３ｍｇ，０．２２４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍＬ）溶液をアルゴン雰囲気下で撹拌しながら、オキサリルクロリド（oxalyl chloride）（９６．０μＬ，１．１２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｄｒｏｐ）を順次滴加した。反応混合物を１時間撹拌した。混合物を減圧濃縮および真空乾燥し、さらなる精製なしに次の反応に使用した。
（２）ステップ２：Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミドの合成
０℃で５－クロロ－６－フルオロ－Ｎ－メチルピリジン－２－アミン（３０．０ｍｇ，０．１８７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液をアルゴン雰囲気下で撹拌しながら、ｎ－ＢｕＬｉ（１１６μＬ，０．１８７ｍｍｏｌ）を一滴ずつ滴加した。反応混合物を１時間撹拌した。混合物にステップ１で調製した２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセチルクロリドのＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍＬ）溶液を滴加した。混合物を５分間撹拌した後、蒸留水（１ｍＬ）を加えて反応を終了した。層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：ＣＨ２Ｃｌ２＝３：３：１）で精製し、茶色の標題化合物（１９．０ｍｇ，２７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．１５（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），３．９８（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）: δ１７２．１７，１５９．２８，１５７．８５，１４２．２９，１４１．９１，１４１．９０，１３６．２０，１２７．１７，１２２．９４，１２２．４４，１１９．８６，１１８．７７，１１８．０１，１１７．９７，１１７．７７，１１７．７３，１１１．３６，１０８．７６，３５．６０，２９．８３ 。
７．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物３２）の合成
前記製造例６において、酢酸を２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸に変更した以外は同様な実験方法を実施し、茶色の標題化合物（１１．６ｍｇ，１５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．２５（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄｄ，Ｊ＝８．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），３．９２（ｓ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）：δ１５９．０６，１５７．９３，１５６．０１，１５１．７０，１５１．６０，１４２．０９，１３４．５４，１２８．３５，１２５．６１，１２４．５２，１２２．７２，１１９．０５，１１８．３４，１１７．９９，１１７．９５，１１７．２６，１１２．３９，３５．６７，２９．８２。
８．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物５１）の合成
Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミドを用いて、前記製造例５と同様の実験方法で白色の標題化合物（２６．４ｍｇ，５４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），４．１１（ｓ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）：δ１７１．５１，１６０．２２，１４８．１２，１３５．５１，１３３．５６，１２９．１９，１２８．６５，１２６．０９，１２５．５８，１２４．０３，１２２．５５，１２１．４２，１２１．２３，１１８．２８，１１０．７１，１０５．５７，３５．７３，３３．１６，３２．４９。
９．Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物３６）の合成
Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミドを用いて、前記製造例５と同様の実験方法で黄色の標題化合物（７．２ｍｇ，５４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．６９（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）: δ １７２．２７，１５７．８５，１５５．９４，１５１．７８，１５１．６９，１４１．８７，１４１．８６，１３６．９９，１２７．６５，１２７．６１，１２２．００，１１９．３６，１１８．８２，１１８．０３，１１７．９８，１１２．９６，１１２．７２，１０９．４６，１０７．０６，３５．５６，３２．８７，３２．８２。
１０．２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物３７）の合成
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミドを用いて、前記製造例５と同様の実験方法で黄色の標題化合物（１７．７ｍｇ，５６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ７．７４（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）: δ １７１．８２，１５７．８９，１５５．９８，１５１．６９，１５１．６４，１４２．０２，１４１．９８，１３５．３９，１２９．１２，１２８．６７，１２５．２８，１２２．２７，１１８．３６，１１７．９８，１１７．９４，１１３．２３，１１２．９６，１１０．５４，１０６．８８，３５．６１，３３．０６，３２．４３。
１１．２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド（化合物３８）の合成
２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミドを用いて、前記製造例５と同様の実験方法で白色の標題化合物（８．２０ｍｇ，２７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）：δ８．１４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），３．８４（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）: δ １６９．９８，１５７．７１，１５５．８０，１４７．５４，１４７．４４，１４２．９３，１３５．８５，１２９．９６，１２８．４７，１２６．０７，１２３．１０，１１８．２２，１１１．７９，１１１．７５，１１１．００，１１０．９４，１１０．６８，１０５．８２，３４．５０，３３．２７。
１２．Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物６）の合成
［反応式５］
室温で２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（２００ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を撹拌しながら、５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－アミン（１９７ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール［４，５－ｂ］ピリジニウム－３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ，４０２ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）、およびトリメチルアミン（trimethylamine）（０．３ｍＬ，２．１１ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテート（ethyl acetate）で層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１２０ｍｇ，３１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ７．９９（ｍ，２Ｈ），７．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），７．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），７．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２７（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ）
１３．Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物５）の合成
［反応式６］
前記製造例１２において、酢酸を２－（１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸に変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（１１０ｍｇ，３０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ８．３７（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），７．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２５（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ）
１４．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物４３）の合成
［反応式７］
室温で２－（１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（１００ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を撹拌しながら、ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミン（１９７ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール［４，５－ｂ］ピリジニウム－３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ，２６０ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）、およびトリメチルアミン（０．１６ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテートで層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１０ｍｇ，６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ８．９９（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），７．４０（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｍ，３Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｓ，２Ｈ）
１５．Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物２３）の合成
［反応式８］
前記製造例１４において、アミンを５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－アミンに変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（６ｍｇ，３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ８．１４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ２．０Ｈｚ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｍ，１Ｈ），７．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４４（ｍ，１Ｈ），７．２４（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｓ，２Ｈ）
１６．２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド（化合物７１）の合成
［反応式９］
前記製造例１４において、アミンを３，４，５－トリメトキシアニリン（3,4,5-trimethoxyaniline）に変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（１０ｍｇ，５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ ７．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．２５（ｍ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），７．００（ｓ，１Ｈ），６．９７（ｍ，１Ｈ），３．７１（ｓ，６Ｈ），３．６９（ｓ，２Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ）
１７．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド（化合物６８）の合成
［反応式１０］
室温で２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（１００ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を撹拌しながら、３，４，５－トリメトキシアニリン（８７ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール［４，５－ｂ］ピリジニウム－３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ，２１７ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）、およびトリメチルアミン（０．１３ｍＬ，０．９５ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテートで層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１０ｍｇ，５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １１．１２（ｓ，１Ｈ），１０．０５（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．３８（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，６Ｈ），３．６８（ｓ，２Ｈ），３．３３（ｓ，３Ｈ）
１８．Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物８１）の合成
［反応式１１］
前記製造例１４において、アミンを３，５－ジクロロアニリン（3,5-dichloroaniline）に変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（８ｍｇ，４％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ８．５０（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．２４（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｍ，２Ｈ），７．０１（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｓ，２Ｈ）
１９．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）アセトアミド（化合物７８）の合成
［反応式１２］
前記製造例１７において、アミンを３，５－ジクロロアニリンに変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（１０ｍｇ，６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ８．３３（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．３０（ｂｓ，１Ｈ），７．２６（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｍ，２Ｈ），７．０６（ｍ，１Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ）
２０．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（ピリジン－４－イル）アセトアミド（化合物８８）の合成
［反応式１３］
前記製造例１７において、アミンをピリジン－４－アミン（pyridin-4-amine）に変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（１０ｍｇ，７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １１．１５（ｓ，１Ｈ），１０．４９（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｍ，１Ｈ），７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．５７（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ ａｎｄ ２．０Ｈｚ），３．７２（ｓ，６Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ）
２１．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物４４）の合成
［反応式１４］
室温で２－（１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（９６０ｍｇ，５．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３５ｍＬ）溶液を撹拌しながら、Ｎ－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミン（６００ｍｇ，３．６５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ，２．７７ｇ，７．３１ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．５５ｍＬ，１４．６１ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテートで層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（４６０ｍｇ，３９％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １１．０２（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｍ，１Ｈ），７．５７（ｍ，１Ｈ），７．３８（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），６．９８（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）
２２．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物４７）の合成
［反応式１５］
室温でＮ－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミン（１００ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）溶液を撹拌しながら、トリエチルアミン（０．６５ｍＬ，３．６８ｍｍｏｌ）を加え、２－（５－クロロ）－１Ｈ－インドール－３－イル）アセチルクロリド（２８０ｍｇ，１．２３ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で１日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（３０ｍｇ，７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １１．２２（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．４２（ｍ，３Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ２．０Ｈｚ），４．２５（ｓ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ）
２３．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物５４）の合成
［反応式１６］
室温でベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミン（２１４ｍｇ，１．４３ｍｍｏｌ）のＣＨ ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）溶液を撹拌しながら、トリエチルアミン（０．６６ｍＬ，４．７５ｍｍｏｌ）を加え、２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセチルクロリド（３２９ｍｇ，１．５８ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で１日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１２０ｍｇ，２３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ８．９６（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３０（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｍ，１Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ）
２４．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物６０）の合成
［反応式１７］
室温で２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（３５２ｍｇ，１．８３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１２ｍＬ）溶液を撹拌しながら、Ｎ－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミン（２００ｍｇ，１．２２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ，９２３ｍｇ，２．４４ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．９ｍＬ，４．８７ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテートで層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１４０ｍｇ，３３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １１．１２（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３７（ｍ，５Ｈ），６．９３（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ）
２５．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物５６）の合成
［反応式１８］
室温で２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（３００ｍｇ，１．３４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１３ｍＬ）溶液を撹拌しながら、ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミン（１６１ｍｇ，１．０７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ，１．０２ｇ，２．６８ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．９ｍＬ，５．３７ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテートで層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１７０ｍｇ，３５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）: δ ９．３５（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４８（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｍ，３Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），３．９４（ｓ，２Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ）
２６．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物６４）の合成
［反応式１９］
室温で２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（５０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を撹拌しながら、ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミン（３１ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ，１９６ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ，１．０４ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテートで層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１０ｍｇ，１２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １２．６５（ｓ，１Ｈ），１１．１０（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３８（ｍ，４Ｈ），７．２８（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ）
２７．Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（６－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド（化合物４１）の合成
［反応式２０］
前記製造例２６において、酢酸を２－（６－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸に変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（６ｍｇ，３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ－ｄ４，４００ＭＨｚ）: δ １１．６５（ｓ，１Ｈ），１１．１０（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．７４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４３（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｍ，２Ｈ），７．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），４．８７（ｓ，２Ｈ）
２８．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（チアゾール－２－イル）アセトアミド（化合物９９）の合成
［反応式２１］
室温で２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）酢酸（１２５ｍｇ，０．４９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を撹拌しながら、チアゾール－２－アミン（５０ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ、Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ，３７８ｍｇ，０．９９ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．４ｍＬ，２．００ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。混合物に蒸留水を加えて反応を終了した。エチルアセテートで層を分離し、有機層を蒸留水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、濃縮液をカラムクロマトグラフィーで精製し、標題化合物（１９ｍｇ，１３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １２．３１（ｓ，１Ｈ），１１．１８（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．３８（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），３．８４（ｓ，２Ｈ）
２９．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（キノリン－２－イル）アセトアミド（化合物１０９）の合成
［反応式２２］
前記製造例２８において、アミンをキノリン－２－アミンに変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（１８ｍｇ，１５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １１．１６（ｓ，１Ｈ），１０．９８（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｍ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ２．０Ｈｚ），７．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．７２（ｍ，２Ｈ），７．４８（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），７．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），３．８６（ｓ，２Ｈ）
３０．２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（４，５，６，７－テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）アセトアミド（化合物１０４）の合成
［反応式２３］
前記製造例２８において、アミンを４，５，６，７－テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾール－２－アミンに変更した以外は同様な実験方法を実施し、標題化合物（１９ｍｇ，１７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）: δ １２．０７（ｓ，１Ｈ），１１．１７（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），７．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ２．０Ｈｚ），７．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ ａｎｄ ４．０Ｈｚ），３．７８（ｓ，２Ｈ），２．５２（ｍ，８Ｈ）
前記化合物の構造式は下記の表２ａ～２ｃに示す通りであり、各化合物の分子量は表２ｄに示す通りである。
実施例．化合物の活性の測定－実験プロトコル
１．化合物の探索および調製
調製した化合物の標的特異性（target specificity）を確認するために、以下の方法で評価を行った。
ＤＭＥＭ－ウシ胎児血清（fetal bovine serum，FBS）１０％培地で培養中のＨｅｐＧ２を回収し、トリパンブルー（trypan blue）染色によって生存率が９７％以上であることを確認した。その後、室温で１２００ｒｐｍの速度で５分間遠心分離した後、細胞をＤＭＥＭ－ウシ胎児血清１０％培地に３×１０５個／ｍｌで再懸濁して準備した。次いで、細胞を６０ｍｍのディッシュ（dish）に３ｍｌずつ分注し、各ディッシュにＤＭＥＭ培地に希釈された５μＭ濃度の化合物をそれぞれ５０μｌずつ処理した。その後、細胞培養器（５％ＣＯ２インキュベーター）で２４時間培養した。対照群では、０．０５％のジメチルスルホキシド（dimethylsulfoxide，DMSO）／ＤＭＥＭ培地を５０μｌ処理した。
培養された細胞を回収し、ｍＲＮＡサンプルを作製した。回収した細胞からｍＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Invitrogen，Cat No．15596018）を用いたフェノール－クロロホルム沈降法で抽出した。分離したＲＮＡから逆転写でｃＤＮＡを合成し、ＣＦＸ９６（Bio-rad）検出システムでｉＱ ＳＹＢＲ－Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Bio-rad）を用いて、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（real-time PCR）でＣＹＰ１Ａ１の発現を確認した。ＧＡＰＤＨを対照酵素として用いたΔΔｃｔ法で酵素発現量の相対値を比較した。対照群を用いて１倍数を設定した。
リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応の結合温度（annealing temperature）を５８℃とし、４５回（cycle）の条件で行い、次のようなプライマー配列を用いた。ヒトＣＹＰ１Ａ１順方向、５’－ＣＡＣ ＣＣＴ ＣＡＴ ＣＡＧ ＴＡＡ ＴＧＧ ＴＣＡ ＧＡ－３’（配列番号１）と逆方向、５’－ＡＡＣ ＧＴＧ ＣＴＴ ＡＴＣ ＡＧＧ ＡＣＣ ＴＣ－３’（配列番号２）；ヒトＧＡＰＤＨ順方向、５’－ＴＧＡ ＴＧＡ ＣＡＴ ＣＡＡ ＧＡＡ ＧＧＴ ＧＧ－３’（配列番号３）と逆方向、５’－ＴＴＡ ＣＴＣ ＣＴＴ ＧＧＡ ＧＧＣ ＣＡＴ ＧＴ－３’（配列番号４）。
その結果、実験した化合物において対照群（vehicle）よりもＣＹＰ１Ａ１の発現量が高いことが確認され、有意にＣＹＰ１Ａ１の発現を誘導することが分かった（図１及び図２）。
２．炎症因子ＩＬ－６の産生抑制効果
本発明による化合物のマクロファージＩＬ－６の産生抑制効果を評価するために、以下の実験を行った。
ＲＰＭＩ－ウシ胎児血清（fetal bovine serum，FBS）１０％＋２－ＭＥ（mercaptoethanol）培地で培養中のＴＨＰ－１を回収し、トリパンブルー（trypan blue）染色により生存率が９７％以上であることを確認した。その後、室温で１２００ｒｐｍの速度で５分間遠心分離した後、細胞をＲＰＭＩ－ウシ胎児血清１０％＋２－ＭＥ培地に５×１０５個／ｍｌで再懸濁して準備した。次いで、細胞を２４ウェルプレートに５００μｌずつ（１サンプル当たり３ウェルずつ）分注した。次いで、各ウェルにＰＭＡを２００ｎｇ／ｍｌに合わせて０．５μｌを処理し、ＲＰＭＩ＋２ＭＥ培地に希釈された５μＭ濃度の化合物をそれぞれ１０μｌずつ処理した。その後、細胞培養器（５％ＣＯ２インキュベーター）で４８時間培養した後、ｄＰＢＳに溶かしたＬＰＳを１００ｎｇ／ｍｌに合わせて５μｌを処理し、細胞培養器（５％ ＣＯ２インキュベーター）で２４時間培養した。
対照群では、０．０５％のジメチルスルホキシド（dimethylsulfoxide，DMSO）／ＲＰＭＩ培地を１０μｌ処理した。培養した細胞の培地を新しいマイクロチューブで回収し、細胞をＴｒｉｚｏｌ（invitrogen）１ｍｌで回収して－８０℃で保存した。回収した培地１０μｌ、ａｓｓａｙ ｄｉｌｕｅｎｔ ｂｕｆｆｅｒ４０μｌをＦＡＣＳ用チューブ（BD falcon）に入れてサンプルを１／５に希釈した。１サンプル当たりキャプチャービーズ（capture bead）をボルテックスした後１μｌ、キャプチャービーズ希釈溶液（capture bead diluent）を４９μｌ入れて、キャプチャービーズ溶液を１サンプル当たり５０μｌ 作った。キャプチャービーズ溶液をボルテックスで混合した後、各サンプルが入っているＦＡＣＳ用チューブにキャプチャービーズ溶液を５０μｌずつ入れ、さらにボルテックスした後、常温で１時間置いた。
１時間後、ＰＥ検出試薬（PE detection reagent）１μｌ、ＰＥ検出希釈溶液（detection reagent diluent）４９μｌを入れて、ＰＥ検出溶液（PE detection solution）を１サンプル当たり５０μｌ作った。ボルテックスした後、キャプチャービーズ溶液とサンプルが入っているＦＡＣＳ用チューブに、ＰＥ検出（PE detection）溶液を１サンプル当たり５０μｌずつ加えた。ＦＡＣＳ用チューブをボルテックスした後、常温で１時間置いた。１時間後、ＣＢＡ洗浄バッファー（wash buffer）を１つのチューブ当たり１ｍｌずつ入れ、４００ｇ、５分間遠心分離した後、上清液を除去した。弱くボルテックスした後、固定バッファー（Fix buffer）を１５０μｌ入れて弱くボルテックスした後、フローサイトメトリー（Flow cytometry）を用いて分析した。
その結果、図３及び図４に示すように、ＬＰＳ刺激によるＴＨＰ－１のＩＬ－６の産生が化合物処理によって有意に減少した。具体的には、対照群（vehicle）の結果と比較して、本発明のすべての化合物において低い結果を示した。これは、化合物がＩＬ－６の産生を効果的に抑制することを意味する。
３．調節Ｔ細胞の産生効果
本発明による化合物の免疫寛容（immune tolerance）誘導効果を調べるために、以下のようにインビトロ（in vitro）調節Ｔ細胞（Foxp3+Treg）の産生実験を行った。
ヒト末梢血液（AllCells）とリン酸緩衝食塩水（Phosphate buffered saline，PBS）を１：１の割合で混合して混合液を作り、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（Sigma）上層に混合されないようにゆっくりと上げた。３５０ｇで２０分間遠心分離して中間層の単核球層のみを収集し、ＨＢＳＳ（Hanks' Balanced Salt Solution、Gibco（登録商標））で洗浄した。Ｔ細胞を得るためにＭＡＣＳバッファー（Miltenyi Biotec）でもう一回洗浄した後、ＣＤ４マイクロビーズ（Microbeads，Miltenyi Biotec）でポジティブセレクション（positive selection，autoMACS seperator，Miltenyi Biotec）した。前記の方法で収集したＴ細胞をＲＰＭＩ－ウシ胎児血清（fetal bovine serum，FBS）１０％＋２－ＭＥ（mercaptoethanol）培地に５×１０５／ｍｌで再懸濁して準備した。Ｔ細胞の活性化のために１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（eBioscienceTM）を４８ウェルプレートに１５０μｌ分注し、細胞培養器（３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター）で３時間反応させた後、リン酸緩衝食塩水で洗浄して準備した。準備したプレートに再懸濁したＴ細胞を２５０μｌずつ分注し、各ウェルに抗ＣＤ２８の２μｇ／ｍｌ（eBioscienceTM）、ＴＧＦβ－１の５ｎｇ／ｍｌ（R&D systems）、そしてＩＬ－２の５０Ｕ／ｍｌ（Miltenyi Biotec）を処理した。ＲＰＭＩ＋２ＭＥ培地に希釈された２．５μＭ濃度の化合物をそれぞれ５μｌずつ処理し、７日間細胞培養器（３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター）で培養した。対照群では、０．０５％ジメチルスルホキシド（dimethylsulfoxide，DMSO）／ＲＰＭＩ培地を５μｌ処理した。７日後、調節Ｔ細胞の産生効果を確認するために、培養細胞を回収してＦｏｘｐ３タンパク質を確認した。
回収した細胞を５ｍｌのＦＡＣＳ用チューブ（BD Falcon）に入れ、１ｍｌのリン酸緩衝食塩水で洗浄した。細胞を０．１ｍｌのＦＡＣＳ緩衝溶液（０．１％ＮａＮ３、１％ＦＢＳ）に再懸濁し、抗体の非特異的結合を防ぐために、１μｇのヒト免疫グロブリンＧ（Human IgG，Sigma）を処理した。４℃で１５分間反応させた後、ＦＡＣＳ緩衝溶液で細胞を洗浄した。サンプルが入っているＦＡＣＳ用チューブに固定／透過（Fixation/Permeabilization）溶液（eBioscienceTM）を１サンプル当たり１ｍｌずつ加え、４℃で１時間反応させた後、透過バッファー（Permeabilization buffer，eBioscienceTM）で２回洗浄した。その後、０．２５μｇのＦｏｘｐ３モノクローナル抗体（monoclonal antibody，eBioscienceTM）を処理し、４℃で３０分間染色した。透過バッファーで２回洗浄し、０．３ｍｌのＦＡＣＳ緩衝溶液に懸濁した後、フローサイトメトリー（Flow cytometry）で測定した。
その結果、実験した化合物５、８、４３、４０、２３、２６、７１、８１、２、４４、４７、５６、６４及び４１の処理により、Ｆｏｘｐ３＋調節Ｔ細胞の産生が促進されることを確認することができた（図５を参照）。これにより、前記化合物は調節Ｔ細胞の効果的な産生および増殖を誘導することが分かる。
４．炎症性腸疾患の治療効果の確認
本発明による化合物の炎症性腸疾患の治療効果を調べるために、以下のようにＣ５７ＢＬ／６マウスに炎症性腸疾患を誘導し、化合物（８、４３、４０、２６、４４、５４、６０）を投与してその効果を評価した（図６～７）。
実験０日目にＤＳＳ（Dextran sulfate sodium，MP biomedicals，Cat No．160110）を１．５％で滅菌蒸留水に溶かして調製した１．５％ＤＳＳ溶液を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、雌、１８±２ｇ）に７日間飲用させた。１．５％ＤＳＳ溶液を２日間隔で交換した。実験８日目からは滅菌蒸留水を飲用させた。実験０日目から２日間隔で体重と重症指数を測定し、炎症性腸疾患の発症の有無を確認した。
マウス１匹当たり２０ｍｇ／ｋｇの化合物を投与容量の１０％（ｖ／ｖ）に相当するＤＭＳＯに完全に溶かした後、最終ＤＭＳＯ：クレモフォールＥＬ：リン酸緩衝食塩水（１：１：８，ｖ／ｖ／ｖ）となるようにクレモフォールＥＬ－リン酸緩衝食塩水混合物に希釈し、２００μｌずつ実験２日目から実験１１日目まで合計１０回を毎日経口投与した。炎症性腸疾患の重症指数は０～１０段階に分類した重症指数体系であり、目視観察して２日間隔で記録した。
炎症性腸疾患の症状に対しては、以下の３つの項目のスコアを合計して指数評価した（表３）。
分析の結果、溶媒対照群は実験６日目から体重が減少し始め、実験１０日目には体重が１０％以上減少し、重症指数が５以上増加し、腸炎が１００％誘導されたことを確認した。溶媒対照群のマウスは、重症指数が最大値である実験１０日目に重症指数７．２９±２．２９を示した。本発明の化合物８、４３、４０、２６、４４、５４または６０の２０ｍｇ／ｋｇ投与群は、実験１０日目には溶媒対照群に比べて統計的に有意な治療効果を示し、実験１５日目には大腸の重量：長さの割合（weight：length ratio，mg/cm）の比較により、形態学的にも腸炎症を有意に抑制することを確認した（溶媒対照群に対して＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１、図６、７参照）。本発明の化合物８、４３、４０、２６、４４、５４および６０は、２０ｍｇ／ｋｇの投与時に優れた炎症抑制効果を示した。
実験１５日目にマウスの大腸を摘出し、ｍＲＮＡサンプルを作製した。ｍＲＮＡを抽出するために、大腸組織を粉砕機（homogenizer）で粉砕して均質懸濁液を得た。均質懸濁液中のｍＲＮＡを、イージースピンＴＭ（easy-spinTM，DNA free）トータルＲＮＡ抽出キット（Intron biotechnology，Cat No．17221）を用いたフェノール－クロロホルム沈降法で抽出した。分離したＲＮＡから逆転写でｃＤＮＡを合成し、ＣＦＸ９６（Bio-rad）検出システムでｉＱ ＳＹＢＲ－Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Bio-rad）を用いて、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（real-time PCR）で炎症性サイトカインの発現を確認した。ＧＡＰＤＨを対照酵素として用いたΔΔｃｔ法で酵素発現量の相対値を比較した。正常マウスの大腸を対照群として用いて１倍数を設定した。
リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応の結合温度（annealing temperature）を５８℃とし、４５回（cycle）の条件で行い、次のようなプライマー配列を用いた。
マウスＩＬ－１β順方向、５’－ＣＴＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＴＣＧ ＧＡＣ ＣＣＡ ＴＡＴ－３’（配列番号５）と逆方向、５’－ＴＴＧ ＡＡＧ ＡＣＡ ＡＡＣ ＣＧＣ ＴＴＴ ＴＣＣ Ａ－３’（配列番号６）。
マウスＩＬ－６順方向、５’－ＣＡＴ ＧＴＴ ＣＴＣ ＴＧＣ ＧＡＡ ＡＴＣ ＧＴＧ Ｇ－３’（配列番号７）と逆方向、５’－ＡＡＣ ＧＣＡ ＣＴＡ ＧＧＴ ＴＴＧ ＣＣＧ ＡＧＴ Ａ－３'（配列番号８）。
マウスＩＬ－１７Ａ順方向、５’－ＴＴＴ ＡＡＣ ＴＣＣ ＣＴＴ ＧＧＣ ＧＣＡ ＡＡＡ－３’（配列番号９）と逆方向、５’－ＣＴＴ ＴＣＣ ＣＴＣ ＣＧＣ ＡＴＴ ＧＡＣ ＡＣ－３’（配列番号１０）。
マウスＴＮＦ－α順方向 、５’－ＣＣＡ ＣＡＣ ＣＧＴ ＣＡＧ ＣＣＧ ＡＴＴ ＴＧ－３’（配列番号１１）と逆方向、５’－ＣＡＣ ＣＣＡ ＴＴＣ ＣＣＴ ＴＣＡ ＣＡＧ ＡＧＣ－３’（配列番号１２）。
マウスＩＬ－１０順方向、５’－ＣＡＡ ＧＧＣ ＡＧＴ ＧＧＡ ＧＣＡ ＧＧＴ ＧＡＡ－３’（配列番号１３）と逆方向、５’－ＣＧＧ ＡＧＡ ＧＡＧ ＧＴＡ ＣＡＡ ＡＣＧ ＡＧＧ ＴＴ－３’（配列番号１４）。
マウスＦｏｘｐ３順方向、５’－ＣＣＣ ＡＴＣ ＣＣＣ ＡＧＧ ＡＧＴ ＣＴＴ Ｇ－３’（配列番号１５）と逆方向、５’－ＡＣＣ ＡＴＧ ＡＣＴ ＡＧＧ ＧＧＣ ＡＣＴ ＧＴＡ－３’（配列番号１６）。
マウスＧＡＰＤＨ順方向、５’－ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＧＣ－３’（配列番号１７）と逆方向、５’－ＧＧＣ ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＧＴ ＧＧＴ ＣＡＴ ＧＡ－３’（配列番号１８）。
大腸病変内の炎症性サイトカインＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１７Ａ、ＴＮＦ－αの発現量は、化合物８、４０、２６または５４の投与により溶媒対照群に比べて有意に減少した（溶媒対照群に対して＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１、図８参照）。大腸病変内の免疫調節因子ＩＬ－１０、Ｆｏｘｐ３の発現量は、化合物８、４０、２６または５４の投与により溶媒対照群に比べて有意に増加した（溶媒対照群に対して＊＊＊、ｐ＜０．００１、図９参照）。これらの結果から、本発明の化合物８、４０、２６および５４は、腸内炎症因子の発現を有意に減少させるとともに、腸内免疫調節因子の発現を有意に増加させることが分かった。
本発明による化合物の粘膜治療効果を調べるために、以下のようにＣ５７ＢＬ／６マウスに炎症性腸疾患を誘導し、化合物（４０、２６、５４）を投与して腸上皮障壁（epithelial braier intectriony）の回復程度を評価した。
実験０日目にＤＳＳを１．５％で滅菌蒸留水に溶かして調製した１．５％ＤＳＳ溶液をＣ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、雌、１８±２ｇ）に７日間飲用させた。１．５％ＤＳＳ溶液を２日間隔で交換した。実験８日目からは滅菌蒸留水を飲用させた。実験０日目から２日間隔で体重と重症指数を測定し、炎症性腸疾患の発症の有無を確認した。
本発明による化合物４０、２６または５４投与群では、マウス１匹当たり２０ｍｇ／ｋｇの化合物を投与容量の１０％（ｖ／ｖ）に相当するＤＭＳＯに完全に溶かした後、最終ＤＭＳＯ：クレモフォールＥＬ：リン酸緩衝食塩水（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）となるようにクレモフォールＥＬ－リン酸緩衝食塩水混合物に希釈し、２００μｌずつ実験２日目から実験９日目まで合計８回毎日経口投与した。
ＦＩＴＣ－デキストラン投与の１日前にマウスを一晩断水した。実験１０日目にＦＩＴＣ－デキストラン（Fluorescein isothiocyanate-dextran，Sigma aldrich，Cat No．FD40）６００ｍｇ／ｋｇをリン酸緩衝食塩水に希釈して２００μｌで１回経口投与した。経口投与４時間後、心臓から抽出した血清中の蛍光度（fluorometer，excitation 485-490nm，emission 528-530nm）を測定した。
血清ＦＩＴＣ－デキストランは、化合物４０、２６または５４の投与により溶媒対照群に比べて有意に減少した（溶媒対照群に対して＊＊＊、ｐ＜０．００１、図１０参照）。この結果から、本発明の化合物４０、２６および５４は有意な粘膜治療効果を示すことが分かった。
前述のように、本発明の化合物８、４３、４０、２６、４４、５４および６０は、炎症性腸疾患マウスモデルにおいて経口投与治療効果を有するので、新規の炎症性腸疾患の経口治療薬として有用な治療戦略を提示することができる。
５．炎症誘導大腸癌の予防効果の確認
本発明による化合物の炎症誘導大腸癌の予防効果を調べるために、以下のようにＣ５７ＢＬ／６マウスのＡＯＭ／ＤＳＳ誘導大腸癌マウスモデルに化合物４０および２６を投与し、その効果を評価した（図１１）。発癌物質であるＡＯＭ（azoxymethane）はマウスへの単独投与によっては大腸癌を発生させないが、ＤＳＳで炎症を追加すると大腸癌が発生する。
ＡＯＭ（Sigma aldrich，Cat No．A5486）を１０ｍｇ／ｋｇとなるように生理食塩水で希釈し、２００μｌずつ７日間隔（実験０、７、１４日）で合計３回腹腔投与した。実験７日目にＤＳＳを１．５％で滅菌蒸留水に溶かして調製した１．５％ＤＳＳ溶液をＣ５７ＢＬ／６マウス（８週齢、雌、１８±２ｇ）に７日間飲用させた。１．５％ＤＳＳ溶液は２日間隔で交換した。実験８日目からは滅菌蒸留水を飲用させた。
本発明による化合物４０および２６投与群では、マウス１匹当たり２０ｍｇ／ｋｇの化合物を投与容量の１０％（ｖ／ｖ）に相当するＤＭＳＯに完全に溶かした後、最終ＤＭＳＯ：クレモフォールＥＬ：リン酸緩衝食塩水（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）となるようにクレモフォールＥＬ－リン酸緩衝食塩水混合物に希釈し、２００μｌずつ実験７日目から実験２１日目まで合計１４回毎日経口投与した。溶媒対照群の体重が最高点となる実験５６日と比較して１５％減少する時点で化合物の大腸癌予防効果を確認した。
実験９３日目にマウスの大腸を摘出し、大腸内腫瘍の発生を確認した。大腸内腫瘍の数は、溶媒対照群の場合は１１．３３±４．３３、化合物４０の場合は３．００±２．００、化合物２６の場合は３．１７±１．１７であり、化合物４０および２６投与により溶媒対照群に比べて腫瘍数が有意に減少した（溶媒対照群に対して＊＊、ｐ＜０．０１、図１１参照）。
前述のように、本発明の化合物４０及び２６は、炎症誘導大腸癌の発生抑制効果を有するので、大腸癌の予防効果を有する新規の炎症性腸疾患の経口治療剤として有用な治療戦略を提示することができる。
６．多発性硬化症の治療効果の確認
本発明による化合物の多発性硬化症の治療効果を調べるために、以下のようにＣ５７ＢＬ／６マウスに自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘導し、化合物（８、４３、４０、２６）を投与してその効果を評価した（図１２～１４）。
実験０日目にミエリン希突起膠細胞糖タンパク質３５－５５（myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55，MOG 35-55，Peptron）（２００μｇ）、熱処理マイコバクテリウム・ツベルクローシス死菌体（heat killed Mycobacterium tuberculosis，Difco，Cat No．231141）（５００μｇ）、アジュバント（Complete Freund's adjuvant，Sigma aldrich，Cat No．F5506）を混合して７分間浸水した。浸水したペプチドをＣ５７ＢＬ／６マウス（７週齢、雌、１７±２ｇ）の両脇腹（flank）にそれぞれ１００μｌ皮下注射（subcutaneous injection）した後、百日咳毒素（pertussis toxin，Sigma aldrich，Cat No．P298）（２００ｎｇ）１００μｌを尾部に静脈投与した。
実験２日目に同量の百日咳毒素を静脈投与した。マウスの注入部位にイマージョン（immersion）が漏れて出るかを確認し、実験７日目から目視観察して多発性硬化症の発症の有無を確認した。
化合物８、４３、４０および２６処理群では、マウス１匹当たり２０ｍｇ／ｋｇの化合物を投与容量の１０％（ｖ／ｖ）に相当するＤＭＳＯに完全に溶かした後、最終ＤＭＳＯ：クレモフォールＥＬ：リン酸緩衝食塩水（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）となるようにクレモフォールＥＬ－リン酸緩衝食塩水混合物に希釈し、２００μｌずつ実験１２日目から実験１７日目まで合計６回毎日腹腔投与した。多発性硬化症指数は実験７日目から０～５段階に分類した重症指数体系であり、目視観察して２日間隔で記録した。自己免疫脳脊髄炎の症状は以下の項目に従って指数評価した（表４参照）。
分析の結果、全ての実験群は実験７日目から多発性硬化症が発症し、実験１８日目には重症指数３．０以上の急性反応が１００％誘導されたことを確認した。
溶媒対照群のマウスの重症指数は、急性反応期間である実験１８日目には３．３３±０．１７、慢性反応期間である実験３６日目には３．３３±０．１７を示した。さらに、溶媒対照群では再発寛解パータン（relapse-remitting pattern）を示し、実験の全期間にわたって高い重症指数を示した。
これに対して、化合物処理群の重症指数は、実験１８日目には化合物８処理群１．１７±０．５６、化合物４３処理群１．８３±０．１７、化合物４０処理群１．１７±０．２２、化合物２６処理群１．３３±０．５６であり、実験３６日目には化合物８処理群１．１７±０．５６、化合物４３処理群２．００±０．３３、化合物４０処理群１．３３±０．６２、化合物２６処理群１．３３±０．２２であり、溶媒対照群に比べて緩和された急性反応と慢性反応治療効果を示した。
また、化合物８、４３、４０および２６処理群では、実験１６日目から溶媒対照群に比べて統計的に有意な治療効果が確認され、投与中断後も溶媒対照群に比べて統計的に有意な治療効果を維持した（溶媒対照群に対して＊＊＊、ｐ＜０．００１、図１２参照）。これにより、マウスに２０ｍｇ／ｋｇの投与時に優れた初期治療及び持続的な再発防止効果を示すことを確認できる。
実験４２日目にマウスの脊髄を摘出し、ｍＲＮＡサンプルを作製した。ｍＲＮＡを抽出するために、脊髄組織を粉砕機（homogenizer）で粉砕して均質懸濁液を得た。均質懸濁液中のｍＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Invitrogen，Cat No．15596018）を用いたフェノール－クロロホルム沈降法で抽出した。分離したＲＮＡから逆転写でｃＤＮＡを合成し、ＣＦＸ９６（Bio-rad）検出システムでｉＱ ＳＹＢＲ－Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Bio-rad）を用いて、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（real-time PCR）で炎症性サイトカインの発現を確認した。ＧＡＰＤＨを対照酵素として用いたΔΔｃｔ法で酵素発現量の相対値を比較した。ＷＴマウスの脊髄を対照群として用いて１倍数を設定した。
リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応の結合温度（annealing temperature）を５８℃とし、４５回（cycle）の条件で行い、次のようなプライマー配列を用いた。
マウスＩＦＮ－γ順方向、５’－ＡＴＧ ＡＡＣ ＧＣＴ ＡＣＡ ＣＡＣ ＴＧＣ ＡＴＣ－３''（配列番号１９）と逆方向、５’－ＣＣＡ ＴＣＣ ＴＴＴ ＴＧＣ ＣＡＧ ＴＴＣ ＣＴＣ－３''（配列番号２０）。
マウスＩＬ－１７Ａ順方向、５’－ＴＴＴ ＡＡＣ ＴＣＣ ＣＴＴ ＧＧＣ ＧＣＡ ＡＡＡ－３''（配列番号２１）と逆方向、５’－ＣＴＴ ＴＣＣ ＣＴＣ ＣＧＣ ＡＴＴ ＧＡＣ ＡＣ－３''（配列番号２２）。
マウスＩＬ－１β順方向、５’－ＣＴＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＴＣＧ ＧＡＣ ＣＣＡ ＴＡＴ－３''（配列番号２３）と逆方向、５’－ＴＴＧ ＡＡＧ ＡＣＡ ＡＡＣ ＣＧＣ ＴＴＴ ＴＣＣ Ａ－３''（配列番号２４）。
マウスＧＡＰＤＨ順方向、５’－ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＧＣ－３''（配列番号２５）と逆方向、５’－ＧＧＣ ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＧＴ ＧＧＴ ＣＡＴ ＧＡ－３''（配列番号２６）。
マウスＩＬ－１０順方向、５’－ＣＡＡ ＧＧＣ ＡＧＴ ＧＧＡ ＧＣＡ ＧＧＴ ＧＡＡ－３'（配列番号２７）と逆方向、５’－ＣＧＧ ＡＧＡ ＧＡＧ ＧＴＡ ＣＡＡ ＡＣＧ ＡＧＧ ＴＴ－３''（配列番号２８）。
マウスＦｏｘｐ３順方向、５’－ＣＣＣ ＡＴＣ ＣＣＣ ＡＧＧ ＡＧＴ ＣＴＴ Ｇ－３''（配列番号２９）と逆方向、５’－ＡＣＣ ＡＴＧ ＡＣＴ ＡＧＧ ＧＧＣ ＡＣＴ ＧＴＡ－３''（配列番号３０）。
また、脊髄病変内の炎症性サイトカインＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１βの発現量が８、４３、４０および２６化合物の投与により溶媒対照群に比べて有意に減少した（溶媒対照群に対して＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１、図１３参照）。脊髄病変内の免疫調節因子ＩＬ－１０、Ｆｏｘｐ３の発現量は、８、４３、４０および２６化合物の投与により溶媒対照群に比べて有意に増加した（溶媒対照群に対して＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１、図１４参照）。
前述のように、本発明の化合物８、４３、４０および２６は、多発性硬化症マウスモデルにおいて治療効果を有するとともに投与中断後も再発防止効果が持続するので、新規の多発性硬化症の経口治療薬として有用な治療戦略を提示することができる。
７．移植片対宿主疾患の治療効果の確認
本発明による化合物の移植片対宿主疾患（Graft versus host disease，GVHD）の抑制効果を調べるために、以下のようにＣ５７ＢＬ／６マウスに同種骨髄移植で急性移植片対宿主疾患を誘導し、化合物（４０、２６）を投与してその効果を評価した（図１５～１６）。
Ｂａｌｂ／ｃ ＩＦＮ－γノックアウトマウス（８～１２週齢、雌、１８±３ｇ）の脾臓（spleen）を摘出し、ＲＰＭＩ培地を加えて粉砕した後、４０μｍのセルストライナー（BD Falcon）に通して単一細胞懸濁液（single cell suspension）を得た。単一細胞懸濁液は遠心分離（１２００ｒｐｍ、５分）後に上清液を捨て、ＡＣＫ（塩化アンモニウム/重炭酸カリウム（ammonium chloride/potassium bicarbonate））溶解バッファー（lysis buffer）（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ，１ｍＭ ＫＨＣＯ３，０．１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡ）１ｍｌを加えて１分間撹拌し、ＲＰＭＩ培地で洗浄した。
細胞懸濁液は、遠心分離後、マウスＣＤ９０．２マイクロビーズ（Miltenyi Biotec，Cat No．130－121－278）に４℃、２０分間反応させた。反応が終了した細胞懸濁液をａｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）ランニングバッファー（Running Buffer，Miltenyi Biotec，Cat No．130－091－221）１０ｍｌで遠心分離して洗浄した後、ａｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）ランニングバッファー３ｍｌで再懸濁した。ａｕｔｏＭＡＣＳ ｐｒｏ（Miltenyi Biotec）を用いて、細胞懸濁液からＣＤ９０．２＋Ｔ細胞を得た（positive selection）。得られたＣＤ９０．２＋Ｔ細胞と共に移植される骨髄細胞を得るために、正常（wild-type）Ｂａｌｂ／ｃマウス（８～１２週齢、雌、１８±３ｇ）の両側大腿骨および脛骨を無菌的に得た。大腿骨と脛骨の先端を切り、骨組織に注射器（大腿骨２１Ｇ、脛骨２６Ｇ）でＲＰＭＩ培地を灌流させて骨髄を抽出した。抽出した骨髄を４０μｍのセルストライナーに通して単一細胞懸濁液を得た。
骨髄単一細胞懸濁液は、遠心分離後に上清液を捨て、ＡＣＫ溶解バッファー（lysis buffer）５００μｌを加えて３０秒間撹拌し、ＲＰＭＩ培地で洗浄した。遠心分離後、マウスＣＤ９０．２マイクロビーズに４℃、２０分間反応させた。反応が終了した細胞懸濁液をａｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）ランニングバッファー１０ｍｌで遠心分離して洗浄した後、ａｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）ランニングバッファー３ｍｌで再懸濁した。細胞懸濁液からＡｕｔｏＭＡＣＳ ｐｒｏによりＣＤ９０．２－Ｔ細胞除去骨髄細胞（T cell－depleted bone marrow cells，TCD－BMs）を得た（negative selection）。得られたＩＦＮ－γノックアウトＣＤ９０．２＋Ｔ細胞と正常ＴＣＤ－ＢＭをリン酸緩衝食塩水で洗浄した。Ｔ細胞は１×１０７／ｍｌで、ＴＣＤ－ＢＭｓは５×１０７／ｍｌでリン酸緩衝食塩水に再懸濁して準備した。
正常Ｃ５７ＢＬ／６マウス（９～１１週齢、雌、１９±３ｇ）に放射線照射器を用いて８５０ｃＧｙの放射線を３時間間隔で二分割して照射した。準備したＣＤ９０．２＋Ｔ細胞とＴＣＤ－ＢＭを１：１の割合で混合して作製した移植片を１００μｌずつＣ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈を介して注入した。本発明による化合物４０または２６投与群では、マウス１匹当たり２０ｍｇ／ｋｇの化合物を投与容量の１０％（ｖ／ｖ）に相当するＤＭＳＯに完全に溶かした後、最終ＤＭＳＯ：クレモフォールＥＬ：リン酸緩衝食塩水（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）となるようにクレモフォールＥＬ－リン酸緩衝食塩水混合物に希釈し、２００μｌずつ移植後４日目から９日目まで合計６回毎日腹腔投与した。移植片対宿主病の重症指数は、体重減少、毛の状態、姿勢、活動性、皮膚の変化を各項目ごとに０～２点ずつ合計１０点に分類した重症指数体系であり、目視観察して２日間隔で評価した。
分析の結果、溶媒対照群のマウスは、重症指数が移植後７日目に４．１２±１．２０となり、移植片対宿主疾患が１００％誘導された。移植後１４日目には、溶媒対照群６．２０±１．２０、化合物４０処理群０．６０±０．６０、化合物２６処理群２．８０±０．８０となり、溶媒対照群に比べて有意に緩和された移植片対宿主疾患の治療効果を示した（溶媒対照群に対して＊＊＊、ｐ＜０．００１、図１５参照）。
実験１５日目にマウスの肺を摘出し、ｍＲＮＡサンプルを作製した。ｍＲＮＡを抽出するために、脊髄組織を粉砕機（homogenizer）で粉砕して均質懸濁液を得た。均質懸濁液中のｍＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Invitrogen，Cat No．15596018）を用いたフェノール－クロロホルム沈降法で抽出した。分離したＲＮＡから逆転写でｃＤＮＡを合成し、ＣＦＸ９６（Bio-rad）検出システムでｉＱ ＳＹＢＲ－Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Bio-rad）を用いて、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（real-time PCR）で炎症性サイトカインの発現を確認した。ＧＡＰＤＨを対照酵素として用いたΔΔｃｔ法で酵素発現量の相対値を比較した。正常マウスの脊髄を対照群として用いて１倍数を設定した。
リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応の結合温度（annealing temperature）を５８℃とし、４５回（cycle）の条件で行い、次のようなプライマー配列を用いた。
マウスＩＬ－１７Ａ順方向、５’－ＴＴＴ ＡＡＣ ＴＣＣ ＣＴＴ ＧＧＣ ＧＣＡ ＡＡＡ－３’（配列番号３１）と逆方向、５’－ＣＴＴ ＴＣＣ ＣＴＣ ＣＧＣ ＡＴＴ ＧＡＣ ＡＣ－３’（配列番号３２）。
マウスＩＬ－６順方向、５’－ＣＡＴ ＧＴＴ ＣＴＣ ＴＧＣ ＧＡＡ ＡＴＣ ＧＴＧ Ｇ－３’（配列番号３３）と逆方向、５’－ＡＡＣ ＧＣＡ ＣＴＡ ＧＧＴ ＴＴＧ ＣＣＧ ＡＧＴ Ａ－３’（配列番号３４）。
マウスＩＬ－１０順方向、５’－ＣＡＡ ＧＧＣ ＡＧＴ ＧＧＡ ＧＣＡ ＧＧＴ ＧＡＡ－３’（配列番号３５）と逆方向、５’－ＣＧＧ ＡＧＡ ＧＡＧ ＧＴＡ ＣＡＡ ＡＣＧ ＡＧＧ ＴＴ－３’（配列番号３６）。
マウスＧＡＰＤＨ順方向、５’－ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＧＣ－３’（配列番号３７）と逆方向、５’－ＧＧＣ ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＧＴ ＧＧＴ ＣＡＴ ＧＡ－３’（配列番号３８）。
肺組織内の炎症性サイトカインＩＬ－６、ＩＬ－１７Ａの発現量は、化合物４０および２６の投与により溶媒対照群に比べて有意に減少した。肺組織内の免疫調節因子ＩＬ－１０の発現量は、化合物４０および２６の投与により溶媒対照群に比べて有意に増加した（溶媒対照群に対して＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１、図１６参照）。
前述のように、本発明の化合物４０および２６は、移植片対宿主疾患マウスモデルにおいて治療効果を有するとともに免疫調節因子の増加によって投与停止後も治療効果が持続するので、新規の移植片対宿主疾患の経口治療薬として有用な治療戦略を提示することができる。

Claims (9)

  1. 下記化学式１で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。

    （式中、Ｒ１～Ｒ４はそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり、Ｒ５及びＲ６は独立して水素またはＣ１～Ｃ５のアルキルであり、
    ＡはＣ５～Ｃ１２の単環または二環基であり、
    前記環基の各環は１～３個のヘテロ原子で置換されていてもよく、
    前記環基はハロゲン、Ｃ１～Ｃ５のアルキルまたはＣ１～Ｃ５のアルコキシで置換されていてもよく、
    前記Ａは以下の環基からなる群より選択され、
    ここで、Ｒ９～Ｒ１２及びＲ１７～Ｒ２４は、それぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシであり、
    Ｒ１０～Ｒ１２の少なくとも１つは、ハロゲンまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシであり、
    Ｒ１３～Ｒ１６は水素であり、
    ただし、前記Ｒ１～Ｒ４及びＲ１３～Ｒ１６がいずれも水素である化合物は除く。）
  2. 前記Ａは以下の環基からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
    （式中、Ｒ９～Ｒ１２はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシであり、
    Ｒ１０～Ｒ１２の少なくとも１つは、ハロゲンまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシであり、
    Ｒ１３～Ｒ１６は水素であり、
    ただし、前記Ｒ１～Ｒ４及びＲ１３～Ｒ１６がいずれも水素である化合物は除く。）
  3. Ｒ２及びＲ３がそれぞれ独立してＦ、ＣｌまたはＢｒである、請求項１に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
  4. 以下の化合物からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（６－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（キノリン－２－イル）アセトアミド；および、
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（４，５，６，７－テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）アセトアミド
  5. 下記化学式１で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む自己免疫疾患の治療または予防用の薬学組成物。
    （式中、Ｒ１～Ｒ４はそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり、Ｒ５及びＲ６は独立して水素またはＣ１～Ｃ５のアルキルであり、
    Ａは以下の環基からなる群より選択され、
    ここで、Ｒ９～Ｒ２４はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
  6. 前記化学式１で表される化合物は、以下の化合物からなる群より選択される化合物である、自己免疫疾患の治療または予防用である、請求項５に記載の薬学組成物。
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
    ２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，４，５－トリメトキシフェニル）アセトアミド；
    Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（６－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（キノリン－２－イル）アセトアミド；および、
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（４，５，６，７－テトラヒドロベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）アセトアミド
  7. 多発性硬化症、炎症性腸疾患、移植片対宿主疾患、喘息、アトピー、乾癬、関節リウマチ、全身紅斑ループスおよび１型糖尿病からなる群より選択されるいずれかの自己免疫疾患の治療または予防用である、請求項５に記載の薬学組成物。
  8. 下記化学式１で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を含む大腸癌の治療または予防用の薬学組成物。
    （式中、Ｒ１～Ｒ４はそれぞれ独立して水素またはハロゲンであり、Ｒ５及びＲ６は独立して水素またはＣ１～Ｃ５のアルキルであり、
    Ａは以下の環基からなる群より選択され、
    ここで、Ｒ９～Ｒ１６はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３のアルキルまたはＣ１～Ｃ３のアルコキシである。）
  9. 前記化学式１で表される化合物は、以下の化合物からなる群より選択される化合物である、請求項８に記載の大腸癌の治療または予防用の薬学組成物。
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（５－ブロモ－６－メチルピリジン－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチル－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    ２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－（５－クロロ－６－フルオロピリジン－２－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－Ｎ－メチルアセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－クロロ－１－メチル－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド；および、
    Ｎ－（ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－（６－クロロ－１Ｈ－インドール－３－イル）アセトアミド
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