治疗心血管病的药物
本发明涉及一种治疗心血管病的药物及其制备方法,具体地说是中药复方生脉散的有效部位组成的药物组合物护心康及其制备方法。
心血管病是常见病、多发病,是病死率仅次于恶性肿瘤的第二大疾病。虽然现在心血管病的预防和治疗水平已有很大提高,但其中心肌炎、心肌病仍缺乏有效的药物治疗,尤其是病毒性心肌炎,目前临床仅仅采用营养心肌、休息、辅酶支持等手段。生脉散是由人参、麦冬、五味子三味中药组成的古方,现代临床已用于治心血管病。目前生脉散的制剂主要有注射剂、冲剂、袋泡剂、口服液。其制备方法可分为三类:三味药分别提取后混合;三味药共煎;三味药分别提取与共煎联用。参见中国发明专利申请97107192、6。这些方法对生脉散的制剂改革,起了很大作用,但是,中药成分复杂,复方更为复杂,仅人参化学成分就有皂甙、蛋白质、多肽、氨基酸、糖、有机酸、生物碱、萜类、苯丙素、炔类、脂类、挥发油等十多类成分。现有的生脉散制剂,由于没有确定有效部位的结构类别,难以制备主要成分类别固定的药物。而只有主要成分类别确定,才能制定较可靠的质量标准。有了质量标准才能保证稳定的临床疗效,产品内在的高质量才能得到国际市场的认可。所以,中药制剂进入国际市场的重要条件不在于是不是制成了注射剂、冲剂、袋泡剂、口服液这些看似现代的剂型,而在于这些现代剂型是否是主要成分类别确定、临床疗效稳定的药物,有没有明确的质量标准。
本发明的目的在于提供一种治疗心血管病,尤其是治疗病毒性心肌炎、扩张型心肌病的主要成分类别确定的中药有效部位的组合物。
本发明的目的尚在于提供一种主要成分类别确定、剂量减小、纯度和质量提高、临床疗效稳定、有明确的质量标准的中药有效部位的组合物。
本发明的目的还在于提供一种群药共煎,再提取不同有效部位的制备方法。
本发明的目的还在于提供一种根据古方生脉散中三味药性质的组合情况、活性物质分子量的大小,制备主要成分类别确定的中药有效部位的组合物的方法。
本发明的技术方案是一种治心血管病的药物组合物,其特征在于主要含人参、麦冬、五味子中提取的多糖、皂甙、氨基酸。
所述心血管病主要包括病毒性心肌炎、扩张型心肌病、冠心病心绞痛、心肌缺血、心衰、心律失常。
本发明的技术方案还包括上述治心血管病药物组合物的制备方法,含如下步骤:将人参、麦冬、五味子加水合煎;水提取液或洗脱液经过乙醇或丙酮沉淀;大孔树脂处理;离子交换树脂处理;分离得到含多糖、皂甙、氨基酸有效部位的药物组合物;制成制剂。
上述治心血管病药物组合物的制备方法具体含如下步骤:
按人参1-5,麦冬1-3,五味子1-3的重量比配方,用水提取;
水提取液浓缩后,加入乙醇使含醇量达60%-80%;
乙醇沉淀物干燥后得多糖;
上清液回收乙醇后用大孔吸附树脂处理,先以去离子水洗至无糖,再以70-
80%乙醇洗至无皂甙止,回收醇洗脱液,得皂甙;
水洗脱液用阳离子交换树脂处理,用2%-15%氨液洗脱,得氨基酸;
混合多糖、皂甙、氨基酸。
上述治心血管病药物组合物的制备方法中水提取液,也可以浓缩后上大孔树脂柱,先水洗,后乙醇洗;乙醇液回收得皂甙;水洗液浓缩后加醇沉淀;醇沉淀物中得多糖;上清液回收乙醇后上阳离子交换树脂,氨洗液得氨基酸;混合多糖、皂甙、氨基酸。
上述治心血管病药物组合物的制备方法中水提取液,也可以上阳离子树脂柱,先水洗,后氨液洗脱;氨洗脱液中得氨基酸;水洗液浓缩后上大孔树脂柱;先水洗,后醇洗;醇液中得皂甙;水洗液浓缩后加丙酮沉淀得多糖;混合多糖、皂甙、氨基酸。
分离提取的多糖、皂甙、氨基酸混合后,就是生脉散提取物(SMT),其可以与任何一种药剂学上所说辅料混合制成各种剂型,可以是细粒剂、颗粒剂(冲剂)、胶囊剂或片剂。
分离的有效部位多糖、皂甙、氨基酸用常规检测试剂定性。
有效部位的得率范围:多糖为2.77-8.33%;皂甙为1.29-2.53%;氨基酸为1.04-1.49%.
氨基酸中含20种氨基酸,精氨酸含量达5.029%,丙氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸的含量也高。
本发明的主要特点在于:
1、从人参、麦冬、五味子中提取了主含多糖、皂甙、氨基酸的药物组合物,其为治疗心血管病,尤其是治疗病毒性心肌炎、扩张性心肌病的有效药物
2、这种从人参、麦冬、五味子中提取分离的主含多糖、皂甙、氨基酸的药物组合物,成分类别明确,临床疗效稳定,易确定质量标准,易与国际市场接轨。
3、本发明提供了一种群药共煎,再提取不同有效部位的制备方法。“群药共煎”继承了中医药的理论和传统,保留了中药汤药的特点。“再提取不同有效部位”使成分类别明确,剂量减小,纯度与质量提高。
4、本发明的目的还在于提供一种根据古方生脉散中三味药性质的组合情况、活性物质分子量的大小,利用大孔树脂、阳离子交换树脂制备主含多糖、皂甙、氨基酸的药物组合物,去除了单糖、无机盐、果胶、树脂等无效成分,与水煎剂比,使服用量从生药重量的约60%下降至10%左右。
5、本发明首次通过实验证实了人参、麦冬、五味子中的多糖、皂甙、氨基酸对病毒性心肌炎动物模型有保护作用,这主要是通过调节机体免疫功能来完成。而且,药效实验结果表明:多糖+皂甙+氨基酸三个有效部位联合给药的综合药效优于分别单独给药,也优于多糖+皂甙两个有效部位联合给药。光镜结果证明,SMT22g/kg(按生药量计)能明显改善病毒引起的心肌病变。电镜结果显示,对照组心肌横纹肌原纤维各部和线粒体形态完整,模型组线粒体损伤明显,呈残缺状,部分线粒体消失后留下呈卵形空缺区域,肌纤维因线粒体肿胀后挤压而扭曲,横纹肌间盘解离。而各给药组线粒体形态均匀,外膜和脊膜系统清晰可见,完整的肌原纤维分布均匀,各部分清晰可辨。其中生脉散水煎剂(SMS)和生脉散中提取的三个有效部位混合物(SMT)两组部分线粒体成凝聚状,受损最轻,多糖、皂甙、氨基酸三种有效部位分别给药组的受损程度重于SMS、SMT组,出现线粒体脊肿胀、线粒体中有空白区域等现象。
实施例一
按配比称取原料550克∶红参1∶麦冬3∶五味子1.5;加10倍水浸泡30分钟,提取3次,每次60分钟;合并水提液,滤过,减压浓缩至密度为1.04(80℃),加95%乙醇使含醇量达70%(20℃),静置,过滤;沉淀抽干;50℃干燥;得多糖41.2克;上清液回收乙醇后,上大孔吸附树脂柱D101,先以去离子水洗至无糖,再以75%乙醇洗脱至尽;醇洗脱液回收乙醇,干燥得皂甙7.2克;水洗液上阳离子交换树脂柱,水洗去杂质,续用5%氨液洗脱至尽,洗脱液减压浓缩,干燥得氨基酸7.79克。合并多糖、皂甙、氨基酸,粉碎,过60目筛,混匀,加适量辅料,制得护心康细粒剂。
实施例二:
按配比称取原料4kg∶红参5∶麦冬3∶五味子3;加10倍水浸泡50分钟,提取2次,每次60分钟;合并水提液,浓缩后上大孔树脂柱(NKA-11),先水洗至无糖,后用70%乙醇洗;乙醇液回收乙醇,得皂甙52克;水洗液浓缩后加丙酮沉淀;沉淀物干燥得多糖131克;上清液回收丙酮后上阳离子交换树脂柱,水洗至无糖,弃去水洗液,再用10%氨液洗脱,氨洗液减压干燥得氨基酸42.6克。
实施例三:
按配比称取原料1.2kg∶红参1∶麦冬2∶五味子1;加10倍水浸泡20分钟,提取4次,每次30分钟;合并水提液,上阳离子树脂柱,先水洗至无糖,后2%氨液洗脱;氨洗脱液中得氨基酸16.32克;水洗液浓缩后上大孔树脂柱(H-107);先去离子水洗至无糖,后80%乙醇洗;醇液回收乙醇得皂甙17.64克;水洗液浓缩后经乙醇沉淀得多糖52.92克。
混合分离提取的多糖、皂甙、氨基酸,得生脉散提取物(SMT),可以与任何一种药剂学上所说辅料混合制成各种剂型,可以是细粒剂、颗粒剂(冲剂)、胶囊剂或片剂。有效部位多糖、皂甙、氨基酸用常规检测试剂定性。
SMT细粒剂处方:SMT 1250克
乳糖 1000克
微晶纤维素 243克
阿斯巴甜 7克
全方制成1000包细粒剂,每包含SMT1.25克。
下面是生脉散提取物SMT治疗病毒性心肌炎的实验:
我们用柯萨奇B3病毒引起的BALB/C小鼠病毒性心肌性模型,以生脉散水煎剂(SMS)及生脉散提取物(SMT)作为治疗药物,考察SMS及SMT对此模型的作用。一、实验材料和方法1、病毒
Coxsackievirus B3,Nancy株,在人胚肾细胞上传代繁殖。在wish细胞测定病毒滴度。病毒效价TCID50103,-70℃保存。2、实验试剂
LDH(乳酸脱氢酶),CK(肌酸激酶),AST(门冬氨酸基转移酶),测定试剂盒由建成生物制品研究所提供;IL-2放免测定试剂盒:中国科学院上海原子能研究所提取供;IFN-γ用ELISA方法测定,试剂盒由深圳晶美生物工程公司提供;中性红:上海试剂三厂;RPMI1640:GIBCO;TRI201试剂:GIBCO,1003511;焦碳酸二乙酯(DEPC):Amresco,E174-25G;柯萨奇病毒基因扩增试剂盒:复华生物工程公司;DNA marker:Promega公司和华美生物工程公司:其余试剂为国产AR级。3、实验仪器
酶联免疫检测仪:DG3022 A型,华东电子管厂
全自动γ计数仪:WIZARD1470型;PCR仪:Perkin Elmer 9600型
凝胶自动成像系统:Gel Doc 1000,Bio Rad.4、实验动物
BALB/c小鼠,雄性。6-8周由南京医科大学实验动物中心,南京军区总医院动物中心提供。5、实验方法
BALB/c,雄性小鼠随机分组,模型组及给药组ip.200TCIDCVB3 0.1ml,对照组ip.等量生理盐水,于第10天,摘眼球取血,3000rpm离心10min,取血清,测定血清中心肌酶谱(CK,LDH,AST)水平。取心脏称重,纵向切开,取一半浸泡于10%福尔马林液中固定,其余浸泡于0.25%戊二醛以供电镜检查。
给药组于ip病毒的同时经口给药,SMS 11g/kg,SMT 22g/kg(按生药量计)及蒸馏水。二、实验结果
SMS 11g/kg(相当于生药量,以下同)、SMT 22g/kg(相当于生药量,以下同)能明显改善病毒小鼠体重减轻的情况,显著降低血清中心肌酶谱CK,LDH,AST的升高;SMS 11g/kg能显著升高病毒小鼠的生存率;
SMT 22g/kg能明显改变病毒引起的心肌病变。由电镜结果可知,对照组心肌横纹肌原纤维各部分和线粒体形态完整;模型组线粒体损伤明显,呈残缺状,部分线粒体消失后留下呈卵形空缺区域,肌纤维因线粒体肿胀后挤压而扭曲,横纹肌闰盘解离。而各给药组线粒体形态均匀,外膜和脊膜系统清晰可见、完整肌原纤维分布均匀,各部分清晰可辨。其中SMS及SMT两给药组线粒体呈凝聚状,受损最轻。
SMS 22g/kg,SMT 22g/kg均能明显改善感染病毒后第七天小鼠的体重变化和心脏指数;显著升高IL-2的含量,SMS 22g/kg能明显升高脾脏NK细胞的活力,SMT 22g/kg组对NK细胞活力有一定的升高趋势,此外,二者均对血浆中过高的IFN-γ有降低的趋势。小鼠感染柯萨奇病毒B310天后,SMT对其体重变化、心脏指数和生存率的
影响
组别 剂量 体重增加值 心脏指数 小鼠生存率
(g/kg) (g) (mg/10g) (%)对照组 +3.6±1.20 39.97±2.32 100SMS 11 -4.72±1.63 49.42±7.11 100*SMT 22 -1.94±2.40* 41.80±3.23 80模型组 -4.89±1.63## 43.075±2.15# 64#以上为7~10只小鼠的平均值小鼠感染柯萨奇病毒B310天后,SMT对其血清CK,LDH,AST活性的影响
组别 剂量(g/kg) CK(u/L) LDH(u/L) AST(u/L)对照组 315.64±112.16 2334.55±355.41 42.89±15.76SMS 11 504.37±184.34 2857.81±494.36 233.59±81.442SMT 22 390.48±99.86* 2819.37±421.83 108.27±36.29*模型组 555.35±192.42## 3376.42±457.51 154.55±31.03##
##以上为7~10只小鼠的平均值小鼠感染柯萨奇B3病毒10天后,SMT对其心肌、病理组织学变化的影响组别 剂量 动物 坏死程度 钙化程度 浸润程度
(g/kg) 数 ± + ++ +++ ± + ++ +++ ++++ + ++对照组 5 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0SMS 11 10 1 5 3 1 0 3 0 2 0 4 6SMT 22 8 2 6 0 0* 1 0 0 0 0 6 0*模型组 7 1 0 2 3# 0 0 0 2 0# 2 4##小鼠感染柯萨奇B3病毒7天后,SMT对其体重变化,心脏指数的影响
组别 剂量 体重增加值 心脏指数
(g/kg) (g) (mg/10g)对照组 +0.14±1.05 47.03±4.93SMS 22 -3.36±0.36* 50.13±1.87**SMT 22 -4.03±1.20 51.07±1.63**模型组 -4.62±0.23## 54.83±1.99##以上为8只小鼠的平均值
小鼠感染柯萨奇B3病毒7天后,SMT对血浆白介素-2,
γ-干扰素含量与脾脏NK细胞活性的影响组别 剂量 白介素-2 γ-干扰素 NK细胞活性
(g/kg) (ng/ml) (pg/ml)对照组 14.25±3.74 74.07±27.78 37.62±15.91SMS 22 14.09±6.22* 128.38±17.66 30.65±8.37*SMT 22 14.14±4.53* 122.13±19.48 15.18±4.60模型组 8.70±2.89## 144.61±33.68### 10.25±7.60#以上为8只小鼠的平均值.*p<0.05 **p<0.01与模型组相比#p<0.05 ##p<0.01 ###p<0.001与对照组比