CN111643483A

CN111643483A - 一种用于制备加兰他敏缓释微球的新方法

Info

Publication number: CN111643483A
Application number: CN202010639084.9A
Authority: CN
Inventors: 刘善奎; 杨冰; 王海龙; 柳宇红
Original assignee: University of Jinan
Current assignee: University of Jinan
Priority date: 2020-07-06
Filing date: 2020-07-06
Publication date: 2020-09-11
Anticipated expiration: 2040-07-06
Also published as: CN111643483B

Abstract

本发明公开了一种制备加兰他敏缓释微球的新方法，准确的说是采用一种新的溶剂碳酸丙烯酯来制备加兰他敏微球。以双羟萘酸加兰他敏为原料，使用乳化‑溶剂挥发法制备出的加兰他敏缓释微球，有着包封率高，产品收率高，残留溶剂少等优点。

Description

一种用于制备加兰他敏缓释微球的新方法

技术领域

本发明属于药物缓释制剂的技术领域，涉及一种制备加兰他敏缓释微球的新方法。

背景技术

加兰他敏又称为尼瓦林、强肌宁，来源于石蒜科植物紫花石蒜、夏雪片莲的叶等，也能用化学方法合成，是一种菲啶类生物碱。加兰他敏是第二代可逆性胆碱酯酶抑制剂，能提高乙酰胆碱的水平，易透过血脑屏障，使受阻的神经肌肉传导恢复，从而改善各种末梢神经肌肉障碍的麻痹状态。临床上用于治疗阿尔兹海默症。由于阿尔兹海默症需要长期治疗，患者记忆力衰退，现有的口服剂型，经常出现漏服或多服的现象，造成血药波动大，恶心、呕吐、腹泻等不良反应明显，治疗顺应性差，达不到理想的治疗效果。

微球是由药物与高分子材料制成基质骨架的球形或类球形实体，药物溶解或分散在实体中。载药微球是用天然或合成的药用高分子材料为载体，包载药物而成的球形实体，微球的直径一般为1-250μm。在生物医药学领域中，将药物微球化后，能控制药物的释放，提高药物的稳定性和生物利用度，降低毒副作用等。微球内药物被释放后，载体可生物降解被机体吸收；既减少了药物的毒副作用，又避免采用手术取出载体给患者带来痛苦。

专利CN101703482B公开了一种乳化-溶剂挥发法制备加兰他敏长效缓释注射微球组合物，药物释放周期可达一个月。该方法使用碱基加兰他敏制备微求，碱基加兰他敏水溶性较高，导致微球包封率偏低，达不到80％的药典指导要求。

专利CN111233877A和专利申请号为201811437836.2公开了一种加兰他敏药学上可接受的盐，双羟萘酸加兰他敏/帕莫酸加兰他敏；相对于氢溴酸盐，该盐显著降低了在水中的溶解性、有良好的吸湿性、较低的吸附性、无苦涩味。

专利申请号为201911144830.0公开一种注射用双羟萘酸加兰他敏缓释微球及其制备方法，采用苯甲醇-二氯甲烷混合溶剂体系制备加兰他敏微球。该方法的优点是制备的微球具有独特的核壳结构，实现了药物的恒定释放，但存在的缺点是使用了大量的苯甲醇溶剂。苯甲醇是一类含有苯环的有机溶剂，沸点较高。微溶于水易溶于有机溶剂，对眼、上呼吸道、皮肤有刺激作用。摄入引起头痛、恶心、呕吐、胃肠道刺激、惊厥、昏迷。

制备微球过程中，苯甲醇溶于二氯甲烷中难除去。苯甲醇为中毒溶剂，在大鼠口服时LD50为1230毫克/公斤，在小鼠口服时LD50为1360毫克/公斤。在制备加兰他敏缓释微球的过程中，急需一种更好的溶剂来替代苯甲醇。

本发明人经过大量研究，找到了一种用于制备加兰他敏微球的新溶剂碳酸丙烯酯。碳酸丙烯酯为低毒溶剂，在大鼠口服时LD50为34900毫克/公斤；小鼠口服时LD50为20700毫克/公斤。其毒性远远小于苯甲醇。目前未见有关于碳酸丙烯酯用来制备加兰他敏微球的报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明在于提供一种制备加兰他敏长效缓释微球的制备方法，所述方法采用了一种新型溶剂碳酸丙烯酯制备加兰他敏缓释微球。

本发明技术方案如下：

一种新型溶剂用于制备加兰他敏缓释微球，选用的药物为双羟萘酸加兰他敏，选用的有机溶剂为碳酸丙烯酯(PC)，分子式为C₄H₆O₃，MW：102.08864，CAS:108-32-7。

本发明以双羟萘酸加兰他敏为原料，用碳酸丙烯酯为溶剂制备缓释微球。碳酸丙烯酯易溶于水，在制备加兰他敏微球时易被水相带走，可大大减少微球中的残留。相对于以其他溶剂制备的加兰他敏微球，使用碳酸丙烯酯时包封率高，微球的形状规则，分散性好，粒径分布均匀。

上述加兰他敏缓释微球，其中活性成分的释放时间维持2-4周。

上述加兰他敏缓释微球，聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的摩尔比为40：60至80：20。优选的摩尔比为75：25和50：50

上述加兰他敏缓释微球，所述聚乳酸-羟基乙酸的分子量为5000-30000道尔顿。所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的端基为-COOH基团。

上述加兰他敏缓释微球，采用乳化-溶剂挥发法制备而得。

一种上述加兰他敏缓释微球的制备方法，包括以下步骤：

1、将双羟萘酸加兰他敏和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加至碳酸丙烯酯与二氯甲烷的混合溶剂体系中，涡旋溶解。

2、用高速剪切机将油相和水相混合剪切，得到微球。所得微球在室温条件下继续固化2-3小时。

3、将固化好的微球用筛网筛选20-160μm的微球。

4、萃取结束用水洗涤微球；冻干后经筛网过滤，得到加兰他敏缓释微球。

上述制备方法，使用了碳酸丙烯酯和二氯甲烷溶解药物。相比采用其他有机溶剂，使用碳酸丙烯酯的优点是：碳酸丙烯酯的毒性要远远小于苯甲醇、碳酸丙烯酯经FDA批准为药用辅料、水中溶解性大易除去。

本发明首次采用碳酸丙烯酯溶解双羟萘酸加兰他敏，使用乳化-溶剂挥发法制备加兰他敏缓释微球，大大提高包封率，产品收率高，残留溶剂少。

与现有技术相比，本发明的核心创造点如下：

1、采用了新的溶剂体系碳酸丙烯酯，能快速有效的制得双羟萘酸加兰他敏缓释微球，碳酸丙烯酯易除去，显著降低了微球中有机溶剂的残留。

2、相比于苯甲醇制备加兰他敏缓释微球，该法不需萃取微球中有机溶剂，缩短了制备时间，操作简单，对环境污染小，具有工艺放大的优势；

3、本发明采用双羟萘酸加兰他敏制备的缓释微球，外观规则、圆整、无粘连，包封率可达90％以上。

附图说明

图1为实施例1制备的加兰他敏缓释微球的扫描电镜照片。

图2为实施例1制备的加兰他敏缓释微球的激光粒度测定图。

图3为实施例1制备的加兰他敏缓释微球的体外释放曲线。

图4为实施例4制备的加兰他敏缓释微球的体外释放曲线。

具体实施方式

制备例1：已知得双羟萘酸加兰他敏缓释微球的制备

已知的双羟萘酸加兰他敏缓释微球根据专利申请号201911144830.0实施例1描述的方法制备。具体为：称取1.25g双羟萘酸加兰他敏和1.25g PLGA(75/25)，加至苯甲醇与二氯甲烷的混合体系(8ml，45/55，v/v)溶解，配制成溶液1。称取PVA6.4g溶于注射用水中，配成0.8％的PVA水溶液。将溶液1缓慢加入至0.8％PVA溶液，2000rpm均质乳化1min；结束后搅拌3h挥发溶剂；用0.25％泊洛沙姆乙醇水溶液洗涤，继续搅拌1h，将所得混悬液用筛网过滤收集微球，并用注射用水洗涤微球，于冻干机中冻干；冻干后经筛网过滤。

实施例1：加兰他敏缓释微球的制备

精密称取双羟萘酸加兰他敏1.25g，聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)1.00g(LA:GA＝75:25)，溶于碳酸丙烯酯和二氯甲烷的混合溶剂(8ml，20/80，v/v)中，涡旋使其完全溶解，超声作为分散相。将分散相滴入200ml 0.8％PVA17-88水溶液的连续相中，边滴加边高速剪切，直至完全加入。减压低速搅拌3h，固化微球并除去有机溶剂，离心收集微球，水洗、真空干燥即得加兰他敏缓释微球。

对采用实施例1制成的加兰他敏缓释球和采用专利申请号201911144830.0实施例1制成的注射用加兰他敏缓释微球进行气相色谱法检测溶剂残留。使用安捷伦气相色谱仪，用顶空气及直接进样气相色谱法对制备微球中所使用的有机溶剂残留量进行分析测定。结果见表1：

表1

	制备例1	实施例1
			二氯甲烷	500ppm	200ppm
苯甲醇	2％	---
			碳酸丙烯酯	---	0.3％

由表1结果可知：通过对二氯甲烷、苯甲醇和碳酸丙烯酯的溶剂残留结果比较，可以看出本发明的加兰他敏缓释微球较已知的加兰他敏微球中二氯甲烷残留量少，碳酸丙烯酯的残留量要远远小于苯甲醇的残留量。

实施例2：加兰他敏缓释微球的制备

精密称取双羟萘酸加兰他敏1.0g，PLGA 1.0g(LA:GA＝75:25)，于碳酸丙烯酯和二氯甲烷的混合溶剂(8ml，33/67，v/v)中，涡旋使其完全溶解，超声作为分散相。将分散相滴入200ml 0.8％PVA17-88水溶液的连续相中，边滴加边高速剪切，直至完全加入。减压低速搅拌3h，固化微球并除去有机溶剂，离心收集微球，水洗、真空干燥即得加兰他敏缓释微球。

实施例3：加兰他敏缓释微球的制备

精密称取双羟萘酸加兰他敏0.667g，PLGA 1.0g(LA:GA＝75:25)，于碳酸丙烯酯和二氯甲烷的混合溶剂(8ml,50/50，v/v)中，涡旋使其完全溶解，超声作为分散相。将分散相滴入200ml 0.8％PVA17-88水溶液的连续相中，边滴加边高速剪切，直至完全加入。减压低速搅拌2h，固化微球并除去有机溶剂，离心收集微球，水洗、真空干燥即得加兰他敏缓释微球。

实施例4：加兰他敏缓释微球的制备

精密称取双羟萘酸加兰他敏1.25g，PLGA 1.0g(LA:GA＝50:50)，于碳酸丙烯酯和二氯甲烷的混合溶剂(8ml，20/80，v/v)中，涡旋使其完全溶解，超声作为分散相。将分散相滴入200ml 0.8％PVA17-88水溶液的连续相中，边滴加边高速剪切，直至完全加入。减压低速搅拌3h，固化微球并除去有机溶剂，离心收集微球，水洗、真空干燥即得加兰他敏缓释微球。

实施例5：加兰他敏缓释微球的制备

精密称取双羟萘酸加兰他敏1.0g，PLGA 1.0g(LA:GA＝50:50)，于碳酸丙烯酯和二氯甲烷的混合溶剂(8ml，33/67，v/v)中，涡旋使其完全溶解，超声作为分散相。将分散相滴入200ml 0.8％PVA17-88水溶液的连续相中，边滴加边高速剪切，直至完全加入。减压低速搅拌3h，固化微球并除去有机溶剂，离心收集微球，水洗、真空干燥即得加兰他敏缓释微球。

实施例6：加兰他敏缓释微球的制备

精密称取双羟萘酸加兰他敏0.667g，PLGA 1.0g(LA:GA＝50:50)，于碳酸丙烯酯和二氯甲烷的混合溶剂(8ml，50/50，v/v)中，涡旋使其完全溶解，超声作为分散相。将分散相滴入200ml 0.8％PVA17-88水溶液的连续相中，边滴加边高速剪切，直至完全加入。减压低速搅拌2h，固化微球并除去有机溶剂，离心收集微球，水洗、真空干燥即得加兰他敏缓释微球。

本实施例1-6的工艺制备的产品结果见表2：

表2

编号	PLGA规格	载药量	包封率	微球收率
					实施例1	75：25	60％	93.5％	88％
实施例2	75：25	50％	89.1％	76％
					实施例3	75：25	40％	90.3％	81％
实施例4	50：50	60％	91.0％	87％
					实施例5	50：50	50％	87.6％	85％
实施例6	50：50	40％	89.1％	79％

从表2的对比结果可以看出，不同规格的PLGA材料，对加兰他敏的包封率没有太大影响。在配制有机相的时候，碳酸丙烯酯的量对载药量和包封率无太大影响，不过从可行性角度和少用有机溶剂的角度出发，碳酸丙烯酯用量只要能将药物溶解即可。

实验例1：加兰他敏缓释微球的体外释药实验

精密称取实施例1加兰他敏缓释微球(约含加兰他敏20mg)，置于50ml离心管中，加入0.01mol/L生理等渗缓释盐溶液(pH 7.4，含有0.05％叠氮化钠，0.2％吐温80)30ml以分散微球，在37℃的恒温水浴摇床中，100rpm。每次取样时，经离心管离心后取5ml上清液再补同样体积的新释放介质，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液20μl经HPLC法测定溶出介质中的药物含量。

实验例2：加兰他敏缓释微球的体外释药实验

精密称取实施例4加兰他敏缓释微球(约含加兰他敏20mg)，置于50ml离心管中，加入0.01mol/L生理等渗缓释盐溶液(pH 7.4，含有0.05％叠氮化钠，0.2％吐温80)30ml以分散微球，在37℃的恒温水浴摇床中，100rpm。每次取样时，离心管离心后取5ml上清液再补同样体积的新释放介质，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液20μl经HPLC法测定溶出介质中的药物含量。本发明未尽事宜为公知技术。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种加兰他敏缓释微球的制备工艺，其特征在于：采用一种新型溶剂碳酸丙烯酯，用乳化-溶剂挥发法来制备加兰他敏微球。

2.如权利要求1所述的加兰他敏缓释微球的制备方法，包含以下步骤：将双羟萘酸加兰他敏和聚乳酸-羟基乙酸溶解于碳酸丙烯酯和二氯甲烷的混合溶剂，乳化制备微球混悬液，固化、洗涤冻干得到加兰他敏缓释微球。

3.如权利要求2所述的加兰他敏缓释微球的制备方法，其特征在于：所用的聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的摩尔比为40 ：60至80 ：20；优选的摩尔比为75 ：25和50：50。

4.如权利要求2所述加兰他敏缓释微球的制备方法，其特征在于：所述聚乳酸-羟基乙酸的分子量为5000-30000道尔顿。

5.如权利要求2所述加兰他敏缓释微球的制备方法，其特征在于：所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的端基为-COOH基团。

6.如权利要求2所述加兰他敏缓释微球，其特征在于：其中活性成分加兰他敏的释放时间维持2-4周。