CN111675769A - 一种海参提取液及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海参提取液及其制备工艺，包括以下步骤：I、对海参预处理：II、破碎处理，离心分离，得到上清液与固体沉淀物；III、生物酶解；IV、脱色处理：V、去除蛋白；VI、纯化处理：VII、将VI所得溶液用高分子膜过滤机过滤浓缩，所得过滤浓缩液即为海参多糖提取液。本发明中原料海参经过粉碎、离心、酶解等步骤，将生物酶解处理用于提取海参多糖，最大限度地利用了原料海参和酶的价值，降低了原料消耗，且整个提取过程中反应环境温和，可保证海参多糖的活性和纯度，提高海参多糖的提取率。此外，在整个提取过程中废水、废液排放量低，有利于降低能耗，符合绿色可持续经济发展的要求。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取液及其制备工艺，尤其涉及一种海参提取液及其制备工艺。
背景技术
海参中含有多种活性成分，如多糖，蛋白，皂苷等。海参体壁是海参主要食(药)用部位，其主要构成为上皮组织和真皮结缔组织。海参真皮结缔组织的细胞间充填着胶原等纤维成分和蛋白聚糖，以及其他糖蛋白等无定形间质，即细胞外基质。因此，蛋白质是海参最主要成分。海参体内含有18种氨基酸，有8种是人体自身不能合成的必需氨基酸。海参多糖主要存在于海参体壁中，少量存在于内脏及性腺中，是海参的重要组成部分，具有治疗动脉血栓、降血脂、防治动脉粥样硬化疾病、调节机体免疫力、保护肠黏膜、抗胃溃疡作用。新鲜海参易发生自溶现象，不宜运输和贮藏，因此促使了海参加工产业的发展。目前，市场上流通最多的是干海参制品。因此，以干海参为原料高效提取其中蛋白、多糖，已经成为海参深度开发利用的重要方向。
近年来，随着我国人民生活水平日益提高，人们对海参的需求也不断增加，海参加工与深加工产品也在市面上出现。现有的海参多糖的传统提取工艺可分为五类，即酸法、碱法、酶法、盐法以及热水浸提法等，其基本原理都是根据海产品的特性，改变蛋白质的外界环境，从而把多糖分离出来。酸法和碱法是将多糖在酸性和碱性环境下提取出来，盐法是将原料在一定浓度的盐溶液中提取出来，主要使用的盐有氯化钠、氯化钾和乙酸钠。以上三种方法虽然工艺简单，但是由于提取过程中会使用大量的淡水和酸碱盐，属于高能耗产业，排放的酸碱盐对周围环境产生一定的生态影响，不符合绿色可持续性经济发展模式。此外，热水浸提法也需要使用大量的淡水和能源，不符合国家及世界经济发展的主流。现有的酶法提取工艺主要利用酶反应的温和高效性在一定环境条件下将多糖从不同的原料中提取出来然而酶法提取工艺虽然克服了上述其他提取工艺的缺陷，能够减少淡水资源的消耗，然而提取率却不高。
发明内容
为了解决上述技术所存在的不足之处，本发明提供了一种海参提取液及其制备工艺。
为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：一种海参提取液的制备工艺，包括以下步骤：
I、对海参预处理：去除海参的内脏并清洗干净，将清洗干净的海参浸泡后进行多次清洗直至清洗液无咸味为止；
II、用组织破碎机对海参进行破碎处理，用低速滚筒离心机对破碎处理后的海参进行离心分离，得到上清液与固体沉淀物；
III、将步骤II中分离得到的固体沉淀物放入生物酶解罐中，并加入固体沉淀物重量2倍的50～60℃温水，调整pH值至6.0，加入复合酶充分混匀，保温酶解1-3h，用低速滚筒离心机离心分离，得到酶解液和残渣；
IV、脱色处理：向酶解液中加入质量分数为2％的粉末活性炭，充分搅拌后，调节pH至5.0，于60℃下水浴60min，抽滤得上清液；
V、向上清液中加入木瓜蛋白酶，保持pH6-7，消化2-3h后沸水浴加热10min终止酶反应；将温度降至55℃，向海参多糖提取液中加入Sevag试剂，混合均匀后，震荡30min后离心，得到上层提取液；
VI、纯化处理：将步骤V中得到的上层提取液经DEAE-琼脂糖柱层析进行分级纯化，以0.5mol/L的NaCl为洗脱剂，按5ml体积分步收集；
VII、将VI所得溶液用高分子膜过滤机过滤浓缩，所得过滤浓缩液即为海参多糖提取液。
进一步地，步骤II中的离心分离在9000-13000转/分钟的转速下连续离心分离35-45min。
进一步地，步骤III中复合酶的添加量为原料海参重量的0.5-2％。
进一步地，步骤III中复合酶由链霉蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶复配而成，所述链霉蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的质量比为：2:3:1。
一种由海参提取液制备工艺制备的海参提取液。
本发明中原料海参经过粉碎、离心、酶解等步骤，将生物酶解处理用于提取海参多糖，最大限度地利用了原料海参和酶的价值，降低了原料消耗，且整个提取过程中反应环境温和，可保证海参多糖的活性和纯度，提高海参多糖的提取率。此外，在整个提取过程中废水、废液排放量低，有利于降低能耗，符合绿色可持续经济发展的要求。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
一种海参提取液的制备工艺，包括以下步骤：
I、对海参预处理：去除海参的内脏并清洗干净，将清洗干净的海参浸泡后进行多次清洗直至清洗液无咸味为止；
II、用组织破碎机对海参进行破碎处理，用低速滚筒离心机对破碎处理后的海参进行离心分离，得到上清液与固体沉淀物；离心分离在9000-13000转/分钟的转速下连续离心分离35-45min。
III、将步骤II中分离得到的固体沉淀物放入生物酶解罐中，并加入固体沉淀物重量2倍的50～60℃温水，调整pH值至6.0，加入复合酶充分混匀，保温酶解1-3h，用低速滚筒离心机离心分离，得到酶解液和残渣；
IV、脱色处理：向酶解液中加入质量分数为2％的粉末活性炭，充分搅拌后，调节pH至5.0，于60℃下水浴60min，抽滤得上清液；
V、向上清液中加入木瓜蛋白酶，保持pH6-7，消化2-3h后沸水浴加热10min终止酶反应；将温度降至55℃，向海参多糖提取液中加入Sevag试剂，混合均匀后，震荡30min后离心，得到上层提取液；复合酶的添加量为原料海参重量的0.5-2％。复合酶由链霉蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶复配而成，所述链霉蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的质量比为：2:3:1。
VI、纯化处理：将步骤V中得到的上层提取液经DEAE-琼脂糖柱层析进行分级纯化，以0.5mol/L的NaCl为洗脱剂，按5ml体积分步收集；
VII、将VI所得溶液用高分子膜过滤机过滤浓缩，所得过滤浓缩液即为海参多糖提取液。
一种由上述制备工艺制备的海参提取液。
下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明。
实施例一：
I、对海参预处理：去除海参的内脏并清洗干净，将清洗干净的海参浸泡后进行多次清洗直至清洗液无咸味为止；
II、用组织破碎机对海参进行破碎处理，用低速滚筒离心机对破碎处理后的海参进行离心分离，得到上清液与固体沉淀物；离心分离在9000转/分钟的转速下连续离心分离35min。
III、将步骤II中分离得到的固体沉淀物放入生物酶解罐中，并加入固体沉淀物重量2倍的50℃温水，调整pH值至6.0，加入复合酶充分混匀，保温酶解1h，用低速滚筒离心机离心分离，得到酶解液和残渣；
IV、脱色处理：向酶解液中加入质量分数为2％的粉末活性炭，充分搅拌后，调节pH至5.0，于60℃下水浴60min，抽滤得上清液；
V、向上清液中加入木瓜蛋白酶，保持pH6，消化2h后沸水浴加热10min终止酶反应；将温度降至55℃，向海参多糖提取液中加入Sevag试剂，混合均匀后，震荡30min后离心，得到上层提取液；复合酶的添加量为原料海参重量的0.5％。复合酶由链霉蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶复配而成，所述链霉蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的质量比为：2:3:1。
VI、纯化处理：将步骤V中得到的上层提取液经DEAE-琼脂糖柱层析进行分级纯化，以0.5mol/L的NaCl为洗脱剂，按5ml体积分步收集；
VII、将VI所得溶液用高分子膜过滤机过滤浓缩，所得过滤浓缩液即为海参多糖提取液。
一种由上述制备工艺制备的海参提取液。
所得海参多糖提取液中蛋白质含量为72％，多糖含量为18％，盐含量为4％，水分含量为4％。
实施例二：
I、对海参预处理：去除海参的内脏并清洗干净，将清洗干净的海参浸泡后进行多次清洗直至清洗液无咸味为止；
II、用组织破碎机对海参进行破碎处理，用低速滚筒离心机对破碎处理后的海参进行离心分离，得到上清液与固体沉淀物；离心分离在13000转/分钟的转速下连续离心分离45min。
III、将步骤II中分离得到的固体沉淀物放入生物酶解罐中，并加入固体沉淀物重量2倍的60℃温水，调整pH值至6.0，加入复合酶充分混匀，保温酶解3h，用低速滚筒离心机离心分离，得到酶解液和残渣；
IV、脱色处理：向酶解液中加入质量分数为2％的粉末活性炭，充分搅拌后，调节pH至5.0，于60℃下水浴60min，抽滤得上清液；
V、向上清液中加入木瓜蛋白酶，保持pH7，消化3h后沸水浴加热10min终止酶反应；将温度降至55℃，向海参多糖提取液中加入Sevag试剂，混合均匀后，震荡30min后离心，得到上层提取液；复合酶的添加量为原料海参重量的2％。复合酶由链霉蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶复配而成，所述链霉蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的质量比为：2:3:1。
VI、纯化处理：将步骤V中得到的上层提取液经DEAE-琼脂糖柱层析进行分级纯化，以0.5mol/L的NaCl为洗脱剂，按5ml体积分步收集；
VII、将VI所得溶液用高分子膜过滤机过滤浓缩，所得过滤浓缩液即为海参多糖提取液。
一种由海参提取液制备工艺制备的海参提取液。
所得海参多糖提取液中蛋白质含量为72％，多糖含量为18％，盐含量为4％，水分含量为4％。
实施例三：
I、对海参预处理：去除海参的内脏并清洗干净，将清洗干净的海参浸泡后进行多次清洗直至清洗液无咸味为止；
II、用组织破碎机对海参进行破碎处理，用低速滚筒离心机对破碎处理后的海参进行离心分离，得到上清液与固体沉淀物；离心分离在11000转/分钟的转速下连续离心分离40min。
III、将步骤II中分离得到的固体沉淀物放入生物酶解罐中，并加入固体沉淀物重量2倍的55℃温水，调整pH值至6.0，加入复合酶充分混匀，保温酶解1-3h，用低速滚筒离心机离心分离，得到酶解液和残渣；
IV、脱色处理：向酶解液中加入质量分数为2％的粉末活性炭，充分搅拌后，调节pH至5.0，于60℃下水浴60min，抽滤得上清液；
V、向上清液中加入木瓜蛋白酶，保持pH6.5，消化2.5h后沸水浴加热10min终止酶反应；将温度降至55℃，向海参多糖提取液中加入Sevag试剂，混合均匀后，震荡30min后离心，得到上层提取液；复合酶的添加量为原料海参重量的1.5％。复合酶由链霉蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶复配而成，所述链霉蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的质量比为：2:3:1。
VI、纯化处理：将步骤V中得到的上层提取液经DEAE-琼脂糖柱层析进行分级纯化，以0.5mol/L的NaCl为洗脱剂，按5ml体积分步收集；
VII、将VI所得溶液用高分子膜过滤机过滤浓缩，所得过滤浓缩液即为海参多糖提取液。
一种由海参提取液制备工艺制备的海参提取液。
所得海参多糖提取液中蛋白质含量为73％，多糖含量为18％，盐含量为4％，水分含量为4％。
上述实施方式并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的技术人员在本发明的技术方案范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也均属于本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种海参提取液的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：
I、对海参预处理：去除海参的内脏并清洗干净，将清洗干净的海参浸泡后进行多次清洗直至清洗液无咸味为止；
II、用组织破碎机对海参进行破碎处理，用低速滚筒离心机对破碎处理后的海参进行离心分离，得到上清液与固体沉淀物；
III、将步骤II中分离得到的固体沉淀物放入生物酶解罐中，并加入固体沉淀物重量2倍的50～60℃温水，调整pH值至6.0，加入复合酶充分混匀，保温酶解1-3h，用低速滚筒离心机离心分离，得到酶解液和残渣；
IV、脱色处理：向酶解液中加入质量分数为2％的粉末活性炭，充分搅拌后，调节pH至5.0，于60℃下水浴60min，抽滤得上清液；
V、向上清液中加入木瓜蛋白酶，保持pH6-7，消化2-3h后沸水浴加热10min终止酶反应；将温度降至55℃，向海参多糖提取液中加入Sevag试剂，混合均匀后，震荡30min后离心，得到上层提取液；
VI、纯化处理：将步骤V中得到的上层提取液经DEAE-琼脂糖柱层析进行分级纯化，以0.5mol/L的NaCl为洗脱剂，按5ml体积分步收集；
VII、将VI所得溶液用高分子膜过滤机过滤浓缩，所得过滤浓缩液即为海参多糖提取液。
2.根据权利要求1所述的海参提取液的制备工艺，其特征在于：所述步骤II中的离心分离在9000-13000转/分钟的转速下连续离心分离35-45min。
3.根据权利要求2所述的海参提取液的制备工艺，其特征在于：所述步骤III中复合酶的添加量为原料海参重量的0.5-2％。
4.根据权利要求3所述的海参提取液的制备工艺，其特征在于：所述步骤III中复合酶由链霉蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶复配而成，所述链霉蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的质量比为：2:3:1。
5.一种由权利要求1-4任一项所述的工艺制备的海参提取液。
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