CN111670897A - 一种牛精子冻存液及其制备方法 - Google Patents
一种牛精子冻存液及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111670897A CN111670897A CN202010471177.5A CN202010471177A CN111670897A CN 111670897 A CN111670897 A CN 111670897A CN 202010471177 A CN202010471177 A CN 202010471177A CN 111670897 A CN111670897 A CN 111670897A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- minus
- plus
- injection
- liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0215—Disinfecting agents, e.g. antimicrobials for preserving living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提出了一种牛精子冻存液,包括A液和B液,以所述A液的质量计,所述A液包括以下组分:35.0±0.5gTris,17.0±0.5g柠檬酸,12.5±0.5g果糖,30±0.5g改性卵磷脂,1000000IU庆大霉素,以注射用水溶解;以所述B液的质量计,所述B液包括以下组分:35.0±0.5gTris,17.0±0.5g柠檬酸,12.5±0.5g果糖,30±0.5g改性卵磷脂,12%甘油,1000000IU庆大霉素,以注射用水溶解。本发明通过使用改性卵磷脂代替卵黄,使产品稳定性增强,通过添加芝麻酚、番茄红素、黄岑素、β‑乳球蛋白,提高精子解冻后质量以及抗氧化能力。
Description
技术领域
本发明涉及一种牛精子冻存液及其制备方法。
背景技术
精液冷冻保存技术是一种先进的动物繁殖技术,其基本原理是通过降低或抑制精子新陈代谢强度达到延长精子在体外存活时间的目的冷冻精液解决了精液长期保存问题,使输精不受时间、地域与种畜生命的限制,极大地优良公畜的利用率,提高了经济效益。
目前市面上已有的精子冻存液大部分添加了卵黄,但是卵黄来源于鸡蛋,鸡蛋的批次不同成分含量也不尽相同,使产品质量不稳定,并且蛋黄里面的生物活性蛋白物质可能引发潜在过敏反应,在后期清洗中难以去除。
在逐级低温冻存和复苏的过程中,精子细胞会发生氧化反应,导致精子凋亡。而目前的产品几乎没有针对氧化应激的措施。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷,本发明提出了一种牛精子冻存液及其制备方法,解决现有产品中添加卵黄物质带来的稳定性问题,以及冻存过程中精子的氧化应激反应。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种牛精子冻存液,包括A液和B液,以所述A液的质量计,所述A液包括以下组分:
35.0±0.5g Tris,17.0±0.5g柠檬酸,12.5±0.5g果糖,30±0.5g改性卵磷脂,1000000IU庆大霉素,以注射用水溶解;
以所述B液的质量计,所述B液包括以下组分:
35.0±0.5g Tris,17.0±0.5g柠檬酸,12.5±0.5g果糖,30±0.5g改性卵磷脂,12%甘油,1000000IU庆大霉素,以注射用水溶解。
进一步地,所述牛精子冻存液A液中还包括以下组分:0.2±0.05g芝麻酚,1.0±0.1g番茄红素,0.04±0.01g黄岑素,20±0.5gβ-乳球蛋白。
进一步地,所述A液制备方法包括以下步骤:
S1、按配方称取Tris、柠檬酸、果糖,溶于500mL注射用水中;
S2、将改性卵磷脂溶于300mL注射用水中后与S1中所得溶液混合;
S3、将S2中所得溶液定容至1L,调节pH后经过0.22μm滤膜过滤;
S5、将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2-8℃避光保存;
所述B液制备方法包括以下步骤:
S1、按配方称取Tris、柠檬酸、果糖,溶于500mL注射用水中;
S2、将改性卵磷脂溶于300mL注射用水中后与S1中所得溶液混合;
S3、向所述S2所得混合液中加入甘油,庆大霉素;
S4、将S3中所得溶液定容至1L,调节pH后经过0.22μm滤膜过滤;
S5、将S4中配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2-8℃避光保存。
进一步地,所述A液与B液制备方法中所用注射用水均为55℃。
进一步地,所述A液制备方法中,S2中所得混合液中还加入有芝麻酚、番茄红素、黄岑素、β-乳球蛋白和庆大霉素。
进一步地,所述A液与B液pH均为6.7~6.9。
进一步地,所述A液以及B液通过NaOH和HCl调节pH。
与现有技术相比,本发明的有益效果包括:
1)通过使用改性卵磷脂代替卵黄,使产品稳定性增强。
2)通过添加芝麻酚、番茄红素、黄岑素、β-乳球蛋白,提高精子解冻后质量以及抗氧化能力。
具体实施方式
容易理解,根据本发明的技术方案,在不变更本发明实质精神下,本领域的一般技术人员可以提出可相互替换的多种结构方式以及实现方式。因此,以下具体实施方式仅是对本发明的技术方案的示例性说明,而不应当视为本发明的全部或者视为对本发明技术方案的限定或限制。
实施例1
A液的制备:
称取35g Tris,17g柠檬酸和12.5g果糖,将上述组分溶于500mL注射用水中;称取30g改性卵磷脂,溶于300mL 55℃注射用水中后与上述混合液混合;向上述混合液中加入0.2g芝麻酚,1g番茄红素,0.04g黄岑素,20gβ-乳球蛋白以及1000000IU庆大霉素;将上述溶液定容至1L,采用HCl或NaOH将溶液pH调整至6.8后经过0.22μm滤膜过滤,将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2~8℃避光保存。
B液的制备:
称取35g Tris,17g柠檬酸和12.5g果糖,将上述组分溶于500mL注射用水中;称取30g改性卵磷脂,溶于300mL 55℃注射用水中后与上述混合液混合;向上述混合液中加入120mL甘油和1000000IU庆大霉素;将上述溶液定容至1L,采用HCl或NaOH将溶液pH调整至6.8后经过0.22μm滤膜过滤,将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2~8℃避光保存。
实施例2
A液的制备:
称取34.5g Tris,16.5g柠檬酸和12g果糖,将上述组分溶于500mL注射用水中;称取29.5g改性卵磷脂,溶于300mL 55℃注射用水中后与上述混合液混合;向上述混合液中加入0.15g芝麻酚,0.9g番茄红素,0.03g黄岑素,19.5gβ-乳球蛋白以及1000000IU庆大霉素;将上述溶液定容至1L,采用HCl或NaOH将溶液pH调整至6.8后经过0.22μm滤膜过滤,将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2~8℃避光保存。
B液的制备:
称取34.5g Tris,16.5g柠檬酸和12g果糖,将上述组分溶于500mL注射用水中;称取32.5g改性卵磷脂,溶于300mL 55℃注射用水中后与上述混合液混合;向上述混合液中加入120mL甘油和1000000IU庆大霉素;将上述溶液定容至1L,采用HCl或NaOH将溶液pH调整至6.8后经过0.22μm滤膜过滤,将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2~8℃避光保存。
实施例3
称取35.5g Tris,17.5g柠檬酸和13g果糖,将上述组分溶于500mL注射用水中;称取30.5g改性卵磷脂,溶于300mL 55℃注射用水中后与上述混合液混合;向上述混合液中加入0.25g芝麻酚,1.1g番茄红素,0.05g黄岑素,20.5gβ-乳球蛋白以及1000000IU庆大霉素;将上述溶液定容至1L,采用HCl或NaOH将溶液pH调整至6.8后经过0.22μm滤膜过滤,将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2~8℃避光保存。
B液的制备:
称取35.5g Tris,17.5g柠檬酸和13g果糖,将上述组分溶于500mL注射用水中;称取33.5g改性卵磷脂,溶于300mL 55℃注射用水中后与上述混合液混合;向上述混合液中加入120mL甘油和1000000IU庆大霉素;将上述溶液定容至1L,采用HCl或NaOH将溶液pH调整至6.8后经过0.22μm滤膜过滤,将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2~8℃避光保存。
其中牛精液冻存包括以下步骤:
a.将A液与待稀释的牛精液按照体积比1:15混合;
b.向上述精子液体中加入与精子液体等体积的B液,静置5分钟;
c.将上述混合液置于冻存管内,依次在4℃,-20℃,-80℃环境下放置5分钟;
d.最后将冻存管冻存于液氮中。
当需将牛精液进行复苏时,将冻存管从液氮中取出后迅速在37度振荡复温20s即可。
取10份精子洗涤后计算前向运动的精子比例,然后上述冻存步骤分别使用实施例一、二、三以及市售牛冻存液作为对照进行冻存。在液氮中10分钟后取出进行复苏,复苏之后再次计算前向运动的精子比例。结果如下:
其中冻存复苏率=冻前活率/冻后活率*100%。
对比实验组一二三与对照组,本发明液可显著提升解冻后精子活力水平,从而增加人工授精的受孕率。
本发明的技术范围不仅仅局限于上述说明中的内容,本领域技术人员可以在不脱离本发明技术思想的前提下,对上述实施例进行多种变形和修改,而这些变形和修改均应当属于本发明的保护范围内。
Claims (6)
1.一种牛精子冻存液,其特征在于,包括A液和B液,
以所述A液的质量计,所述A液包括以下组分:
35.0±0.5g Tris,17.0±0.5g柠檬酸,12.5±0.5g果糖,30±0.5g改性卵磷脂,1000000IU庆大霉素,以注射用水溶解;
以所述B液的质量计,所述B液包括以下组分:
35.0±0.5g Tris,17.0±0.5g柠檬酸,12.5±0.5g果糖,30±0.5g改性卵磷脂,12%甘油,1000000IU庆大霉素,以注射用水溶解。
2.根据权利要求1所述的牛精子冻存液,其特征在于,所述牛精子冻存液A液中还包括以下组分:0.2±0.05g芝麻酚,1.0±0.1g番茄红素,0.04±0.01g黄岑素,20±0.5gβ-乳球蛋白。
3.一种如权利要求2所述的牛精子冻存液的制备方法,其特征在于,
所述A液制备方法包括以下步骤:
S1、按配方称取Tris、柠檬酸、果糖,溶于500mL注射用水中;
S2、将改性卵磷脂溶于300mL注射用水中后与S1中所得溶液混合;
S3、将S2中所得溶液定容至1L,调节pH后经过0.22μm滤膜过滤;
S5、将配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2-8℃避光保存;
所述B液制备方法包括以下步骤:
S1、按配方称取Tris、柠檬酸、果糖,溶于500mL注射用水中;
S2、将改性卵磷脂溶于300mL注射用水中后与S1中所得溶液混合;
S3、向所述S2所得混合液中加入甘油,庆大霉素;
S4、将S3中所得溶液定容至1L,调节pH后经过0.22μm滤膜过滤;
S5、将S4中配置好的溶液按每瓶100mL无菌分装,2-8℃避光保存。
4.根据权利要求3所述的牛精子冻存液的制备方法,其特征在于,所述A液与B液制备方法中所用注射用水均为55℃。
5.根据权利要求4所述的牛精子冻存液的制备方法,其特征在于,所述A液制备方法中,S2中所得混合液中还加入有芝麻酚、番茄红素、黄岑素、β-乳球蛋白和庆大霉素。
6.根据权利要求2所述的牛精子冻存液,其特征在于,所述A液与B液pH均为6.7~6.9。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010471177.5A CN111670897A (zh) | 2020-05-28 | 2020-05-28 | 一种牛精子冻存液及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010471177.5A CN111670897A (zh) | 2020-05-28 | 2020-05-28 | 一种牛精子冻存液及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111670897A true CN111670897A (zh) | 2020-09-18 |
Family
ID=72453710
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010471177.5A Pending CN111670897A (zh) | 2020-05-28 | 2020-05-28 | 一种牛精子冻存液及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111670897A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113197891A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-08-03 | 南昌乐悠生物科技有限公司 | 黄芩素在调节精子受精能力中的用途 |
CN114521549A (zh) * | 2022-02-28 | 2022-05-24 | 四川中科博瑞生物科技有限公司 | 一种免疫细胞冻存液和应用及细胞冻存方法和复苏方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101610669A (zh) * | 2007-01-09 | 2009-12-23 | Imv技术股份有限公司 | 包含乳蛋白的猪精子稀释培养基 |
CN102948414A (zh) * | 2012-11-20 | 2013-03-06 | 新疆天山畜牧生物工程股份有限公司 | 一种牛冻精生产工艺 |
CN104604843A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-05-13 | 上海市农业科学院 | 一种精液冷冻保存液及其制备方法 |
CN106538510A (zh) * | 2016-09-22 | 2017-03-29 | 西北农林科技大学 | 番茄红素和芝麻酚配伍在家畜精液冷冻保存剂中的应用 |
CN110037011A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-07-23 | 上海市农业科学院 | 一种大豆卵磷脂冷冻稀释液的制备方法及其应用 |
-
2020
- 2020-05-28 CN CN202010471177.5A patent/CN111670897A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101610669A (zh) * | 2007-01-09 | 2009-12-23 | Imv技术股份有限公司 | 包含乳蛋白的猪精子稀释培养基 |
CN102948414A (zh) * | 2012-11-20 | 2013-03-06 | 新疆天山畜牧生物工程股份有限公司 | 一种牛冻精生产工艺 |
CN104604843A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-05-13 | 上海市农业科学院 | 一种精液冷冻保存液及其制备方法 |
CN106538510A (zh) * | 2016-09-22 | 2017-03-29 | 西北农林科技大学 | 番茄红素和芝麻酚配伍在家畜精液冷冻保存剂中的应用 |
CN110037011A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-07-23 | 上海市农业科学院 | 一种大豆卵磷脂冷冻稀释液的制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
AIRES V.A.等: "In vitro and in vivo comparison of egg yolk-based", 《THERIOGENOLOGY 》 * |
AKHTER S.等: "Soya-lecithin in Extender Improves the Freezability and Fertility of Buffalo (Bubalus bubalis) Bull Spermatozoa", 《REPROD DOM ANIM》 * |
EL-SISY G.A.等: "Substitution of egg yolk with different concentrations of soybean lecithin in tris-based extender during bulls" semen preservability", 《ASIAN PACIFIC JOURNAL OF REPRODUCTION》 * |
FEREIDOON S.: "《贝类油脂化学与工艺学(第六版)》", 30 September 2016, 中国轻工业出版社 * |
MOUSAVIA S.M.等: "Comparison of two different antioxidants in a nano lecithin-based extender for bull sperm cryopreservation", 《ANIMAL REPRODUCTION SCIENCE》 * |
王彦平等: "无卵黄牛冷冻精液稀释液研究进展", 《中国奶牛》 * |
胡传话等: "卵磷脂取代卵黄冷冻牛精液效果观察", 《江苏农业科学》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113197891A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-08-03 | 南昌乐悠生物科技有限公司 | 黄芩素在调节精子受精能力中的用途 |
CN114521549A (zh) * | 2022-02-28 | 2022-05-24 | 四川中科博瑞生物科技有限公司 | 一种免疫细胞冻存液和应用及细胞冻存方法和复苏方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111670897A (zh) | 一种牛精子冻存液及其制备方法 | |
EP0312114A2 (en) | Cryoprotectant solution and method | |
CN107950636B (zh) | 一种对虾保活剂及其用于对虾无水保活运输的方法 | |
CN107372460A (zh) | 一种抗氧化应激的猪精液常温保存稀释剂、保存液及应用 | |
CN107912419A (zh) | 一种人外周血单个核细胞的冻存液及冻存方法 | |
US20200060259A1 (en) | Small ruminant semen freezing diluent | |
CN102986828A (zh) | 一种延长液态蛋保质期的方法 | |
KR101457526B1 (ko) | 돼지 정액의 보존성 개선을 위한 희석액 조성물 | |
CN109122668A (zh) | 一种鲥鱼精液的保存方法 | |
CN113519506A (zh) | 一种无蛋白、无dmso细胞冻存液、应用及其制备方法 | |
CN110973120A (zh) | 番鸭精液常温保存稀释液的配制方法 | |
AU2011327417B2 (en) | Diluent for frozen human sperm, dilution method for frozen human sperm, and adjustment method for human semen for in vitro fertilization or semen for artificial insemination | |
KR20150101498A (ko) | 아스타잔틴 또는 커큐민을 포함하는 돼지 정자 동결보존용 조성물 | |
CN112514891B (zh) | 一种大熊猫乳汁冻存液及大熊猫乳汁的保存方法 | |
KR101546487B1 (ko) | 저밀도 지질단백질과 항산화제를 포함하는 정자 동결보존용 조성물 및 이의 용도 | |
CN106342786B (zh) | 猪精液体外低温保存用稀释剂及其制备方法 | |
CN104396941B (zh) | 一种鸡精液稀释液及其制备方法 | |
KR101746025B1 (ko) | 아스타잔틴 또는 커큐민을 포함하는 돼지 정자 동결보존용 조성물 | |
Foote | Influence of pH on survival and fertility of bull sperm | |
JPH03188001A (ja) | 臓器保存用溶液 | |
CN115024309A (zh) | 新型人精子冷冻保护剂制备方法 | |
CN111449058B (zh) | 一种提高公鸡精液保存质量的方法 | |
CN113940340B (zh) | 一种鸡精子稀释液及其制备方法与应用 | |
CN109006801B (zh) | 一种用于桡足类卵粒超低温储存的冷冻保护剂及冷冻方法 | |
CN114009427B (zh) | 一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法、兔精液冷冻保存方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200918 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |