CN111683945A - Cxcr7受体拮抗剂(3s,4s)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型 - Google Patents

Abstract

本发明涉及(3S,4S)‑1‑环丙基甲基‑4‑{[5‑(2,4‑二氟‑苯基)‑异噁唑‑3‑羰基]‑氨基}‑哌啶‑3‑羧酸(1‑嘧啶‑2‑基‑环丙基)‑酰胺的结晶型；其制备方法，含有所述结晶型的医药组合物，由所述结晶型制备的医药组合物及其作为药品、尤其作为CXCR7受体调节剂的用途。

Description

CXCR7受体拮抗剂(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟- 苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基- 环丙基)-酰胺的结晶型

技术领域

本发明涉及新颖结晶型(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺(此后亦称为“化合物”)：

用于制备该化合物的方法、包含该结晶型的医药组合物、由该结晶型制备的医药组合物及其作为CXCL11/CXCL12受体CXCR7的调节剂的用途、尤其用于治疗癌症、自体免疫疾病、发炎性疾病、移植排斥或纤维化的用途。本发明进一步涉及在癌症(尤其脑肿瘤，包括恶性神经胶瘤、多形性神经胶质母细胞瘤；神经胚细胞瘤；胰脏癌，包括胰腺癌/胰脏管腺癌；胃肠癌，包括结肠癌、肝细胞癌、胃癌；卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)；白血病，包括成人T细胞白血病；淋巴瘤；肺癌；乳癌；横纹肌肉瘤；前列腺癌；食道鳞癌；口腔鳞状细胞癌；子宫内膜癌；甲状腺癌，包括乳突甲状腺癌；转移癌；肺转移；皮肤癌，包括黑色素瘤及转移性黑色素瘤；膀胱癌；多发性骨髓瘤；骨肉瘤；头颈癌；及肾癌，包括肾透明细胞癌、转移性肾透明细胞癌)的治疗中，作为药品与一或多种治疗剂及/或放射疗法及/或针对性疗法组合的该结晶型。

背景技术

趋化因子受体是一组G蛋白偶合受体(GPCR)，其以高亲和力连接肽趋化因子配体。趋化因子受体的主要功能是在静止状态下以及在发炎期间引导白细胞向淋巴器官及组织运输，但亦已发现特定趋化因子受体对非造血细胞及其祖细胞的作用。

CXCR7(别名ACKR3、别名RDC1、别名CMKOR1、别名GPR159)具有两种已知趋化因子配体：CXCL12(别名基质细胞衍生衍生因子1、SDF-1；别名前B细胞生长刺激因子，PBSF)及CXCL11(别名l-TAC、别名INF-y-诱导型T细胞a化学吸引因子)。

基质衍生化学吸引因子CXCL12参与免疫监测及发炎反应的调节。CXCL12是由骨髓基质细胞、内皮细胞、心脏、骨骼肌、肝、脑、肾、实质细胞分泌且对干细胞增殖、存活及造血细胞/祖细胞向骨髓回归起重要作用(Rankin SM等人；Immunol let.2012,145(1-2):47-54)。CXCL12亦将骨髓衍生祖细胞募集至形成血管分布的位点。此外，其在致癌作用中起主导作用。CXCL12促使内皮祖细胞及骨髓衍生抑制细胞募集至肿瘤位点，以及促使其他骨髓衍生细胞的募集。此外，CXCL12调节与肿瘤进程相关的血管生成/血管形成且在将循环肿瘤细胞种入转移位点中起关键作用。除趋化性功能外，亦已显示CXCL12调节肿瘤细胞增殖、移动性及存活(Kryczek I等人；Cancer Res.2005,65(2):465-72；Teicher BA等人；Clin CanRes.2010,16(11):2927-31；Domanska UM等人；European J of Cancer.2013,49(1):219-30)。

除CXCR7外，CXCL12连接且激活CXCR4(别名引信蛋白、别名白细胞衍生七次跨膜域受体；LESTR、别名D2S201E、别名七次跨膜片段受体、别名HM89、别名脂多醣相关蛋白3；lap3、别名LPS相关蛋白3)，而CXCL11连接且激活CXCR3(别名GPR9、别名CD183)。

因此，CXCR7与其配体CXCL12及CXCL11(此后称为CXCR7轴)的相互作用参与将承载受体的细胞引导至身体的具体位置，尤其引导至发炎、免疫损伤及免疫功能障碍的位点，且亦与组织损伤、细胞凋亡、细胞生长及血管抑制的诱导相关。CXCR7及其配体经上调且在包括以下的不同病理性情况中得到高度表达：癌症、自体免疫疾病、发炎、感染、移植排斥、纤维化及神经退化。

癌症是全世界死亡的主要原因。肿瘤由异常增殖恶性癌细胞构成，亦由功能支持微环境构成。此肿瘤微环境由细胞、细胞外基质组分及信号传导分子的复合数组构成，且藉由基质与肿瘤细胞之间改变的通信建立。随着肿瘤尺寸扩大，其引发不同因子产生，所述因子可帮助肿瘤生长，诸如血管生成因子(促进血管向内生长)，或可帮助避开宿主免疫反应袭击。CXCL12是生成于肿瘤中的该血管生成及免疫调节因子。

本结晶CXCR7调节剂可单独或以组合形式适用于癌症，其中CXCL11/CXCL12受体CXCR7的表达与癌症的疾病进程相关(其中包括胰脏癌、胰腺癌、乳癌、荷尔蒙抗性前列腺癌、肾细胞癌、子宫颈癌、子宫颈内上皮肿瘤、乳突甲状腺癌、膀胱癌、尤文氏肉瘤(Ewing'ssarcoma)、结肠癌、结直肠癌、肺癌、肺腺癌、非小细胞肺癌、脑脊髓膜瘤、MALT淋巴瘤、皮肤鳞状细胞癌、神经-内分泌肿瘤、鼻咽癌、多形性神经胶质母细胞瘤、星状细胞瘤、神经胶瘤、肝细胞癌、雌激素阳性乳癌、骨肉瘤、胆囊癌、肾肿瘤及肾细胞癌)。CXCR7亦表达于以下中：血癌、腺癌、脑转移癌、多发性骨髓瘤、头颈癌、原发性皮肤黑色素瘤、黑色素瘤、转移性黑色素瘤、横纹肌肉瘤、垂体腺瘤、口腔鳞状细胞癌、口腔肿瘤、淋巴质浆细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病、脑肿瘤、食道鳞癌、食道癌、卵巢癌、淋巴瘤、病毒引发性肿瘤、耳鼻喉癌、伯奇氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、甲状腺癌、子宫颈鳞状细胞癌、子宫内膜癌、神经胚细胞瘤、胃肠癌、淋巴细胞增生性疾病、乳房外佩吉特氏病(extramammary paget disease)、急性骨髓白血病、急性淋巴性白血病、胃癌、神经鞘肿瘤及绒毛膜癌、恶性胸膜间皮瘤、神经鞘瘤、脑脊髓膜瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、口腔白斑病、卡波西氏肉瘤及齿槽横纹肌肉瘤(审阅参见Sun等人；Cancer Metastasis Rev.2010,29(4),709-722)。

本CXCR7调节剂可单独或以组合形式适用于疾病，其中已显示使用siRNA、shRNA、微RNA、过度表达、CXCR7敲除动物、CXCR7激动剂、CXCR7拮抗剂、抗体或纳米抗体的CXCR7调节作为单一试剂在实验疾病模型中改变肿瘤生长，或在包括以下的疾病中与细胞毒性疗法组合：肝细胞癌(Xue TC等人；Exp Ther Med.2012,3(1):117-123；Zheng等人；Journal ofExperimental and Clinical Cancer Research.2010,11；29:31)、卡波西氏肉瘤(Raggo C等人；Cancer Res.2005,65(12):5084-95)、T细胞白血病(Jin Z等人；Int J Cancer.2009,125(9):2229-35)、淋巴瘤(Burns JM等人；J Exp Med.2006,203(9):2201-13)、肺癌、乳癌(Miao Z等人；PNAS.2007,104(40):15735-40)、胃癌(De-Min M等人；World J SurgOncol.2016,14(1):256-266)、横纹肌肉瘤(Grymula K等人；Int J cancer.2010,127(11):2554-68)、前列腺癌(Wang J等人；J Biol Chem.2008,283(7):4283-94)、胰腺癌(Shakir M等人；Pancreas.2015,44(4):528-34)、食道鳞癌(Zhou SM等人；Oncol Rep.2016,35(6):3453-9)、子宫内膜癌(Long P等人；Tumour boil.2016,37(6):7473-80)、乳突甲状腺癌(Zhang H等人；Tumour boil.2016,37(2):2415-23)、口腔鳞状细胞癌(Chen N等人；Tumourboil.2016,37(1):567-75)、肺转移(Goguet-Surmenian等人；Br J Cancer.2013,109(6):1579-85)、黑色素瘤(McConnell AT等人；Br J Dermatol.2016,doi:10.1111/bjd.14720)、膀胱癌(Liu L等人；Mol Med Rep.2013,8(1):140-6)、多发性骨髓瘤(Azab AK等人；Blood.2014,124(12):1905-14)、骨肉瘤(Zhang Y等人；Oncol Rep.2014,32(3):965-72)、结肠癌(Wang HX等人；Mol Clin Oncol.2015,3(6):1229-1232)、IV级星状细胞瘤(WaltersMJ等人；Br J Cancer.2014,110(5):1179-88)、头颈癌(Maussang D等人；J BiolChem.2013,288(41):29562-72)、神经胚细胞瘤(Liberman J等人；Plos One.2012,7(8):e43665)及神经胶质母细胞瘤(Liu Y；Anticancer Res.2015,35(1):53-64；Walters MJ等人；Br J Cancer.2014,110(5):1179-88；Ebsworth K等人；J Clin Oncol.2012,30(15)e13580)；改变肿瘤相关性血管(Miao Z等人；PNAS.2007,104(40):15735-40)；且减少肿瘤细胞接种(Grymula K等人；Int J cancer.2010,127(11):2554-68)。

本CXCR7调节剂可单独或以组合形式适用于疾病，其中已显示CXCR7调节(例如，使用siRNA、shRNA、微RNA、过度表达、CXCR7敲除动物、CXCR7激动剂、CXCR7拮抗剂、抗体或纳米抗体)调整白细胞转移(Berahovich RD等人；Immunology.2014,141(1):111-22)且促进髓磷脂/神经元修复(Williams JL等人；J Exp Med.2014,5；211(5):791-9；Gottle P等人；Ann Neurol.2010,68(6):915-24)，在以下实验疾病模型中提供有益效用：发炎性、自体免疫及髓鞘脱失疾病，包括多发性硬化及自体免疫脑脊髓炎(Cruz-Orengo L等人；JNeuroinflammation.2011,6；8:170；Bao J等人；Biochem Biophys Res Commun.2016Jan1；469(1):1-7)，格巴二氏症候群(Guillain-Barrésyndrome)或自体免疫神经炎(Brunn A等人；Neuropathol Appl Neurobiol.2013,39(7):772-87)、风湿性关节炎(Watanabe K等人；Arthritis Rheum.2010,62(11):3211-20)、急性肺炎/急性肺损伤(Ngamsri KC等人；JImmunol.2017,198(6):2403-2413；Petty JM等人；J Immunol.2007,178(12):8148-57)、气喘(Gasparik V等人；ACS Med Chem Lett.2012Jan 12；3(1):10-4；Chang HC等人；Immunology.2017 DOI:10.1111/imm.12881)；缓解慢性缺氧性肺性高血压(Sartina E等人；Pediatr Res.2012,71(6):682-8)；肺纤维化(Cao Z等人；Nat Med.2016,；22(2):154-62)；及动脉粥状硬化(Zhao D等人；Biochemistry.2015,17；54(45):6806-14；Ma W.等人；Biochem Pharmacol.2014,1；89(1):99-108)。

此外，已指出CXCR7参与心脏干细胞转移(Chen D等人；Sci Rep.2015,5:16813)、慢性同种异体移植物血管病变(Thomas MN等人；Transpl Int.2015,28(12):1426-35)、发炎性肠病(Werner L等人；Theranostics.2013,3(1):40-6)、慢性鼻窦炎(Patadia M等人；Am J Rhinol Allergy.2010,24(1):11-6)、人类肺血管疾病(Rafii S等人；Nat CellBiol.2015,17(2):123-36)及严重子癫前症的发展(Lu J等人；Exp Mol Pathol.2016,100(1):184-91)；且改善基于间叶干细胞的疗法对肾缺血/再灌注损伤的有益效用(Liu H等人；Plos One.2012,7(4):e34608)且引发类抗焦虑剂行为(Ikeda Y等人；Cell.2013,5；155(6):1323-36)。除上文提及的疾病外，CXCR7调节剂可适用于治疗肾同种异体移植物排斥、全身性红斑狼疮、骨关节炎、肺血管疾病、急性肾衰竭、包括大脑缺血的缺血、慢性同种异体移植物排斥、急性冠状动脉综合症、受损中枢神经系统；高血脂病、HSC移植、高血压、肺性高血压、滋贺-毒素相关性溶血性尿毒症候群、HIV/AIDS；硬化、压力相关性疾病、增生性糖尿病视网膜病变、西尼罗病毒脑炎(West Nile virus encephalitis)、血管损伤、肺纤维化、子宫内膜异位、自体免疫甲状腺炎、脉络膜新血管形成相关性疾病、再生不全性贫血、薛格连氏病(

disease)及白斑症。

机械地，最新研究已提供愈来愈多的证据证明激活CXCL12路径是肿瘤经由多重互补作用对常规疗法及生物试剂具有抗性的潜在机制：(i)藉由直接促进癌细胞存活、入侵及癌症干细胞及/或肿瘤引发的细胞表型；(ii)藉由募集“末端基质”(亦即，骨髓衍生细胞)以促进免疫抑制、肿瘤再生及转移；及(iii)藉由直接促进血管生成或使用旁分泌方式(DudaDG等人:CXCL12(SDF1alpha)-CXCR4/CXCR7 pathway inhibition:an emergingsensitizer for anticancer therapies？；Clin Cancer Res；2011,17(8)；2074-80)，其最近讨论了临床前及临床数据，所述数据支持包括CXCR7调节剂的抗CXCL12试剂在癌症治疗中作为敏化剂对抗现有疗法的潜在用途。此外，内皮细胞上CXCR7表达中的改善似乎对自体免疫疾病中的发炎性渗入至关重要。CXCL12及CXCL11是发炎性免疫反应中的关键配体：(i)藉由作用于细胞转移、细胞粘附及细胞存活(Kumar R等人；Cell Immunol.2012,272(2):230-41)；(ii)藉由驱使细胞的分化、成熟及极化，亦即，巨噬细胞(Ma W.等人；BiochemPharmacol.2014,1；89(1):99-108)、CD4+T细胞(Zohar Y等人；J Clin Invest.2014,124(5):2009-22)、少突神经胶质细胞祖细胞(Gottle P等人；Ann Neurol.2010,68(6):915-24)；(iii)藉由参与回归过程(Lewellis SW等人；J Cell Biol.2013,4；200(3):337-55)。因此，靶向CXCR7且因此调节其配体的含量将对各种自体免疫及发炎性疾病的病因起决定性作用。Sanchez-Martin等人(Trends Mol Med.2013,19(1):12-22)最近论述了CXCR7在疾病中的失调且强调以下事实：此受体是用于治疗自体免疫疾病及炎症的有趣治疗目标。

发明内容

因此，本CXCR7拮抗剂可单独或与一或多种治疗剂及/或化学疗法及/或放射疗法及/或免疫疗法组合使用；特定而言，与化学疗法、放射疗法、EGFR抑制剂、芳香酶抑制剂、诸如尤其PD1及/或PDL1阻断及/或CTLA4阻断的免疫疗法、或其他靶向治疗组合；用于预防/防治或治疗诸如以下的癌症：癌；腺癌；神经内分泌肿瘤；皮肤癌，包括黑色素瘤及转移性黑色素瘤；肺癌，包括非小细胞肺癌；转移性癌症；肺转移癌；膀胱癌，包括泌尿膀胱癌；尿道上皮细胞癌；肾癌，包括肾细胞癌；转移性肾细胞癌、转移性肾透明细胞癌；胃肠癌，包括结肠癌、结直肠腺瘤、结直肠腺癌、结直肠癌、转移性结直肠癌、家族性腺瘤息肉病(FAP)、食道癌、口腔鳞状细胞癌；胃癌、胆囊癌、胆管癌、肝细胞癌；胰脏癌，诸如胰腺癌或胰脏管腺癌；子宫内膜癌；卵巢癌；子宫颈癌；神经胚细胞瘤；前列腺癌，包括抗阉割前列腺癌；脑肿瘤，包括脑转移、恶性神经胶瘤、多形性神经胶质母细胞瘤、神经管胚细胞瘤、脑脊髓膜瘤；乳癌，包括三阴性乳癌；口腔肿瘤；鼻咽肿瘤；胸癌；头颈癌；白血病，包括急性骨髓白血病、成人T细胞白血病；甲状腺癌，包括乳突甲状腺癌；绒毛膜癌；尤文氏肉瘤；骨肉瘤；横纹肌肉瘤；卡波西氏肉瘤；淋巴瘤，包括伯奇氏淋巴瘤、MALT淋巴瘤；原发性眼内B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤及病毒诱导性肿瘤；及涉及CXCR7及/或CXCL12及/或CXCL11介导性转移、趋化性、细胞粘附、跨内皮转移、细胞增殖及/或存活的疾病。

具体而言，自参考文献得知CXCR7在脑肿瘤、恶性神经胶瘤及多形性神经胶质母细胞瘤中的潜在作用。包括CXCR7调节剂的CXCL12路径的调节剂已作为与化疗剂或放射疗法组合用于治疗脑癌的潜在治疗剂而得到提及。举例而言，Hattermann等人(Cancerresearch 2010,70(8):3299-3308)教示CXCL12“刺激防止喜树碱及替莫唑胺诱发性细胞凋亡且CXCR7拮抗剂降低CXCL12的抗细胞凋亡作用”。作者总结，“CXCR7在星状细胞瘤/神经胶质母细胞瘤中是CXCL12的功能受体，且调和针对药物诱发性细胞凋亡的抗性”。此外，Hattermann等人(Oncol Rep.2012,27:1348-1352)教示“CXCL12消除替莫唑胺的抗增殖效果”。作者亦教示此效果可能由CXCR7特异性拮抗剂几乎完全消除，“表明CXCL12的抗细胞凋亡效果主要由CXCR7调和”。Ebsworth等人(Neuro Oncol(2013)15(suppl 3):iii37-iii61.ET-023)教示在神经胶质母细胞瘤的大鼠模型中，当与放射疗法组合施用时，CXCR7拮抗剂显著延长存活时间。其他研究(例如，Ebsworth K等人；J Clin Oncol.2012,30(15)e13580；Walters MJ等人；Br J Cancer.2014,110(5):1179-88)支持此发现，所述研究揭示与放射疗法组合的CXCR7的体内抑制在另一神经胶质母细胞瘤的大鼠模型中使存活时间显著延长。此外，Liu SC等人(Neuro-Oncology 2014；16(1):21-28)教示照射后CXCL12的抑制作用在大鼠中抑制原生脑肿瘤中的肿瘤再生。Liu SC等人(Neuro Oncol.2013,16(1):21-8)亦教示相较于单独照射，照射后脑转移模型中CXCL12的抑制作用抑制肿瘤生长且延长寿命。Calatozzolo C等人(Cancer Biol Ther.2011,11(2),1-12)教示在体外实验中，CXCR7拮抗剂显示完全抑制神经胶瘤增生。

具体而言，已在参考文献中描述CXCR7于胰腺肿瘤中的作用。Shakir等人(Pancreas.2015,44(4):528-34)观察到，在与CXCL12相互作用时，CXCR4及CXCR7激活促进更激进行为的下游蛋白酶。此外，CXCR7及CXCl12的表达与肿瘤组织学等级相关(Liu Z等人；World J Surg Oncol.2014,12:348)。此等发现由Heinrich EL等人(J TranslMed.2012,10:68)证实。因此，CXCR7调节剂可能适用于治疗胰腺癌。

CXCR7调节剂亦可能适用于治疗乳突甲状腺癌。Liu Z等人(J Surg Res.2014,191(2):379-88)描述CXCR7信使RNA及蛋白质含量在乳突甲状腺癌中显著提高且与肿瘤进程相关。CXCR7可能调节参与S-G2相转移的增殖、细胞周期、细胞凋亡、侵入及细胞周期调节性蛋白质的表达。敲除乳突甲状腺癌细胞中的CXCR7抑制细胞增殖及侵入、诱发S相捕获且促进细胞凋亡。Zhang H等人(Tumor Biol.2016,37(2):2415-23)进一步证明CXCR7影响乳突甲状腺癌细胞的生长且参与乳突甲状腺癌的肿瘤形成，其或许是藉由调节血管新生VEGF或IL-8导致的血管生成而进行。甲状腺癌中CXCR7轴的表达及功能是由Zhu X等人(Int JOncol.2016,48(6):2321-9)证实。

CXCR7调节剂亦可能适用于治疗肺癌：使用过度表达与RNA干预的组合，Miao Z等人(PNAS.2007,104(40):15735-40)确定CXCR7促进形成自乳癌细胞及肺癌细胞的肿瘤的生长且促进实验性肺转移。Iwakiri S等人(Iwakiri S等人；Cancer.2009,115(11):2580-93)观察到，CXCR7的较高表达与病理I阶段非小细胞肺癌中的早期及转移性再生有关。

CXCR7调节剂亦可适用于治疗肝细胞癌：据报道，肝细胞癌组织中的CXCR7表达增加。敲除CXCR7表达显著抑制肝细胞癌细胞侵入、粘附及血管生成。此外，CXCR7表达的下调使肝细胞癌的异种移植模型中的肿瘤生长减弱(Zheng K等人；J Exp Clin CancerRes.2010,29:31)。Monnier J等人(Eur J Cancer.2012,48(1):138-48)亦观察到，在408个人类肝细胞癌的群组中，相较于正常肝对照物，CXCR7在肿瘤中明显更高。人类肝细胞癌部分上的免疫组织化学染色证明癌症组织中的CXCR7表达更高。在肝细胞癌细胞株中使用CXCR7的RNAi，Xue TC等人(Exp Ther Med.2012,3(1):117-123)观察到，CXCR7下调使肿瘤生长减少，且减少裸鼠中肺转移的数目。此外，组织微阵列显示，具有高CXCR7表达的HCC易于转移至肺。下调CXCR7抑制了具有高度转移可能性的人类肝细胞癌细胞的生长及肺转移。

CXCR7调节剂亦可适用于治疗转移性结肠癌：Guillemot等人(Br J Cancer.2012,107(12):1944-9)观察到，在注射大肠直肠癌细胞之后，用CXCR7拮抗剂治疗的小鼠的肺转移显著减少。Wang HX等人(Mol Clin Oncol.2015,3(6):1229-1232)研究结肠癌样品中的CXCR7表达，且观察到相较于正常结肠组织中的CXCR7含量，结肠肿瘤中的CXCR7含量明显更高。此外，相较于非转移性肿瘤，淋巴结转移性结肠肿瘤呈现明显更高的CXCR7表达。

亦报导CXCR7表达于脑转移中(Salmaggi等人；Cancer Biol Ther.2009,8:17,1-7)。作者总结，CXCL12/CXCR4/CXCR7路径可能是进一步研究的有趣目标，所述研究探究此等分子在转移性细胞的侵入及增殖中的作用。

具体而言，自参考文献得知CXCR7对发炎性髓鞘脱失疾病的作用。CXCR7表达于整个成年小鼠大脑的各种区域中，且其表达在针对多发性硬化症的小鼠模型中经上调(Banisadr G等人；J Neuroimmune Pharmacol.2016Mar；11(1):26-35)。血脑屏障(BBB)处CXCL12经改变的表达形式参与多发性硬化症且与疾病的严重程度相关(McCandless EE等人；Am J Pathol.2008,172(3):799-808)。已显示CXCR7拮抗作用在小鼠中的实验性自体免疫脑脊髓炎中有效。那些最新研究有力表明CXCR7在多发性硬化症中经由互补机制成为疾病调节分子：(i)藉由经由BBB处的CXCL12重新分配促使白细胞进入血管周空间中(Cruz-Orengo L等人；J Neuroinflammation.2011,6；8:170；Cruz-Orengo L等人；J ExpMed.2011,14；208(2):327-39)且调节CXCR4介导的整合素的活化(Hartmann TN等人；JLeukoc Biol.2008,；84(4):1130-40)(ii)藉由直接影响微胶质细胞趋化性(Bao J等人；Biochem Biophys Res Commun.2016Jan 1；469(1):1-7)且影响发炎性单核细胞，促使其进入大脑(Douglas SD等人；J Leukoc Biol.2017；102:1155-1157)(iii)藉由经由提高CXCL12的含量促进髓鞘再生，该CXCL12促进CXCR4介导的少突神经胶质细胞祖细胞成熟(Williams JL等人；J Exp Med.2014,5；211(5):791-9；Gottle P等人；Ann Neurol.2010,68(6):915-24)。最近，Chu等人(Neuroscientist.2017,23(6):627-648)评述靶向轴CXCL12/CXCR4/CXCR7对于髓鞘脱失疾病的重要性，此是因为其在促进少突神经胶质细胞祖细胞的转移、增殖及分化中的中心作用。因此，在治疗学上，CXCR7拮抗作用可能预防炎症且在髓鞘脱失成人CNS中促进髓磷脂修复。

具体而言，自参考文献得知CXCR7在风湿性关节炎中的潜在作用。据报导，CXCR7表达于滑膜中的内皮细胞上。此外，在风湿性关节炎患者的滑液组织中发现CXCL12及CXCL11mRNA的含量提高(Ueno等人；Rheumatol Int.2005,25(5):361-7)。显示CXCL12在CD4+T细胞及滑膜中的单核细胞累积中起中心作用(Nanki T等人；J Immunol.2000,165(11):6590-8；Blades MC等人；Arthritis Rheum.2002 Mar；46(3):824-36)。此外，CXCL12经由其促血管生成功能及其对破骨细胞募集及分化的作用而参与风湿性关节炎过程。此外，包括CXCR7调节剂的CXCL12路径的调节剂已作为治疗风湿性关节炎的潜在治疗剂而提出。Villalvilla等人(Expert Opin Ther Targets.2014,18(9):1077-87)最近论述支持抗CXCL12试剂在风湿性关节炎治疗中的潜在用途的临床前及临床资料。Watanabe等人(ArthritisRheum.2010,62(11):3211-20)教示在预防及治疗上，CXCR7抑制剂减少小鼠胶原蛋白诱发性关节炎模型中的疾病临床症状及血管生成。

具体而言，CXCR7参与若干发炎性疾病。举例而言，CXCL12及CXCL11参与急性及慢性肺部发炎过程，诸如慢性阻塞性肺病(Petty JM等人；J Immunol.2007,178(12):8148-57；Porter JC等人；J Immunol.2008,180(3):1866-77)。发现CXCL12在人类及动物模型的肺中经上调(Phillips RJ等人；J Clin Invest.2004,114(3):438-46)。已显示肺中CXCR7的敲除及抗CXCL12试剂使气喘模型中的肺炎及气道过度活性减弱(Gasparik V等人；ACSMed Chem Lett.2012 Jan 12；3(1):10-4；Lukacs NW等人；Am J Pathol.2002,160(4):1353-60)。显示CXCR7拮抗作用或CXCL12阻断使肺炎减弱，使小鼠的急性肺部损伤中的肺部上皮障壁稳定(Ngamsri KC等人；J Immunol.2017,198(6):2403-2413；Konrad FM等人；Cell Death Dis.2017,8(5))。Cao等人(Nat Med.2016,；22(2):154-62)教示在肺部损伤后，CXCR7调节剂在肺纤维化的小鼠模型中“促进肺泡修复且减少纤维化”。亦描述肝纤维化中CXCR7的作用(Ding BS等人；Nature.2014,505(7481):97-102)。

亦报导，CXCL12及CXCL11在发炎性肠病中经上调(Koelink PJ等人；PharmacolTher.2012,133(1):1-18)。发现CXCR7在发炎性肠病中的周边血液T细胞上经上调(WernerL等人；J Leukoc Biol.2011,90(3):583-90)。作者假设“提高发炎性肠病病人的周边血液中CXCR7的表达可能使T细胞向黏膜发炎的位点的流入增加”(Werner L等人；Theranostics.2013,3(1):40-6)。在发炎性肠病的小鼠模型中，CXCL12路径的调节剂可能减少T细胞的渗入且减少组织损伤(Mikami S等人；J Pharmacol Exp Ther.2008,327(2):383-92；Xia XM等人；PLoS One.2011,6(11):e27282)。

亦在皮损银屑病皮肤中发现CXCL12及CXCL11的含量提高(Chen SC等人；ArchDermatol Res.2010,302(2):113-23；Zgraggen S等人；PLoS One.2014,9(4):e93665)。Zgraggen等人教示阻断CXCL12在两种不同类银屑病皮肤炎症模型中改善慢性皮肤炎症的过程。

如全身性红斑狼疮(SLE)的若干其他自体免疫疾病显示经改变的CXCR7/CXCR4表达，其与SLE B细胞的受损CXCL12促进性转移有关(Biajoux V等人；J Transl Med.2012,18；10:251)。此外，在多个狼疮的鼠类模型中，肾炎性肾中的CXCL12经显著上调。Wang等人(J Immunol.2009,182(7):4448-58)教示作用于CXCL12轴是狼疮中的较佳治疗目标，而CXCR4拮抗剂显著改善疾病、延长存活时间且减弱肾炎及淋巴腺增生。

在来自自体免疫患者的甲状腺中及动物模型中发现CXCL12及CXCR4经上调(Armengol MP等人；J Immunol.2003,170(12):6320-8)。Liu等人(Mol Med Rep.2016,13(4):3604-12)教示阻断CXCR4在小鼠中减少自体免疫甲状腺炎的严重性，减少淋巴细胞渗入及自动抗体生成。

Virani等人(Virani S等人；AJRI.2013,70:386-397)教示阻断CXCL12限制子宫内膜异位病灶中的血管生成。

CXCR7调节剂的生物特性亦包括(但不限于)任何由其配体CXCL11、CXCL12、BAM22及其关联肽连接及/或控制的生理性功能及/或细胞功能。因此，CXCL12损耗使癌细胞对体内化学疗法敏感，且CXCL12治疗阻碍结肠癌转移(Duda等人；Clin.Cancer Res.2011 17(8)2074-2080；Naumann等人；Plos One.2010,5(2)e9175)。CXCR7亦是CXCL11的受体(别名小型可诱导细胞因子子族b，成员11；scyb11，别名干扰素-γ-可诱导蛋白质9；ip9，别名小型可诱导细胞因子子族b，成员9b，scyb9b)且因此CXCR7活性的调节剂亦可用于指示CXCL11相关性病理学(Rupertus K等人；Clin Exp Metastasis.2014,31(4):447-59；Zohar Y等人；JClin Invest.2014,124(5):2009-22；Antonelli A等人；Thyroid.2013,23(11):1461-9)。CXCR7亦用作类鸦片肽BAM22及其关联肽(肽E、肽BAM12、BAM14、BAM18)的受体，且因此CXCR7活性的调节剂亦很可能用于指示类鸦片肽相关性病理学(Ikeda等人；Cell.2013,155,1323-1336)。亦已显示，CXCR7用作CXCl11及CXCL12的清除受体。因此，已显示CXCR7靶向改变CXCl11及CXCL12局部浓度，使CXCl11及CXCL12浓度梯度失调。

自WO2016/040515得知特定异噁唑化合物，其是SMYD蛋白质阻断剂，其中在WO2016/040515的化合物中，用特定(环)烷基取代基而非本发明的苯基取代基取代异噁唑环；且哌啶部分不携载羧酰胺取代基。自WO2006/087543、WO2005/026149及J.Med.Chem2014,57(14),6060-6082得知特定吡咯化合物作为抗菌剂。自WO2005/032490得知环状二胺作为因子Xa抑制剂。WO2004/050024揭示吡咯烷化合物作为趋化因子受体调节剂。

本发明提供新颖结晶型(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺，其是CXCR7受体的调节剂，亦即，其用作CXCR7受体拮抗剂，且用于预防或治疗对CXCL12受体及/或CXCL11受体的活化作出响应的疾病，尤其是癌症。在癌症的预防或治疗中，该结晶型亦可与一或多种化学疗法试剂及/或放射疗法及/或靶向治疗组合使用。

附图简要说明

图1显示如自实施例1获得的呈结晶型1的化合物的X射线粉末衍射图。当与图中强度最高峰比较时，用方法1图测量的X射线衍射显示具有相对强度的峰，该相对强度在指定衍射角2θ处是以下百分比(相对峰强度于括号内给出)(报导选自范围3-40°2θ的具有明显强度的峰)：3.6°(53％)、7.2°(31％)、8.2°(68％)、8.7°(46％)、9.1°(6％)、10.8°(50％)、13.9°(9％)、17.0°(26％)、17.5°(12％)、18.3°(100％)。

图2显示如自实施例2获得的呈结晶型2的化合物的X射线粉末衍射图。当与图中强度最高峰比较时，用方法1测量的X射线衍射图显示具有相对强度的峰，该相对强度在指定衍射角2θ处是以下百分比(相对峰强度于括号内给出)(报导选自范围3-40°2θ的具有明显强度的峰)：6.7°(46％)、8.5°(100％)、10.9°(19％)、13.2°(15％)、14.1°(13％)、14.5°(31％)、16.0°(16％)、17.4°(20％)、18.4°(16％)、20.8°(14％)。

图3显示如自实施例3获得的呈结晶型3的化合物的X射线粉末衍射图。当与图中强度最高峰比较时，用方法2测量的X射线衍射图显示具有相对强度的峰，该相对强度在指定衍射角2θ处是以下百分比(相对峰强度于括号内给出)(报导选自范围3-40°2θ的具有明显强度的峰)：6.8°(26％)、8.2°(100％)、8.8°(11％)、14.1°(27％)、16.0°(16％)、17.9°(31％)、21.0°(26％)、24.1°(17％)。

图4显示如自实施例4获得的呈结晶型4的化合物的X射线粉末衍射图。当与图中强度最高峰比较时，用方法2测量的X射线衍射图显示具有相对强度的峰，该相对强度在指定衍射角2θ处是以下百分比(相对峰强度于括号内给出)(报导选自范围3-40°2θ的具有明显强度的峰)：6.4°(100％)、8.3°(38％)、8.9°(12％)、13.6°(20％)、14.1°(9％)、15.4°(14％)、16.7°(28％)、18.0°(32％)、23.2°(42％)。

为避免任何质疑，上文所列峰描述图1至图4中所示X射线粉末衍射的实验结果。应理解，与上文所列峰相反，仅要求一系列特征峰完全且明确表示本发明呈各别结晶型的化合物的特点。

在图1至图4的X射线衍射图中，衍射角2theta(2θ)绘制于横轴上，且计数绘制于纵轴上。

具体实施方式

1)本发明的第一实施方案涉及化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型

其特征是：

a.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°(尤其3.6°、7.2°、8.2°、8.7°及18.3°；尤其3.6°、7.2°、8.2°、8.7°、9.1°、10.8°、13.9°、17.0°、17.5°及18.3°)；或

b.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°及10.9°(尤其6.7°、8.5°、10.9°、13.2°及14.5°；尤其6.7°、8.5°、10.9°、13.2°、14.1°、14.5°、16.0°、17.4°、18.4°及20.8°)；或

c.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：8.2°、17.9°及21.0°(尤其6.8°、8.2°、14.1°、17.9°及21.0°；尤其6.8°、8.2°、8.8°、14.1°、16.0°、17.9°、21.0°及24.1°)。

应理解，实施方案1)的结晶型包含呈游离碱(亦即，不呈盐形式)的结晶型的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺。此外，所述结晶型可包含非配位及/或配位溶剂。配位溶剂在本文中用作结晶溶合物的术语。类似地，非配位溶剂在本文中用作物理吸附或物理捕获溶剂的术语(Polymorphism in the Pharmaceutical Industry(R.Hilfiker编,VCH,2006),第8章:U.J.Griesser:The Importance of Solvates的定义)。特定而言，结晶型1是无水物，亦即，其不包含配位水，但可包含非配位溶剂，诸如异丙醇、甲醇、乙醇及/或水。特定而言，结晶型2是无水物，亦即，其不包含配位水，但可包含非配位溶剂，诸如异丙醇、甲醇、乙醇及/或水。特定而言，结晶型3是二水合物，亦即，其包含约2当量的配位水，且可包含额外非配位溶剂，诸如水。

2)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°；其中该结晶型的特征尤其是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、7.2°、8.2°、8.7°及18.3°。

3)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°；或关于实施方案2)的该结晶型，其中该结晶型的特征尤其是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、7.2°、8.2°、8.7°、9.1°、10.8°、13.9°、17.0°、17.5°及18.3°。

4)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°；或关于实施方案2)或3)的该结晶型，其基本上显示如图1中描绘的X射线粉末衍射图案。

5)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°；或关于实施方案2)至4)中任一者的该结晶型，如藉由差示扫描量热法(例如，藉由使用如本文所述的方法)测定，其在约259℃处具有吸热现象。

6)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°；或关于实施方案2)至5)中任一者的该结晶型，其中该形式是藉由以下获得：

a)将10mg化合物与1mL甲醇混合，或将20mg化合物与1mL约3:1甲醇与乙腈的混合物混合；

b)藉由以0.1℃/min的匀速升温加热至约65℃以溶解化合物；

c)藉由使用0.1℃/min的匀速降温将混合物冷却至约20℃；且

d)过滤且干燥产物(例如，在室温下且在约10毫巴的减压下持续4小时)。

7)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°；或关于实施方案2)至6)中任一者的该结晶型，其中该结晶型是无水物(亦即，其不含配位水)。

8)另一实施方案涉及实施方案1的化合物的结晶型，其特征是：

a.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°、10.9°、13.2°及14.5°；或

b.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.8°、8.2°、14.1°、17.9°及21.0°。

9)另一实施方案涉及实施方案1)或8)的化合物的结晶型，其特征是：

a.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°、10.9°、13.2°、14.1°、14.5°、16.0°、17.4°、18.4°及20.8°；或

b.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.8°、8.2°、8.8°、14.1°、16.0°、17.9°、21.0°及24.1°。

10)另一实施方案涉及实施方案1)或8)的化合物的结晶型，其特征是：

a.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°、10.9°(尤其6.7°、8.5°、10.9°、13.2°及14.5°)；或关于实施方案9)的该结晶型，其基本上显示如图2中描绘的X射线粉末衍射图案；或

b.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：8.2°、17.9°、21.0°(尤其6.8°、8.2°、14.1°、17.9°及21.0°)；或关于实施方案9)的该结晶型，其基本上显示如图3中描绘的X射线粉末衍射图案。

11)另一实施方案涉及实施方案1的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°、10.9°、13.2°、14.5°(尤其6.7°、8.5°、10.9°、13.2°、14.1°、14.5°、16.0°、17.4°、18.4°及20.8°)。

12)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°及10.9°；或关于实施方案8)至11)中任一者的该结晶型，其中该结晶型是无水物(亦即，其不含配位水)。

13)另一实施方案涉及实施方案1的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.8°、8.2°、14.1°、17.9°、21.0°(尤其6.8°、8.2°、8.8°、14.1°、16.0°、17.9°、21.0°及24.1°)。

14)另一实施方案涉及实施方案1)的化合物的结晶型，其特征是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：8.2°、17.9°及21.0°；或关于实施方案8)至10)或13)中任一者的该结晶型，其中该结晶型是二水合物(亦即，其含有约2当量的配位水；其中应理解，该约2当量的配位水相当于化合物的结晶型具有约6.9％的水含量(例如，如藉由GVS/吸湿实验测定)。

进一步揭示呈结晶型4的(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺，该形式的特点尤其是在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.4°、8.3°、16.7°、18.0°及23.2°(尤其6.4°、8.3°、8.9°、13.6°、14.1°、15.4°、16.7°、18.0°及23.2°)；且其基本上显示如图4中描绘的X射线粉末衍射图案。特定而言，结晶型4可包含额外配位或非配位溶剂，诸如THF及/或水。

为避免任何质疑，上文实施方案之一无论何时提及“在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处的峰”，该X射线粉末衍射图均藉由使用组合Cu Kα1与Kα2辐射获得，无Kα2剥离；且应理解，如本文提供的2θ值的准确度是在+/-0.1-0.2°范围内。尤其在本发明实施方案及权利要求中指定峰的衍射角2theta(2θ)时，给出的2θ值应理解为自该值减0.2°至该值加0.2°(2θ+/-0.2°)的区间；且较佳自该值减0.1°至该值加0.1°(2θ+/-0.1°)。

当复数形式用于化合物、固体、医药组合物、疾病及其类似物时，此亦欲意谓单个化合物、固体或其类似者。

术语“对映体富集”在本发明的上下文中理解为意谓尤其至少90wt％，较佳至少95wt％，且最佳至少99wt％化合物以该化合物的对映异构体形式存在。应理解，化合物是以对映体富集的绝对(3S,4S)-构形存在。

术语“基本上纯”在本发明的上下文中理解为意谓尤其至少90wt％，较佳至少95wt％，且最佳至少99wt％化合物的晶体以本发明的结晶型存在，尤其以本发明的单一结晶型存在。

当例如在X射线粉末衍射图中定义峰的存在时，常用途径是根据S/N比(S＝讯号，N＝噪声)进行。根据此定义，当陈述峰必须存在于X射线粉末衍射图时，应理解X射线粉末衍射图中的峰是藉由具有大于x(x数值大于1)，通常大于2，尤其大于3的S/N比(S＝讯号，N＝噪声)定义。

在陈述分别如图1至图4中所描绘，结晶型基本上显示X射线粉末衍射图案的上下文中，术语“基本上”意谓至少所述图示中描绘的图的主峰(亦即，相较于图中强度最高峰，具有大于10％，尤其大于20％的相对强度的那些峰)必须存在。然而，X射线粉末衍射领域的普通技术人员将认识到X射线粉末衍射图中的相对强度因择优取向效应可经受较强强度变化。

除非用于温度，否则置于数值“X”之前的术语“约”在本申请中是指自X减X的10％至X加X的10％的区间，且较佳是指自X减X的5％至X加X的5％的区间。在温度的特定情况下，置于温度“Y”之前的术语“约”在本申请中是指温度Y减10℃至Y加10℃的区间，较佳是指Y减5℃至Y加5℃的区间，尤其是指Y减3℃至Y加3℃的区间。室温意谓约25℃的温度。当在本申请中使用术语n等效表达，其中n是数值时，其意谓且在本申请的范畴中n是指约值n，较佳n是指确定数值n。

每当字组“之间”或“至”用于描述数值范围时，应理解指定范围的端点明确包括在范围内。举例而言：若温度范围描述为介于40℃与80℃之间(或40℃至80℃)，则此意谓端点40℃及80℃包括在范围内；或若变量定义为介于1与4之间(或1至4)的整数，则此意谓变量是整数1、2、3或4。

表述％w/w是指与所考虑组合物的总重量相比的重量百分比。同样，表述v/v是指所考虑两种组分的体积比。表述“vol”表示体积(以L为单位，例如，溶剂)/重量(以kg为单位，例如，反应物)。举例而言，7vol表示7公升(溶剂)/kg(反应物)。

实施方案1)至14)中任一者的化合物的结晶型，尤其基本上纯结晶型可用作药品，例如，以医药组合物形式用于肠内或非经肠给药。

15)因此，另一实施方案涉及实施方案1)至14)中任一者的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型作为药品的用途。

实施方案1)至14)中任一者的化合物的结晶固体，尤其基本上纯结晶固体可用作单一组分或用作与化合物的其他结晶型或非晶型的混合物。

医药组合物的制造可以任何本领域普通技术人员将熟悉的方式实现(参见例如Remington,The Science and Practice of Pharmacy,第21版(2005),第5部分,“Pharmaceutical Manufacturing”[由Lippincott Williams&Wilkins出版])，其藉由将本发明的结晶型(视情况与其他治疗有价值的物质组合)引入盖伦投药剂型以及适合、无毒、惰性、医药学上可接受的固体或液体载体材料及必要时常见医药佐剂。

16)本发明的另一实施方案涉及医药组合物，其包含实施方案1)至14)中任一者的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型作为活性成分，及至少一种医药学上可接受的载体材料。

实施方案16)的该医药组合物尤其适用于预防或治疗与CXCR7受体或其配体相关的疾病或病症。

17)本发明的另一实施方案涉及实施方案14)的医药组合物，其中该医药组合物呈片剂形式。

18)本发明的另一实施方案涉及实施方案14)的医药组合物，其中该医药组合物呈胶囊形式。

19)本发明的另一实施方案涉及实施方案1)至14)中任一者的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型[尤其实施方案2)至实施方案7)中任一者的结晶型]在制造医药组合物中的用途，其中该医药组合物包含化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺作为活性成分及至少一种医药学上可接受的载体材料。

为避免任何质疑，实施方案19)是指实施方案1)至14)中任一者的结晶型[尤其实施方案2)至7)中任一者的结晶型]，其适合用作/用作化合物的最终分离步骤(例如，以满足医药制造的纯度要求)，然而实施方案17)的最终医药组合物可能含有或可能不含该结晶型(例如，此是因为化合物的最初结晶型在制造过程期间进一步转化且/或溶解于医药学上可接受的载体材料中；因此，在最终医药组合物中，化合物可以非晶型、以另一结晶型或以溶解形式或类似形式存在)。

20)因此，本发明的另一实施方案涉及一种医药组合物，其包含化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺作为活性成分，其中该医药组合物是使用实施方案1)至14)中任一者的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型[尤其实施方案2)至7)中任一者的结晶型]及至少一种医药学上可接受的载体材料制造。

21)本发明的另一实施方案涉及实施方案20)的医药组合物，其中该医药组合物呈胶囊形式。

22)本发明的另一实施方案涉及实施方案1)至14)中任一者的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其用于预防/防治或治疗与CXCR7受体或其配体相关的疾病或病症。

23)本发明的另一实施方案涉及实施方案1)至14)中任一者的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其用于制备用于预防/防治或治疗与CXCR7受体或其配体相关的疾病或病症的药品。

如实施方案1)至14)中任一项定义的化合物的结晶型适用于预防/防治或治疗与CXCR7受体或其配体相关的病症，尤其是与CXCR7受体的功能异常、或藉由CXCR7传递信号的配体的功能异常、或藉由它们的其他受体(CXCR4及CXCR3)传递信号的CXCR7配体(CXCL12及CXCL11)的功能异常相关的病症。

所述与CXCR7受体或其配体相关的疾病或病症尤其选自由以下组成的群：

·癌症(尤其脑肿瘤，包括恶性神经胶瘤、多形性神经胶质母细胞瘤；神经胚细胞瘤；胰脏癌，包括胰腺癌/胰脏管腺癌；胃肠癌，包括结肠癌、肝细胞癌及胃癌；卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)；白血病，包括成人T细胞白血病；淋巴瘤；肺癌；乳癌；横纹肌肉瘤；前列腺癌；食道鳞癌；口腔鳞状细胞癌；子宫内膜癌；甲状腺癌，包括乳突甲状腺癌；转移癌；肺转移；皮肤癌，包括黑色素瘤及转移性黑色素瘤；膀胱癌；多发性骨髓瘤；骨肉瘤；头颈癌；及肾癌，包括肾透明细胞癌、转移性肾透明细胞癌)；

·发炎性疾病(尤其慢性鼻窦炎、气喘、慢性阻塞性肺病、动脉粥状硬化、心肌炎及类肉瘤病；尤其慢性鼻窦炎、气喘及动脉粥状硬化)；

·自体免疫病症(尤其(发炎性)髓鞘脱失疾病；多发性硬化症(MS)；格巴二氏症候群(Guillain Barré syndrome)；风湿性关节炎(RA)；发炎性肠病(IBD，尤其包含克罗恩氏病(Crohn's disease)及溃疡性结肠炎)；全身性红斑狼疮(SLE)；狼疮性肾炎；间质性膀胱炎；乳糜泻；自体免疫脑脊髓炎；骨关节炎；及I型糖尿病；尤其具有发炎部分的自体免疫病症，诸如(发炎性)髓鞘脱失疾病、多发性硬化症、格巴二氏症候群、风湿性关节炎、发炎性肠病、全身性红斑狼疮、狼疮性肾炎及自体免疫脑脊髓炎)；

·移植排斥(尤其肾同种异体移植物排斥、心同种异体移植物排斥及由造血干细胞移植导致的移植物抗宿主疾病)；及

·纤维化(尤其肝纤维化、肝硬化、肺纤维化，尤其自发性肺纤维化)。

所述与CXCR7受体或其配体相关的疾病或病症尤其是癌症、自体免疫病症(尤其具有发炎性部位的自体免疫病症)及纤维化。

此外，其他与CXCR7受体或其配体相关的疾病或病症涉及以下的疾病：CXCR7及/或CXCL12及/或CXCL11介导的转移、趋化性、细胞粘附、跨内皮转移、细胞增殖及/或存活。

此外，其他与CXCR7受体或其配体相关的特定疾病或病症是增生性糖尿病视网膜病变；西尼罗病毒脑炎(West Nile virus encephalitis)；肺血管疾病、急性肾衰竭、包括大脑缺血的缺血、急性冠状动脉综合症、受损中枢神经系统、高血脂病、高血压、肺部高血压、滋贺毒素相关性溶血性尿毒症症候群、子癫前症、血管损伤、HIV/AIDS、血管生成及脑部及神经元功能异常(诸如阿兹海默氏症(Alzheimer's disease)的发炎部位)、压力相关性疾病(诸如焦虑、抑郁及创伤后压力病症)及涉及类鸦片受体的疾病、子宫内膜异位、自体免疫甲状腺炎、脉络膜血管新生相关性疾病、再生不全性贫血、薛格连氏病(

disease)及白斑症。在子实施方案中，该与CXCR7受体或其配体相关的另一特定疾病或病症是肺性高血压。

术语“癌症”是指所有种类的癌症，诸如癌瘤；腺癌；白血病；肉瘤；淋巴瘤；骨髓瘤；转移性癌症；脑肿瘤；神经胚细胞瘤；胰脏癌；胃肠癌；肺癌；乳癌；前列腺癌；子宫内膜癌；皮肤癌；膀胱癌；头颈癌；神经内分泌肿瘤；卵巢癌；子宫颈癌；口腔肿瘤；鼻咽肿瘤；胸癌；及病毒诱发性肿瘤。

术语尤其是指脑肿瘤，包括脑转移、恶性神经胶瘤、多形性神经胶质母细胞瘤、神经管胚细胞瘤、脑脊髓膜瘤；神经胚细胞瘤；胰脏癌，包括胰腺癌/胰脏管腺癌；胃肠癌，包括结肠癌、结直肠癌、结直肠腺癌、转移性大肠直肠癌、家族性腺瘤息肉症(FAP)、胃癌、胆囊癌、胆管癌、肝细胞癌；卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)；白血病，包括急性骨髓性白血病、成人T细胞白血病；淋巴癌，包括伯奇氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、MALT淋巴瘤及原发性眼内B细胞淋巴瘤；肺癌，包括非小细胞肺癌；乳癌，包括三阴性乳癌；横纹肌肉瘤；前列腺癌，包括抗阉割前列腺癌；食道鳞癌；(口腔)鳞状细胞癌；子宫内膜癌；甲状腺癌，包括乳突甲状腺癌；转移癌；肺转移；皮肤癌，包括黑色素瘤及转移性黑色素瘤；膀胱癌，包括泌尿膀胱癌、尿道细胞癌；多发性骨髓瘤；骨肉瘤；头颈癌；及肾癌，包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、转移性肾细胞癌、转移性肾透明细胞癌；以及神经内分泌肿瘤；卵巢癌；子宫颈癌；口腔肿瘤；鼻咽肿瘤；胸癌；绒毛膜癌；尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)；及病毒诱发性肿瘤。

术语“癌症”尤其是指恶性神经胶瘤，尤其多形性神经胶质母细胞瘤、神经胚细胞瘤；胰脏癌，尤其胰脏管腺癌；卡波西氏肉瘤；成人T细胞白血病、淋巴瘤；肺癌；乳癌；横纹肌肉瘤；前列腺癌；食道鳞癌；(口腔)鳞状细胞癌；子宫内膜癌；乳突甲状腺癌；转移癌；肺转移；黑色素瘤；膀胱癌；多发性骨髓瘤；骨肉瘤；胃肠癌，尤其结肠癌、肝细胞癌及胃癌；头颈癌；及肾透明细胞癌。较佳地，术语“癌症”是指恶性神经胶瘤，尤其多形性神经胶质母细胞瘤；胰脏癌，尤其胰脏管腺癌；乳突甲状腺癌；肝细胞癌；肺癌；乳癌；转移癌；肺转移；黑色素瘤；结肠癌；头颈癌；及肾透明细胞癌。

如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型可尤其适用作治疗剂，其用于预防/防治或治疗如先前定义的癌症，该癌症是转移癌/形成转移的癌症。

如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型可尤其适用作治疗剂，其用于预防/防治或治疗癌症。其可用作单一治疗剂或与一或多种化学治疗剂及/或放射疗法及/或靶向治疗组合。在子实施方案中，当式(I)化合物与一或多种化学治疗剂及/或放射疗法及/或靶向治疗组合用于预防/防治或治疗癌症时，该癌症尤其是恶性神经胶瘤，尤其多形性神经胶质母细胞瘤；胰脏癌，尤其胰脏管腺癌；乳突甲状腺癌；肺转移；黑色素瘤；肺癌；转移癌；肝细胞癌；乳癌；结直肠癌；或头颈癌。此类组合治疗可同时、分开或在一段时间内进行。

因此，本发明亦关于包含医药学上可接受的载体材料及以下的医药组合物：

·如实施方案1)至14)中任一项定义的化合物的结晶型；

·及一或多种细胞毒性化学治疗剂。

因此，本发明进一步关于一种试剂盒，其包含

·医药组合物，该组合物包含医药学上可接受的载体材料及如实施方案1)至14)中任一项定义的化合物的结晶型；

·及如何与化学疗法及/或放射疗法及/或靶向治疗组合使用该医药组合物以预防或治疗癌症(尤其恶性神经胶瘤、尤其多形性神经胶质母细胞瘤)的说明。

术语“放射疗法”或“放射线疗法”或“放射线肿瘤学”是指电离放射线预防(辅助疗法)及/或治疗癌症的医疗用途；包括外部及内部放射疗法。

术语“靶向治疗”是指用一或多种抗肿瘤剂，诸如对特定类型的癌细胞或基质细胞起作用的小分子或抗体，预防/防治(辅助疗法)及/或治疗癌症。一些靶向治疗阻断某些酶、蛋白质或与癌细胞的生长及扩散有关的其他分子的活动。其他类型的靶向治疗帮助免疫系统杀灭癌细胞(免疫疗法)；或直接将毒性物质投递至癌细胞且将其灭杀。尤其适用于与本发明的化合物组合的靶向治疗的实例是免疫疗法，尤其靶向程序性细胞死亡受体1(PD-1受体)或其配体PD-L1的免疫疗法(Feig C等人,PNAS 2013)。

当与式(I)化合物组合使用时，术语“靶向治疗”尤其是指诸如以下的试剂：

a)表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂或阻断抗体(例如，吉非替尼(Gefitinib)、埃罗替尼(Erlotinib)、阿法替尼(Afatinib)、埃克替尼(Icotinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、帕尼单抗(Panitumumab)、扎鲁目单抗(Zalutumumab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab)、马妥珠单抗(Matuzumab)及西妥昔单抗(Cetuximab))；

b)B-RAF抑制剂(例如威罗菲尼(Vemurafenib)、索拉菲尼(Sorafenib)、达拉菲尼(Dabrafenib)、GDC-0879、PLX-4720、LGX818)；

c)芳香酶抑制剂(例如依西美坦(Exemestane)、来曲唑(Letrozole)、阿那曲唑(Anastrozole)、氟氯唑(Vorozole)、福美坦(Formestane)、法屈唑(Fadrozole)；

d)免疫检查点抑制剂(例如，抗PD1抗体，诸如帕博利珠单抗(Pembrolizumab)(兰布鲁珠单抗(Lambrolizumab)，MK-3475)、纳武单抗(Nivolumab)、皮地利珠单抗(Pidilizumab)、AMP-514/MED10680；小分子抗PD1试剂，诸如例如WO2015/033299、WO2015/044900及WO2015/034820中揭示的化合物；抗PD1L抗体，诸如BMS-936559、阿特珠单抗(atezolizumab)(MPDL3280A)、MEDI4736、阿维单抗(avelumab)(MSB0010718C)；抗PDL2，诸如AMP224、抗CTLA-4抗体，诸如伊匹木单抗(ipilimumab)、替西木单抗(tremilmumab)；

e)疫苗方式(例如树状细胞疫苗、肽或蛋白质疫苗(例如使用gp100肽或MAGE-A3肽)；

f)再次引入经遗传修饰以分泌免疫调节因子，诸如粒细胞单核细胞集落刺激因子(GMCSF)基因转染的肿瘤细胞疫苗(GVAX)或Fms相关的酪氨酸激酶3(Flt-3)配位体基因转染的肿瘤细胞疫苗(FVAX)或基于Toll样受体增强的GM-CSF肿瘤的疫苗(TEGVAX)的患者来源或同种异体(非自身)癌细胞；

g)基于T细胞的过继免疫疗法，包括嵌合抗原受体(CAR)工程改造的T细胞(例如CTL019)；

h)基于细胞因子或免疫细胞因子的疗法(例如，干扰素α、干扰素β、干扰素γ、介白素2、介白素15)；

i)Toll样受体(TLR)激动剂(例如，雷西莫特(resiquimod)、咪喹莫特(imiquimod)、葡萄糖吡喃基脂A、CpG寡聚脱氧核苷酸)；

j)沙利度胺(Thalidomide)类似物(例如来那度胺(Lenalidomide)、泊马多胺(Pomalidomide))；

k)吲哚-2,3-二氧酶(IDO)及/或色氨酸-2,3-二氧酶(TDO)抑制剂(例如NLG919/吲哚莫德(Indoximod)、1MT(1-甲基色氨酸)、INCB024360)；

l)T细胞共激受体的活化剂(例如抗淋巴细胞活化基因3(LAG-3)抗体(诸如BMS-986016)；抗T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)抗体、抗CD137/4-1BB抗体(例如BMS-663513/优鲁单抗(urelumab))、抗杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)，例如利鲁单抗(Lirilumab)(IPH2102/BMS-986015)；抗OX40/CD134(肿瘤坏死因子受体超家族，第4成员)、抗OX40-配体/CD252；抗葡萄糖皮质素诱发性TNFR族相关性基因(GITR)(诸如TRX518)、抗CD40(TNF受体超家族第5成员)抗体(诸如CP-870,893)；抗CD40-配体抗体(诸如BG9588)；抗CD28抗体)；

m)结合肿瘤特异性抗原的分子以及T细胞表面标记物，诸如双特异性抗体或抗体片段、诸如设计的锚蛋白重复蛋白质(DARPINS)的抗体模拟性蛋白质、双特异性T细胞衔接子(BITE，例如AMG103、AMG330)；

n)靶向集落刺激因子-1受体(CSF-1R)的抗体或小分子量抑制剂(例如，RG7155或PLX3397)。

当与如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型组合使用时，诸如那些d)处所列的免疫检查点抑制剂及尤其靶向程序性细胞死亡受体1(PD-1受体)或其配体PD-L1的那些是较佳的。

术语“化学疗法”是指用一或多种细胞毒性抗肿瘤剂(“细胞毒性化学治疗剂”)治疗癌症。化学疗法常常结合诸如放射线疗法或手术的其他癌症治疗使用。该术语尤其是指藉由杀死迅速分裂(大部分癌细胞的主要特性之一)的细胞来起作用的常规化学治疗剂。化学疗法可每次使用一种药物(单剂化学疗法)或一次使用若干药物(组合化学疗法或多化学疗法)。使用仅仅在曝光时方转变成细胞毒活性的药物的化学疗法称为光化学疗法或光动力疗法。

如本文所用，术语“细胞毒性化学治疗剂”或“化学治疗剂”是指诱发细胞凋亡或坏死性细胞死亡的活性抗肿瘤剂。当与式(I)化合物组合使用时，该术语尤其是指常规细胞毒性化学治疗剂，诸如：

a)烷化剂(例如二氯甲二乙胺、氯芥苯丁酸、环磷酰胺、依弗酰胺(ifosfamide)、链脲霉素、卡氮芥、洛莫斯汀(lomustine)、米尔法兰(melphalan)、白消安(busulfan)、达卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺、噻替派(thiotepa)或六甲蜜胺(altretamine)；尤其替莫唑胺)；

b)铂药物(例如顺铂、卡铂或奥沙利铂)；

c)抗代谢药物(例如5-氟脲嘧啶、卡培他宾(capecitabine)、6-硫醇嘌呤、氨甲喋呤、吉西他滨(gemcitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、夫达拉滨(fludarabine)或培美曲塞(pemetrexed))；

d)抗肿瘤抗生素(例如道诺霉素、阿霉素、表柔比星(epirubicin)、依达比星(idarubicin)、放线菌素-D、博莱霉素(bleomycin)、丝裂霉素-C或米托蒽醌(mitoxantrone))；

e)有丝分裂抑制剂(例如紫杉醇、多西他塞(docetaxel)、伊沙匹隆(ixabepilone)、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨(vinorelbine)、长春地辛或雌莫斯汀(estramustine))；或

f)拓朴异构酶抑制剂(例如依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、拓朴替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、二氟替康(diflomotecan)或伊洛替康(elomotecan))。

当与实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型结合使用时，较佳细胞毒性化学治疗剂是上述烷化剂(尤其二氯甲二乙胺、氯芥苯丁酸、环磷酰胺、依弗酰胺、链脲霉素、卡氮芥、洛莫斯汀、米尔法兰、白消安、达卡巴嗪、3-甲基-(三氮烯-1-基)咪唑-4-羧酰胺(MTIC)及其前体药，诸如尤其替莫唑胺、噻替派(thiotepa)、六甲蜜胺；或所述化合物的医药学上可接受的盐；尤其替莫唑胺)；及有丝分裂抑制剂(尤其紫杉醇、多西他塞、伊沙匹隆、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛、雌莫斯汀；或此等化合物的医药学上可接受的盐；尤其紫杉醇)。与式(I)化合物结合使用的最佳细胞毒性化学治疗剂是常规用于治疗多形性神经胶质母细胞瘤的那些物，尤其替莫唑胺。放射疗法同样较佳。

化学疗法可在治愈意图下给与或其可旨在延长生命或减轻症状。

a)组合形式化学疗法是使用药物与其他癌症治疗法，诸如放射线疗法或手术。

b)诱导化学疗法是使用化学治疗药物的第一线癌症治疗。此类型化学疗法用于治愈意图。

c)巩固化学疗法在缓解后给与，以延长整体无疾病时间且提高整体存活。施用的药物与实现缓解的药物相同。

d)加强化学疗法与巩固化学疗法一致，但使用与诱导化学疗法不同的药物。

e)组合化学疗法涉及同时用许多不同药物治疗患者。所述药物的机制及副作用不同。最大优点是对任一药剂形成抗性的机率降至最低。此外，药物可常以较低剂量使用，降低毒性。

f)新辅助化学疗法在诸如手术的局部治疗前给与，且经设计以缩小原发性肿瘤。其亦给与具有高风险微转移疾病的癌症。

g)辅助化学疗法在局部治疗(放射疗法或手术)后给与。其可在几乎无癌症存在的证据但存在复发风险时使用。其亦可用于杀死已扩散至其他身体部分的任何癌细胞。这些微转移瘤可用辅助化学疗法治疗且可降低由这些散播性细胞引起的复发速率。

h)维持化学疗法是重复低剂量治疗以延长缓解。

i)补救性化学疗法或缓解性化学疗法在无治愈意图下给与，但仅降低肿瘤负荷及增加预期寿命。对于这些方案，一般预期更佳毒性型态。

当与实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型结合使用时，诸如上文a)、b)、c)、d)、e)及尤其g)及/或h)处所列的那些化学疗法的预防性或治愈性形式(或加以必要的修改：放射疗法)是较佳的。

在提及施用类型时，“同时”在本申请中意谓相关施用类型在于在大致相同时间施用两种或更多种活性成分及/或治疗；其中应了解，同时施用将使受试者同时暴露于两种或更多种活性成分及/或治疗。在同时施用时，该两种或更多种活性成分可以固定剂量组合施用，或以相当非固定剂量组合(例如，藉由在大致相同时间使用以相同给药途径施用的两种或更多种不同医药组合物)施用或藉由使用两种或更多种不同给药途径的非固定剂量组合施用；其中该施用使受试者基本上同时曝露于两种或更多种活性成分及/或治疗。

当提及施用类型时，“固定剂量组合”在本申请中意谓相关施用类型在于施用包含两种或更多种活性成分之一种单一医药组合物。

当提及施用类型时，“分开”在本申请中意谓相关施用类型在于在不同时间点施用两种或更多种活性成分及/或治疗；其中应理解，分开施用将产生受试者同时曝露于两种或更多种活性成分及/或治疗的治疗阶段(例如，至少1小时，尤其至少6小时，尤其至少12小时)；其中该“分开施用”可在某些情况下亦涵盖受试者曝露于两种或更多种活性成分及/或治疗的仅一者下持续特定时间段(例如，至少12小时，尤其至少一日)的治疗阶段。因此，分开施用尤其是指其中一种活性成分及/或治疗例如一日一次地给予，且另一者例如一日两次、一日三次、每隔一日地给予的情况，其中该施用类型的结果在于，在基本上整个治疗时段期间，受试者同时曝露于两种或更多种活性成分及/或治疗。分开施用亦是指以下情况：其中以基本上长于一日(诸如每日一次或两次)施用(例如其中例如一日一次或两次地给予一种活性成分及/或治疗，且一周一次地给予另一者)的频率给予活性成分及/或治疗的至少一者。举例而言，当与放射疗法组合使用时(例如一周或两周)，本发明如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型将可能“分开”使用。

“在一段时间内”施用在本申请中意谓在不同时间相继施用两种或更多种活性成分及/或治疗。该术语尤其是指其中活性成分及/或治疗之一者的整个施用在另一/其他活性成分及/或治疗的施用开始前完成的施用方法。以此方式，可施用活性成分及/或治疗之一者达若干个月，接着施用其他活性成分及/或治疗。

“在一段时间内”施用亦涵盖其中如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型将用于初始化学治疗或放射治疗或靶向治疗(例如引导性化疗)结束后方开始的治疗的情况，其中该治疗视情况将与进一步/进行性化学治疗或放射治疗或靶向治疗组合(例如，与巩固化学疗法、加强化学疗法、辅助化学疗法或维护化学疗法组合；或与其放射疗法等效疗法组合)；其中该进一步/进行性化学治疗或放射治疗或靶向治疗将与使用如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型的治疗同时或分开进行。

自体免疫病症可定义为包含(发炎性)髓鞘脱失疾病；多发性硬化症(MS)；格巴二氏症候群；风湿性关节炎(RA)；发炎性肠病(IBD，尤其包含克罗恩氏病及溃疡性结肠炎)；全身性红斑狼疮(SLE)；狼疮性肾炎；间质性膀胱炎；乳糜泻；自体免疫脑脊髓炎；骨关节炎；及I型糖尿病。此外，自体免疫疾病进一步包含诸如以下的病症：银屑病；银屑病关节炎；抗磷脂质症候群；甲状腺炎，诸如桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)；淋巴细胞性甲状腺炎；重症肌无力症；眼色素层炎；上巩膜炎；巩膜炎；川崎氏病；葡萄膜视网膜炎；后段葡萄膜炎；与贝切特氏病相关的眼色素层炎；眼色素膜脑膜炎症候群；过敏性脑脊髓炎；特异性疾病，诸如鼻炎、结膜炎、皮肤炎；及感染后自体免疫疾病，包括风湿性发热及感染后肾小球性肾炎。在子实施方案中，自体免疫病症尤其是指具有发炎性部位的自体免疫病症，其中特定实例是(发炎性)髓鞘脱失疾病、多发性硬化症(MS)、格巴二氏症候群、风湿性关节炎(RA)、发炎性肠病(IBD，尤其包含克罗恩氏病及溃疡性结肠炎)、全身性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎及自体免疫脑脊髓炎。

发炎性疾病可定义为尤其包含慢性鼻炎以及气喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、动脉粥状硬化、心肌炎、干眼病、类肉瘤病、发炎性疾病及急性肺损伤。

移植排斥可定义为包含移植器官的排斥，诸如肾、肝、心、肺、胰、角膜及皮肤；由造血干细胞移植导致的移植物抗宿主疾病；慢性同种异体移植物排斥及慢性同种异体移植物血管病变。

纤维化可定义为尤其包含肝纤维化、肝硬化、肺纤维化、自发性肺纤维化、肾纤维化、心肌内膜纤维化及关节纤维化。

如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型亦适用于防治或治疗肿瘤的方法，其包含施用有效量的该结晶型，其中该有效量使肿瘤特性改变，且其中该改变是藉由调整CXCL11/CXCL12受体路径实现；其中该防治或治疗可视情况与常规化学治疗或放射治疗结合进行(在该情况下，肿瘤尤其是恶性神经胶瘤，尤其多形性神经胶质母细胞瘤)。该组合治疗可同时、分开及/或在一段时间内进行。

如实施方案1)至14)中任一者定义的化合物的结晶型亦适用于改变免疫反应的方法，其包含施用有效量的该结晶型，其中该有效量改变发炎性疾病，且其中该反应是藉由CXCL11/CXCL12受体路径调整。

本发明亦涉及用于制备呈对映体富集形式的化合物的方法，且涉及用于制备且表示实施方案1)至14)中任一者的化合物的结晶型的特征的方法。所述方法描述于下文实验部分的程序中。

实验程序：

所有温度是以℃陈述。以不进一步纯化的接收状态使用商购的初始材料。除非另外指明，否则所有反应均在氮气或氩气的氛围下于烘干玻璃器皿中进行。化合物藉由硅胶快速管柱层析法或藉由制备型HPLC纯化。本发明中所述化合物的特征是藉由LC-MS数据(滞留时间t_R以分钟给出；获自质谱的分子量以g/mol给出)表示，其使用下文所列条件。在本发明化合物呈现为构象异构体的混合物的情况下，尤其在其LC-MS谱中可见，给出最大量构象异构体的滞留时间。

NMR频谱学

Bruker Avance II光谱仪配备有400MHz(¹H)Ultrashield^TM磁铁及BBO 5mm探头或PAXTI 1mm探头，或Bruker Avance III HD Ascend 500MHz(¹H)，配备有DCH冷冻探针的磁铁。相对于由NMR溶剂的不完全氘化产生的质子共振，化学位移(δ)是以百万分之一(ppm)报导，例如，二甲亚砜δ(H)2.49ppm，氯仿δ(H)7.24ppm。缩写s、d、t、q及m分别是指单峰、双峰、三峰、四峰、多重峰且br是指宽峰。偶合常数J是以Hz报导。

质量控制(QC)分析性LC-MS：

装置及条件：

泵：Waters Acquity Binary,Solvent Manager，MS：Waters SQ Detector，DAD：Acquity UPLC PDA Detector，ELSD：Acquity UPLC ELSD。管柱：来自Waters的AcquityUPLC CSH C18 1.7μm2.1×50mm或Acquity UPLC HSS T3 C18 1.8μm 2.1×50mm，在60℃下于Acquity UPLC Column Manager中保持恒温。洗脱剂：A1:H2O+0.05％FA；B1:AcCN+0.045％FA。方法：梯度：在2.0分钟内，2％B98％B。流速：1.0mL/min。检测：UV 214nm及ELSD，及MS，tR是以分钟给出。

分析性LC-MS

装置：

二元梯度泵Agilent G4220A或与质谱分析检测(单一四极质量分析器，ThermoFinnigan MSQPlus或等效装置)相当。

条件：

方法A(酸性条件)：管柱：Zorbax SB-aq(3.5μm，4.6×50mm)；条件：MeCN[洗脱剂A]；水+0.04％TFA[洗脱剂B]；梯度：在1.5分钟内，95％B→5％B(流速：4.5毫升/分钟)。检测：UV/Vis+MS。

制备型LC-MS

装置：

二元梯度泵Gilson 333/334或与质谱分析检测(单一四极质量分析器，ThermoFinnigan MSQPlus或等效装置)相当。

条件：

方法B(碱性条件)：管柱：Waters XBridge C18(10μm，30×75mm)；条件：MeCN[洗脱剂A]；水+0.5％NH₄OH(25％aq.)[洗脱剂B]；梯度：在6.5分钟内，95％B→5％B(流速：75毫升/分钟)。检测：UV/Vis+MS。

手性分析性层析法

装置：

HPLC：具有Dionex DAD-3000 UV检测器的Dionex HPG-3200SD泵。

SFC：CO₂供应：Aurora Fusion A5 Evolution；泵：Agilent G4302A；UV检测器：Agilent G1315C。

条件：

HPLC：管柱：ChiralPak AY-H，5μm，250×4.6mm或Regis(R,R)Whelk-O1 250×4.6mm，5μm；洗脱剂：A：Hept，0.05％DEA，B：乙醇，0.05％DEA，流速0.8至1.2毫升/分钟。

SFC管柱：Regis(R,R)Whelk-O1，4.6×250mm，5μM；洗脱剂：A：60％CO₂，B：40％DCM/EtOH/DEA 50:50:0.1

手性制备型层析法

装置：

HPLC：具有Dionex DAD-3000 UV检测器的2 Varian SD1泵。

SFC：CO₂供应：Maximator DLE15-GG-C；泵：2 SSI HF CP 300；UV检测器：DionexDAD-3000。

条件：

HPLC：管柱：ChiralPak IA、IB、IC、IE或IF，5μm，20×250mm或Regis(R,R)Whelk-O1，21.1×250mm，5μm；洗脱剂：A(0％至90％Hept)与B(10％至100％EtOH，0.1％DEA)的合适混合物，流速：16、23或34毫升/分钟的合适流速。

SFC：管柱：Regis(R,R)Whelk-O1，30×250mm，5μm或ChiralPak IC，30×250mm，5μm；洗脱剂A(60％至80％CO₂)与B(30％至40％的DCM/EtOH/DEA 50:50:0.1)的合适混合物，流速160毫升/分钟。

X射线粉末衍射(XRPD)分析

XRPD方法1：

以反射模式(成对2θ/θ)在配备有用CuKα-辐射操作的Lynxeye检测器的Bruker D8Advance X射线衍射仪上收集X射线粉末衍射图案。通常，以40kV/40mA运行X射线管。在呈2θ的3-50°扫描范围内，运用0.02°(2θ)的步长及76.8秒的步时间。发散狭缝固定设为0.3。将粉末微微按入具有0.5mm深度的硅单晶样本夹持器中，且在测量期间，样本在其自身平面上旋转。使用Cu Kα1与Kα2组合辐射报导衍射数据，无Kα2剥离。如常规记录的X射线粉末衍射图案的一般情况，如本文提供的2θ值的准确度是在+/-0.1-0.2°范围内。

XRPD方法2：

以反射模式在配备有自动XYZ阶段、用于自动样本放置的雷射视讯显微镜及用CuKα-辐射操作的Vantec-500检测器的Bruker D8 GADDS-HTS衍射仪上收集X射线粉末衍射图案。通常，以40kV/40mA运行X射线管。X射线光学由与0.5mm针孔准直仪耦联的单个

多层镜组成。通常，单一框架是在180秒内记录，其使用4°处的θ1及16°处的θ2的测角器位置及20cm的检测器距离。框架整合于5-35°2θ范围内。在不研磨的情况下按原样使用粉末以平板样品形式制备在环境条件下操作的样本。将大约5-10mg样本轻按于玻璃片上以获得平滑表面。在测量时间内不移动样本。使用Cu Kα1与Kα2组合辐射报导衍射数据，无Kα2剥离。如常规记录的X射线粉末衍射图案的一般情况，如本文提供的2θ值的准确度是在+/-0.1-0.2°范围内。

重力蒸气吸附(GVS)分析

在25℃下以步进模式操作的多样本仪器SPS-100n(Projekt Messtechnik,Ulm,德国)上进行测量。允许样本在40％RH下平衡，随后开始预定义的湿度程序(应用40-0-95-0-95-40％RH，5％ΔRH的步进及每步24小时最大平衡时间)。使用约20至30mg的各样本。根据欧洲药典技术指南(European Pharmacopeia Technical Guide，1999，第86页)进行吸湿性分类，例如，轻微吸湿性：质量增加小于2％且等于或大于0.2％质量/质量；吸湿性：质量增加小于15％且等于或大于2％质量/质量。考虑首先吸附扫描中的40％相对湿度与80％相对湿度之间质量变化。

差示扫描量热法

在具有34位置自动取样器的Mettler Toledo STARe System(DSC822e模块，具有陶瓷传感器的测量单元及STAR软件9.20版)上收集DSC数据。使用经鉴定的铟校准仪器的能量及温度。除非另外陈述，否则通常在自动穿孔铝盘上将1-5mg的各样本以10℃min^-1自20℃加热至280℃。在样本上以20mL min^-1维持氮气吹扫。峰值温度以熔点报导。

热重力分析(TGA)

在具有34位置自动取样器的Mettler Toledo STARe System(TGA851e模块及STAR软件9.20版)上收集TGA数据。除非另外陈述，否则通常在自动穿孔铝盘上约5mg的各样本以10℃min^-1自30℃加热至250℃。在样本上以10mL min^-1维持氮气吹扫。峰值温度以熔点报导。

缩写(如上文或下文中使用)：

aq. 水性

Boc 丁氧基羰基

d 日

DCM 二氯甲烷

DEA 二乙胺

DIPEA 二异丙基-乙基胺，Hünig's碱，乙基-二异丙基胺

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

Et 乙基

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

FC 快速层析

h 小时

HATU 六氟磷酸2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基鎓

Hept 庚烷

HPLC 高效液相色谱法

HV 高度真空条件

LC-MS 液相色谱-质谱分析法

Me 甲基

MeCN 乙腈

MeOH 甲醇

mL 毫升

min 分钟

Nr 数目

Ph 苯基

prep. 制备型

rpm 转数/分钟

RT 室温

s 秒

sat. 饱和的

SFC 超临界液态层析

tBu 叔丁基

TEA 三乙胺

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

T₃P 丙基磷酸酐

t_R 滞留时间

参考实施例1：(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺

4-((S)-1-苯基-乙基氨基)-5,6-二氢-2H-吡啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯

在配备有Dean-Stark分离器及回流冷凝器的干燥烧瓶中，将4-氧代基哌啶-1,3-二羧酸-1-叔丁酯3-乙酯(10g，37mmol)溶解于甲苯(150mL)中。添加(S)-(-)-α-甲基苄胺(6.71g，55.4mmol)及单水合对二甲苯磺酸(0.36g，1.85mmol)且将混合物加热至回流持续3小时。随后将混合物冷却至RT，使用饱和NaHCO₃水溶液(3×100mL)洗涤三次，且在MgSO₄上干燥，过滤且在减压下浓缩以产生如黄色厚油的产物。LC-MS方法A：t_R＝1.01分钟；[M+H]⁺＝375.18.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.28(d,J＝7.4Hz,1H),7.25-7.38(m,5H),4.63(m,1H),4.19(q,J＝7Hz,2H),4.07(s,2H)3.46-3.38(m,1H)3.33-3.26(m,1H),2.43-35(m,1H),2.09-1.99(m,1H),1.50(d,J＝7.4Hz,3H),1.43(s,9H),1.29(t,J＝7.0Hz,3H)。

(3R,4S)-4-((S)-1-苯基-乙基氨基)-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯

在-15下于N₂下将硼氢化钠(1.43g，37.85mmol)溶解于THF(100mL)中。在20分钟内逐滴添加TFA(10.7mL，0.14mmol)。在-14至-18℃下于10分钟内添加4-((S)-1-苯基-乙基氨基)-5,6-二氢-2H-吡啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(10.5g，28mmol)。在0℃下搅拌所得混合物持续60分钟。仔细添加冰水(100mL)且在RT下搅拌反应混合物持续10分钟。添加3MNaOH水溶液以使混合物达至pH 11。用DCM(2×100mL)提取反应混合物，用盐水(2×100mL)洗涤组合的有机层，在MgSO₄上干燥，且在减压下蒸发溶剂。使用庚烷/EtOAc系统(1:0至4:1)作为洗脱剂在120g硅胶上藉由FC纯化所得油以获得呈微黄油(9.5g)的标题产物。标题化合物是由～10％的对应(3S,4R)-异构体污染。LC-MS方法A：t_R＝0.71分钟；[M+H]⁺＝377.33.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.31-7.41(m,5H),4.14-4.27(m,3H),4.02(q,J＝6.6Hz,1H),3.74-3.85(m,3H),3.00-3.10(m,2H),2.89-2.94(m,2H),1.88(m,1H),1.60-1.65(m,1H),1.42-1.46(m,11H),1.28-1.38(m,3H)。

(3R,4S)-4-氨基-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯

在H₂下于活性炭(1g)上将(3R,4S)-4-((S)-1-苯基-乙基氨基)-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(9.6g，25.5mmol)于MeOH(250mL)中的溶液添加至Pd(OH)₂ 20％悬浮液中。在RT下搅拌混合物持续18小时。使悬浮液滤过Celite，且在真空下浓缩过滤物以获得呈微黄油(5.65g)的标题产物。标题化合物含有～10％的对应(3S,4R)-异构体。LC-MS方法A：t_R＝0.54分钟；[M+H]⁺＝273.26.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:4.56-4.65(m,1H),4.40-4.65(m,2H),4.04-4.30(m,3H),3.59-3.72(m,1H),3.01-3.21(m,2H),2.51-2.68(m,2H),1.98-2.11(m,1H),1.73-1.77(m,1H),1.46(m,8H),1.26-1.39(m,3H)。

(3R,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯

在RT下，向(3R,4S)-4-氨基-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(12.15g，27.2mmol)于DCM(200mL)中的溶液添加5-(2,4-二氟苯基)异噁唑-3-羧酸(6.1g，26.3mmol)。随后，添加TEA(15.2mL，109mmol)，随后是T3P 50％于DCM中(32.4mL，54.4mmol)。在RT下搅拌反应混合物持续24小时。用饱和NaHCO₃水溶液(2×100mL)洗涤反应混合物两次。在MgSO₄上干燥有机层且进行蒸发。使用庚烷/EtOAc系统(1:0至85:15)作为洗脱剂在100g硅胶上藉由FC纯化粗制残余物以获得呈白色粉末的标题化合物(10.25g)；标题化合物含有～10％的对应(3S,4R)-异构体；LC-MS方法A：t_R＝1.15分钟；[M+H]⁺＝480.1.¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.96-8.00(m,1H),7.81-7.89(m,1H),6.98-7.13(m,2H),4.54-4.62(m,1H),4.42-4.52(m,1H),3.97-4.28(m,2H),3.14-3.21(m,1H),2.88-3.08(m,2H),2.03-2.18(m,1H),1.78-1.87(m,1H),1.58(s,2H),1.48-1.52(m,9H),1.28-1.37(m,3H)。

(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯

将乙醇钠(3.225g，45mmol)添加至(3R,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(3.6g，7.5mmol)于EtOH(40mL)与EtOAc(20mL)的混合物中的溶液中。在RT下搅拌混合物1日。用饱和NH₄Cl水溶液(25mL)处理反应混合物。添加DCM(50mL)。分离有机相，且用DCM提取三次水相层(3×50mL)。在MgSO₄上干燥组合的有机层，过滤且浓缩。使用碱性条件(方法B)藉由制备型LC-MS纯化粗制残余物。获得呈无色粉末的标题化合物(1.91g)，其含有～10％的对应(3S,4R)-异构体。

藉由含有～10％(3R,4R)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯的(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯的混合物的手性制备性SFC获得对映异构性纯标题化合物，其使用管柱ChiralPak IC，5μm，30×250mm；使用A(80％CO₂)与B(50％DCM，20％MeOH，0.1％DEA)的混合物作为洗脱剂，及160毫升/分钟的流速。手性HPLC：t_R＝3.29分钟。LC-MS方法A:t_R＝1.06分钟；[M+H]⁺＝480.08.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.90-8.94(m,1H),8.04-8.10(m,1H),7.57-7.62(m,1H),7.31-7.38(m,1H),7.11-7.16(m,1H),4.23-4.32(m,1H),4.05-4.13(m,1H),4.03(q,J＝7.1Hz,2H),3.92-3.97(m,1H),2.80-3.06(m,2H),2.61-2.69(m,1H),1.77-1.81(m,1H),1.48-1.58(m,1H),1.40-1.46(m,9H),1.08(t,J＝7.1Hz,3H)。

(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯

将(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(4.98g，10.7mmol)溶解于THF(80mL)中。随后，添加1M NaOH水溶液(20mL，20mmol)，且在RT下搅拌混合物3小时。使用2M HCl水溶液(10mL)使反应混合物酸化至约pH＝3，且使用DCM提取三次(3×50mL)。在MgSO₄上干燥组合的有机相，过滤且浓缩。获得呈白色粉末的标题化合物(4.56g)；LC-MS方法A t_R＝0.99分钟；[M+H]⁺＝452.33.¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.51(s,1H),8.90(d,J＝8.8Hz,1H),8.07(td,J₁＝8.6Hz,J₂＝6.4Hz,1H),7.60(m,1H),7.34(td,J₁＝8.5Hz,J₂＝2.2Hz,1H),7.15(d,J＝2.9Hz,1H),4.26(m,1H),4.04-4.17(m,1H),3.92-3.95(m,1H),2.79-3.01(m,2H),2.60(td,J₁＝11.0Hz,J₂＝4.0Hz,1H),1.75-1.82(m,1H),1.36-1.54(m,10H)。

(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-3-(1-嘧啶-2-基-环丙基氨甲酰基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯

向(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-1,3-二羧酸1-叔丁酯(400mg，0.88mmol)于DMF(15mL)中的溶液中添加盐酸1-(嘧啶-2-基)环丙-1-胺(171mg，0.975mmol)、DIPEA(0.805mL，4.61mmol)及HATU(404mg,1.06mmol)。在RT下搅拌反应混合物4小时。蒸发挥发物，且使用碱性条件(方法B)藉由制备型LC-MS纯化粗制混合物以产生标题化合物(419mg)；LC-MS方法A t_R＝0.95分钟；[M+H]⁺＝568.97。¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:8.62(d,J＝8.6Hz,1H),8.53(d,J＝4.8Hz,3H),8.08(d,J＝6.4Hz,1H),7.34(d,J＝2.4Hz,1H),7.19-7.21(m,1H),7.17(d,J＝3.0Hz,1H),3.92-4.1(m,2H)3.63(m,1H),3.35-3.45(m,1H),3.15-3.26(m,2H),2.75-2.92(m,1H),1.42-154(m,4H),1.22-1.44(m,11H)。

盐酸(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺

将(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-3-(1-嘧啶-2-基-环丙基氨甲酰基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(419mg，0.74mmol)溶解于二氧六环(10mL)中。逐滴添加于二氧六环中的HCl 4M(5mL，20mmol)中。在RT下搅拌混合物1小时。蒸发溶剂，且在HV上干燥残余物以获得呈白色粉末的标题粗制化合物(365mg)。LC-MS方法A:t_R＝0.64分钟；[M+H]⁺＝469.17。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.38-9.41(m,1H),9.27-9.29(m,1H),9.00(d,J＝8.5Hz,1H),8.93(s,1H),8.57(d,J＝4.8Hz,2H),8.06(q,J＝7.8Hz,1H),7.59(t,J＝10.5Hz,1H),7.31-7.39(m,2H),7.25(t,J＝4.8Hz,1H),4.27(d,J＝9.8Hz,1H),3.34(m,2H),3.07-3.20(m,3H),2.03(m,1H),1.86-1.89(m,1H),1.51(m,1H),1.37-1.41(m,1H),1.03-1.11(m,2H)。

(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺

在RT下向盐酸(3S,4S)-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸甲酯(200mg，0.396mmol)于DCM(20mL)中的悬浮液中添加环丙烷甲醛(0.03mL，0.396mmol)，随后添加DIPEA(0.2mL，1.2mmol)及三乙酰氧基硼氢化钠(221mg，1mmol)。在RT下搅拌反应混合物2小时。用饱和NaHCO₃水溶液处理反应混合物两次(50mL)。在MgSO₄上干燥有机相且蒸发。在碱性条件下(方法B)藉由制备型LC-MS纯化粗制残余物以产生呈无色固体的标题化合物(148mg)；手性HPLC:t_R＝2.42分钟；LC-MS方法A:t_R＝0.69分钟；[M+H]⁺＝523.04。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.57(d,J＝8.4Hz,1H),8.51(d,J＝4.7Hz,2H),8.47(s,1H),8.08(dd,J₁＝8.2Hz,J₂＝15.7Hz,1H),7.59(t,J＝9.8Hz,1H),7.34(t,J＝8.3Hz,1H),7.12-7.23(m,2H),3.95-4.06(m,1H),3.14(d,J＝10.0Hz,1H),2.99(d,J＝10.3Hz,1H),2.72(t,J＝9.3Hz,1H),2.18-2.27(m,2H),2.12(t,J＝11.4Hz,1H),2.01(t,J＝11.5Hz,1H),1.85(d,J＝11.0Hz.1H),1.54-1.66(m,1H),1.45-1.51(m,1H),1.31-1.41(m,1H),1.04-1.16(m,2H),0.79-0.90(m,1H),0.49(d,J＝7.6Hz,2H),0.10(d,J＝4.1Hz,2H)。

II.生物分析

活体外分析

根据以下实验方法确定化合物对CXCR7受体的拮抗作用。

该分析使用来自invitrogen的Tango CXCR7-bla U2OS细胞株。这些细胞含有与TEV蛋白酶位点连接的人类趋化因子受体CXCR7，及稳定整合于Tango GPCR-bla U2OS亲本细胞株中的Gal4-VP16转录因子。在UAS反应元件的控制下，此亲本细胞株稳定表达β抑制蛋白/TEV蛋白酶融合蛋白及β内酰胺酶报导基因。在配体结合及受体活化时，将蛋白酶标记β抑制蛋白分子募集至藉由蛋白酶分裂位点在C端连接至转录因子的CXCR7。蛋白酶使转录因子自CXCR7分离，其移位至细胞核且激活β内酰胺酶的表达。FRET启用的基质允许检测β内酰胺酶表达。

使用0.05％胰蛋白酶-EDTA使Tango CXCR7-bla U2OS细胞自培养皿分离且在生长培养基(McCoy's 5A 90％(v/v)、渗出的FCS 10％(v/v)、0.1mM NEAA、25mM HEPES(pH7.3)、1mM丙酮酸钠、P/S 1％(v/v)50μg/mL潮霉素、100μg/mL遗传霉素、200μg/mL博莱霉素)中收集，减速旋转且再悬浮于培养基(McCoy's 5A 90％(v/v)、渗出的FCS 1％(v/v)、0.1mMNEAA、25mM HEPES(pH 7.3)、P/S 1％(v/v))中。将10'000个细胞/孔(30μL)接种于384孔板中(黑色内壁，透明底部)。再37℃/5％CO₂下培养该孔板24小时。将测试化合物溶解为10mM于DMSO中，且连续稀释于DMSO中达至剂量反应曲线的最终浓度的500×。随后，以1:100将化合物稀释于分析培养基中，达至最终浓度的5×。将10微升/孔的稀释化合物添加至分析孔板中，且在37℃下培养15分钟。其后，将CXCL12/SDF1-α稀释于分析培养基中，达至最终浓度的5×(其受体活化的EC80值)，且将10微升/孔添加至分析孔板中。激动剂使受体活化，且因此使β抑制蛋白募集。用作拮抗剂的化合物削弱此活化。在37℃下培养该孔板22小时。将10微升/孔的检测试剂(LiveBLAzer^TM-FRET B/G(CCF4-AM)基质)转移至分析孔板，且在室温下避光培养该孔板2小时。测定荧光计数(扫描1:Ex 409/20nm，Em 460/30nm，扫描2：Ex 409/20nm，Em 530/30nm)。计算的发射比是用于IC₅₀测定。所计算的IC₅₀值可视日常细胞分析效能而变动。此类变动为本领域普通技术人员已知。来自若干测量的平均IC₅₀值给定为几何平均值。在此分析中，测试参考实施例1的化合物以具有3nM的IC₅₀。

III.实施例

实施例1：呈结晶型1的(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺

在标准HPLC瓶中，将1mL MeOH添加至10mg化合物(例如，如获自参考实施例1)中，藉由以0.1℃/分钟的匀速升温加热至65℃溶解悬浮液，同时使用Crystal 16器件(Crystallization Systems,NL)以500rpm使用磁棒搅拌。随后，以0.1℃/分钟的匀速降温使溶液冷却至20℃。所获固体是呈结晶型1的化合物。

或者，在标准HPLC瓶中，将1mL MeOH/MeCN 3/1添加至20mg化合物(例如，如获自参考实施例1)中，藉由以0.1℃/分钟的匀速升温加热至65℃溶解悬浮液，同时使用Crystal16器件(Crystallization Systems,NL)以500rpm使用磁棒搅拌。随后，以0.1℃/分钟的匀速降温使溶液冷却至20℃。所获固体是呈结晶型1的化合物。

实施例2：呈结晶型2的(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺

将呈形式1的100mg化合物悬浮于1mL DCM中，且在室温下用置于4mL玻璃瓶中的磁性搅拌棒轻柔搅拌。1周后，分离固体，且固体是呈结晶型2的化合物。

或者，在标准HPLC瓶中，将1mL MeOH/MeCN 3/1添加至10mg化合物(例如，如获自参考实施例1)中，藉由以0.1℃/分钟的匀速升温加热至40℃溶解悬浮液，同时使用Crystal16器件(Crystallization Systems,NL)以500rpm使用磁棒搅拌。随后，以0.1℃/分钟的匀速降温使溶液冷却至20℃。所获固体是呈结晶型2的化合物。

XRPD方法1	形式2，图2
		湿气吸附	在95％RH下，6.9％的吸收

实施例3：呈结晶型3的(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺

在4mL玻璃瓶中，将50mg呈形式2的化合物悬浮于0.4mL水中，且在振荡器上于室温下轻柔摇晃。1日后，当以湿状态测量时，所获固体是呈结晶型3的化合物。结晶型3是二水合物。

XRPD方法2

形式3，图3

实施例4：呈结晶型4的(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-丙基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺

在4mL玻璃瓶中，将10mg化合物溶解于3mL THF中，且允许在环境条件下蒸发。在固体完全蒸发后(3日后)，所测量的固体是呈结晶型4的化合物。

或者，将呈形式2的10mg化合物悬浮于0.02mL THF/H₂O 9/1中，且使小瓶在RT封闭。6日后，所获固体是呈结晶型4的化合物。

XRPD方法2

形式4，图4

Claims (17)

1.一种(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型

其特征在于：

a.在X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、8.2°及18.3°；或

b.在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°及10.9°；或

c.在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：8.2°、17.9°及21.0°；

其中该X射线粉末衍射图是藉由使用组合Cu Kα1与Kα2辐射获得，无Kα2剥离；且所述2θ值的准确度是在2θ+/-0.2°范围内。

2.如权利要求1所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其中在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、7.2°、8.2°、8.7°及18.3°；其中该X射线粉末衍射图是藉由使用组合Cu Kα1与Kα2辐射获得，无Kα2剥离；且所述2θ值的准确度是在2θ+/-0.2°范围内。

3.如权利要求1所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其中在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：3.6°、7.2°、8.2°、8.7°、9.1°、10.8°、13.9°、17.0°、17.5°及18.3°；其中该X射线粉末衍射图是藉由使用组合Cu Kα1与Kα2辐射获得，无Kα2剥离；且所述2θ值的准确度是在2θ+/-0.2°范围内。

4.如权利要求2或3所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其基本上显示如图1中描绘的X射线粉末衍射图案。

5.如权利要求2至4中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，如藉由差示扫描量热法测定，其在约259℃处具有吸热现象。

6.如权利要求2至5中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其中该结晶型是半水合物。

7.如权利要求2至6中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其可藉由以下获得：

a)将10mg(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺与1mL甲醇混合，或

将20mg(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺与1mL约3:1甲醇与乙腈的混合物混合；

b)藉由以0.1℃/分钟的匀速升温加热至约65℃溶解(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺；

c)藉由使用0.1℃/分钟的匀速降温将该混合物冷却至约20℃，及

d)过滤且干燥产物。

8.如权利要求1所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其中

a.在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°、10.9°、13.2°及14.5°；或

b.在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.8°、8.2°、14.1°、17.9°及21.0°；

其中该X射线粉末衍射图是藉由使用组合Cu Kα1与Kα2辐射获得，无Kα2剥离；且所述2θ值的准确度是在2θ+/-0.2°范围内。

9.如权利要求8所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其中

a.在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°、10.9°、13.2°及14.5°；其基本上显示如图2中描绘的该X射线粉末衍射图案；或

b.在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.8°、8.2°、14.1°、17.9°及21.0°；其基本上显示如图3中描绘的该X射线粉末衍射图案。

10.如权利要求8或9所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其中在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.7°、8.5°、10.9°、13.2°及14.5°，其中该结晶型是无水物。

11.如权利要求8或9所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其中在该X射线粉末衍射图中，于以下衍射角2θ处存在峰：6.8°、8.2°、14.1°、17.9°及21.0°，其中该结晶型是二水合物。

12.如权利要求1至11中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其用作药品。

13.一种医药组合物，其包含如权利要求1至11中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型作为活性成分及至少一种医药学上可接受的载剂。

14.如权利要求1至11中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其用于制造医药组合物，其中该医药组合物包含该化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺作为活性成分，及至少一种医药学上可接受的载体材料。

15.如权利要求1至11中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型，其用于预防或治疗癌症、自体免疫病症、发炎性疾病、移植排斥或纤维化。

16.一种如权利要求1至11中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型的用途，其用于制备用于预防或治疗癌症、自体免疫疾病、发炎性疾病、移植排斥或纤维化的药品。

17.一种预防或治疗癌症、自体免疫病症、发炎性疾病、移植排斥或纤维化的方法；其包含向患者施用有效量的如权利要求1至11中任一项所述的化合物(3S,4S)-1-环丙基甲基-4-{[5-(2,4-二氟-苯基)-异噁唑-3-羰基]-氨基}-哌啶-3-羧酸(1-嘧啶-2-基-环丙基)-酰胺的结晶型。

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