CN111514320B - 一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌psa的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syingaepv.Actinidiae,PSA)的方法，属于猕猴桃花粉处理技术领域，所述方法包括以下步骤：1)在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m3的臭氧；2)将脱药后的猕猴桃花粉包装，以60Co‑γ射线辐照获得灭菌花粉，所述60Co‑γ射线辐照的剂量为300～900Gry。所述方法采用60Co‑γ射线辐照结合臭氧处理，目的为去除花粉携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带的所有细菌，可以更好地保护猕猴桃花粉活性。以本发明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、种子数和耐储性均未受影响。

Description

一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法
技术领域
本发明属于猕猴桃商品花粉处理技术领域，尤其涉及一种杀灭猕猴桃商品花粉中溃疡病致病菌PSA的方法。
背景技术
猕猴桃属雌雄异株植物，是一种营养价值丰富的水果，含有丰富的维生素C、钾、钙、以及胡萝卜素等丰富的维生素，具有清理肠胃、抗衰老、调节血液循环等功效。
猕猴桃溃疡病是一种低温、高湿性病害，是一种严重威胁猕猴桃生产的毁灭性细菌性病害，传播性和潜伏性极强，雄株难以避免感染猕猴桃溃疡病致病菌—丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syingae pv.Actinidiae,PSA)，而商品花粉如果未能彻底杀灭PSA，会存在跨区域、大面积传播PSA的隐患。
传统臭氧灭菌需平铺花粉，场地占用大，成本高；ClO2水溶液处理法仅适用于商品花粉授粉前小批量，处理结束后需要立即进行授粉，不能长期保存。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法；所述方法采用60Co辐照结合臭氧处理猕猴桃花粉；本发明所述方法采用的辐照和臭氧处理的剂量只针对花粉携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带的所有细菌，因此可以更好地保护花粉活性。以本发明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、种子数和耐储性均未受影响。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，包括以下步骤：
1)在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m3的臭氧；
2)将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以60Co-γ射线辐照获得灭菌花粉，所述60Co-γ射线辐照的剂量为300～900Gry。
优选的，步骤1)中充入臭氧的浓度为300～500mg/m3。
优选的，步骤1)中充入臭氧的浓度为400mg/m3。
优选的，步骤2)中所述60Co-γ射线辐照的剂量为350～450Gry。
优选的，步骤2)中所述60Co-γ射线辐照的剂量为380～420Gry。
优选的，步骤2)中所述60Co-γ射线辐照的剂量为400Gry。
优选的，所述60Co-γ射线辐照的温度为20～30℃。
本发明的有益效果：本发明提供的杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，采用60Co-γ射线辐照结合臭氧处理，在花粉脱药过程中吹入低浓度臭氧，解决传统臭氧灭菌只能平铺处理的缺陷；脱药后的花粉进行小剂量60Co-γ射线辐照处理；此方法可去除花粉携带溃疡病致病菌，并非杀灭花粉携带所有细菌，可以更好地保护猕猴桃花粉活性。以本发明所述方法灭菌的花粉授粉，获得猕猴桃果实商品果率、果实品质、种子数和耐储性均未受影响。
本发明所述方法利于大批量生产去除PSA商品花粉，成本低廉，可操作性高，农户购买到花粉后可直接使用。
具体实施方式
本发明提供了一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，包括以下步骤：1)在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m3的臭氧；2)将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以60Co-γ射线辐照获得灭菌花粉，所述60Co-γ射线辐照的剂量为300～900Gry。
本发明在猕猴桃花粉脱药过程充入200～800mg/m3的臭氧。在本发明中，所述花粉脱药过程优选的在脱药机中进行，本发明对所述脱药机没有特殊限定，采用本领域常规的花粉脱药机即可。在本发明中，所述充入臭氧的浓度优选为300～500mg/m3，更优选为400mg/m3。本发明对所述臭氧的来源没有特殊限定，采用臭氧发生器制备臭氧即可。在本发明中，所述充入臭氧的浓度优选的采用臭氧监测仪检测。本发明将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以60Co-γ射线辐照获得灭菌花粉。在本发明中，所述60Co-γ射线辐照的剂量优选为350～450Gry，更优选为380～420Gry，最优选为400Gry。本发明对所述包装没有特殊限定，采用本领域常规的商品包装即可。在本发明中，所述60Co-γ射线辐照委托商业辐照公司进行。在本发明中，所述60Co-γ射线辐照的温度优选为20～30℃，更优选为25℃。
在本发明中，所述灭菌花粉在授粉前，于20～25℃放置2～4h，然后与石松子粉混合后进行授粉。在本发明中，优选的将灭菌花粉放置3h；所述灭菌花粉和石松子粉混合的质量比优选为1:1～1:0.4。本发明对所述授粉的具体操作没有特殊限定，采用本领域常规的授粉操作即可。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
猕猴桃花粉生产脱药过程中通入臭氧(400mg/m3)进行臭氧灭菌，花粉装入商品包装后，采用60Co-γ射线辐照(400Gry)灭菌。
对灭菌花粉进行PCR扩增检测PSA：
灭菌花粉前处理：采用灭菌花粉提取基因组DNA，以提取的基因组DNA作为模板进行PCR扩增。扩增程序如下：
预变性94℃、5min；采用变性94℃、60s，退火48℃、60s，延伸72℃、60s的扩增程序，循环30次。
PCR引物
PsaF3：5’-ACCTTGGTGAAGTTGGTCAGAGC-3’(SEQ ID No.1)
PsaR4：5’-CGCACCCTTCAATCAGGATG-3’(SEQ ID No.2)
PCR扩增体系：
PCR扩增程序：
将PCR扩增后的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，未出现170bp特异扩增条带，检测结果为阴性。
对灭菌花粉进行花粉活力检测
花粉活力检测方法：离体萌发法，参考以下文献中记载的方法进行：Vanneste JL,Giovanardi D,Yu J,et al.Detection of Pseudomonas syringae pv.actinidiae inkiwifruit pollen samples[J].New Zealand Plant Protection,2011,64:246-251.
检测结果：灭菌花粉的平均花粉活力为62.3％；未进行灭菌的花粉的平均活性为68.5％。
实施例2
不同灭菌方法PSA检测结果、不同灭菌方法对花粉活力的影响
PSA检测和花粉活力检测方法同实施例1。
PSA检测结果如表1。
表1不同灭菌方法PSA的检测结果
Figure BDA0002421324710000041
花粉活力检测结果如表2所示。
表2不同灭菌方法花粉活力检测结果
Figure BDA0002421324710000042
实施例3
猕猴桃种植园内选择五年生健康、无病害、树势相近的‘贵长’猕猴桃果树20棵，每10棵数为一个实验组，实验组间间隔一亩地，采用实施例1中的60Co-γ射线辐照(400Gry)+臭氧(400mg/m3)灭菌生产的商品花粉于盛花期进行授粉。对照包括不进行灭菌处理的猕猴桃花粉(空白)、“400Gry+600mg/m3”灭菌处理的猕猴桃花粉和“400Gry+800mg/m3”灭菌处理的猕猴桃花粉。
授粉后一个月调查座果率可知，实验组与对照组相比座果率提高5％。
十月初猕猴桃成熟后每棵树随机采摘30个猕猴桃果实，调查果实品质可知，与对照组相比，实验组果重与对照组相比无统计学差异、果实纵径增加、横径减小、果形指数减小；实验组种子数量、种子总重量、单粒种子重量，可溶性固形物、干物质、酸度、维生素C含量均无统计学差异(P＜0.05)，果实营养品质无变化；实验组乙烯生成速率与对照组无差异，果皮硬度增加，耐贮性更好。具体的结果见表3。
表3不同灭菌方法获得的灭菌花粉授粉后的果实品质数据对比
Figure BDA0002421324710000051
Figure BDA0002421324710000061
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 贵阳学院
<120> 一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
accttggtga agttggtcag agc 23
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
cgcacccttc aatcaggatg 20

Claims (5)

1.一种杀灭猕猴桃花粉中溃疡病致病菌PSA的方法，步骤如下：
1)在猕猴桃花粉脱药过程充入300～500mg/m3的臭氧；
2)将脱药后的猕猴桃花粉包装后，以60Co-γ射线辐照获得灭菌花粉，所述60Co-γ射线辐照的剂量为350～450Gry。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中充入臭氧的浓度为400mg/m3。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述60Co-γ射线辐照的剂量为380～420Gry。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述60Co-γ射线辐照的剂量为400Gry。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述60Co-γ射线辐照的温度为20～30℃。
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