CN111607012B - 一种滇牡丹多糖提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药领域，涉及一种中药提取物及其制备方法和应用，具体涉及一种滇牡丹多糖提取物及其制备方法和应用。本提取方法采用乙醇冷浸的方法提取丹皮中的多糖物质，然后采用酶解和超声辅助的方法对冷浸提取的滤渣进行再次水提，最后通过乙醇沉淀的方法使得多糖沉淀析出，达到了初步纯化的效果。通过本法可以获得生物活性高、纯度高的滇牡丹多糖提取物，并且该提取物的得率也较高，本法能够将滇牡丹根皮中的多糖物质充分提取利用。本方案可以应用于保健食品的研究开发和生产中。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，涉及一种中药提取物及其制备方法和应用，具体涉及一种滇牡丹多糖提取物及其制备方法和应用。
背景技术
滇牡丹(Paeonia delavayi)的根皮是滇牡丹的主要药用部位，又称牡丹皮或丹皮，其中含有大量的丹皮酚和芍药苷等功效物质。除上述功效物质外，滇牡丹根皮中还含有大量的多糖物质(植物多糖)，也具有一定的药用和保健价值。植物多糖，又称植物多聚糖，是植物细胞代谢产生的聚合度超过10个的聚糖。
现有技术中对植物多糖(粗多糖)的提取和纯化主要是采用溶剂提取和沉淀多糖的方法。可利用水或醇溶液等作为溶剂对植物中的多糖物质进行提取，再通过乙醇、金属盐或季铵盐等对植物多糖进行初步富集和纯化。但是植物多糖的热稳定性、酸碱稳定性等均欠佳，提取和纯化的过程容易导致植物多糖的生物活性的丧失。特别是在沉淀多糖的过程中，现有技术往往是加入高浓度的乙醇，会导致多糖物质由于高级结构被破坏而失活。例如：多糖主链间以氢键为主要次级键而形成的有规则的构象、多糖主链之间的空间排布形式等。因此，需要研发一种既能够充分提取滇牡丹多糖，又能够保持滇牡丹多糖的生物活性的方法。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种滇牡丹多糖提取物的制备方法，利用本制备方法具有多糖提取率高，且能够获得生物活性较高的滇牡丹多糖提取物。
为达到上述目的，本发明提出了以下技术方案：
一种滇牡丹多糖提取物的制备方法，包括以下步骤，
步骤(1)：通过预处理获得丹皮原料；
步骤(2)：对步骤(1)中的丹皮原料进行乙醇溶液冷浸提取；完成冷浸提取后，过滤得滤渣和滤液；浓缩所述滤液，得浸膏，再将浸膏分散于水中，得浸膏分散液；
步骤(3)：使用蛋白酶对步骤(2)中的浸膏分散液进行酶解处理，获得酶解液；浓缩所述酶解液，获得浓缩液，在浓缩液中加入无水乙醇，然后过滤取固相，得多糖沉淀。
采用上述技术方案，技术原理为：首先采用乙醇冷浸处理丹皮原料的方式，对丹皮原料细胞中的物质进行提取，乙醇溶液穿透丹皮原料组织，将细胞内的物质溶出。然后通过蛋白酶除去大分子蛋白杂质和乙醇沉淀的方法，进一步纯化多糖，最后获得多糖沉淀。
发明人研究发现，滇牡丹根皮中的可溶性多糖物质储存的部位包括细胞壁和细胞质，其中，细胞壁中的多糖物质含量较高。传统的滇牡丹多糖的提取和纯化的方法为：先进行超声辅助提取(或者酶辅助提取)，再通过乙醇沉淀多糖来实现多糖的初步富集和纯化。发明人通过实验发现，直接提取的多糖需要使用较高浓度的乙醇来实现对多糖物质的沉淀，会导致多糖的生物活性的损失。位于滇牡丹根皮细胞内的多糖物质(细胞内多糖)和位于滇牡丹根皮细胞壁上的多糖物质(细胞壁多糖)在乙醇中的溶解度存在差异，细胞内多糖和细胞壁多糖在此处均是指可溶性多糖。细胞内多糖和细胞壁多糖混合在一起时，需要较高浓度的乙醇才能将多糖类物质充分沉淀。但是细胞内多糖的在乙醇浓度较低的情况下就可以实现沉淀，从而将细胞内多糖初步分离纯化出来。再经过乙醇冷浸处理之后，滤渣中的脂类、蛋白质以及其他成分得到了充分的溶出，滤渣中还残留了大量的细胞壁多糖，通过酶解和超声处理，使得细胞壁结构瓦解，细胞壁多糖溶出，过滤取液相，可获得含有细胞壁多糖的提取液。将两部分混合，可获得完整的具有较高生物活性的滇牡丹可溶性多糖。
本技术方案的有益效果具体如下：
(1)本方案利用了细胞壁多糖和细胞内多糖的不同性质，分别对两部分的可溶性的多糖物质进行提取和纯化，针对细胞内可溶性多糖进行了专门的提取设计，一方面保证了对可溶性的多糖物质充分提取，另一方面也最大限度的保留了多糖物质的高级结构，从而保留了其生物活性。
(2)使用蛋白酶对浸膏分散液进行酶解处理，将大分子蛋白质分解为小分子，使得在一定的乙醇浓度下，蛋白质不会和可溶性多糖物质发生共沉淀，可以辅助多糖除蛋白的过程，获得纯度更高的滇牡丹多糖提取物。
(3)冷浸处理过程中，已经将丹皮原料中的脂类、蛋白质类等杂质充分溶出，滤渣中的主要成分为各种多糖(包括可溶性多糖和难于溶解于水的多糖)，后续提取细胞壁多糖的过程更为容易和简单，由于提取步骤的简化，进一步保证了滇牡丹多糖提取物的生物活性。
进一步，还包括步骤(4)：在步骤(2)中获得的滤渣中加入水，并使用纤维素酶对滤渣进行酶解处理，获得滤渣酶解液；超声处理所述滤渣酶解液，然后离心取液相，获得多糖提取液。
采用上述技术方案，在冷浸提取中获得的滤渣中也含有大量的多糖类物质，这部分的多糖类物质不能通过冷浸处理来充分溶出，需要使用纤维素酶水解和超声处理，促使植物细胞壁破坏，从而使得多糖类物质充分释放，再通过过滤获得多糖提取液。本方案结合了酶解反应和超声处理两个破坏植物细胞壁的方法，使得滤渣中的植物细胞壁充分破坏，使得细胞壁多糖充分溶出，提高了本方案滇牡丹多糖提取物的得率以及多糖物质的纯度。冷浸处理过程中，已经将丹皮原料中的脂类、蛋白质类等杂质充分溶出，滤渣中的主要成分为各种多糖(包括可溶性多糖和难于溶解于水的多糖)，所以在酶解和超声处理之后，通过过滤操作即可获得纯度较高的细胞壁多糖，简化了后续的乙醇沉淀步骤，进一步保证了滇牡丹多糖提取物的生物活性。
进一步，还包括步骤(5)：将步骤(3)中的多糖沉淀加入步骤(4)中的多糖提取液中，经脱色和浓缩处理后，获得滇牡丹多糖提取物。
采用上述技术方案，将多糖提取液和多糖沉淀混合，经过脱色和浓缩处理之后，可以获得本方案的滇牡丹多糖提取物。本方案利用了细胞壁多糖和细胞内多糖的不同性质，分别对两部分的可溶性的多糖物质进行提取和纯化，一方面保证了对可溶性的多糖物质充分提取，另一方面也最大限度的保留了多糖物质的高级结构，从而保留了其生物活性。
进一步，在步骤(1)中，预处理的方法为取新鲜的滇牡丹根皮，粉碎后过20目筛，获得丹皮原料。
采用上述技术方案，新鲜的滇牡丹根皮中多糖的生物活性较高，通过粉碎之后，可以增加物料和提取液之间的接触面积，从而提高提取效率。
进一步，在步骤(2)中，使用10-20％的乙醇溶液对步骤(1)中的丹皮原料进行冷浸提取，乙醇溶液和丹皮原料的用量比为(20-30)ml:1g；所述浸膏的密度为0.8-1.3g/ml，浸膏和水的用量比为1g:(6-8)ml。
采用上述技术方案，采用冷浸处理所需设备简单，减少了工业化推广的难度；使用上述浓度和用量的乙醇溶液可以实现对植物组织的穿透，将细胞壁内的包括细胞内多糖等物质充分溶出。
进一步，在步骤(3)中，所述蛋白酶为中性蛋白酶，所述中性蛋白酶和所述浸膏分散液的用量比为(2-4)g:100ml；酶解处理的温度为30-40℃，时长为2-3h，pH值为6.8-7.2；所述浓缩液和所述酶解液的体积比为1:(5-8)；所述浓缩液和所述无水乙醇的体积比为1:(0.5-0.8)。
采用上述技术方案，使用中性蛋白酶对酶解液中的大分子蛋白质进行酶解，可以使得获得的细胞内多糖在醇浓度较低的情况下充分沉淀，可降低后续醇沉步骤中乙醇的浓度，从而保护多糖物质的生物活性不受影响。
浓缩酶解液可以减少后续无水乙醇的使用量，节约成本；浓缩液和无水乙醇的体积比在上述范围内(换算可得乙醇体积浓度为33.3％-44.4％)，既可以使细胞内多糖可以充分析出，也可以减少乙醇对多糖高级结构的破坏，并且在上述乙醇浓度范围内，经酶解获得的小分子蛋白不会发生沉淀，减少了蛋白质对滇牡丹多糖提取物中多糖的纯度的负面影响。现有技术中，多糖中除蛋白一般是采用Sevag法等较为复杂的沉淀蛋白的方法。
进一步，在步骤(4)中，滤渣和水的用量比为1g:(5-6)ml，搅拌后加入纤维素酶，纤维素酶和水的用量比为(4-5)g:100ml；酶解处理的温度为35-45℃，时长为1-1.5h，pH值为7.3-7.5。
采用上述技术方案，通过纤维素酶酶解将滤渣中的植物细胞壁充分瓦解，使得细胞壁多糖释放，实现对多糖物质的充分提取。
进一步，对所述滤渣酶解液进行超声处理的超声功率为250-300W，处理时间为40-60min。
采用上述技术方案，采用超声处理的方法进一步确保植物细胞壁的破坏，使得细胞壁多糖释放，实现对多糖物质的充分提取。
进一步，一种由本方案的制备方法获取的滇牡丹多糖提取物。
采用上述技术方案，由本法获得的滇牡丹多糖提取物，具有杂质含量少和生物活性高的特点。
进一步，滇牡丹多糖提取物在保健食品中的应用。
采用上述技术方案，滇牡丹的活性多糖具有抗氧化、激活免疫系统等功效，可以应用于保健食品的研究开发和生产中。
具体实施方式
实施例1：滇牡丹多糖提取物的制备
步骤(1)：取新鲜的滇牡丹根皮，粉碎后过20目筛，获得丹皮原料，取新鲜的丹皮，丹皮中的多糖成分生物活性更高。
步骤(2)：使用20％的乙醇溶液对步骤(1)中的丹皮原料进行冷浸提取，冷浸提取的次数为3次，每次冷浸24h，共72h。每次在每g丹皮原料中加入20ml乙醇溶液，冷浸24h后，过滤取液相低温(4℃)保存，在滤渣中继续按照上述比例加入乙醇溶液，再次冷浸处理24h，如此重复3次，合并三次的液相，得到滤液，并保留三次冷浸提取后的滤渣(4℃保存)。使用旋转蒸发仪对滤液进行减压浓缩(压强0.05MPa、温度35℃)，直至浸膏浓度为1.3g/ml。然后将浸膏分散在纯净水中，每g浸膏中加入7ml的纯净水，充分搅拌，使得多糖物质充分溶解，获得浸膏分散液。
步骤(3)：使用蛋白酶(上海源叶生物，CAS号：9068-59-1)对步骤(2)中的浸膏分散液进行酶解处理，获得酶解液。使用的蛋白酶为中性蛋白酶，中性蛋白酶的用量为每100ml浸膏分散液中使用3g中性蛋白酶。整个酶解处理过程的温度为35℃，酶解处理持续3h，并且酶解处理在pH值7.0下进行。完成酶解反应之后，获得酶解液，然后再使用旋转蒸发仪对酶解液进行减压浓缩(压强0.05MPa、温度40℃)，直到浓缩液的体积为酶解液的体积的1/6。在浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液和无水乙醇的体积比为1:0.6，待沉淀出现完全之后(沉淀完全的过程不超过5min)，迅速用布氏漏斗对含有沉淀的体系进行抽滤，保留沉淀部分，即为多糖沉淀。
步骤(4)：在步骤(2)中获得的滤渣中加入水，并充分搅拌，水的用量为每g滤渣使用5ml纯净水。并使用纤维素酶(湖北远成赛创，CAS号：9012-54-8)对滤渣进行酶解处理，每100ml纯净水中使用5g纤维素酶。在本步骤中酶解处理的参数为：温度40℃，时长1h，pH值7.4。
完成酶解处理之后获得滤渣酶解液，继续对滤渣酶解液进行超声处理，进一步破坏材料的细胞壁，使得细胞壁中结合的多糖成分充分的析出。超声处理的参数为功率250W(24kHz)，处理时长为60min，分三次进行，每次20min，整个超声处理过程均在35℃的条件下(水浴)进行。完成超声处理之后，3000rpm离心20min取液相获得多糖提取液。
步骤(5)：将步骤(3)中的多糖沉淀加入步骤(4)中的多糖提取液中，充分混合后进行脱色处理，如果多糖沉淀不能完全溶解，可以适量加入纯净水。在混合有多糖沉淀的多糖提取液中加入活性炭，活性炭在提取液中的质量百分数为4％，搅拌30min后静置20min，然后过滤取液相，完成脱色处理。将脱色处理后的液体经减压浓缩之后(使用旋转蒸发仪，压强0.05MPa、温度40℃)，再通过冷冻干燥获得滇牡丹多糖提取物，称重并记录滇牡丹多糖提取物的质量。
实施例2：滇牡丹多糖提取物的制备
本实施例基本同实施例1，不同点在于，在步骤(2)中，使用10％乙醇对丹皮原料进行冷浸提取，乙醇溶液的加入量为每g丹皮原料中加入30ml乙醇溶液。
在步骤(3)中，蛋白酶的用量为每100ml浸膏分散液使用4g中性蛋白酶；整个酶解处理过程的温度为40℃，酶解处理持续2h，并且酶解处理在pH值6.8下进行；浓缩液和酶解液的体积比为1:8；浓缩液和无水乙醇的体积比为1:0.8。
在步骤(4)中，使用纤维素酶对滤渣进行酶解处理时，每100ml纯净水中使用5g纤维素酶。在本步骤中酶解处理的参数为：温度35℃，时长1.5h，pH值7.3；超声处理的功率为300W(24kHz)，处理时长为40min，分两次进行，每次20min。
实施例3：滇牡丹多糖提取物的制备
本实施例基本同实施例1，不同点在于，在步骤(2)中，使用20％乙醇对丹皮原料进行冷浸提取，乙醇溶液的加入量为每g丹皮原料中加入25ml乙醇溶液。
在步骤(3)中，蛋白酶的用量为每100ml浸膏分散液使用2g中性蛋白酶；整个酶解处理过程的温度为30℃，酶解处理持续3h，并且酶解处理在pH值7.2下进行；浓缩液和酶解液的体积比为1:5；浓缩液和无水乙醇的体积比为1:0.5。
在步骤(4)中，使用纤维素酶对滤渣进行酶解处理时，每100ml纯净水中使用4g纤维素酶。在本步骤中酶解处理的参数为：温度45℃，时长1h，pH值7.5；超声处理的功率为250W(24kHz)，处理时长为60min，分两次进行，每次30min。
对比例1：
本对比例采用传统的多糖提取方法，具体如下：取新鲜的滇牡丹根皮，粉碎后过20目筛，获得丹皮原料。在丹皮原料中加入纯净水，每g滤渣使用5ml纯净水。并使用纤维素酶对丹皮原料进行酶解处理，每100ml纯净水中使用5g纤维素酶，酶解处理的参数为：温度40℃，时长1h，pH值7.4。完成酶解处理之后获得酶解液，继续对酶解液进行超声处理。超声处理的参数为功率250W(24kHz)，处理时长为60min，分三次进行，每次20min，整个超声处理过程均在35℃的条件下(水浴)进行。完成超声处理之后，3000rpm离心20min取液相，获得提取液。采用旋转蒸发仪，将提取液浓缩至原来体积的五分之一，然后再加入与提取液相同体积的无水乙醇，得沉淀体系，使用布氏漏斗过滤取沉淀，将沉淀溶解于水中，得多糖溶液，然后使用活性炭除去多糖溶液中的色素，再通过减压浓缩和冷冻干燥获得干粉(脱色和浓缩步骤的操作方法同实施例1)，即为本对比例的滇牡丹多糖提取物。
对比例2
本对比例基本同对比例1，不同点在于，提取液中加入无水乙醇的量，无水乙醇的体积为浓缩后的提取液的3倍。通过本对比例方法获得滇牡丹多糖提取物。
对比例3
本对比例基本同对比例1，不同点在于，提取液中加入无水乙醇的量，无水乙醇的体积为浓缩后的提取液的二分之一。通过本对比例方法获得滇牡丹多糖提取物。
对比例4
本对比例基本同实施例1，不同点在于，不将多糖沉淀和多糖提取液混合。用纯净水将多糖沉淀溶解，再通过实施例1的脱色和浓缩方法，对多糖沉淀进行脱色处理之后，浓缩干燥获得干粉，命名为细胞内多糖提取物(A)。再对多糖提取液进行实施例1的脱色和浓缩，获得的干粉命名为细胞壁多糖提取物(B)。
对比例5
本对比例基本同实施例1，不同点在于，在步骤(3)中，浓缩液和无水乙醇的体积比为1:2，乙醇的浓度较高。通过本对比例方法获得滇牡丹多糖提取物。
对比例6
本对比例基本同实施例1，不同点在于，在步骤(3)中，浓缩液和无水乙醇的体积比为1:0.2，乙醇的浓度较低。通过本对比例方法获得滇牡丹多糖提取物。
对比例7
本对比例基本同实施例1，不同点在于，在步骤(3)中不设置中性蛋白酶酶解的步骤，直接在浸膏分散液中加入无水乙醇，浸膏分散液和无水乙醇的体积比为1:0.6。通过本对比例方法获得滇牡丹多糖提取物。
实验例1：多糖含量以及提取量的检测
本实验例对实施例1-3和对比例1-7中提取得到的滇牡丹多糖提取物(或者细胞内多糖提取物或者细胞壁多糖提取物)进行了多糖含量检测，并计算了提取量。使用葡萄糖标准品制备不同浓度的标准品溶液，并采用苯酚硫酸比色法绘制葡萄糖标准品的标准曲线。分别测量待测样品经苯酚硫酸比色反应获得的溶液在490nm处的吸光光度，再根据吸光光度值和葡萄糖标准品的标准曲线计算待测样品中的多糖含量(即多糖纯度)。多糖纯度指的是多糖物质在滇牡丹多糖提取物中的质量分数(％)。并同时计算滇牡丹多糖提取物的提取量(mg/100g)，为每100g丹皮原料中获得的滇牡丹多糖提取物的质量(以mg表示)，结果如表1所示。
表1：多糖纯度以及提取量的检测结果
| 多糖纯度(％) | 提取量(mg/100g) | |
| 实施例1 | 86.54 | 120.37 |
| 实施例2 | 84.7 | 113.24 |
| 实施例3 | 85.69 | 119.11 |
| 对比例1 | 54.39 | 137.31 |
| 对比例2 | 45.23 | 163.69 |
| 对比例3 | 62.78 | 74.19 |
| 对比例4(A) | 84.36 | 53.94 |
| 对比例4(B) | 86.33 | 68.58 |
| 对比例5 | 68.22 | 147.12 |
| 对比例6 | 85.51 | 92.66 |
| 对比例7 | 71.73 | 132.42 |
由实验结果可知，实施例1-3中的滇牡丹多糖提取物的得率和纯度均较高。对比例1中使用传统的同时提取丹皮中所有部位(细胞壁上和细胞内)的多糖的方法，在醇沉淀过程中，由于乙醇的浓度不够高，所以没有能够将多糖物质充分沉淀，所以提取量较低。并且多糖沉淀中没有排除蛋白质等杂质的影响，所以多糖的纯度也较低。对比例2中，在醇沉淀过程中，由于乙醇的浓度较高，大量多糖物质沉淀，也同时沉淀了大量的杂质，导致提取量看似较高，但是多糖的纯度很低。对比例3使用的乙醇的浓度过低，导致多糖类物质无法充分沉淀，提取量低。在对比例4中，由于采用了本方案的提取方法，细胞内多糖提取物和细胞壁多糖提取物的纯度均较高，并且提取量也较高。对比例5中使用的乙醇浓度过高，导致小分子蛋白质类杂质发生沉淀，蛋白沉淀和多糖沉淀混在一起，导致多糖的纯度下降，提取量升高。对比例6中，沉淀细胞内多糖的乙醇浓度过低，导致大量细胞内多糖没有被沉淀，降低了多糖的总提取量，但是纯度没有受到较大影响。对比例7中，没有使用蛋白酶酶解，导致细胞内多糖沉淀中混有蛋白沉淀，虽然提取量较高，但是提取获得的多糖提取物中有较多的杂质，多糖的纯度降低。
实验例2：自由基清除实验
本实验例采用ABTS自由基清除法来测试提取获得的滇牡丹多糖提取物的生物活性，该法是最常见的评价药物的抗氧化活性的一种方法。含ABTS自由基的甲醇溶液呈深紫红色，并在734nm有最大吸收峰。向含ABTS自由基的甲醇溶液中加入待测药物(具有抗氧化活性的物质)，含ABTS自由基的甲醇溶液在734nm波长处的吸收值降低，可以用分光光度计测定待测药物的抗氧化活性，从而计算该待测药物的自由基清除率，计算公式为：清除率(％)＝[1-Ai/A0]×100％，其中，A0表示含ABTS自由基的甲醇溶液的吸光光度值，Ai表示含ABTS自由基的甲醇溶液中加入待测药物后的吸光光度值。ABTS自由基用K2S2O8与ABTS(2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)直接反应生成。本实验例中检测的待测药物为本实验例对实施例1-3和对比例1-7中提取得到的滇牡丹多糖提取物(或者细胞内多糖提取物或者细胞壁多糖提取物)。将一定量的待测药物加入100ml去离子水中溶解，获得待测药物溶液。一定量的待测药物通过实验例1中的多糖纯度换算得来，保持每个待测药物溶液中的多糖含量为定值，每100ml去离子水中含有多糖50mg。将待测药物溶液100μl加入1ml含ABTS自由基的甲醇溶液中，再对吸光光度进行检测。检测结果如表2所示，表中样品用量是指含有50mg多糖的滇牡丹多糖提取物(或者细胞内多糖提取物或者细胞壁多糖提取物)的质量。
表2：自由基清除实验结果
根据实验结果可知：实施例1-3中的多糖的生物活性较高，在保证提取效率(提取量)和多糖纯度的基础上，较好的维持了多糖的生物活性，具有一定的抗氧化能力。对比例2和对比例5中使用到了较高浓度的乙醇来沉淀多糖物质，破坏了多糖物质的生物活性，导致这两组实验中的自由基清除率非常低。对比例4中，对细胞内和细胞壁上的多糖均进行了乙醇沉淀的操作，也一定程度上影响了多糖的生物活性。对比例3和对比例6中，沉淀多糖的乙醇浓度较小，虽然较好的保留了多糖的活性，但是提取量非常低，不满足实际生产要求。对比例4(B)中，未使用乙醇沉淀多糖，多糖的活性得到了很好的保留。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
Claims (6)
1.一种滇牡丹多糖提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，
步骤（1）：通过预处理获得丹皮原料；
步骤（2）：使用10-20%的乙醇溶液对步骤（1）中的丹皮原料进行乙醇溶液冷浸提取；完成冷浸提取后，过滤得滤渣和滤液；浓缩所述滤液，得浸膏，再将浸膏分散于水中，得浸膏分散液；乙醇溶液和丹皮原料的用量比为（20-30）ml:1g；所述浸膏的密度为0.8-1.3g/ml，浸膏和水的用量比为1g:（6-8）ml；
步骤（3）：使用中性蛋白酶对步骤（2）中的浸膏分散液进行酶解处理，获得酶解液；浓缩所述酶解液，获得浓缩液，在浓缩液中加入无水乙醇，然后过滤取固相，得多糖沉淀；所述中性蛋白酶和所述浸膏分散液的用量比为（2-4）g:100ml；酶解处理的温度为30-40℃，时长为2-3h，pH值为6.8-7.2；所述浓缩液和所述酶解液的体积比为1:（5-8）；所述浓缩液和所述无水乙醇的体积比为1:（0.5-0.8）；
步骤（4）：在步骤（2）中获得的滤渣中加入水，并使用纤维素酶对滤渣进行酶解处理，获得滤渣酶解液；超声处理所述滤渣酶解液，然后离心取液相，获得多糖提取液；
步骤（5）：将步骤（3）中的多糖沉淀加入步骤（4）中的多糖提取液中，经脱色和浓缩处理后，获得滇牡丹多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的一种滇牡丹多糖提取物的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，预处理的方法为取新鲜的滇牡丹根皮，粉碎后过20目筛，获得丹皮原料。
3.根据权利要求1所述的一种滇牡丹多糖提取物的制备方法，其特征在于，在步骤（4）中，滤渣和水的用量比为1g:（5-6）ml，搅拌后加入纤维素酶，纤维素酶和水的用量比为（4-5）g:100ml；酶解处理的温度为35-45℃，时长为1-1.5h，pH值为7.3-7.5。
4.根据权利要求3所述的一种滇牡丹多糖提取物的制备方法，其特征在于，对所述滤渣酶解液进行超声处理的超声功率为250-300W，处理时间为40-60min。
5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法所制备的滇牡丹多糖提取物。
6.根据权利要求5所述的滇牡丹多糖提取物在保健食品中的应用。
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