CN111700898B - 巴戟甲素的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及巴戟甲素的应用，具体涉及巴戟甲素在制备防治高血压和/或肾病的药物中的应用。所述肾病系原发性高血压引起的肾病或者其他原因引起的肾病。本发明的发明人经过大量实验发现，巴戟甲素能够防治高血压，也能够防治肾病，特别是，经在SHR高血压肾病模型大鼠上验证，该药物能有效防治高血压肾病。

Description

巴戟甲素的应用

技术领域

本发明涉及医药和制药技术领域，特别是涉及巴戟甲素的应用。

背景技术

高血压的发病与肾脏的关系十分密切，肾脏既是血压调节的重要器官，同时也是高血压损害的主要靶器官之一。继发于高血压的肾脏损害即高血压肾病，是高血压最重要的并发症之一。据统计，高血压肾病发生率为42%，仅次于心脏并发症，其中18%的高血压肾病患者最终出现慢性肾功能衰竭。我国高血压肾病患者占肾衰竭腹膜透析和血液透析患者数量的第3位，仅次于慢性肾炎和糖尿病，严重危害高血压患者生命和生存质量。

目前高血压肾病的临床治疗措施主要是抗高血压药物的应用：血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素受体阻滞剂。但研究表明当前的治疗是远远不够的，在接受降压治疗的高血压患者中，尿蛋白排泄异常患者约4%-16%。过去10年里，美国慢性肾衰竭的发病率以每年9%的速度增长，其中因高血压而引起的约占28%，这提示目前临床使用的抗高血压药物不足以起到充分的肾脏保护作用。

巴戟甲素，分子式为C₁₂H₂₂O₁₁，化学名β-D-果呋喃糖基（2-2）β-D-果呋喃糖，化学结构式为：

。

巴戟甲素可从巴戟天中分离得到，具有抗抑郁、抗应激、抗心肌缺血再灌注损伤、促免疫活性、促精子生成等作用，但其在高血压、肾病药物中的应用，尚未见有报道，

发明内容

基于此，本发明的主要目的是提供一种巴戟甲素的应用，主要将其用于制备防治高血压和/或肾病的药物。

具体技术方案如下。

本发明涉及巴戟甲素在制备防治高血压和/或肾病的药物中的应用。

在其中一个实施例中，所述肾病系原发性高血压引起的肾病或者其他原因引起的肾病。

在其中一个实施例中，所述高血压为原发性高血压

在其中一个实施例中，所述药物包含活性成分巴戟甲素以及药学上可接受的辅料。

在其中一个实施例中，所述药物包含0.1 wt%-99.5wt%的所述巴戟甲素。

在其中一个实施例中，所述药物包含10.0 wt%-90.0wt%的所述巴戟甲素。

在其中一个实施例中，所述辅料选自稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂、等渗或等张调节剂中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述稀释剂选自淀粉类、糖类、纤维素类以及无机盐类中的至少一种；或/和，所述润湿剂选自水以及乙醇中的至少一种；或/和，所述黏合剂选自淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述崩解剂选自干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂以及泡腾崩解剂中的至少一种；或/和，所述润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述色香味调节剂选自色素、香料、甜味剂、胶浆剂以及矫臭剂中的至少一种；或/和，所述溶剂选自水、油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油以及乙酸乙酯中的至少一种；或/和，所述增溶剂选自吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物以及磺酸化物中的至少一种；或/和，所述助溶剂选自有机酸及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮以及甘油中的至少一种；或/和，所述乳化剂选自司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅以及皂土中的至少一种；或/和，所述助悬剂选自甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇以及触变胶中的至少一种；或/和，所述抗氧剂选自亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类中的至少一种；或/和，所述金属络合剂选自乙二胺四乙酸二钠以及多羧酸化合物中的一种；或/和，所述惰性气体选自氮气以及二氧化碳中的一种；或/和，所述防腐剂选自尼泊金类、有机酸及其盐、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类以及挥发油中的至少一种；或/和，所述局部止痛剂选自苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因以及普鲁卡因中的至少一种；或/和，所述pH调节剂选择盐酸、硫酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐以及枸橼酸盐中的至少一种；或/和，所述等渗或等张调节剂选自葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇以及木糖醇中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂或者胶囊剂。

在其中一个实施例中，所述药物的剂型为注射剂、口服液、眼用制剂或者外用制剂。

在其中一个实施例中，所述药物的给药途径包括静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、口服给药、舌下给药、鼻腔给药或者经皮给药。

本发明的有益效果如下：

本发明的发明人经过大量实验发现，巴戟甲素能够防治高血压，也能够防治肾病，特别是，经在SHR高血压肾病模型大鼠上验证，该药物能有效防治高血压肾病。

附图说明

图1为实施例3中ACE酶电泳图；

图2为实施例4中巴戟甲素对HUVEC细胞凋亡AO-EB染色的荧光显微镜摄片图(×200)；

图3为实施例4中巴戟甲素对HUVEC细胞凋亡百分率的影响实验结果图(与AGEs组相比：** p<0.01)；

图中，“Low”、“Middle”、“High”分别表示巴戟甲素的浓度为“10μmol/L”、“50μmol/L”、“250μmol/L”。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和／或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明实施例涉及巴戟甲素的新用途，具体涉及巴戟甲素在制备防治高血压和/或肾病的药物中的应用。

本发明的发明人经过大量实验发现，巴戟甲素能够防治高血压，也能够防治肾病，特别是，经在SHR高血压肾病模型大鼠上验证，该药物能有效防治高血压肾病。

具体地：巴戟甲素能够抑制内皮细胞凋亡。可以理解的是，所述内皮细胞凋亡可以为AGEs所致内皮细胞凋亡。所述巴戟甲素改善尿量异常。尿量异常指，与健康人的正常尿量相比，尿量较高等。巴戟甲素改善尿量异常，是指巴戟甲素能够用于将尿量异常的情况调节至正常尿量或者尽可能接近正常尿量。所述巴戟甲素改善微量白蛋白含量异常。微量白蛋白含量异常指，与健康人尿液所含微量白蛋白水平相比，微量白蛋白含量较高。巴戟甲素改善微量白蛋白含量异常是指巴戟甲素能够用于将尿量微量白蛋白异常的情况调节至正常微量白蛋白水平或者尽可能接近正常微量白蛋白水平。所述巴戟甲素改善血压异常。巴戟甲素改善血压异常是指巴戟甲素能将高于健康人正常的血压调至正常或者接近正常。所述巴戟甲素抑制血管紧张素转换酶（ACE）活性。所述巴戟甲素改善血糖异常。巴戟甲素改善血压异常是指巴戟甲素能将高于健康人正常的血糖含量调至正常或者接近正常。本发明涉及将巴戟甲素用于抑制内皮细胞凋亡、改善尿量异常、改善微量白蛋白含量异常、改善血压异常、抑制血管紧张素转换酶活性、改善血糖异常。

巴戟甲素为从巴戟天肉质根分离得到的天然活性成分，可以和药物载体制备成药物组合物，进而制备成各种口服剂型，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂等，使用方便，安全可靠。

优选地，所述肾病系原发性高血压引起的肾病或者其他原因引起的肾病。系原发性高血压引起的肾病也称为“高血压肾病”。“其他原因引起的肾病”指非高血压引发的肾脏损伤或者肾功能下降，例如慢性肾炎、糖尿病等引发的肾脏损伤或者肾功能下降。

优选地，所述高血压为原发性高血压。

优选地，所述药物包含巴戟甲素以及药学上可接受的辅料。

优选地，所述药物包含0.1 wt%-99.5wt%的所述巴戟甲素。进一步地，所述药物包含10.0 wt%-90.0wt%的所述巴戟甲素。

本发明实施例的所述药物的使用剂量可随特定的给药方式、病症的严重程度等而相应调整。一般情况下，巴戟甲素的临床口服用量根据动物(大鼠)体内实验的治疗最低起效量2.5mg/kg体重/日，按照体表面积换算得到人体的用药剂量为0.5mg/kg体重/日。

优选地，所述辅料例如：稀释剂（填充剂）、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂、等渗或等张调节剂等。

进一步地：稀释剂，如淀粉、蔗糖、纤维素类、无机盐类等；润湿剂，如水、乙醇等；黏合剂，如淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮、聚乙二醇等；崩解剂，如淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂、跑腾崩解剂等；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶、聚乙二醇等；色香味调节剂，如色素、香料、甜味剂、胶浆剂、矫臭剂等，具体如品红、木糖醇；溶剂，如水、油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油、乙酸乙酯等；增溶剂，如吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物、磺酸化物等；助溶剂，如有机酸（如枸橼酸）及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮以、甘油等；乳化剂，如司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅、皂土等；助悬剂，如甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇、触变胶等；抗氧剂，如亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类等；金属络合剂，如乙二胺四乙酸二钠、多羧酸化合物等；惰性气体，如氮气、二氧化碳等；防腐剂，如尼泊金类、有机酸及其盐（如苯甲酸钠）、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类以及挥发油等；局部止痛剂，如苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因以及普鲁卡因等；pH调节剂，如盐酸、硫酸、磷酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐、枸橼酸、枸橼酸盐等；等渗或等张调节剂，如葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇以及木糖醇等。可以理解的是，本发明实施例所述的稀释剂也可以叫填充剂，在药物制剂中发挥作用相同；本发明实施例所述的水为满足药剂要求的水，例如注射用水、纯化水等，油为注射用油；本发明实施例所述的防腐剂也可以称作抗菌剂，在制剂中发挥抑制微生物生长、延长保质期等作用；本发明实施例的润滑剂含有助流剂、抗黏剂等；本发明实施例所述的糖可以使糖粉或者是糖浆，糖的种类也不限于葡萄糖；本发明实施例所述的香料包括但不限于香精。

本发明实施例所述的药物，剂型不限，可以为固体制剂，如片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、胶囊剂等，液体制剂，如注射剂、口服液、眼用制剂或者外用制剂等。

以下通过具体实施例对本发明做进一步的阐述。

实施例1、巴戟甲素的制备

按照如下制备方法，从巴戟天中提取分离纯化制得巴戟甲素：

取巴戟天药材1.0kg，粉碎成粗粉，过50目筛，加15L 40%乙醇浸泡24小时，90ºC水浴回流提取2小时，滤过，滤渣加10L 40%乙醇再次提取1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至适量体积，过活性炭柱除杂，再加至D-900大孔树脂中，水冲洗至洗脱液糖显色反应为阴性，合并洗脱液，减压浓缩至稠膏后，减压干燥，加入5倍量水水浴回流溶解，趁热过滤，滤液冷却至常温后，加入乙醇至体积分数为90%，搅拌均匀，常温静置过夜，过滤，收集沉淀，减压干燥，以水溶解，0.45µm微孔滤膜过滤，经制备液相分离，收集巴戟甲素对应保留时间溶液，减压浓缩，真空干燥，得8g白色晶体，经鉴定为巴戟甲素，HPLC检测其纯度>98%。

实施例2、巴戟甲素对肾内压的影响实验

本实施例采用肾脏灌流系统，检测肾内压（体外模拟血压）变化情况，以缬沙坦为阳性药，观察巴戟甲素对其影响，考察其是否具有降压作用。

实验内容如下：

1、试验材料与仪器

SPF级大鼠，购买于南方医科大学，许可证号SCXK（粤）2016-0041；

重酒石酸去甲肾上腺素，lot#：1805191，天津金耀氨基酸有限公司；

缬沙坦，lot#：SML0142，Sigma；

其余试剂均为国产分析纯。

电子分析天平，BS224S/CB-25A，北京赛多利斯仪器系统有限公司；

离体肾灌流装置，TIS3852，Kent公司；

四通道记录仪，MPA2000/CB-275，上海奥尔科特生物技术有限公司。

2、试验方法

2.1 试剂配制

Tyrode’s灌流液的配制：按NaCl 8.01g、KCl 0.2g、CaCl₂ 0.2g、MgCl₂·6H₂O0.214g、NaH₂PO₄·2H₂O 0.07g、NaHCO₃ 1.0g、Glu·H₂O 1.11g、EDTA-Na₂ 0.2g配方称量试剂置于1000ml烧杯中，加入1000ml超纯水，搅拌充分溶解，调PH7.35-7.45，常温保存。

2.2 离体大鼠肾脏灌流模型制备

大鼠手术前12h禁食不禁水，称重，10%水合氯醛腹腔内注射麻醉。

按照以下方法制备模型：背位固定，切开腹壁，分离肠系膜动脉、腹主动静脉、左肾动静脉及输尿管。

沿肠系膜动脉进入肾动脉插入以肝素预处理的导管，结扎固定，摘出肾脏，经肾动脉推注含2000U/L肝素的灌流液灌洗，除去肾内残存的血液，直至静脉流出液透明无色澄清为止。

立即开启蠕动泵，将肾脏移入预热37℃恒温容器内，用95%O₂与5%CO₂混合气预先饱和过的灌流液持续灌流，实时监测肾内灌流压，调节灌流量使灌流压稳定。持续灌流，以待后续实验。

2.3 离体肾灌流

离体大鼠肾脏先用灌流液（95%O₂与5%CO₂混合气预先饱和）平衡，肾内压力信号达到基线平稳后，加入适量药液灌流入肾后，用灌流液灌流，待基线重新平稳后；再次加入适量药液灌流入肾，用灌流液灌流，待基线重新平稳后；继续下一次药物加入，如此重复操作，直至肾失活。整个实验通过压力监测仪记录压力信号图谱，并保存。

2.4 数据处理与结果分析

根据监测的压力信号图谱，比较分析离体肾在药物作用前后肾内压的变化，并对压力信号进行数据化统计分析。

3试验结果

给予去甲肾上腺素（NE）后，肾内压迅速升高；再给予缬沙坦，升高的肾内压迅速降低，直至恢复基线水平；给予去甲肾上腺素后再给予不同剂量巴戟甲素，肾内压迅速降低一定幅度后，缓慢降低至接近基线水平，具有量效关系，表明巴戟甲素可对抗去甲肾上腺素导致离体肾脏肾内压升高，详见表1。

表1、巴戟甲素对离体肾脏模拟肾内压的影响

实施例3、巴戟甲素对ACE活力的影响实验

本实施例利用猪肺来源的ACE，观察巴戟甲素对其酶活力的影响，考察其对是否具有降压作用。

实验内容如下：

1、试验材料与仪器

马尿酸（HA），Lot：F1212042，Aladdin；

马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL），Lot：SLBW5368，Sigma；

DEAE seplife FF，lot#：20180116101，西安蓝晓科技新材料股份有限公司）

Triton x-100，lot#：125346，上海捷倍思基因技术有限公司；

透析袋，MW：14000±2000；

BCA试剂盒，lot#：041318180711，碧云天；

Tris，lot#：0922S0715，Solarbio；

牛血清白蛋白，BSA，lot#：SL27152202，上海联硕生物科技有限公司；

其余试剂均为国产分析纯。

新鲜猪肺，购自家猪繁殖基地。

PH计，型号：Five Eosy，METTLER TOLEDO；

高速冷冻离心机，型号：GL-21M，长沙湘仪离心机有限公司；

酶标仪，SpectraMax 190型，Molecular Devices；

电子分析天平，BS224S/CB-25A，北京赛多利斯仪器系统有限公司；

核酸蛋白测定仪，型号：6132，艾本德中国有限公司；

高效液相色谱仪，1260型，Agilent。

2、试验方法

2.1 试剂配制

0.05mol/L Tris-HCl溶液（PH7.4）的配制：称取Tris 6.055g于1000ml烧杯中，加适量超纯水溶解后，加入4.3ml的HCl，混匀后转移至容量瓶中定容至1000ml后，4℃保存。

2mmol/L HHL溶液的配制：称取HHL粉末8.67mg于10ml烧杯中，加适量超纯水溶解后，转移至容量瓶中定容至10ml后，4℃保存。

马尿酸母液的配制：称取马尿酸粉末10.17mg于100ml烧杯中，加适量超纯水溶解后，转移至容量瓶中定容至100ml，得101.7ug/ml的马尿酸母液，4℃保存。

2.2 猪肺ACE的提取和纯化

新鲜猪肺生理盐水洗净，剪成小块，匀浆，加入适量0.5% Triton x-100，缓慢搅拌30min，纱布过滤，滤液4℃、3000rpm离心20min，取上清液，加入55%饱和硫酸铵静置12h，4℃，7000rpm 离心10min，取沉淀，适量pH8.3、0.1mol/L硼酸缓冲液溶解，4℃透析至透析液中无SO₄ ^2-，得ACE粗提液。粗提液经DEAE Seplife FF凝胶柱分离纯化，经SDS-PAGE凝胶电泳鉴别，为ACE酶，详见图1。

2.3 酶活力测定

取ACE酶，BCA试剂盒测定其蛋白浓度。取适量ACE酶，加入40µL各浓度巴戟甲素或纯化水，37℃水浴10min，再加入2mmol/L的HHL 25µL，充分混匀后37℃水浴15min，加入150µL 0.2 mol/L的HCl，12000rpm离心10min，取上清液，0.22µm过滤后，HPLC进样分析，检测反应溶液中马尿酸（HA）的含量。

2.4 数据处理与结果分析

按公式ACE酶相对比活力（U/mg）=马尿酸含量/（反应时间×蛋白浓度）计算ACE酶相对比活力。

3、试验结果

给予不同剂量巴戟甲素，ACE酶相对比活力显著降低，具有量效关系，表明巴戟甲素可降低ACE酶活性，详见表2。

表2、巴戟甲素对ACE酶活力的影响(±s,n=3)

** p<0.01，*p<0.05 vs对照组。

实施例4、巴戟甲素对内皮细胞凋亡的影响实验

本实施例利用AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡模型，维生素E（VitE）为阳性药，观察巴戟甲素对其影响，考察其抗内皮细胞凋亡的效果。

实验内容如下：

1、材料、试剂与仪器

DMEM培养基（GIBCO），Life Technologies公司；

胎牛血清（FBS），浙江天杭生物科技股份有限公司；

多聚赖氨酸、VitE均为Sigma产品；

吖啶橙（AO）、溴化乙锭（EB）染料均为碧云天产品；

人脐静脉内皮细胞（HUVEC），美国ATCC产品；

巴戟甲素由康臣肾病药物研究中心制剂室分离纯化制得，经高效液相色谱仪（HPLC）检测其纯度>98%；

BS-224S型电子分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；

LDZ5-2型医用离心机，北京京立医用离心机厂；

CO2培养箱，长沙长锦科技有限公司；

奥林巴斯IX71、BX51显微镜，日本奥林巴斯公司；

超净工作台，苏州百神科技网络系统有限公司，苏州市洁净技术研究所；

SPECTRA max190酶标仪，美国MD公司。

2、实验方法

2.1 细胞培养

取对数生长期细胞，以含10% FBS的DMEM制成单细胞悬液，以1mL/孔接种于放入预先用多聚赖氨酸包被的盖玻片的24孔板，细胞数1×105/孔，37℃、5%CO2培养24h后，加入无血清的DMEM，再孵育12h，使细胞同步化；

吸弃细胞上清液，同一水平3孔并列，加入含10% FBS的DMEM 900μL/孔和各药物100μL/孔。正常对照组加入等体积磷酸盐缓冲液（PBS），AGEs模型对照组加入AGEs（终浓度为0.1g/L）；VitE阳性对照组分别加入AGEs（终浓度为0.1g/L）和VitE（终浓度为100μmol/L）；巴戟甲素低、中、高剂量实验组分别加入AGEs（终浓度为100mg/L）和巴戟甲素（终浓度分别为10μmol/L、50μmol/L、250μmol/L)。

2.2细胞凋亡的染色及观察

AO-EB染液的配制：称取AO、EB各0.20g，以超纯水2.0mL溶解完全，装入2mL棕色EP管中，4℃冷藏保存备用。

染色及观察：取出细胞爬片，PBS洗涤2次，甩干；在载玻片上滴加15μL AO-EB染液，盖上细胞爬片，细胞面向下；静止30秒，置荧光显微镜下，观察并摄片。摄片时每张爬片均取中心位置。

2.3 数据分析及统计

以IPP图像分析软件，分析各图片（橙色+红色部分细胞面积）和细胞总面积，以下列公式计算各样本凋亡百分率：

凋亡百分率（%）=（橙色+红色部分细胞面积）/细胞总面积×100

所有实验数据均采用成组设计的方差分析，用SPSS软件进行处理，结果均以±s（均值±方差）表示。

3、实验结果

从图2、图3可以看出，巴戟甲素各实验组细胞凋亡百分率与AGEs模型对照组相比明显降低(p<0.05，p<0.01)，而且具有明显量效关系，说明巴戟甲素能有效抑制AGEs诱导的内皮细胞凋亡。

实验例5、巴戟甲素对SHR高血压肾病模型大鼠的影响实验

本实施例以高脂高糖饮食喂养的SHR大鼠，制造高血压肾病模型，给予巴戟甲素8周后，检测其尿量、尿微白蛋白、血压、血糖水平，考察巴戟甲素对整体动物的药理作用。

实验内容如下：

1、材料与试剂

SPF级SHR大鼠80只，SD大鼠10只，体重130±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCKX（京）2016-0006；

葡萄糖检测试剂盒、尿液总蛋白检测试剂盒、肌酐检测试剂盒，均为南京建成生物工程研究所产品；

罗氏血糖仪及试纸，罗氏诊断中国公司；

电子分析天平（BS-224S），北京赛多利斯仪器系统有限公司；

医用离心机(LDZ5-2)，北京医用离心机厂；

CODA无创血压仪，美国Kent公司。

2、实验方法

2.1 高血压肾病模型大鼠的建立

SHR大鼠80只，给予高脂高糖饮食；SD大鼠10只，给予正常饮食；各动物自由饮水，连续4周。动物饲养环境保持明：暗时间为12：12小时。

2.2 分组与给药

造模结束后测定血糖，以血糖值在16mmol/L -30mmol/L者为合格动物，合格动物按照血糖分组，每组15只，使血糖值组间无显著差异，分组情况为：模型组，厄贝沙坦组（剂量为13.5mg/kg），巴戟甲素低、中、高剂量组（剂量分别为2.5mg /kg、5.0mg /kg、10 mg /kg）。正常对照组大鼠10只，保持不变。

给药组分别给予相应药物，体积为0.5ml/220g，均采用灌胃给药的方法；正常对照组、模型组给予同体积生理盐水。每周给药6天，连续8周。

2.3指标检测

给药前和给药第4、8周测定血压、血糖、尿量、尿微白蛋白含量。

2.4数据统计

所有实验数据均采用成组设计的方差分析，用SPSS软件进行处理，结果均以±s（均值±方差）表示。

3．实验结果

3.1对SHR高血压肾病模型大鼠血压、血糖的影响

由表3可看出，模型组血糖显著升高(p<0.01)，巴戟甲素5.0mg/kg、10mg/kg可以明显改善这一情况(p<0.05)。

由表4可看出，模型组血压明显升高(p<0.05，p<0.01)，厄贝沙坦和2.5mg/kg、5.0mg/kg、10mg/kg的巴戟甲素在不同时期可明显改善这一情况(p<0.05，p<0.01)。

表3 巴戟甲素对SHR高血压肾病模型大鼠血糖的影响(±s,n=10)

vs正常：## p<0.01；vs模型：* p<0.05，** p<0.01。

表4、巴戟甲素对SHR高血压肾病模型大鼠血压的影响(±s,n=10)

vs正常：## p<0.01；vs模型：* p<0.05，** p<0.01。

3.2 对SHR高血压肾病模型大鼠尿量、尿微白蛋白的影响

由表5可看出，模型组24h尿量明显升高(p<0.01)，5.0、10mg/kg的巴戟甲素在不同时期可明显改善这一情况(p<0.05，p<0.01)。

由表6可看出，模型组24h尿微白蛋白增加，厄贝沙坦和2.5、5.0、10mg/kg的巴戟甲素可明显改善或逆转这一情况(p<0.05，p<0.01)。

表5、巴戟甲素对SHR高血压肾病模型大鼠24h尿量的影响（±s,n=10）

vs正常: # p<0.05, ## p<0.01；vs模型: * p<0.05，** p<0.01。

表6、巴戟甲素对SHR高血压肾病模型大鼠尿24h微白蛋白的影响（±s,n=10）

vs正常：# p<0.05，## p<0.01；vs模型：* p<0.05，** p<0.01。

通过上述实施例2至5可知，巴戟甲素可以对抗去甲肾上腺素所致肾内压升高，抑制ACE活性，抑制AGEs所致内皮细胞凋亡，并可改善SHR高血压肾病模型大鼠尿量、微白蛋白、血压、血糖异常，从而也证实了巴戟甲素对高血压肾病具有防治作用。

实施例6、防治高血压肾病的药物颗粒剂

本实施例提供一种防治高血压肾病的药物颗粒剂，每包颗粒剂包括以下质量数的组分：

巴戟甲素 5.0mg，

淀粉 2497.5mg，以及

微晶纤维素 2497.5mg。

所述药物颗粒剂的制备方法包括以下步骤：

将巴戟甲素与淀粉、微晶纤维素混合均匀后，过20目筛，干法制粒、1.2mm孔径筛网整粒、分装即得。

实施例7、防治高血压肾病的药物片剂

本实施例提供一种防治高血压肾病的药物片剂，每片片剂包括以下质量数的组分：

巴戟甲素 30.0mg，

乳糖 115.0mg，

玉米淀粉 50.0mg，以及

硬脂酸镁 5.0mg。

所述药物片剂的制备方法包括以下步骤：

将巴戟甲素与乳糖和玉米淀粉混合均匀，过20目筛，干法制粒，1.2mm孔径筛网整粒，与其余赋形剂混合，压片即得。

实施例8、防治高血压肾病的药物胶囊剂

本实施例提供一种防治高血压肾病的药物胶囊剂，每粒胶囊剂包括以下质量数的组分：

巴戟甲素 199.0mg，

糊精 1.0mg，以及

羟丙甲纤维素 适量。

所述药物胶囊剂的制备方法包括以下步骤：

将巴戟甲素过20目筛，与糊精按等量倍增法混合均匀，加入适量羟丙甲纤维素，干法制粒，1.2mm孔径筛网整粒，装胶囊即得。

实施例9、防治高血压肾病的药物滴丸

本实施例提供一种防治高血压肾病的药物滴丸，每粒滴丸包括以下质量数的组分：

巴戟甲素 15.0g，以及

聚乙二醇4000 15.0g。

所述药物滴丸的制备方法包括以下步骤：

称取巴戟甲素15.0g，经超微粉碎过200目筛后得细粉，加入至熔融的15.0g聚乙二醇4000基质中，搅匀，以二甲苯硅油为冷却剂，滴制法制丸，干燥，制得防治高血压肾病的药物滴丸。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.巴戟甲素在制备防治高血压和/或肾病的药物中的应用，所述肾病系原发性高血压引起的肾病。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述高血压为原发性高血压。

3.根据权利要求1或者2所述的应用，其特征在于，所述药物包含活性成分巴戟甲素以及药学上可接受的辅料。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物包含0.1wt%-99.5wt%的所述巴戟甲素。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物包含10.0 wt%-90.0wt%的所述巴戟甲素。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述辅料选自稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂以及等渗或等张调节剂中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述稀释剂选自淀粉类、糖类、纤维素类以及无机盐类中的至少一种；或/和，所述润湿剂选自水以及乙醇中的至少一种；或/和，所述黏合剂选自淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述崩解剂选自淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂以及泡腾崩解剂中的至少一种；或/和，所述润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶以及聚乙二醇中的至少一种；或/和，所述色香味调节剂选自色素、香料、甜味剂、胶浆剂以及矫臭剂中的至少一种；或/和，所述溶剂选自水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油以及乙酸乙酯中的至少一种；或/和，所述增溶剂选自吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物、以及磺酸化物中的至少一种；或/和，所述助溶剂选自有机酸及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮以及甘油中的至少一种；或/和，所述乳化剂选自司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅以及皂土中的至少一种；或/和，所述助悬剂选自甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇以及触变胶中的至少一种；或/和，所述抗氧剂选自亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类中的至少一种；或/和，所述金属络合剂选自乙二胺四乙酸二钠以及多羧酸化合物中的一种；或/和，所述惰性气体选自氮气以及二氧化碳中的一种；或/和，所述防腐剂选自尼泊金类、有机酸及其盐、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类以及挥发油中的至少一种；或/和，所述局部止痛剂选自苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因以及普鲁卡因中的至少一种；或/和，所述pH调节剂选择盐酸、硫酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐以及枸橼酸盐中的至少一种；或/和，所述等渗或等张调节剂选自葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇以及木糖醇中的至少一种。

8.根据权利要求1或者2、以及4至7任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂或者胶囊剂。

9.根据权利要求1或者2、以及4至7任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射剂、口服液、眼用制剂或者外用制剂。

10.根据权利要求1或者2、以及4至7任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的给药途径包括静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、口服给药、舌下给药、鼻腔给药或者经皮给药。

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