CN110973120A - 番鸭精液常温保存稀释液的配制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种番鸭精液常温保存稀释液的配制方法，包括葡糖糖0.5g，D‑果糖0.5‑0.85g，六水合氯化镁0.064‑0.072g，醋酸钠0.820‑0.852g，谷氨酸钠1.91‑1.94g，柠檬酸0.062‑0.068g，三羟甲基氨基甲烷0.164‑0.195g，青霉素0.1g,链霉素0.1g,双蒸水100mL，pH为7.2‑7.6，双层滤纸过滤后，沸水浴灭菌即可，冷却后，4℃密闭保存备用。本发明所述稀释液对番鸭精液有良好的液态保护效果，能解决番鸭精液的短期保存问题，提高优秀种公番鸭利用率，操作简单，经济效益好，适合代替生理盐水用于精液保存稀释与人工授精。

Description

番鸭精液常温保存稀释液的配制方法
技术领域
本发明涉及番鸭精液处理技术领域，具体涉及一种番鸭精液常温保存稀释液配方。
背景技术
番鸭，又名香鹑雁，麝香鸭，红嘴雁，与家鸭同属不同种。番鸭原产于中、南美洲热带地区。
番鸭体型与家鸭不同，体重比鸭大比鹅小，体型前尖后窄，呈长椭圆形，头大，颈短，嘴甲短而狭，嘴、爪发达；胸部宽阔丰满，尾部瘦长，不似家鸭有肥大的臀部。嘴的基部和眼圈周围有红色或黑色的肉瘤，雄者展延较宽。
现代化的番鸭育种繁育基地普遍采用人工授精技术结合笼养的饲养管理方式，来应对目前番鸭养殖行业发展的问题与挑战，以提高种蛋的受精率、合格率与孵化率，降低生产成本，提高经济效益，促进番鸭养殖产业发展。精液稀释与常温、低温及冷冻条件下的活力保持是人工授精的基础。精液的稀释和保存在提高种用公番鸭的精液利用率上具有重要意义，也是异地人工授精过程中的一个重要技术环节。
人工授精技术通常是指采用非性交的方式将精子递送到雌性动物生殖道中以达到使雌性动物受孕目的的一种辅助生殖技术。人工授精技术应用于养殖业可以加快动物的遗传选择，减少自然交配中的传染性疾病传播，有效的提高雄性动物的种用价值和利用率。
番鸭精液量少，精子密度高，在人工输精过程中，随着暴露时间的延长，精子容易发生凝集，不利于精液的保存。加入精液稀释液，可以增加公番鸭精液体积，降低精子密度，在保证精子密度的同时可以增加输精母番鸭数量，高效利用优秀种公番鸭。稀释液中含有精子体外存活所需的额外能量，可延长精子受精能力的持续时间，实现精液的短期甚至长期保存和运输。在精液冷冻保存过程中还可以维持精液酸碱度和渗透压，稀释精液中有害成分和代谢产物，增强精子抵抗冷冻损伤的能力。
目前番鸭养殖场人工授精仍大规模使用生理盐水作为稀释液，采集精液常温保存超过30分钟，精子活率就会受到影响，过量精液常温保存时间短，活率差，而造成优秀公鸭精液浪费，影响受精率。
稀释液用于扩大精液容量，要求与精液有相同或相近的pH及渗透压，如生理盐水、糖类及某些盐溶液(磷酸盐溶液)。常用稀释液主要由四部分组成：营养物质—提供外源的能量，减缓内源性物质的消耗，延长精子存活时间，如糖类(一般指单糖)、奶类及卵黄；缓冲物质—作用是中和精液pH，缓冲环境变化对精子造成的不良影响，如：柠檬酸钾，三羟甲基氨基甲烷(对代谢中毒和酶活动反应的缓冲作用效果较好)，碳酸氢钠(可在溶液中产生CO2抑制精子代谢活动)；防低温打击物质—防止精子受“低温打击”，出现冷休克如卵磷脂等；其他添加剂—可改善精子外在环境的理化特性，保持精子正常形态(Mg2+)，创造精子生存所需的抑菌环境，调节母禽生殖道的生理机能，提高受精率，常用的有酶类、激素类、维生素等
发明内容
本发明的目的在于针对番鸭养殖人工授精过程中的缺点和不足，配置一种番鸭精液常温保存稀释液以延长番鸭精液常温保存时间，降低精液保存畸形率，提高人工授精受精率和种蛋合格率。
为实现目的，本发明的番鸭精液稀释液采用了细胞培养液成分，添加D-果糖，葡萄糖作为外源性能源物质；三羟甲基氨基甲烷(Tris)作为缓冲物质，缓冲代谢、pH变化；谷氨酸钠用以降低精液保存畸形形态发生；以及青霉素、链霉素用于抑制细菌滋生等，用蒸馏水溶解而成。
一种番鸭精液常温保存稀释液的配制方法，包括葡糖糖0.5g，D-果糖0.5-0.85g，六水合氯化镁0.064-0.072g，醋酸钠0.820-0.852g，谷氨酸钠1.91-1.94g，柠檬酸0.062-0.068g，三羟甲基氨基甲烷0.164-0.195g，青霉素0.1g,链霉素0.1g,双蒸水100mL，pH为7.2-7.6，双层滤纸过滤后，沸水浴灭菌即可，冷却后，4℃密闭保存备用。
所述常温保存稀释液与精液混合后，于17-20℃下进行保存。
所述稀释液与精液混合后，精子密度稀释至8×108-1.2×109cell/mL，保存时间至少为32h。
本发明的番鸭精液稀释液，以番鸭人工授精精液液态短期保存为立足点，以三羟甲基氨基甲烷-谷氨酸钠-单糖-柠檬酸-乙酸钠-六水合氯化镁为基础成分，研制出精液短期高效保存的稀释液配方(常温条件下至少为32h)，本发明所述稀释液对番鸭精液有良好的液态保护效果，能解决番鸭精液的短期保存问题，提高优秀种公番鸭利用率，操作简单，经济效益好，适合代替生理盐水用于精液保存稀释与人工授精。
具体实施方式
葡糖糖0.5g，D-果糖0.5-0.85g，六水合氯化镁0.064-0.072g，醋酸钠0.820-0.852g，谷氨酸钠1.91-1.94g，柠檬酸0.062-0.068g，三羟甲基氨基甲烷0.164-0.195g，青霉素0.1g,链霉素0.1g,双蒸水100mL。
优选稀释液配方如下：
葡糖糖0.5g，D-果糖0.5g，六水合氯化镁0.064g，醋酸钠0.82g，谷氨酸钠1.94g，柠檬酸0.066g，Tirs 0.164g，加入40mL双蒸水溶解，再加60mL双蒸水混匀，每毫升稀释液中加青霉素1mg，链霉素1mg。
本发明的稀释液可按本领域的常规方法配制，分别依次加入上述成分，加蒸馏水溶解，然后100mL定容即可，pH：7.4-7.6，为番鸭精液精子提供适宜生存条件。
本发明的番鸭精液常温保存稀释液中D-果糖，葡萄糖作为外源性能源物质，三羟甲基氨基甲烷(Tris)作为缓冲物质，缓冲代谢、pH变化，谷氨酸钠用以降低精液保存畸形形态发生，以及青霉素、链霉素用于抑制细菌滋生等。
本发明番鸭精液稀释液与精液以体积比精液-稀释液1:1-1:2比例稀释后，进行常温17-20℃下保存。
所述稀释液与精液混合后，精子密度稀释至8×108-1.2×109cell/mL，保存时间至少为32h。
三羟甲基氨基甲烷有效缓冲范围在pH 7.0-9.2之间，能使精液pH在一定程度上倾向于碱性，有利于精子活率，缓和稀释液中离子对精子有害作用，而且在高浓度时毒性很低，同一营养物质保存效果Tris>柠檬酸钾>EDTA。果糖和葡萄糖则为精子提供外源性能源，减缓精子内源性物质的消耗，延长精子保存时间，同一缓冲物质，精子保存效果：果糖>葡糖糖>蔗糖。谷氨酸钠则有利于维持精子正常形态，降低精子畸形，青霉素与链霉素是细胞培养常用的抑菌剂。
逐一称取：葡糖糖0.5g，D-果糖0.5g，六水合氯化镁0.064g，醋酸钠0.82g，谷氨酸钠1.94g，柠檬酸0.066g，三羟甲基氨基甲烷0.164g，青霉素0.1g，链霉素0.1g，待前一种溶解后再加下一种，40mL双蒸水溶解，再加60mL双蒸水混匀定容，操作均在无菌条件下进行，双层定性滤纸过滤后，沸水浴灭菌，冷却后并4℃密闭保存备用。稀释精液时最好保证稀释液与精液温度相同或接近，避免温度突然改变对精子结构造成伤害。
以本稀释液对番鸭精液稀释授精，稀释比例适宜在精液-稀释液体积比为1.5：1-1:1，常温保存稀释比例适宜在1:1和1:2。
实施例1
准确称取：葡糖糖0.5g，D-果糖0.5g，六水合氯化镁0.064g，醋酸钠0.82g，谷氨酸钠1.94g，柠檬酸0.066g，三羟甲基氨基甲烷0.164g，青霉素0.1g，链霉素0.1g，溶解于100mL双蒸水。
精液-稀释液体积比1:1，保存时间40h，精子畸形率：0.22±0.02，质膜完整率：0.64±0.03。
实施例2
准确称取：葡糖糖0.5g，D-果糖0.5g，六水合氯化镁0.064g，醋酸钠0.82g，谷氨酸钠1.94g，柠檬酸0.066g，三羟甲基氨基甲烷0.164g，青霉素0.1g，链霉素0.1g，溶解于100mL双蒸水。
精液-稀释液体积比1:1，输精1080羽母番鸭，受精率对比生理盐水提高2％-5％。

Claims (3)

1.一种番鸭精液常温保存稀释液的配制方法，其特征在于，包括葡糖糖0.5g，D-果糖0.5-0.85g，六水合氯化镁0.064-0.072g，醋酸钠0.820-0.852g，谷氨酸钠1.91-1.94g，柠檬酸0.062-0.068g，三羟甲基氨基甲烷0.164-0.195g，青霉素0.1g,链霉素0.1g,双蒸水100mL，pH为7.2-7.6，双层滤纸过滤后，沸水浴灭菌即可，冷却后，4℃密闭保存备用。
2.根据权利要求1所述一种番鸭精液常温保存稀释液的配制方法，其特征在于，所述常温保存稀释液与精液混合后，于17-20℃下进行保存。
3.根据权利要求2所述一种番鸭精液常温保存稀释液的配制方法，其特征在于，所述稀释液与精液混合后，精子密度稀释至8×108-1.2×109cell/mL，保存时间至少为32h。
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