CN111690559B - 可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌 - Google Patents

可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌 Download PDF

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Abstract

本发明公开了可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌，属于微生物技术领域。本发明提供了一株可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌JWG‑G1，将此嗜麦芽寡养单胞菌的种子液以10％(v/v)的接种量接种至含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基中培养5d后，可使聚对苯二甲酸乙二醇酯颗粒部分被降解为羟乙基对苯二甲酸酯和可直接回收利用的对苯二甲酸，可使聚对苯二甲酸乙二醇酯塑料颗粒表面的酯键官能团减少，且使聚对苯二甲酸乙二醇酯塑料颗粒的失重率达9.4％，因此，本发明的嗜麦芽寡养单胞菌JWG‑G1在降解聚对苯二甲酸乙二醇酯中具备极高的应用前景。

Description

可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌
技术领域
本发明涉及可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌，属于微生物技术领域。
背景技术
随着经济的高速发展，人们对塑料制品的消耗水平显著提高，全球每年的塑料消耗量超3.2亿吨，并且消耗量每年以4～6％的速度增长。由于塑料难以降解，因此，全球每年的塑料制品回收利用率仅有14％，这使得塑料垃圾在环境中持续积累，对生态构成了严重的威胁。
聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)是乙二醇(Ethylene glycol,EG)和对苯二甲酸(Terephthalic acid,TPA)以酯键依次连接形成的线性大分子。目前，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料制品约占所有塑料制品的60％，相应的，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料垃圾在所有塑料垃圾中也占比较高。因此，降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)对治理塑料垃圾十分关键。
目前，降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)依旧停留在使用酸、碱、醇、热等化学物理降解法的阶段。化学降解法需要使用大量的化学品，且过程中会产生大量有毒有害物质，对生态环境产生较为严重的负面影响。物理降解法则需要高温和高压的设备，这大大增加了聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料垃圾的治理成本。因此，各国政府积极探索降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)新技术。
生物降解技术是直接通过可降解塑料的菌株降解塑料的技术，由于其具有绿色无污染以及成本低的优势，逐渐成为塑料降解领域的研究热点。例如，菌株Ideonellasakaiensis 201-F6，能够以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)为唯一营养源，降解速率为0.13mg/d(Science,2016,351(6278):1196-1199)；可降解聚乳酸(PLA)的苍白杆菌属菌株(公开号为CN102639690A)；可降解聚羟基脂肪酸酯(PHA)的青霉属菌株(Polymer-plasticsTechnology and Engineering,2009,48(1):58-63)
然而，相比于同样是C-O键连接的聚羟基脂肪酸酯(PHA)和聚乳酸(PLA)等生物基塑料，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)分子链中含有大量芳香基团，导致分子链空间位阻大且表面更加疏水，难以被微生物降解。因此，获得可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的菌株仍是一个难点。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一种可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)。
[技术方案]
为解决上述技术问题，本发明提供了一株嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019415，保藏日期为2019年06月03日。
所述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1是从来源于无锡桃花山垃圾填埋场的土壤样本中分离得到的，该菌株经测序分析，其16S rDNA序列如SEQ IDNO.1所示，将测序得到的序列在Genbank中进行核酸序列比对，结果显示与寡养单胞菌属的核酸序列相似度高达99％，将与其相似度高的菌株构建系统进化树(具体可见图1)，结果显示菌株属于寡养单胞菌属的嗜麦芽寡养单胞菌，将其命名为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1。
所述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1在LB固体培养基上的菌落呈圆隆形凸起，淡黄色，不透明，湿润有光泽，边缘有鞭毛(具体可见图2-图3)。
本发明还提供了上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1在降解聚对苯二甲酸乙二醇酯、明胶或七叶苷中的应用。
在本发明的一种实施方式中，本发明还提供了一种降解解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的方法，所述方法为将上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1的种子液接种至含有聚对苯二甲酸乙二醇酯的液体培养基中进行培养。
在本发明的一种实施方式中，上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1的种子液以不低于10％(v/v)的接种量在含有聚对苯二甲酸乙二醇酯的液体培养基中接种。
在本发明的一种实施方式中，上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1的种子液在培养基中的浓度不低于1×108CFU/mL。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基为无机盐培养基。
在本发明的一种实施方式中，本发明还提供了一种可用于降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的产品，所述产品中含有上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1。
本发明还提供了一种水解明胶的方法，所述方法为将上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1接种至含有明胶的平板培养基中进行培养。
本发明还提供了一种可用于水解明胶的产品，所述产品中含有上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1。
本发明还提供了一种水解七叶苷的方法，所述方法为将上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1接种至含有明胶的平板培养基中进行培养。
本发明还提供了一种可用于水解七叶苷的产品，所述产品中含有上述嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1。
[有益效果]
(1)本发明提供了一株可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1，将此嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1的种子液以10％(v/v)的接种量接种至含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基中培养5d后，可使聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)颗粒部分被降解为羟乙基对苯二甲酸酯(MHET)和可直接回收利用的对苯二甲酸(TPA)，并且，在本发明嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1的作用下，可使聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒表面的酯键官能团减少，且使聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒的失重率达9.4％，因此，本发明的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1在降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)中具备极高的应用前景。
(2)本发明的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1具有优良的耐盐性能，可在含有1～9g/L NaCl的LB液体培养基中旺盛生长。
(3)本发明的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1能够水解明胶和七叶苷。
生物材料保藏
一株嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1，分类学命名为Stenotrophomonas pavanii JWG-G1，已于2019年06月03日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019415，保藏地址为中国武汉武汉大学。
附图说明
图1为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1的系统进化树。
图2为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1的菌落。
图3为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1的菌体形态
图4为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1在不同pH下生长曲线。
图5为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1在不同温度下生长曲线。
图6为聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒表面经嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1处理后的酯键官能团变化情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的对苯二酸二甲酯(DET)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒、苯二甲酸乙二醇酯(BHET)购自Sigma公司，TPA、MHET、BHET的标准品购自Sigma公司。
下述实施例中涉及的培养基如下：
LB固体培养基(g/L)：蛋白胨10、酵母粉5、氯化钠10、琼脂13，pH 7.0。
LB液体培养基(g/L)：蛋白胨10、酵母粉5、氯化钠10，pH 7.0。
无机盐液体培养基(g/L)：KH2PO4 0.7、K2HPO4·3H2O 0.5、NH4Cl 2、MgSO4·7H2O0.6、NaCl 0.005、FeSO4·7H2O 0.001、ZnSO4·7H2O 0.002、MnSO4·H2O 0.001。
无机盐固体培养基(g/L)：KH2PO4 0.7、K2HPO4·3H2O 0.5、NH4Cl 2、MgSO4·7H2O0.6、NaCl 0.005、FeSO4·7H2O 0.001、ZnSO4·7H2O 0.002、MnSO4·H2O 0.001、琼脂粉13。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒表面官能团变化的检测方法：
将经菌株处理后的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒用去离子水反复清洗3～4次；将清洗完的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒于功率200W、频率58KHz的条件下超声15min；将超声后的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒放入烘箱60℃烘干6h；以未经处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒为对照，使用傅里叶变换红外光谱仪检测未经处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒表面以及经菌株处理后聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒表面官能团的变化。
降解产物及其含量的检测方法：
标准品处理：分别称取TPA、MHET、BHET的标准品溶于二甲亚砜(DMSO)中制成母液，利用无菌水将母液稀释成0.1mg/mL标准品溶液，用0.22μM的滤头过滤，用注射器注入液相瓶进行HPLC检测；
样品处理：将培养液静置10min，取上清5mL，12000rpm离心8min，用0.22μM的滤头过滤，用注射器注入液相瓶，进行HPLC检测。
失重率的检测方法：
PET塑料颗粒的失重率(％)＝[(m2-m1)÷m2]×100；
m1：经菌株处理后的PET塑料颗粒用去离子水反复清洗3～4次，将清洗完的PET塑料颗粒于功率200W、频率58KHz的条件下超声15min，放入烘箱60℃烘干6h后称重；
m2：经菌株处理前的PET塑料颗粒用去离子水反复清洗3～4次，将清洗完的PET塑料颗粒于功率200W、频率58KHz的条件下超声15min，放入烘箱60℃烘干6h后称重。
实施例1：嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)的筛选
具体步骤如下：
1、普通筛选
以来源于无锡市桃花山垃圾填埋场土壤为样本，取1g土壤加入9mL生理盐水，于35℃、180rpm的条件下振荡富集培养30min；随后取1mL上清液依次稀释至10-4、10-5、10-6，分别取200μL稀释至10-4、10-5、10-6的稀释液均匀涂布于含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐固体培养基上，置于35℃培养箱中恒温培养至长出菌落；实验结果显示经多日培养，分离平板未出现菌落，该方法并不能有效分离出具有降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)能力的菌株。
2、“PET诱导培养”筛选
(1)以来源于无锡市桃花山垃圾填埋场土壤为样本，取1g土壤加入9mL含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基，于35℃、180rpm的条件下振荡富集培养48h；接着吸取上述1mL富集液加入新的9mL2 g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基，相同条件培养10个循环；
(2)随后取步骤(1)培养10个循环后获得的培养液上清1mL依次稀释至10-4、10-5、10-6，取200μL稀释至10-4、10-5、10-6的稀释液均匀涂布于含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐固体培养基上，置于35℃培养箱中恒温培养至长出菌落；实验结果显示经多日培养，分离平板出现的菌落稀疏(5-6个/板)；
(3)作为对照，取步骤(1)培养10个循环后获得的培养液上清1mL依次稀释至10-4、10-5、10-6，取200μL稀释至10-4、10-5、10-6的稀释液转接到不含聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐固体培养基，35℃下进行培养，上述菌落均能够在不含聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐固体培养基上生长；
可见，上述菌落均为自养型的纯化菌株，并非是以PET为唯一营养源的非自养型的菌株。该方法并不能有效分离出具有降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)能力的菌株。
3、“逐级筛选”策略
(1)以来源于无锡市桃花山垃圾填埋场土壤为样本，取1g土壤加入9mL含有10g/L对苯二甲酸二乙酯(DET)的无机盐液体培养基，于35℃、180rpm的条件下振荡富集培养48h，接着吸取上述1mL富集液加入新的9mL含有10g/L对苯二甲酸二乙酯(DET)的无机盐液体培养基，相同条件培养10个循环；
(2)吸取上述步骤(1)培养10个循环后获得的培养液上清1mL加入新的9mL含有对苯二甲酸双羟乙酯(BHET)的无机盐液体培养基，相同条件培养10个循环；
(3)吸取上述步骤(2)培养10个循环后获得的培养液上清1mL加入新的9mL含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基，相同条件培养10个循环；
(4)吸取上述步骤(3)培养10个循环后获得的培养液上清1mL依次稀释至10-4、10-5、10-6，取200μL稀释至10-4、10-5、10-6的稀释液均匀涂布于含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐固体培养基上，置于35℃培养箱中恒温培养至长出菌落(180-200个/板)；以无营养源的无机盐固体培养基作为对照，得到非自养型的纯化菌株10个，将长势最好的纯化菌株分别命名为菌株JWG-G1。
基于上述的3中不同的分离筛选方法的结果，可发现需要对苯二甲酸二乙酯(DET)和对苯二甲酸双羟乙酯(BHET)等可溶、结构简单的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)中间体作为初步底物，对聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)降解菌株进行富集，使其菌株适应聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)中间体为唯一营养物。随后就以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)为唯一底物再次进行降解菌株富集，使其聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)中间体降解菌株中衍生出能够降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的菌株，并使其浓度进一步提升。故“逐级筛选”策略能够有效筛选出具有PET降解能力的菌株。
实施例2：嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)鉴定
提取菌株JWG-G1的总DNA进行16S rDNA的扩增和测序(由无锡天霖生物科技有限公司完成)，将测序得到的序列在Genbank中进行核酸序列比对，发现菌株JWG-G1与寡养单胞菌属的16S rDNA序列同源性大于99％，其中，与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)DSM 25135的16S rDNA序列相似率达99.5％。可见，菌株JWG-G1属于寡养单胞菌属。
将菌株JWG-G1的16S rDNA序列(序列如SEQ ID NO.1所示)与其相似度高的菌株构建系统进化树(菌株JWG-G1构建得到的系统进化树可见图1)，结果显示菌株JWG-G1与Stenotrophomonas pavanii DSM 25135同属于一个分支，可见，菌株JWG-G1属于寡养单胞菌属，命名为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1。
实施例3：嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)的培养
具体步骤如下：
刮取一环实施例1获得的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1接种至LB固体培养基划线培养，35℃培养36h后，观察其菌落，发现其菌落呈圆隆形凸起，浅黄色，不透明，湿润有光泽，边缘有鞭毛(具体可见图2-图3)。
将实施例1获得的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1经革兰氏染色后于显微镜下观察，发现为革兰氏阳性菌。
刮取一环实施例1获得的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1接种至pH分别为7～11的LB液体培养基中培养，于35℃培养，通过酶标仪检测培养液中的OD600值，发现最适生长pH为7(具体可见图4)。
刮取一环实施例1获得的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1接种至pH为7的LB液体培养基中培养，分别于25～40℃培养，通过酶标仪检测培养液中的OD600值，发现最适生长温度为25℃(具体可见图5)。
实施例4：不同寡养单胞菌及嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)对聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒的降解能力
具体步骤如下：
由于嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1属于寡养单胞菌属，寡养单胞菌属可能是潜在的PET塑料颗粒降解菌株来源属之一，故收集与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1亲缘关系近的7株寡养单胞属菌(Stenotrophomonas pavanii DSM 25135；Stenotrophomonas bentonitica DSM 103927；Stenotrophomonas chelatiphaga DSM 21508；Stenotrophomonas ginsengisoli KCTC12539；Stenotrophomonas lactitubi DSM 104152；Stenotrophomonas rhizophila DSM14405；Stenotrophomonas tumulicola NCIMB 15009)与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1株作为共同测试菌株。
挑取实施例1获得的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1以及7株寡养单胞菌的单菌落，分别接入100mL的LB液体培养基中，于35℃、180rpm的条件下震荡培养24h，得到种子液A；将种子液A以10％(v/v)的接种量转接到100mL新鲜的LB液体培养基中，于35℃、180rpm的条件下震荡培养24h，得到培养液A；将培养液A于8000rpm的条件下离心10min，收集菌体；将菌体用无机盐培养基洗涤2次后制成OD600＝1.0的菌悬液作为种子液B；以未接种种子液B的含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基为对照组，将种子液B以10％(v/v)的接种量接种至含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基中(此时，种子液B在PET无机盐液体培养基中嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1的菌浓度为1×109CFU/mL)，于35℃、180rpm的条件下震荡培养5d，得到培养液B，测定培养液B前后的OD600的变化可见表1；将培养液B中的PET塑料颗粒取出，检测其表面官能团结构的变化(嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1以及7株寡养单胞菌培养获得的培养液B中的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒表面酯键官能团结构的变化可见表1，嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1培养获得的培养液B中的PET塑料颗粒表面官能团结构的变化可见图6)并检测其失重率(嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1以及7株寡养单胞菌培养获得的培养液B中的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒的失重率可见表1)，同时，检测培养液B中聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒降解产物羟乙基对苯二甲酸酯(MHET)和对苯二甲酸(TPA)的含量(嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1以及7株寡养单胞菌培养获得的培养液B中聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒降解产物羟乙基对苯二甲酸酯(MHET)和对苯二甲酸(TPA)的含量可见表1)。
由表1和图6可以看出，以PET塑料颗粒为唯一营养源时，嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1能够生长；而7株寡养单胞菌的OD600无显著变化(误差范围内±0.04)。可见，仅有嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1可以PET塑料颗粒为唯一营养源生长繁殖。
由表1和图6可以看出，经嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1处理5d后，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒部分被降解为羟乙基对苯二甲酸酯(MHET)和对苯二甲酸(TPA)，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒表面的酯键官能团被破坏(在1000～1300cm-1之间有两个特征峰，在1700～1750cm-1之间有一个特征峰)，且聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒失重9.4％；而经7株寡养单胞菌处理5d后，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒未见明显变化。可见，仅有嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1能够降解聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒。
表1嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1以及7株寡养单胞菌经含有PET的培养基培养前后的性能检测
Figure BDA0002523829130000081
Figure BDA0002523829130000091
其中，嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1以及7株寡养单胞菌经含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基培养前后的OD600变化即嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1以及7株寡养单胞菌经含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基培养后的OD600值减去嗜麦芽寡养单胞菌JWG-G1以及7株寡养单胞菌经含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基培养前的OD600值，“+”：检测为阳性；“-”：检测为阴性。
实施例5：嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1对不同含量的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒的降解能力
具体实施方式同实施例4，区别在于，将嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1的种子液B以10％(v/v)的接种量分别接种至含有2.5g/L、3.0g/L、3.5g/L和4.0g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基中；
结果如表2所示，其中，降解产物中对苯二甲酸(TPA)含量分别为203、206、205、205mg/L，羟乙基对苯二甲酸酯(MHET)含量分别为8.1、8.0、8.3、8.2mg/L，而聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)颗粒失重率分别达到9.8％、9.7％、9.6％、9.7％。结果显示嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1对聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的降解效果，不随聚对苯二甲酸乙二醇酯含量的增加而增加。
表2嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)对不同含量的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒的降解能力
Figure BDA0002523829130000092
实施例6：不同添加量的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)对聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒的降解能力
具体实施方式同实施例4，区别在于，将嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1的种子液B以15％、20％、25％、30％(v/v)的接种量接种至含有2g/L聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的无机盐液体培养基中；
结果如表3所示，其中降解产物对苯二甲酸(TPA)含量分别为250、300、330、360mg/L，羟乙基对苯二甲酸酯(MHET)含量分别为8.1、10.6、12.3、15.2mg/L，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)颗粒失重率分别达到10.3％、11.6％、12.3％、13.9％。结果显示随着嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1接种量的增加，聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)的降解效果越显著。
表3不同添加量的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)对聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)塑料颗粒的降解能力
Figure BDA0002523829130000101
实施例7：嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)的耐盐能力
具体步骤如下：
挑取实施例1获得的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1的单菌落接入100mL的LB液体培养基中，于35℃、180rpm条件下震荡培养24h，得到种子液A；将种子液A以10％(v/v)的接种量转接到100mL新鲜的LB液体培养基中，于35℃、180rpm的条件下震荡培养72h，得到培养液A；将培养液A于8000rpm的条件下离心10min，收集菌体；将菌体用无机盐培养基洗涤2次后制成OD600＝1.0的菌悬液作为种子液B；将种子液B以10％(v/v)的接种量分别接种至含有不同浓度NaCl(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10g/L)的LB液体培养基中，于35℃、180rpm的条件下震荡培养5d，获得培养液B。
由测定培养液B的OD600结果发现，嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1在含有1～9g/L NaCl的LB液体培养基中生长5d后获得的培养液B中的OD600增加量分别为0.20、10.31、0.35、0.45、0.35、0.32、0.31、0.29、0.24、0.21。可见，嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1具有优良的耐盐性能。
实施例8：嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)水解明胶和七叶苷的能力
具体步骤如下：
依据参考文献“Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.New York:Springer,2012”采用平板透明圈法检测嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)JWG-G1对明胶、七叶苷水解能力。
由检测结果可知，嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas pavanii)在检测平板上生长5d后，在分别含有明胶、七叶苷的平板表面出现明显的水解透明圈，其中，明胶、七叶苷水解透明圈直径分别达到1.3cm、0.9cm。可见，嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonaspavanii)JWG-G1具备水解明胶、七叶苷的能力。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 可降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的嗜麦芽寡养单胞菌
<130> BAA200406A
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1416
<212> DNA
<213> Stenotrophomonas pavanii
<400> 1
ggcagcgccc tcccgaaggt taagctacct gcttctggtg caacaaactc ccatggtgtg 60
acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgca gcaatgctga tctgcgatta 120
ctagcgattc cgacttcatg gagtcgagtt gcagactcca atccggactg agatagggtt 180
tctgggattg gcttaccgtc gccggcttgc agccctctgt ccctaccatt gtagtacgtg 240
tgtagccctg gccgtaaggg ccatgatgac ttgacgtcat ccccaccttc ctccggtttg 300
tcaccggcgg tctccttaga gttcccacca ttacgtgctg gcaactaagg acaagggttg 360
cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacag ccatgcagca 420
cctgtgttcg agttcccgaa ggcaccgatc catctctgga aagttctcga catgtcaagg 480
ccaggtaagg ttcttcgcgt tgcatcgaat taaaccacat actccaccgc ttgtgcgggc 540
ccccgtcaat tcctttgagt ttcagtcttg cgaccgtact ccccaggcgg cgaacttaac 600
gcgttagctt cgatactgcg tgccaaattg cacccaacat ccagttcgca tcgtttaggg 660
cgtggactac cagggtatct aatcctgttt gctccccacg ctttcgtgcc tcagtgtcag 720
tgttggtcca ggtagctgcc ttcgccatgg atgttcctcc tgatctctac gcatttcact 780
gctacaccag gaattccgct accctctacc acactctagt cgcccagtat ccactgcagt 840
tcccaggttg agcccagggc tttcacaacg gacttaaacg accacctacg cacgctttac 900
gcccagtaat tccgagtaac gcttgcaccc ttcgtattac cgcggctgct ggcacgaagt 960
tagccggtgc ttattctttg ggtaccgtca tcccaaccgg gtattagcca gctggatttc 1020
tttcccaaca aaagggcttt acaacccgaa ggccttcttc acccacgcgg tatggctgga 1080
tcaggcttgc gcccattgtc caatattccc cactgctgcc tcccgtagga gtctggaccg 1140
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aagatcccct gctttcaccc gtaggtcgta tgcggtatta gcgtaagttt ccctacgtta 1320
tcccccacga cagagtagat tccgatgtat tcctcacccg tccgccactc gccacccaga 1380
gagcaagctc tcctgtgctg ccgttcgact gcatgt 1416

Claims (8)

1.一株嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas pavanii），其特征在于，所述嗜麦芽寡养单胞菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M 2019415，保藏日期为2019年06月03日。
2.权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌在降解聚对苯二甲酸乙二醇酯、明胶或七叶苷中的应用。
3.一种降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的方法，其特征在于，所述方法为将权利要求1所述嗜麦芽寡养单胞菌接种至含有聚对苯二甲酸乙二醇酯的液体培养基中进行培养。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，权利要求1所述嗜麦芽寡养单胞菌以种子液的形式接种至含有聚对苯二甲酸乙二醇酯的液体培养基中；所述种子液的体积占液体培养基总体积的比例不低于10%。
5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述培养基为无机盐液体培养基。
6.一种可用于降解聚对苯二甲酸乙二醇酯的菌悬液，其特征在于，所述菌悬液中含有权利要求1所述嗜麦芽寡养单胞菌。
7.一种水解明胶的方法，其特征在于，所述方法为将权利要求1所述嗜麦芽寡养单胞菌接种至含有明胶的培养基中进行培养。
8.一种水解七叶苷的方法，其特征在于，所述方法为将权利要求1所述嗜麦芽寡养单胞菌接种至含有七叶苷的培养基中进行培养。
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