CN104382940B - 一种蚕用复配剂及用途 - Google Patents

一种蚕用复配剂及用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蚕用复配剂及用途，属于桑蚕养殖技术领域；该复配剂由黄腐酸盐和褐煤蜡树脂降解物按照一定的比例科学配制而成。通过大量试验验证，该复配剂能够有效防治桑蚕的几种常见病害，全龄使用可以极大地提高桑蚕的机体免疫力和抗逆性，大幅降低桑蚕的发病率；同时能够有效地助动桑蚕的消化系统，提高桑蚕对桑叶的食用度，促进了桑蚕的均衡生长发育，对提高蚕茧的产量和质量均效果显著；且无毒副作用、无抗药性、无药物残留；其制备工艺简单，相对成本较低，原料来源稳定，适合于规模化生产；为桑蚕病害综合防治及蚕茧高产优质提供一种有益探索和全新选择。

Description

一种蚕用复配剂及用途
技术领域
本发明涉及一种蚕用复配剂及用途，属于蚕桑养殖技术领域。
背景技术
黄腐酸是腐植酸中分子量最小、溶解度最高、生物活性最好的部分，极易被机体吸收利用。近年来，诸多报道肯定了黄腐酸及其盐在抗菌、消炎、抗病毒、抗溃疡、调节胃肠、调节免疫系统等方面的显著效果，展现其在医药等领域的广泛应用前景。褐煤蜡树脂是从褐煤蜡中通过选择性溶剂萃取出来的，同样属于褐煤资源的一种基本成分，在本世纪初本发明人之一李宝才教授就展望了褐煤蜡树脂可以作为药用资源，特别是树脂醇部分，包括甾醇类，甾酮类，二十八醇以及五环三萜氧化物等具有生理活性的物质就集中在这一馏分（李宝才等.褐煤树脂醇类化学组成与分布特征[J].昆明理工大学学报(理工版),2004,29(3),82-90.）。随着近年来的研究深入，已经逐渐明晰褐煤蜡树脂的部分药用“有效成分”，特别是其降解产物在抗炎、抗菌、抗病毒、增强免疫等方面的应用已经初见成效。
云南作为“植物王国”和“动物王国”，展现出了其生物多样性，而年青褐煤正是由古代动、植物的遗骸在微生物及复杂的地球物理和化学变化下形成的，因此云南地区的褐煤资源内部成分及相关功效上也展示了其多样性。事实上，本发明人通过长期探索做了大量实验，首次发现利用云南地区的年青褐煤和褐煤蜡树脂通过过氧化氢降解的方法分别制备得到的黄腐酸及其盐和褐煤蜡树脂降解物在防治桑蚕多种病害上起到了良好的功效，特别是其与褐煤蜡树脂降解物的复配剂效果更加显著。此外，该复配剂还能够有效助动桑蚕的消化系统，提高桑蚕对桑叶的食用度，促进桑蚕的健康生长发育；同时，也能够有效地提高桑蚕的机体免疫力，促进桑蚕群体的均衡发育；获得的蚕茧不仅在产量上还是品质上均优越于对照组；因此才形成了本发明内容，但在不限定具体前提条件下，并非所有黄腐酸盐和褐煤蜡树脂降解物的复配剂均具有同等功效。
基于上述理由，本发明极具针对性地利用云南地区褐煤和褐煤蜡树脂通过过氧化氢降解的方法分别制备得到的黄腐酸盐和褐煤蜡树脂降解物复配成一种蚕用基础药剂，并可以以此为基础附加其他选择性的强效辅助剂继而研发出一系列的蚕药、蚕用添食剂等产品，为桑蚕养殖的病害防治、高产优质提供了一种全新的选择，因此说，对整个蚕桑业的发展也是具有积极意义的。
发明内容
针对上述背景，本发明目的在于提供了一种功能多、效能快、成本低、无毒副作用的蚕用复配剂，其根据当季桑蚕的不同龄期的生长发育状况和需求等多种因素，通过有效试验来确定最佳配比，最终研制出针对性强的具有区域特色的蚕用复配剂。
本发明所述蚕用复配剂包括黄腐酸盐和褐煤蜡树脂降解物，黄腐酸盐与褐煤蜡树脂降解物的重量比为6-9:1。
所述黄腐酸盐均为药用级，具体为黄腐酸钠、黄腐酸钾中的一种或两种任意比混合物；
所述黄腐酸盐的制备方法如下：
（1）首先参照发明专利200810233669.X“褐煤氧化降解生产腐植酸及其盐的方法”中的方法利用云南地区年青褐煤制备出黄腐酸粗品，其中年青褐煤是灰分为5-10%的优质褐煤；
（2）将黄腐酸粗品加入其质量3-5倍的去离子水中常温溶解后离心分离，取上清液置入透析装置进行透析，将所得透析液加入质量百分比浓度为10-15%的碱性物质溶液调节pH值至9-10，并在85-95℃条件下搅拌反应20-30分钟，然后浓缩至体积为原液体积的三分之一后再次离心分离，取上清液再次进行透析，最后将所得透析液浓缩后干燥得到黄腐酸盐，其中透析装置的截留分子量为500-1000道尔顿，其中碱性物质为食用级的氢氧化钠或氢氧化钾。
所述黄腐酸盐在pH值为1-9不产生任何沉淀，且其重金属检测含量指标如下：砷（As）未检出，铬（Cr）未检出，铅（Pb）≤5ppm，镉（Cd）≤5ppm，汞（Hg）≤3ppm，铜（Cu）≤10ppm。
所述褐煤蜡树脂降解物的制备方法如下：
（1）首先参照专利CN201310047688.4“褐煤蜡中树脂物的脱出方法” 中的方法从云南地区年青褐煤中提取出褐煤蜡后再进一步提取得到褐煤蜡树脂，其中褐煤蜡树脂限定为残留褐煤蜡含量小于3%；
（2）将褐煤蜡树脂置入反应釜，于搅拌条件下加热升温至80-90℃熔化后，再按褐煤蜡树脂:过氧化氢氧化液=1:4-6的质量比，将过氧化氢氧化液分成2-4份分次加入反应釜中并在80-90℃条件下搅拌反应1-2小时，其间在新加入过氧化氢氧化液前先分离出前一部分氧化降解液，合并全部氧化降解液后，将其进行离心分离，取上清液置入透析装置进行透析，将所得透析液浓缩后干燥得到的固形物即为褐煤蜡树脂降解物，其中过氧化氢氧化液为质量百分比浓度为15-30%的过氧化氢溶液，其中透析装置的截留分子量为500-1000道尔顿。
本发明的有益效果如下：
（1）本发明的蚕用复配剂具备防治蚕病方面的用途，其能够有效地抑制或杀灭多种桑蚕致病源，同时对病毒病、细菌病和真菌病等几种主要蚕病均具有显著的防治效果，全龄使用可以极大地提高桑蚕的机体免疫力和抗逆性，大幅降低桑蚕的发病率；
（2）本发明的蚕用复配剂具备改善桑蚕消化道生理环境方面的用途，其能够有效地助动桑蚕的消化系统，促进桑蚕对食物的消化和吸收，促进桑蚕的健康生长发育；
（3）本发明的蚕用复配剂具备提高蚕茧的产量和质量方面的用途，其能够极大地提高了蚕农的收入，同时对促进整个蚕桑业的发展也具有积极作用。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。
实施例1：
本实施例所述蚕用复配剂按照黄腐酸钠:褐煤蜡树脂降解物=9:1的重量比例混合制得。
其中，黄腐酸钠的制备要求如下：
（1）首先参照专利200810233669.X“褐煤氧化降解生产腐植酸及其盐的方法”中方法利用云南地区灰分为10%的年青褐煤制备出黄腐酸粗品；
（2）将黄腐酸粗品加入其质量5倍的去离子水常温溶解后离心分离，取上清液置入截留分子量为1000道尔顿的透析装置进行透析，将所得透析液加入质量百分比浓度为15%的氢氧化钠溶液调节pH值至9，并在85℃条件下搅拌反应30分钟，然后浓缩至体积为原液的三分之一后再次离心分离，取上清液用同样的透析装置再次进行透析，最后将所得透析液浓缩后干燥得到黄腐酸钠。
其中，褐煤蜡树脂降解物的备要求如下：
（1）首先参照专利201310047688.4“褐煤蜡中树脂物的脱出方法”中方法从云南地区年青褐煤中提取出褐煤蜡后再进一步提取得到残留褐煤蜡含量小于3%的褐煤蜡树脂；
（2）将褐煤蜡树脂置入反应釜，于搅拌条件下加热升温至90℃熔化后，再按褐煤蜡树脂:过氧化氢氧化液（质量百分比浓度为15%）的质量比为1:4的比例，将过氧化氢氧化液分成2份分次加入反应釜中并在90℃条件下搅拌反应1小时，其间在新加入过氧化氢氧化液前先分离出前一部分氧化降解液，合并全部氧化降解液后，将其进行离心分离，取上清液置入截留分子量为1000道尔顿的透析装置进行透析，将所得透析液浓缩后干燥得到的固形物即为褐煤蜡树脂降解物。
本实施例制备的蚕用复配剂功效试验情况如下：
1、蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
试验方法：预防区常规饲养的2龄蚕，在整个2龄期内每日分别添食本实施例各种浓度的蚕用复配剂1次进行预防，在3龄起蚕后分别进行皮下针刺接种各浓度的4种病毒（攻毒）。治疗区常规饲养的2龄蚕，在3龄起蚕后分别进行皮下针刺接种各浓度的病毒（攻毒），然后每日分别添食本实施例各种浓度的蚕用复配剂1次；对照区在添食区添食时以清水代替，每小区30头，重复3次。4龄起蚕调查各区的发病率%，平均发病率X%、防治效果P%；添食前用清水将复配剂溶解配制成相应的复配剂浓度，然后均匀地喷洒到桑叶上，待桑叶晾干后再喂食，添食用量为：0.5g/kg（复配剂干基重量/桑叶重量）。结果见表1.1、1.2。
表1.1 蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
表1.2 蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
试验结果表明，本实施例蚕用复配剂对桑蚕病毒病有显著的防治效果，对4种病毒病的治疗效果达到64%以上，预防效果在55%以上，此外治疗区的效果优于预防区的效果。
2、蚕用复配剂对蚕细菌病和真菌病的防治效果
2.1（1）供试病原细菌：苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、黑胸败血芽孢杆菌(Bacillus bombyseptieus)、黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens Bizio)；供试病原真菌：球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)、黄曲霉菌（Aspergillus flavus）。（2）菌悬液的制备：按常规操作要求配制分别得到浓度均为1×106cfu/mL的上述6种病原菌的菌悬液，备用。（3）最小抑菌浓度（MIC）与最低杀菌浓度（MBC）的测定：采用试管两倍稀释法，取无菌试管10只，每只试管中分别加入3 mL胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)，再于第1只试管中加入100mg/mL蚕用复配剂药液3 mL，混匀后，取3 mL加入第2只试管，直至第8只试管吸出3 mL滴入营养琼脂培养皿上供无菌检查。8只试管中蚕用复配剂的质量浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78、0.39 mg/mL，然后于第1-8管中加入稀释好的菌悬液300µL，第9只试管只加菌悬液作为培养物对照，第10只试管视为培养基对照。在28℃培养20 h，当对照物混浊，对照培养基不混浊，则以不发生混浊变化的最小浓度为该蚕用复配剂的最小抑制浓度；将完全清晰无菌生长的试管中的培养物分别接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(PSA)上，经过夜培养，菌落数不超过5个的最小浓度为该蚕用复配剂的最低杀菌浓度，试验重复3 次；结果见表1.3。
表1.3 蚕用复配剂对6种病原菌的MIC和MBC
2.2不同浓度的蚕用复配剂对桑蚕部分病原细菌的杀灭效果：将不同浓度的蚕用复配剂2mL，分别作用于0.2mL苏云金芽胞杆菌、黑胸败血芽孢杆菌、黏质沙雷氏菌的菌悬液10min后，用中和剂(0.5%硫代硫酸钠+1%卵磷脂+1%吐温80-PBS)终止消毒，家蚕4龄起蚕皮下穿刺接种处理后的病原菌菌悬液，设清水和空白对照，常规饲养调查家蚕发病情况，每区30头蚕，重复3次；将不同浓度的蚕用复配剂2mL，分别作用于0.2mL球孢白僵菌、莱氏野村菌、黄曲霉菌的菌悬液10min后，用中和剂(0.5%硫代硫酸钠+1%卵磷脂+1%吐温80-PBS)终止消毒，家蚕2龄起蚕体表喷洒处理后的球孢白僵菌、莱氏野村菌菌悬液，蚁蚕体喷黄曲霉菌菌悬液，常规饲养调查家蚕发病情况，设清水和空白对照，每区30头蚕，重复3次；结果见表1.4。
表1.4 蚕用复配剂对6种病原菌的杀灭效果
试验结果表明，本实施例蚕用复配剂对桑蚕细菌病和真菌病均有较好的防治效果，整体灭菌复配剂浓度范围为：6.25-12.5 mg/mL。
3、蚕用复配剂对家蚕的生理影响
试验方法：将蚕用复配剂稀释为系列浓度，从家蚕2龄起蚕，每天添食1次喷有蚕用复配剂的桑叶（添食前处理见上述1中所述，添食用量为：2-3龄为0.1g/kg（复配剂干基重量/桑叶重量），4龄为0.15g/kg，5龄为0.2g/kg），饲育至上蔟结茧，设清水对照；调查每龄起蚕体重、龄期经过、全龄经过、熟蚕体重、全茧量、茧层量及茧层率；调查地点：云南省曲靖市陆良县的板桥镇和三岔河镇，通过20户以上蚕农的生产试验获得各指标数值，并求其平均值作为最终结果，见表1.5。
表1.5 添食不同浓度的蚕用复配剂后春蚕（菁松×皓月）的生长发育及茧质成绩
试验结果表明，添食组的死笼率明显低于清水对照组，且添食组的全茧量、茧层量、茧层率、万头产茧量四项指标高于清水对照组，而添食组的公斤茧粒数小于清水对照组，这说明本实施例复配剂能够明显地降低桑蚕发病率，进而提高蚕茧的产量和质量。
实施例2：
本实施例所述蚕用复配剂按照黄腐酸盐(黄腐酸钠: 黄腐酸钾重量比为1:1):褐煤蜡树脂降解物=6:1的重量比例混合制得。
其中，黄腐酸钠或黄腐酸钾的制备要求如下：
（1）首先参照专利200810233669.X“褐煤氧化降解生产腐植酸及其盐的方法”中方法利用云南地区灰分为5%的年青褐煤制备出黄腐酸粗品；
（2）将黄腐酸粗品加入其质量3倍的去离子水常温溶解后离心分离，取上清液置入截留分子量为500道尔顿的透析装置进行透析，将所得透析液加入质量分数为10%的氢氧化钠或氢氧化钾溶液调节pH值至9.5，并在95℃条件下搅拌反应20分钟，然后浓缩至体积为原液的三分之一后再次离心分离，取上清液用同样的透析装置再次进行透析，最后将所得透析液浓缩后干燥得到黄腐酸钠或黄腐酸钾。
其中，褐煤蜡树脂降解物的备要求如下：
（1）首先参照专利201310047688.4“褐煤蜡中树脂物的脱出方法”中方法从云南地区年青褐煤中提取出褐煤蜡后再进一步提取得到残留褐煤蜡含量小于3%的褐煤蜡树脂；
（2）将褐煤蜡树脂置入反应釜，于搅拌条件下加热升温至85℃熔化后，再按褐煤蜡树脂: 20%的过氧化氢氧化液=1:5的质量比，将过氧化氢氧化液分成3份分次加入反应釜中并在85℃条件下搅拌反应1.5小时，其间在新加入过氧化氢氧化液前先分离出前一部分氧化降解液，合并全部氧化降解液后，将其进行离心分离，取上清液置入截留分子量为800道尔顿的透析装置进行透析，将所得透析液浓缩后干燥得到的固形物即为褐煤蜡树脂降解物。
本实施例制备的蚕用复配剂功效试验情况如下：
1、蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
试验方法：参照实施例1，结果见2.1、2.2。
表2.1 蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
表2.2 蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
试验结果表明，本实施例蚕用复配剂对桑蚕病毒病有显著的防治效果，对4种病毒病的治疗效果达到70%以上，预防效果在57%以上，此外治疗区的效果优于预防区的效果。
2、蚕用复配剂对蚕细菌病和真菌病的防治效果
试验方法：参照实施例1，结果见表2.3、表2.4。
表2.3 蚕用复配剂对6种病原菌的MIC和MBC
表2.4 蚕用复配剂对6种病原菌的杀灭效果
试验结果表明，本实施例蚕用复配剂对桑蚕细菌病和真菌病均有较好的防治效果，整体灭菌复配剂浓度范围为：6.25-12.5 mg/mL。
3、蚕用复配剂对家蚕的生理影响
试验方法：参照实施例1，结果见表2.5。
表2.5 添食不同浓度的蚕用复配剂后夏蚕（云7×云8）的生长发育及茧质成绩
试验结果表明，添食组的死笼率明显低于清水对照组，且添食组的全茧量、茧层量、茧层率、万头产茧量四项指标高于清水对照组，而添食组的公斤茧粒数小于清水对照组，这说明本实施例复配剂能够明显地降低桑蚕发病率，进而提高蚕茧的产量和质量。
实施例3：
本实施例所述蚕用复配剂按照黄腐酸钾:褐煤蜡树脂降解物=7.5:1的重量比例混合制成。
其中，黄腐酸钾的制备要求如下：
（1）首先参照专利200810233669.X“褐煤氧化降解生产腐植酸及其盐的方法”中方法利用云南地区灰分为8%的年青褐煤制备出黄腐酸粗品；
（2）将黄腐酸粗品加入其质量4倍的去离子水常温溶解后离心分离，取上清液置入截留分子量为800道尔顿的透析装置进行透析，将所得透析液加入质量分数为12%的氢氧化钾溶液调节pH值至10，并在90℃条件下搅拌反应25分钟，然后浓缩至体积为原液的三分之一后再次离心分离，取上清液用同样的透析装置再次进行透析，最后将所得透析液浓缩后干燥得到黄腐酸钾。
其中，褐煤蜡树脂降解物的备要求如下：
（1）首先参照专利201310047688.4“褐煤蜡中树脂物的脱出方法” 中方法从云南地区年青褐煤中提取出褐煤蜡后再进一步提取得到残留褐煤蜡含量小于3%的褐煤蜡树脂；
（2）将褐煤蜡树脂置入反应釜，于搅拌条件下加热升温至80℃熔化后，再按褐煤蜡树脂: 30%的过氧化氢氧化液=1:6的质量比，将过氧化氢氧化液分成4份分次加入反应釜中并在80℃条件下搅拌反应2小时，其间在新加入过氧化氢氧化液前先分离出前一部分氧化降解液，合并全部氧化降解液后，将其进行离心分离，取上清液置入截留分子量为500道尔顿的透析装置进行透析，将所得透析液浓缩后干燥得到的固形物即为褐煤蜡树脂降解物。
本实施例制备的蚕用复配剂功效试验情况如下：
1、蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
试验方法：参照实施例1，结果见3.1、3.2。
表3.1 蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
表3.2 蚕用复配剂对蚕病毒病的防治效果
试验结果表明，本实施例蚕用复配剂对桑蚕病毒病有显著的防治效果，对四种病毒病的治疗效果达到68%以上，预防效果在56%以上，此外治疗区的效果优于预防区的效果。
表3.3 蚕用复配剂对6种病原菌的MIC和MBC
表3.4 蚕用复配剂对6种病原菌的杀灭效果
试验结果表明，本实施例蚕用复配剂对桑蚕细菌病和真菌病均有较好的防治效果，整体灭菌复配剂浓度范围为：6.25-12.5 mg/mL。
3、蚕用复配剂对家蚕的生理影响
试验方法：参照实施例1，结果见表3.5。
表3.5 添食不同浓度的蚕用复配剂后秋蚕（781×7532）的生长发育及茧质成绩
试验结果表明，添食组的死笼率明显低于清水对照组，且添食组的全茧量、茧层量、茧层率、万头产茧量四项指标高于清水对照组，而添食组的公斤茧粒数小于清水对照组，这说明本实施例复配剂能够明显地降低桑蚕发病率，进而提高蚕茧的产量和质量。

Claims (2)

1.一种蚕用复配剂，其特征在于：包括黄腐酸盐和褐煤蜡树脂降解物，黄腐酸盐与褐煤蜡树脂降解物的重量比为6-9:1；
所述黄腐酸盐均为药用级，具体为黄腐酸钠、黄腐酸钾中的一种或两种任意比混合物；
所述黄腐酸盐的制备方法如下：
（1）首先利用云南地区年青褐煤制备出黄腐酸粗品，其中年青褐煤是灰分为5-10%的优质褐煤；
（2）将黄腐酸粗品加入其质量3-5倍的去离子水中常温溶解后离心分离，取上清液置入透析装置进行透析，将所得透析液加入质量百分比浓度为10-15%的碱性物质溶液调节pH值至9-10，并在85-95℃条件下搅拌反应20-30分钟，然后浓缩至体积为原液体积的三分之一后再次离心分离，取上清液再次进行透析，最后将所得透析液浓缩后干燥得到黄腐酸盐，其中透析装置的截留分子量为500-1000道尔顿，其中碱性物质为食用级的氢氧化钠或氢氧化钾；
所述褐煤蜡树脂降解物的制备方法如下：
（1）首先从云南地区年青褐煤中提取出褐煤蜡后再进一步提取得到褐煤蜡树脂，其中褐煤蜡树脂中残留褐煤蜡含量小于3%；
（2）将褐煤蜡树脂置入反应釜，于搅拌条件下加热升温至80-90℃熔化后，再按褐煤蜡树脂:过氧化氢氧化液的质量比为1:4-6的比例，将过氧化氢氧化液分成2-4份分次加入反应釜中并在80-90℃条件下搅拌反应1-2小时，其间在新加入过氧化氢氧化液前先分离出前一部分氧化降解液，合并全部氧化降解液后，将其进行离心分离，取上清液置入透析装置进行透析，将所得透析液浓缩后干燥得到的固形物即为褐煤蜡树脂降解物，其中过氧化氢氧化液为质量百分比浓度为15-30%的过氧化氢溶液，其中透析装置的截留分子量为500-1000道尔顿。
2.权利要求1中所述蚕用复配剂在提高蚕茧的产量和质量中的应用。
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