CN111514054A - 抑制酪氨酸酶活性的组合物及其制备方法和化妆品 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种抑制酪氨酸酶活性的组合物及其制备方法和化妆品。抑制酪氨酸酶活性的组合物，其原料以重量份数计，包括：姜花提取物0.5‑30份、杜鹃花提取物0.1‑20份、黄芩提取物0.1‑6份、尤加利提取物1‑30份、大蒜提取物0.1‑10份、人参皂甙Rg1 0.1‑2份和人参皂甙Re 0.1‑2份。抑制酪氨酸酶活性的组合物的制备方法：将所述原料混合得到所述抑制酪氨酸酶活性的组合物。化妆品，包括所述的抑制酪氨酸酶活性的组合物。本申请提供的抑制酪氨酸酶活性的组合物，有较好的抑制酪氨酸酶活性作用，能起到美白祛斑的作用，安全无刺激。

Description

抑制酪氨酸酶活性的组合物及其制备方法和化妆品
技术领域
本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种抑制酪氨酸酶活性的组合物及其制备方法和化妆品。
背景技术
黑色素是影响皮肤白皙最主要的一类色素。酪氨酸酶又称多酚氧化酶，是一种氧化还原酶，广泛存在于动植物、微生物及人体中，它是黑色素合成的限速酶，它的活性与皮肤黑色素合成量相关。在黑色素合成过程中涉及到酪氨酸酶的氧化以及转运，酪氨酸在酪氨酸酶的作用下生成多巴，再经过一系列的步骤最终生成黑色素。黑色素使人体皮肤呈现较暗颜色，特别是黑色和棕色，有时出现黄色。所以酪氨酸酶在黑素产生的过程中饰演了举足轻重的角色。酪氨酸酶活性增加，产生的黑素就会更多；酪氨酸酶活性被抑制，黑素细胞产生黑素的能力就相应降低。可以说酪氨酸酶就是控制黑素细胞活性的关键，它决定了黑素合成的速率。酪氨酸酶活性增强或紊乱就会发生色素性疾病，黄褐斑就是其中之一。
目前的美白产品多存在治标不治本的问题，而且刺激性和安全性都存在问题。因此，一种天然无刺激、安全且能够从根本上解决黑色素生成的美白产品成为人们研究的重点。
有鉴于此，特提出本申请。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抑制酪氨酸酶活性的组合物及其制备方法和化妆品，以解决上述问题。
为实现以上目的，本发明特采用以下技术方案：
一种抑制酪氨酸酶活性的组合物，其原料以重量份数计，包括：
姜花提取物0.5-30份、杜鹃花提取物0.1-20份、黄芩提取物0.1-6份、尤加利提取物1-30份、大蒜提取物0.1-10份、人参皂甙Rg1 0.1-2份和人参皂甙Re 0.1-2份。
通过各组分的复配，能够有效抑制酪氨酸酶活性，进而抑制黑色素的生成，达到从根本上实现美白的目的。需要说明的是，上述各组分中，姜花提取物和杜鹃花提取物是核心成分，且两者搭配具有协同增效作用。
姜花提取物的主要有效成分为滇姜花素B、滇姜花素A、姜花酮；杜鹃花提取物的主要有效成分为杜鹃素；黄芩提取物的有效成分为黄芩苷；尤加利提取物的有效成分为桉叶素；大蒜提取物的有效成分为蒜氨酸。
可选地，组合物中，姜花提取物的用量可以是0.5份、1份、5份、10份、15份、20份、25份、30份以及0.5-30份之间的任一值，杜鹃花提取物可以是0.1份、0.5份、1份、5份、10份、15份、20份以及0.1-20份之间的任一值，黄芩提取物可以是0.1份、0.5份、1份、2份、3份、4份、5份、6份以及0.1-6份之间的任一值，尤加利提取物可以是1份、5份、10份、15份、20份、25份、30份以及1-30份之间的任一值，大蒜提取物可以是0.1份、0.5份、1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份以及0.1-10份之间的任一值，人参皂甙Rg1可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份以及0.1-2份之间的任一值，人参皂甙Re可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份以及0.1-2份之间的任一值。
优选地，所述杜鹃花提取物包括高山玫瑰杜鹃花提取物。
高山玫瑰杜鹃花中有效成分含量高，符合化妆品原料使用的相关要求，无毒安全。
优选地，所述姜花提取物的制备方法包括：
将姜花用第一有机溶剂进行第一浸提得到姜花浸膏；
将所述姜花浸膏进行水洗得到姜花沉淀物，将所述姜花沉淀物用第二有机溶剂溶解，然后用大孔树脂洗脱得到滤液；
将所述滤液进行第一脱色、浓缩后用第三有机溶剂溶解姜花浓缩物，得到所述姜花提取物；
优选地，所述姜花在第一浸提前预先粉碎；
优选地，粉碎后的姜花的粒径小于等于20目；
优选地，所述第一有机溶剂、所述第二有机溶剂包括乙醇；
优选地，所述乙醇包括质量分数为95％的乙醇；
优选地，所述第一有机溶剂的用量为所述姜花的质量的8-12倍，所述第二有机溶剂的质量为所述姜花沉淀物的重量的4-6倍；
优选地，所述第三有机溶剂包括丙二醇；
优选地，所述第三有机溶剂的用量为所述姜花浓缩物的质量的4-6倍；
优选地，所述第一浸提的温度为65-70℃，时间为2-4h；
优选地，使用活性炭进行所述第一脱色。
通过对姜花进行提取，获得其脂溶性成分，由于皮肤表面有一层皮脂膜保护，皮脂膜的成分是脂溶性的，所以组合物中含有脂溶性成分，使得组合物能较好的渗入到皮脂膜中，到达皮肤基底层，有效被细胞吸收营养而加以利用。
可选地，所述第一有机溶剂的用量可以为所述姜花的质量的8倍、9倍、10倍、11倍、12倍以及8-12倍之间的任一值，所述第二有机溶剂的质量可以为所述姜花沉淀物的重量的4倍、5倍、6倍以及4-6倍之间的任一值；所述第三有机溶剂的用量可以为所述浓缩物的质量的4倍、5倍、6倍以及4-6倍之间的任一值；所述第一浸提的温度可以为65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃以及65-70℃之间的任一值，时间可以为2h、3h、4h以及2-4h之间的任一值。
优选地，所述杜鹃花提取物的制备方法包括：
将杜鹃花用第四有机溶剂进行第二浸提得到杜鹃花浸膏；
将所述杜鹃花浸膏水洗得到杜鹃花沉淀物，将所述杜鹃花沉淀物用第五有机溶剂溶解，然后进行第二脱色、浓缩后用第六有机溶剂溶解杜鹃花浓缩物，得到所述杜鹃花提取物；
优选地，所述杜鹃花在第二浸提前预先粉碎；
优选地，粉碎后的杜鹃花的粒径小于等于20目；
优选地，所述第四有机溶剂、所述第五有机溶剂包括乙醇；
优选地，所述乙醇包括质量分数为95％的乙醇；
优选地，所述第四有机溶剂的用量为所述杜鹃花的质量的8-12倍，所述第五有机溶剂的质量为所述杜鹃花沉淀物的重量的4-6倍；
优选地，所述第六有机溶剂包括丙二醇；
优选地，所述第六有机溶剂的用量为所述浓缩物的质量的4-6倍；
优选地，所述第二浸提的温度为65-70℃，时间为2-4h；
优选地，使用活性炭进行所述第二脱色。
通过上述方法对杜鹃花中的有效成分进行提取，获得脂溶性成分，有利于获得更好的美白效果。
可选地，所述第四有机溶剂的用量可以为所述杜鹃花的质量的8倍、9倍、10倍、11倍、12倍以及8-12倍之间的任一值，所述第五有机溶剂的质量可以为所述杜鹃花沉淀物的重量的4倍、5倍、6倍以及4-6倍之间的任一值；所述第六有机溶剂的用量可以为所述浓缩物的质量的4倍、5倍、6倍以及4-6倍之间的任一值；所述第二浸提的温度可以为65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃以及65-70℃，时间可以为2h、3h、4h以及2-4h。
优选地，所述尤加利提取物的制备方法包括：
将尤加利的原料与水混合后进行第一加热，收集尤加利馏出液，然后将所述尤加利馏出液中不溶于水的成分分离出来，得到尤加利粗提物；
将所述尤加利粗提物和氢化蓖麻油混合，进行第二加热后加入甘油硬脂酸酯、聚乙二醇-14M和水得到混合物，然后将所述混合物进行第一乳化、第一干燥得到所述尤加利提取物；
优选地，所述尤加利的原料包括尤加利的叶子和/或树皮；
优选地，所述尤加利的原料与水的质量比为1：(1.5-2.5)；
优选地，所述尤加利粗提物与所述氢化蓖麻油、所述甘油硬脂酸酯、所述聚乙二醇-14M、相应的水的质量比为1：(1.5-2.5)：(1.5-2.5)：(0.3-0.4)：(6-7)；
优选地，所述第一加热的温度为95-100℃，所述第二加热的温度为80-85℃，所述第二加热的时间为10-20min；
优选地，所述第一乳化包括：将所述混合物振荡4-6h，然后在40-60℃、18-22MPa条件下进行第一均质；
优选地，所述第一均质的次数为1-3次，每次时间为1-3min；
优选地，所述第一干燥采用喷雾干燥，所述喷雾干燥的进风温度为150-160℃、进料温度为60-70℃、出风温度为60-70℃；
优选地，所述第一干燥之后还包括：将所述第一干燥的产物过60-100目筛。
需要说明的是，氢化蓖麻油可以用吐温60或司盘80替代，甘油硬脂酸酯可以用硬脂酸甘油酯替代。
可选地，所述尤加利的原料与水的质量比可以为1：1.5、1：2.0、1：2.5以及1：(1.5-2.5)之间的任一值；所述第一加热的温度可以为95℃、96℃、97℃、98℃、99℃、100℃以及95-100℃之间的任一值，所述第二加热的温度可以为80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃以及80-85℃之间的任一值，所述第二加热的时间可以为10min、15min、20min以及10-20min；所述振荡的时间可以为4h、5h、6h以及4-6h之间的任一值，均质的温度可以为40℃、45℃、50℃、55℃、60℃以及40-60℃之间的任一值，压力可以为18MPa、19MPa、20MPa、21MPa、22MPa以及18-22MPa之间的任一值；所述均质的次数可以为1次、2次、3次以及1-3次之间的任一值，每次时间可以为1min、2min、3min以及1-3min之间的任一值；所述喷雾干燥的进风温度可以为150℃、155℃、160℃以及150-160℃之间的任一值，进料温度可以为60℃、65℃、70℃以及60-70℃之间的任一值，出风温度可以为60℃、65℃、70℃以及60-70℃之间的任一值；所述第一干燥的产物过筛的目数可以为60目、70目、80目、90目、100目以及60-100目之间的任一值。
优选地，所述大蒜提取物的制备方法包括：
将大蒜与水混合后进行第三加热，收集大蒜馏出液，然后将所述大蒜馏出液中不溶于水的成分分离出来，得到大蒜粗提物；
将所述大蒜粗提物和氢化蓖麻油混合，进行第四加热后加入硬脂醇聚醚-21、聚乙二醇-14M和水得到混合料液，然后将所述混合料液进行第二乳化、第二干燥得到所述大蒜提取物；
优选地，所述大蒜与水的质量比为1：(1.5-2.5)；
优选地，所述大蒜粗提物与所述氢化蓖麻油、所述硬脂醇聚醚-21、所述聚乙二醇-14M、相应的水的质量比为1：(1.5-2.5)：(4-6)：(0.4-0.6)：(8-12)；
优选地，所述第三加热的温度为95-100℃，所述第四加热的温度为80-85℃，所述第四加热的时间为10-20min；
优选地，所述第二乳化包括：将所述混合料液振荡10-14h，然后在45-55℃、18-22MPa条件下进行第二均质；
优选地，所述第二均质的次数为1-3次，每次时间为1-3min；
优选地，所述第二干燥采用喷雾干燥，所述喷雾干燥的进风温度为150-160℃、进料温度为60-70℃、出风温度为60-70℃；
优选地，所述第二干燥之后还包括：将所述第二干燥的产物过60-100目筛。
可选地，所述大蒜与水的质量比可以为1：1.5、1：2.0、1：2.5以及1：(1.5-2.5)之间的任一值；所述第三加热的温度可以为95℃、96℃、97℃、98℃、99℃、100℃以及95-100℃之间的任一值，所述第四加热的温度可以为80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃以及80-85℃之间的任一值，所述第二加热的时间可以为10min、15min、20min以及10-20min之间的任一值；所述振荡的时间可以为10h、11h、12h、13h、14h以及10-14h之间的任一值，均质的温度可以为45℃、50℃、55℃以及45-55℃之间的任一值，压力可以为18MPa、19MPa、20MPa、21MPa、22MPa以及18-22MPa之间的任一值；所述均质的次数可以为1次、2次、3次以及1-3次之间的任一值，每次时间可以为1min、2min、3min以及1-3min之间的任一值；所述喷雾干燥的进风温度可以为150℃、155℃、160℃以及150-160℃之间的任一值，进料温度可以为60℃、65℃、70℃以及60-70℃之间的任一值，出风温度可以为60℃、65℃、70℃以及60-70℃之间的任一值；所述第二干燥的产物过筛的目数可以为60目、70目、80目、90目、100目以及60-100目之间的任一值。
尤加利提取物和大蒜提取物也都是脂溶性成分，但是提取物本身有刺激性气味，不适合作为化妆品原料进行使用，因此通过包裹技术进行掩盖；同时，将脂溶性成分变为水溶性成分，调整整个组合物的极性，使得组合物在使用时更加方便。
优选地，所述黄芩提取物包括黄芩的水提取物；
优选地，所述人参皂甙Rg1和所述人参皂甙Re均为单体含量大于等于90％的、从三七中提取的人参皂甙单体。
优选地，所述的组合物，还包括辅料0.1-20份。
辅料包括但不限于防腐剂、透明质酸、半乳糖阿拉伯聚糖、苯氧乙醇、卡波、三乙醇胺、聚丙烯酸钠、PPG-5-月桂醇聚醚-5、甘油、霍霍巴籽油、海藻糖、苯氧乙醇等。
一种所述的抑制酪氨酸酶活性的组合物的制备方法，包括：
将所述原料混合得到所述抑制酪氨酸酶活性的组合物。
一种化妆品，包括所述的抑制酪氨酸酶活性的组合物；
优选地，所述化妆品包括精华液剂型、膏霜剂型、乳液剂型和凝胶剂型。
本申请提供的抑制酪氨酸酶活性的组合物，适用于常见的所有化妆品类型。
与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括：
1.本申请提供的抑制酪氨酸酶活性的组合物和化妆品，通过姜花提取物、杜鹃花提取物、黄芩提取物、尤加利提取物、大蒜提取物、人参皂甙Rg1和人参皂甙Re的复配和协同作用，有效抑制酪氨酸酶活性，从而从根本上抑制黑色素的生成，获得优异的美白效果；
2.本申请提供的抑制酪氨酸酶活性的组合物的制备方法，操作简单方便，成本低。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对本发明范围的限定。
图1为实施例1制得的美白祛斑精华液在不同体积浓度条件下的抑制黑色素合成实验对比图；
图2为实施例1制得的美白祛斑精华液的酪氨酸酶活力抑制率柱状图；
图3为空白对照组的色素沉积前后情况对比图；
图4为样品1的色素沉积前后情况对比图；
图5为样品2的色素沉积前后情况对比图；
图6为样品3的色素沉积前后情况对比图。
具体实施方式
如本文所用之术语：
“由……制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。
“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。
下面将结合具体实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1-5
备料：
姜花提取物的制备方法：
(1)将晒干的姜花(整株)，粉碎成粉至能过20目筛；(2)加入姜花粉碎后的粉重量10倍的质量分数为95％的乙醇，65℃加热回流提取3h，过滤，反复提取三次，合并滤液，在70℃下浓缩至无醇，得到浸膏。(3)加入重量为浸膏5倍量的水，加热搅拌，水洗，静置过夜水层弃去。加入重量为5倍量的95％乙醇溶解沉淀，待用；(4)将95％乙醇溶解的样品用AB-8大孔树脂过滤洗脱，水洗至无色，将滤液合并；(5)在合并的滤液中加入活性炭加热30分钟脱色，脱色后过滤活性炭，滤液浓缩至无醇，加入重量为5倍量的丙二醇溶解，得到的即为姜花提取物。
高山玫瑰杜鹃花提取物的制备方法：
(1)将晒干的高山玫瑰杜鹃花，粉碎成粉至能过20目筛；(2)加入高山玫瑰杜鹃花粉碎后的粉重量10倍的质量分数为95％的乙醇，70℃加热回流提取3h，过滤，反复提取三次，合并滤液，在70℃下浓缩至无醇，得到浸膏。(3)加入重量为浸膏5倍量的水，加热搅拌，水洗，静置过夜水层弃去。加入重量为2倍量的95％乙醇溶解沉淀；(4)再加入活性炭加热30分钟脱色，脱色后过滤活性炭，滤液浓缩至无醇，加入重量为5倍量的丙二醇溶解，得到的即为高山玫瑰杜鹃花提取物。
尤加利提取物的制备方法：
(1)新鲜的尤加利叶子和树皮加入重量比为1：1.5的纯化水，在95℃加热回流，收集溜出液；再将溜出液中部溶于水的部分分离出来即可得到尤加利粗提物；
(2)混合料液:在150g尤加利粗提物中加入300g氢化蓖麻油，混合均匀，在80℃水浴锅中保持15min后加入300g甘油硬脂酸酯，50g聚乙二醇-14M，加水至1000g混匀；
(3)乳化均质：将混合料液置于振荡器上振荡4h，在40℃、22MPa的压力下均质1次，3分钟；
(4)喷雾干燥：混合液进行喷雾干燥，进风温度150℃，进料温度70℃，出风温度60℃。喷雾干燥的产品过80目筛，可得白色均匀的粉状尤加利提取物。
大蒜提取物的制备方法：
(1)将新鲜的大蒜(有皮)加入重量比为1：2的纯化水，在95℃加热回流，收集溜出液；再将溜出液中部溶于水的部分分离出来即可得到大蒜粗提物；
(2)混合料液:在100g大蒜粗提物中加入200g氢化蓖麻油，混合均匀，在80℃水浴锅中保持10min后加入500g硬脂醇聚醚-21，50g聚乙二醇-14M，加水至1000g混匀；
(3)乳化均质：将混合料液置于振荡器上振荡10h，在45℃、22MPa的压力下均质1次，3分钟；
(4)喷雾干燥：混合液进行喷雾干燥，进风温度150℃，进料温度60℃，出风温度60℃。喷雾干燥的产品过60目筛，可得白色均匀的粉状大蒜提取物。
黄芩提取物为水提取物。将晒干的黄芩粉碎成粉至能过60目筛；(2)加入黄芩粉碎后的粉重量15倍的水，于80-85℃条件下煮2小时，然后过滤；(3)将步骤(2)中的浸泡物于80-85℃条件下再煮2次，每次2h，分别过滤；(4)将提取液过滤，合并滤液，减压蒸馏浓缩成浸膏后干燥即得。
人参皂甙Rg1和人参皂甙Re为单体含量为95％的从三七中提取的人参皂甙单体。
实施例1-5提供一种美白祛斑精华液，每个实施例对应的精华液的原料配方及重量百分比含量如表1所示。
表1实施例1-5组成成分
Figure BDA0002529675960000121
美白祛斑精华液的制作工艺均按照如下步骤进行：
1)将称量好的姜花提取物、高山玫瑰杜鹃花提取物，黄芩提取物投入搅拌锅中搅拌均匀，再将尤加利提取物、大蒜提取物，人参皂甙Rg1，人参皂甙Re等固体小料投入预混罐中，加入称量好的纯化水搅拌使物料充分溶解，后吸入搅拌锅中，启动搅拌器搅拌2-3分钟。
2)将称量好的防腐剂一起投入搅拌锅，并且搅拌5-10分钟，使之完全混匀，即得到精华液。
实施例6-10
备料：
姜花提取物的制备方法：
(1)将晒干的姜花(整株)，粉碎成粉至能过20目筛；(2)加入姜花粉碎后的粉重量8倍的质量分数为95％的乙醇，70℃加热回流提取2h，过滤，反复提取三次，合并滤液，在70℃下浓缩至无醇，得到浸膏。(3)加入重量为浸膏5倍量的水，加热搅拌，水洗，静置过夜水层弃去。加入重量为4倍量的95％乙醇溶解沉淀，待用；(4)将95％乙醇溶解的样品用AB-8大孔树脂过滤洗脱，水洗至无色，将滤液合并；(5)在合并的滤液中加入活性炭加热30分钟脱色，脱色后过滤活性炭，滤液浓缩至无醇，加入重量为4倍量的丙二醇溶解，得到的即为姜花提取物。
高山玫瑰杜鹃花提取物的制备方法：
(1)将晒干的高山玫瑰杜鹃花，粉碎成粉至能过20目筛；(2)加入高山玫瑰杜鹃花粉碎后的粉重量8倍的质量分数为95％的乙醇，65℃加热回流提取4h，过滤，反复提取三次，合并滤液，在70℃下浓缩至无醇，得到浸膏。(3)加入重量为浸膏5倍量的水，加热搅拌，水洗，静置过夜水层弃去。加入重量为4倍量的95％乙醇溶解沉淀；(4)再加入活性炭加热30分钟脱色，脱色后过滤活性炭，滤液浓缩至无醇，加入重量为4倍量的丙二醇溶解，得到的即为高山玫瑰杜鹃花提取物。
尤加利提取物的制备方法：
(1)新鲜的尤加利叶子和树皮加入重量比为1：2.5的纯化水，在100℃加热回流，收集溜出液；再将溜出液中部溶于水的部分分离出来即可得到尤加利粗提物；
(2)混合料液:在150g尤加利粗提物中加入300g氢化蓖麻油，混合均匀，在85℃水浴锅中保持10min后加入300g甘油硬脂酸酯，50g聚乙二醇-14M，加水至1000g混匀；
(3)乳化均质：将混合料液置于振荡器上振荡6h，在50℃、20MPa的压力下均质2次，每次2分钟；
(4)喷雾干燥：混合液进行喷雾干燥，进风温度160℃，进料温度60℃，出风温度70℃。喷雾干燥的产品过60目筛，可得白色均匀的粉状尤加利提取物。
大蒜提取物的制备方法：
(1)将新鲜的大蒜(有皮)加入重量比为1：1.5纯化水，在100℃加热回流，收集溜出液；再将溜出液中部溶于水的部分分离出来即可得到大蒜粗提物；
(2)混合料液:在100g大蒜粗提物中加入200g氢化蓖麻油，混合均匀，在85℃水浴锅中保持20min后加入500g硬脂醇聚醚-21，50g聚乙二醇-14M，加水至1000g混匀；
(3)乳化均质：将混合料液置于振荡器上振荡14h，在55℃、18MPa的压力下均质3次，每次1分钟；
(4)喷雾干燥：混合液进行喷雾干燥，进风温度160℃，进料温度70℃，出风温度70℃。喷雾干燥的产品过100目筛，可得白色均匀的粉状大蒜提取物。
黄芩提取物为水提取物。将晒干的黄芩粉碎成粉至能过60目筛；(2)加入黄芩粉碎后的粉重量15倍的水，于80—85℃条件下煮2小时，然后过滤；(3)将步骤(2)中的浸泡物于80——85℃条件下再煮2次，每次2h，分别过滤；(4)将提取液过滤，合并滤液，减压蒸馏浓缩成浸膏后干燥即得。
人参皂甙Rg1和人参皂甙Re为单体含量为92％的从三七中提取的人参皂甙单体。
实施例6-10提供一种美白祛斑凝胶，每个实施例对应的美白祛斑凝胶的原料配方及重量百分比含量如表2所示。
表2美白祛斑凝胶的原料组成
Figure BDA0002529675960000151
美白祛斑凝胶的制作工艺均按照如下步骤进行：
1)将称量好的姜花提取物、高山玫瑰杜鹃花提取物，黄芩提取物投入搅拌锅中搅拌均匀，再将尤加利提取物、大蒜提取物，人参皂甙Rg1，人参皂甙Re等固体小料投入预混罐中，加入称量好的纯化水搅拌使物料充分溶解，后吸入搅拌锅中，启动搅拌器搅拌2-3分钟。
2)将称量好的卡波用纯化水先溶解，加入称量好的三乙醇胺，搅拌均匀，再将称量好的透明质酸、半乳糖阿拉伯聚糖吸入搅拌锅中，启动搅拌器搅拌均匀；
3)将称量好的苯氧乙醇投入搅拌锅，并且搅拌5-10分钟，使之完全混匀，开启真空搅拌10-15分钟；即得到美白祛斑凝胶。
实施例11-15
备料：
姜花提取物的制备方法：
(1)将晒干的姜花(整株)，粉碎成粉至能过20目筛；(2)加入姜花粉碎后的粉重量12倍的质量分数为95％的乙醇，68℃加热回流提取4h，过滤，反复提取三次，合并滤液，在70℃下浓缩至无醇，得到浸膏。(3)加入重量为浸膏5倍量的水，加热搅拌，水洗，静置过夜水层弃去。加入重量为6倍量的95％乙醇溶解沉淀，待用；(4)将95％乙醇溶解的样品用AB-8大孔树脂过滤洗脱，水洗至无色，将滤液合并；(5)在合并的滤液中加入活性炭加热30分钟脱色，脱色后过滤活性炭，滤液浓缩至无醇，加入重量为6倍量的丙二醇溶解，得到的即为姜花提取物。
高山玫瑰杜鹃花提取物的制备方法：
(1)将晒干的高山玫瑰杜鹃花，粉碎成粉至能过20目筛；(2)加入高山玫瑰杜鹃花粉碎后的粉重量12倍的质量分数为95％的乙醇，68℃加热回流提取2h，过滤，反复提取三次，合并滤液，在70℃下浓缩至无醇，得到浸膏。(3)加入重量为浸膏5倍量的水，加热搅拌，水洗，静置过夜水层弃去。加入重量为6倍量的95％乙醇溶解沉淀；(4)再加入活性炭加热30分钟脱色，脱色后过滤活性炭，滤液浓缩至无醇，加入重量为6倍量的丙二醇溶解，得到的即为高山玫瑰杜鹃花提取物。
尤加利提取物的制备方法：
(1)新鲜的尤加利叶子和树皮加入重量比为1：2的纯化水，在100℃加热回流，收集溜出液；再将溜出液中部溶于水的部分分离出来即可得到尤加利粗提物；
(2)混合料液:在150g尤加利粗提物中加入300g氢化蓖麻油，混合均匀，在82℃水浴锅中保持20min后加入300g甘油硬脂酸酯，50g聚乙二醇-14M，加水至1000g混匀；
(3)乳化均质：将混合料液置于振荡器上振荡5h，在60℃、18MPa的压力下均质3次，每次1分钟；
(4)喷雾干燥：混合液进行喷雾干燥，进风温度155℃，进料温度65℃，出风温度65℃。喷雾干燥的产品过100目筛，可得白色均匀的粉状尤加利提取物。
大蒜提取物的制备方法：
(1)将新鲜的大蒜(有皮)加入重量比为1：2.5的纯化水，在98℃加热回流，收集溜出液；再将溜出液中部溶于水的部分分离出来即可得到大蒜粗提物；
(2)混合料液:在100g大蒜粗提物中加入200g氢化蓖麻油，混合均匀，在83℃水浴锅中保持15min后加入500g硬脂醇聚醚-21，50g聚乙二醇-14M，加水至1000g混匀；
(3)乳化均质：将混合料液置于振荡器上振荡12h，在50℃、20MPa的压力下均质2次，每次2分钟；
(4)喷雾干燥：混合液进行喷雾干燥，进风温度155℃，进料温度65℃，出风温度65℃。喷雾干燥的产品过80目筛，可得白色均匀的粉状大蒜提取物。
黄芩提取物为水提取物。
人参皂甙Rg1和人参皂甙Re为单体含量为94％的从三七中提取的人参皂甙单体。
实施例11-15提供一种美白祛斑精华乳，每个实施例对应的修复乳的原料配方及重量百分比含量如表3所示。
表3美白祛斑精华乳的原料组成
Figure BDA0002529675960000181
美白祛斑精华乳的制作工艺均按照如下步骤进行：
1)将称量好的姜花提取物、高山玫瑰杜鹃花提取物，黄芩提取物投入搅拌锅中搅拌均匀，再将尤加利提取物、大蒜提取物，人参皂甙Rg1，人参皂甙Re等固体小料投入预混罐中，加入称量好的纯化水搅拌使物料充分溶解，后吸入搅拌锅中，加热到80℃-85℃中，启动搅拌器搅拌2-3分钟为A相，备用；
2)将称量好的聚丙烯酸钠、PPG-5-月桂醇聚醚-5、矿油、霍霍巴籽油投入预混罐中，加热到80℃-85℃中，启动搅拌器搅拌2-3分钟为B相，备用；
3)将A相倒入B相中均质乳化搅拌，开动磁力加热搅拌器，控制搅拌速率为3000r/min，缓慢加入，反应15min，停止加热，保持搅拌，缓慢降温至50℃时为C相。
4)将苯氧乙醇一起投入C相搅拌均匀，均质2分钟，继续降温至45℃出料，即得到美白祛斑精华乳。
为了证明本申请提供的组合物的相关效果，特进行实验如下：
1.挑选受精卵后的健康斑马鱼胚胎随机置于细胞培养板，每孔加入实验溶液。实验设立溶剂对照组(水)和样品组，每组设3个复孔。
2.用体视显微镜观察斑马鱼色素沉着情况并拍照记录。
3.每孔挑选幼鱼置于培养皿中并将幼鱼转移到管中，在低温下超声制备成匀浆液。
4.酪氨酸酶活力的测定：将匀浆液离心，取上清液置于孔板中。使用酶标仪检测各实验组的吸光值(使用100ul左旋多巴溶液和100ul斑马鱼养殖水混合溶液作为溶剂调零组)。酪氨酸酶活性抑制率按下列公式计算:
Figure BDA0002529675960000191
5.统计分析：采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用±SEM数据表示，用单因素方差分析。各浓度组与空白对照组两两比较：*P<0.05。
基于上述方法，取实施例1制得的美白祛斑精华液，用去离子水配置成体积浓度为0.0125％、0.025％、0.05％、0.1％、0.2％的溶液，样品对斑马鱼酪氨酸酶活力的抑制实验结果如表4和图1、图2所示：
表4样品酪氨酸酶活力抑制率
Figure BDA0002529675960000201
与空白对照组比较：*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。
由图1可知，空白组的斑马鱼有大量黑色素沉着，而样品处理组的斑马鱼黑色素沉着随着浓度的增加而逐渐减少，表明随着浓度的增加样品对酪氨酸酶活性的抑制能力增强。
由表4和图2可知，样品浓度(v/v)为0.0125％时，对斑马鱼体内酪氨酸酶活力的抑制率为4.11±1.14％，与空白对照组相比较没有显著性差异(P>0.05)。而样品浓度(v/v)为0.025％、0.05％、0.1％和0.2％时，对斑马鱼体内酪氨酸酶活力的抑制率分别为19.08±1.55％、27.34±1.09％、42.62±1.12％和49.18±1.34％，与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.05)。因此，样品浓度(v/v)≥0.025％时，对斑马鱼体内酪氨酸酶活力有较强的抑制作用，而且呈体积百分比浓度依赖性。
对比例1-2
为了证明本申请提供的组合物中主要有效成分对酪氨酸酶活性的影响，申请人委托广州鲁比生物科技有限公司进行酪氨酸酶抑制活性(鱼胚实验)研究和检测，订单编号为RB200041301，检测日期：2020/05/5—2020/05/15，检测报告项目负责人为刘云啸，完成报告日为2020-05-15。报告具体内容如下：
1.样品信息
测试样品分别对应的配方(样品1为实施例，样品2为对比例1，样品3为对比例2)如下表5所示：
表5样品成分表
组成成分/％ 样品1 样品2 样品3
姜花提取物 20 0 15
高山玫瑰杜鹃花提取物 10 10 0
黄芩提取物 2 2 2
尤加利提取物 10 10 10
大蒜提取物 1 1 1
人参皂甙Rg1 0.3 0.3 0.3
人参皂甙Re 0.5 0.5 0.5
防腐剂 0.5 0.5 0.5
纯化水 余量 余量 余量
以上样品均在室温下保存，外观呈乳黄色液体，溶于水。
2.试验材料
本次测试所用斑马鱼为AB系斑马鱼，由广东药科大学引入，本检测单位的实验室扩繁。
主要设备及试剂包括：Z-A-D5五层单排独立养殖单元(上海海圣生物实验设备有限公司)；SZ680连续变倍体式显微镜(重庆奥特光学仪器有限公司)；ZXSD-A1090生化培养箱(上海智城分析仪器制造有限公司)；SQP万分之一电子秤(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；全波长酶标仪(赛默飞)；超声振荡器(昆山市超声仪器有限公司)；超低温离心机(湘仪离心机仪器有限公司)；左旋多巴(麦克林)；脱氧胆酸钠(麦克林)等。
3实验方法
3.1实验用鱼及其受精卵的采集
将性成熟斑马鱼雌雄分缸饲养于斑马鱼养殖单元中。水温：26±2℃；PH 7.2；电导率：520μs/cm；光照/黑暗周期：14h:10h。暴露实验开始前一天将雌雄以1:2配对，自然交配产卵。胚胎在原肠胚期(受精后0～8hpf)最为敏感，因此，于受精卵收集后6hpf进行暴露实验。
3.2暴露实验
选用6孔细胞培养板，每孔放入受精卵30枚，实验重复两组。以12mg/ml样品1溶液为对照，设置样品2、样品3的实验浓度也为12mg/ml。另设空白对照(养殖水)组。
3.3显微观察
孵育至72hpf时，于体式显微镜下观察斑马鱼胚胎的黑色素沉积情况，并拍照记录；结果如图3、图4、图5和图6所示。
图3为空白对照组的色素沉积前后情况对比图；图4为样品1的色素沉积前后情况对比图；图5为样品2的色素沉积前后情况对比图；图6为样品3的色素沉积前后情况对比图。
由图3到图6对比可知，样品1的色素沉积情况明显比空白对照组和样品2、样品3的沉积情况要少很多，证明样品1的抑制酪氨酸酶活性的效果明显优于样品2和样品3。
3.4酪氨酸酶活性研究
孵育至72hpf时，每组实验浓度挑选20枚已孵化的斑马鱼幼鱼，用PBS冲洗，加入脱氧胆酸钠溶液，并在低温下超声制备成匀浆液；离心，加入左旋多巴溶液，于酶标仪下检测各实验的吸光值(使用100ul左旋多巴溶液和100ul斑马鱼养殖水混合溶液作为溶剂调零组)。酪氨酸酶活性抑制率按下列公式计算:
Figure BDA0002529675960000221
3.5统计分析
采用SPSS 19.0软件统计处理数据，实验数据均用±SEM数据表示，用卡方检验进行分析比较。
4实验结果
4.1受试样品对鱼胚酪氨酸酶活性的影响
基于实验方法4，样品1、样品2、样品3对鱼胚酪氨酸酶活性的影响见表6。
在实验条件下，样品1、样品2、样品3(12mg/ml)对鱼胚酪氨酸酶活性的抑制率分别为：72.27±3.67％、58.82±5.22％和51.71±5.85％。
表6受试样品对鱼胚酪氨酸酶活性(％)的影响
(注：与样品1相比，*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001)
Figure BDA0002529675960000231
4.2受试样品安全性研究实验结果
4.2.1受试样品对鱼胚死亡率的影响
表7受试样品对鱼胚死亡率的影响
Figure BDA0002529675960000232
4.2.2受试样品对鱼胚孵化率的影响
表8受试样品对鱼胚孵化率的影响
Figure BDA0002529675960000233
Figure BDA0002529675960000241
4.2.3受试样品对鱼胚畸形率的影响
表9受试样品对鱼胚畸形率的影响
Figure BDA0002529675960000242
5结论
本次实验条件下，样品1、样品2、样品3(12mg/ml)对鱼胚的酪氨酸酶活性抑制率分别为：72.27±3.67％、58.82±5.22％和51.71±5.85％。
由上述检测报告可知，本申请提供的组合物能够很好的抑制酪氨酸酶活性，且姜花提取物和高山玫瑰杜鹃花提取物对抑制能力影响较大。
本申请提供的抑制酪氨酸酶活性的组合物，安全无毒副作用，尤其适用于过敏性肌肤的护理，具有活血养颜、美白祛斑的功效，可提升肌肤光泽，使肌肤更加细腻白皙。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
此外，本领域的技术人员能够理解，尽管在此的一些实施例包括其它实施例中所包括的某些特征而不是其它特征，但是不同实施例的特征的组合意味着处于本发明的范围之内并且形成不同的实施例。例如，在上面的权利要求书中，所要求保护的实施例的任意之一都可以以任意的组合方式来使用。公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本发明的总体背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域技术人员所公知的现有技术。

Claims (10)

1.一种抑制酪氨酸酶活性的组合物，其特征在于，其原料以重量份数计，包括：
姜花提取物0.5-30份、杜鹃花提取物0.1-20份、黄芩提取物0.1-6份、尤加利提取物1-30份、大蒜提取物0.1-10份、人参皂甙Rg1 0.1-2份和人参皂甙Re 0.1-2份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述杜鹃花提取物包括高山玫瑰杜鹃花提取物。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述姜花提取物的制备方法包括：
将姜花用第一有机溶剂进行第一浸提得到姜花浸膏；
将所述姜花浸膏进行水洗得到姜花沉淀物，将所述姜花沉淀物用第二有机溶剂溶解，然后用大孔树脂洗脱得到滤液；
将所述滤液进行第一脱色、浓缩后用第三有机溶剂溶解姜花浓缩物，得到所述姜花提取物；
优选地，所述姜花在第一浸提前预先粉碎；
优选地，粉碎后的姜花的粒径小于等于20目；
优选地，所述第一有机溶剂、所述第二有机溶剂包括乙醇；
优选地，所述乙醇包括质量分数为95％的乙醇；
优选地，所述第一有机溶剂的用量为所述姜花的质量的8-12倍，所述第二有机溶剂的质量为所述姜花沉淀物的重量的4-6倍；
优选地，所述第三有机溶剂包括丙二醇；
优选地，所述第三有机溶剂的用量为所述姜花浓缩物的质量的4-6倍；
优选地，所述第一浸提的温度为65-70℃，时间为2-4h；
优选地，使用活性炭进行所述第一脱色。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述杜鹃花提取物的制备方法包括：
将杜鹃花用第四有机溶剂进行第二浸提得到杜鹃花浸膏；
将所述杜鹃花浸膏水洗得到杜鹃花沉淀物，将所述杜鹃花沉淀物用第五有机溶剂溶解，然后进行第二脱色、浓缩后用第六有机溶剂溶解杜鹃花浓缩物，得到所述杜鹃花提取物；
优选地，所述杜鹃花在第二浸提前预先粉碎；
优选地，粉碎后的杜鹃花的粒径小于等于20目；
优选地，所述第四有机溶剂、所述第五有机溶剂包括乙醇；
优选地，所述乙醇包括质量分数为95％的乙醇；
优选地，所述第四有机溶剂的用量为所述杜鹃花的质量的8-12倍，所述第五有机溶剂的质量为所述杜鹃花沉淀物的重量的4-6倍；
优选地，所述第六有机溶剂包括丙二醇；
优选地，所述第六有机溶剂的用量为所述浓缩物的质量的4-6倍；
优选地，所述第二浸提的温度为65-70℃，时间为2-4h；
优选地，使用活性炭进行所述第二脱色。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述尤加利提取物的制备方法包括：
将尤加利的原料与水混合后进行第一加热，收集尤加利馏出液，然后将所述尤加利馏出液中不溶于水的成分分离出来，得到尤加利粗提物；
将所述尤加利粗提物和氢化蓖麻油混合，进行第二加热后加入甘油硬脂酸酯、聚乙二醇-14M和水得到混合物，然后将所述混合物进行第一乳化、第一干燥得到所述尤加利提取物；
优选地，所述尤加利的原料包括尤加利的叶子和/或树皮；
优选地，所述尤加利的原料与水的质量比为1：(1.5-2.5)；
优选地，所述尤加利粗提物与所述氢化蓖麻油、所述甘油硬脂酸酯、所述聚乙二醇-14M、相应的水的质量比为1：(1.5-2.5)：(1.5-2.5)：(0.3-0.4)：(6-7)；
优选地，所述第一加热的温度为95-100℃，所述第二加热的温度为80-85℃，所述第二加热的时间为10-20min；
优选地，所述第一乳化包括：将所述混合物振荡4-6h，然后在40-60℃、18-22MPa条件下进行第一均质；
优选地，所述第一均质的次数为1-3次，每次时间为1-3min；
优选地，所述第一干燥采用喷雾干燥，所述喷雾干燥的进风温度为150-160℃、进料温度为60-70℃、出风温度为60-70℃；
优选地，所述第一干燥之后还包括：将所述第一干燥的产物过60-100目筛。
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述大蒜提取物的制备方法包括：
将大蒜与水混合后进行第三加热，收集大蒜馏出液，然后将所述大蒜馏出液中不溶于水的成分分离出来，得到大蒜粗提物；
将所述大蒜粗提物和氢化蓖麻油混合，进行第四加热后加入硬脂醇聚醚-21、聚乙二醇-14M和水得到混合料液，然后将所述混合料液进行第二乳化、第二干燥得到所述大蒜提取物；
优选地，所述大蒜与水的质量比为1：(1.5-2.5)；
优选地，所述大蒜粗提物与所述氢化蓖麻油、所述硬脂醇聚醚-21、所述聚乙二醇-14M、相应的水的质量比为1：(1.5-2.5)：(4-6)：(0.4-0.6)：(8-12)；
优选地，所述第三加热的温度为95-100℃，所述第四加热的温度为80-85℃，所述第四加热的时间为10-20min；
优选地，所述第二乳化包括：将所述混合料液振荡10-14h，然后在45-55℃、18-22MPa条件下进行第二均质；
优选地，所述第二均质的次数为1-3次，每次时间为1-3min；
优选地，所述第二干燥采用喷雾干燥，所述喷雾干燥的进风温度为150-160℃、进料温度为60-70℃、出风温度为60-70℃；
优选地，所述第二干燥之后还包括：将所述第二干燥的产物过60-100目筛。
7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述黄芩提取物包括黄芩的水提取物；
优选地，所述人参皂甙Rg1和所述人参皂甙Re均为单体含量大于等于90％的、从三七中提取的人参皂甙单体。
8.根据权利要求1-7任一项所述的组合物，其特征在于，还包括辅料0.1-20份。
9.一种权利要求1-8任一项所述的抑制酪氨酸酶活性的组合物的制备方法，其特征在于，包括：
将所述原料混合得到所述抑制酪氨酸酶活性的组合物。
10.一种化妆品，其特征在于，包括权利要求1-8任一项所述的抑制酪氨酸酶活性的组合物；
优选地，所述化妆品包括精华液剂型、膏霜剂型、乳液剂型和凝胶剂型。
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