CN111505171B - 一种鉴别三种药用黄精品种的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种鉴别三种药用黄精品种的方法，属于中药质量控制技术领域。本发明将三种药用黄精进行提取和衍生化处理后，利用气相色谱‑质谱对药用黄精中的代谢物进行分析检测，并通过多元统计学方法筛选三种药用黄精的差异代谢物，所述差异代谢物作为鉴别三种药用黄精品种的特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别。本发明提供的方法准确度以及可靠性高，实验结果可信度高，为三种药用黄精的品质鉴定和质量控制提供了科学依据，有助于快速、准确鉴别市售药用黄精的真伪以及品质。

Description

一种鉴别三种药用黄精品种的方法
技术领域
本发明涉及中药质量控制技术领域，尤其涉及一种鉴别三种药用黄精品种的方法。
背景技术
药用黄精是百合科黄精属的黄精(Polygonatum sibiricum Red.)、滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.)以及多花黄精(Polygonatum cyrtonemaHua.)的干燥根茎，富含多糖、甾体皂苷等药用活性成分，功效主要有补气养阴、健脾、润肺、益肾功能。但由于药用黄精块茎形态相似度较高，外观上难以鉴别，以次充好、以假乱真现象时有发生。因此，有必要提供一种有效的分析方法，以实现对药用黄精进行品质鉴定和质量控制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鉴别三种药用黄精品种的方法，本发明提供的方法准确度以及可靠性高，实验结果可信度高，为三种药用黄精的品质鉴定和质量控制提供了科学依据。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种鉴别三种药用黄精品种的方法，所述三种药用黄精为黄精、滇黄精和多花黄精，包括以下步骤：
(1)将黄精样品、滇黄精样品和多花黄精样品分别研磨后分散于甲醇中，得到黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液；
(2)将所述黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液分别与邻苯二酚的甲醇溶液混合，之后依次进行超声和第一固液分离，所得第一液体物料分别于氯仿-水混合溶剂中进行提取，之后经第二固液分离，所得第二液体物料分别为黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液；
(3)将所述黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液中的溶剂去除后分别与盐酸羟胺的吡啶溶液混合进行第一衍生化处理，之后与衍生化试剂混合进行第二衍生化处理，经第三固液分离，所得第三液体物料分别为黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液；其中，所述衍生化试剂包括N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷；
(4)以所述黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液作为待测样品进行气相色谱-质谱分析，并将所得数据进行多元统计学分析，根据所得特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别。
优选地，所述研磨的方式为液氮研磨；研磨后所得粉末过80目筛，取筛下物备用。
优选地，所述黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液中药用黄精与甲醇的用量比均为100mg：1.4mL；所述邻苯二酚的甲醇溶液中邻苯二酚的浓度为0.2mg/mL；所述黄精样品的甲醇分散液中黄精样品与邻苯二酚的甲醇溶液的用量比为100mg：60μL；
所述第一液体物料与氯仿-水混合溶剂中的氯仿以及水的体积比为1.4mL：750μL：1.4mL。
优选地，所述超声的温度为40℃，时间为30min；所述提取的方式为涡旋振荡1min。
优选地，所述盐酸羟胺的吡啶溶液中盐酸羟胺的浓度为20mg/mL，所述盐酸羟胺的吡啶溶液与黄精样品的提取液的体积比为60μL：1mL。
优选地，所述第一衍生化处理的温度为60℃，时间为120min。
优选地，所述衍生化试剂中N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的质量比为99:1，所述衍生化试剂与黄精样品的提取液的体积比为60μL：1mL。
优选地，所述第二衍生化处理的温度为60℃，时间为90min。
优选地，进行所述气相色谱-质谱分析时，气相色谱的操作条件包括：
DB-5石英毛细管柱60m×250μm×0.25μm；分流进样，进样量为1μL，分流比为10:1；进样口温度为280℃；离子源温度为250℃；接口温度为250℃；升温程序：初始温度为40℃，保持5min，以8℃/min速度升温至280℃，保持5min；载气为氦气，载气流速为1mL/min；溶剂延迟时间为14min；以m/z计，质量检测范围为33～600；
质谱的操作条件包括：
电喷雾电离源，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，全扫描方式，电子能量为70eV；以m/z计，四极杆扫描范围为35～780。
优选地，所述多元统计学分析包括主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析。
本发明提供了一种鉴别三种药用黄精品种的方法，本发明将三种药用黄精进行提取和衍生化处理后，利用气相色谱-质谱对药用黄精中的代谢物进行分析检测，并通过多元统计学方法筛选三种药用黄精的差异代谢物，所述差异代谢物作为鉴别三种药用黄精品种的特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别。本发明提供的方法准确度以及可靠性高，实验结果可信度高，为三种药用黄精的品质鉴定和质量控制提供了科学依据，有助于快速、准确鉴别市售药用黄精的真伪以及品质。
附图说明
图1是实施例1中的三种药用黄精样品的TIC谱图；
图2是实施例1中三种药用黄精样品的聚类分析图；
图3是实施例1中三种药用黄精样品的PCA得分图；
图4是实施例1中黄精与滇黄精OPLS-DA的S-plot图；
图5是实施例1中黄精与多花黄精OPLS-DA的S-plot图；
图6是实施例1中滇黄精与多花黄精OPLS-DA的S-plot图。
具体实施方式
本发明提供了一种鉴别三种药用黄精品种的方法，所述三种药用黄精为黄精、滇黄精和多花黄精，包括以下步骤：
(1)将黄精样品、滇黄精样品和多花黄精样品分别研磨后分散于甲醇中，得到黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液；
(2)将所述黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液分别与邻苯二酚的甲醇溶液混合，之后依次进行超声和第一固液分离，所得第一液体物料分别于氯仿-水混合溶剂中进行提取，之后经第二固液分离，所得第二液体物料分别为黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液；
(3)将所述黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液中的溶剂去除后分别与盐酸羟胺的吡啶溶液混合进行第一衍生化处理，之后与衍生化试剂混合进行第二衍生化处理，经第三固液分离，所得第三液体物料分别为黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液；其中，所述衍生化试剂包括N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷；
(4)以所述黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液作为待测样品进行气相色谱-质谱分析，并将所得数据进行多元统计学分析，根据所得特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别。
本发明将黄精样品、滇黄精样品和多花黄精样品分别研磨后分散于甲醇中，得到黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液。在本发明中，所述药用黄精为黄精、滇黄精和多花黄精；在本发明的实施例中，具体是采用一至三年生块茎，液氮速冻后置于-80℃低温冰箱中保存备用。在本发明中，所述研磨的方式优选为液氮研磨；研磨后所得粉末优选过80目筛，取筛下物备用。
在本发明中，所述黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液中药用黄精与甲醇的用量比优选均为100mg：1.4mL；所述甲醇使用前优选于-20℃预冷。在本发明的实施例中，以黄精样品为例，具体是将粒度满足要求的100mg黄精样品与1.4mL甲醇混合后涡旋振荡1min，得到黄精样品的甲醇分散液。在本发明中，滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液的配制方式与黄精样品的甲醇分散液的配制方式一致，在后续处理过程中，若无特殊说明，滇黄精样品以及多花黄精样品的处理方式均与黄精样品的处理方式一致，不再赘述。
得到黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液后，本发明将所述黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液分别与邻苯二酚的甲醇溶液混合，之后依次进行超声和第一固液分离，所得第一液体物料分别于氯仿-水混合溶剂中进行提取，之后经第二固液分离，所得第二液体物料分别为黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液。在本发明中，所述第一液体物料分别为黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液经上述与邻苯二酚的甲醇溶液混合、超声和第一固液分离后所得对应的三种料液，而非指三种料液的混合液。在本发明中，所述邻苯二酚的甲醇溶液中邻苯二酚的浓度优选为0.2mg/mL；所述黄精样品的甲醇分散液中黄精样品与邻苯二酚的甲醇溶液的用量比优选为100mg：60μL。在本发明中，所述邻苯二酚作为内标，有利于后续对药用黄精中的代谢物进行定量检测。在本发明的实施例中，以黄精样品为例，具体是将黄精样品的甲醇分散液与邻苯二酚的甲醇溶液混合后涡旋振荡1min，之后在密封条件下(例如可以采用石蜡膜将容器口密封)依次进行超声和第一固液分离。
在本发明中，所述超声的温度优选为40℃，时间优选为30min；所述提取的方式优选为涡旋振荡1min。在本发明中，所述第一固液分离的方式优选为离心，所述离心的转速优选为4000rpm，时间优选为20min。本发明优选取离心后所得上清液(即第一液体物料)与氯仿和水混合后进行提取，之后进行第二固液分离，所得第二液体物料分别为黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液。在本发明中，所述第一液体物料与氯仿以及水的用量比优选为1.4mL：750μL：1.4mL；所述水优选为超纯水，所述水在使用前优选于4℃预冷。在本发明中，所述第二固液分离的方式优选为离心，所述离心的转速优选为4000rpm，时间优选为20min；离心后所得上清液(即第二液体物料)分别为黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液。
得到黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液后，本发明将所述黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液中的溶剂去除后分别与盐酸羟胺的吡啶溶液混合进行第一衍生化处理，之后与衍生化试剂混合进行第二衍生化处理，经第三固液分离，所得第三液体物料分别为黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液；其中，所述衍生化试剂包括N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷。在本发明中，所述盐酸羟胺的吡啶溶液中盐酸羟胺的浓度优选为20mg/mL，所述盐酸羟胺的吡啶溶液与黄精样品的提取液的体积比优选为60μL：1mL。本发明对所述溶剂去除的方式没有特殊限定，采用氮气吹干即可。本发明优选将去除溶剂后所得剩余物与盐酸羟胺的吡啶溶液混合，在密封条件下涡旋振荡30s，之后进行第一衍生化处理。在本发明中，所述第一衍生化处理的温度优选为60℃，时间优选为120min。
所述第一衍生化处理完成后，本发明将所得体系与衍生化试剂混合进行第二衍生化处理，之后进行第三固液分离。在本发明中，所述衍生化试剂中N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)和三甲基氯硅烷(TMCS)的质量比优选为99:1，所述衍生化试剂与黄精样品的提取液的体积比优选为60μL：1mL。在本发明中，所述第二衍生化处理优选在密封条件下进行；所述第二衍生化处理的温度优选为60℃，时间优选为90min。在本发明中，所述第三固液分离的方式优选为离心，所述离心的转速优选为12000rpm，时间优选为10min；离心后所得上清液(即第三液体物料)分别为黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液。
得到黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液后，本发明以所述黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液作为待测样品进行气相色谱-质谱分析，并将所得数据进行多元统计学分析，根据所得特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别。在本发明中，进行所述气相色谱-质谱分析时，气相色谱的操作条件优选包括：
DB-5石英毛细管柱60m×250μm×0.25μm；分流进样，进样量为1μL，分流比为10:1；进样口温度为280℃；离子源温度为250℃；接口温度为250℃；升温程序：初始温度为40℃，保持5min，以8℃/min速度升温至280℃，保持5min；载气为氦气，载气流速为1mL/min；溶剂延迟时间为14min；以m/z计，质量检测范围为33～600；
质谱的操作条件优选包括：
电喷雾电离源，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，全扫描方式，电子能量为70eV；以m/z计，四极杆扫描范围为35～780。
在本发明中，完成所述气相色谱-质谱分析后，将所得数据进行多元统计学分析，得到所述三种药用黄精品种的特征性代谢产物的方法优选包括以下步骤：
将气相色谱-质谱分析后得到的原始数据经GCMSTranslator软件转换为CDF格式文件，之后利用R2.7.2软件进行初步处理(如滤噪、峰匹配、基线校准、面积归一化等，从而去除由于柱流失、样品制备中引起的杂质峰等外界因素的干扰)，然后在EXCEL软件中进行编辑，数据经过初步处理之后结合SPSS19.0软件进行聚类分析并导入Simca-p14.1软件中进行多元统计分析；其中，所述多元统计分析包括主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)；
通过PCA与OPLS-DA的S-plot筛选出VIP>1组分，并结合t检验，筛选出有统计学差异(p<0.05)的组分作为差异代谢物，所述差异代谢物作为鉴别三种药用黄精品种的特征性代谢产物。
在本发明的实施例中，黄精与滇黄精中筛选出13种差异代谢物，分别为N,N-二乙基甲酰胺、L-脯氨酸、吡咯烷酮、亮氨酸、L-异亮氨酸、磷酸、苹果酸、阿洛酮糖、山梨醇、果糖、葡萄糖、肌醇和蔗糖，即黄精与滇黄精中均含有上述13种差异代谢物；
黄精与多花黄精中筛选出19种差异代谢物，分别为特丁噻草隆、草酸、L-脯氨酸、乙酸,磺基,1-酰肼(9CI)、丙氨酸、十一烷、羟胺、丙二酸二甲酯、亮氨酸、L-异亮氨酸、磷酸、2-哌啶甲酸、L-焦谷氨酸、核糖、山梨醇、果糖、肌醇、蔗糖和1-硬脂酸单甘油酯，即黄精与多花黄精中均含有上述19种差异代谢物；
滇黄精与多花黄精中筛选出17种差异代谢物，分别为氰胺、特丁噻草隆、草酸、L-脯氨酸、丙氨酸、十一烷、羟胺、1,3-丙二醇、吡咯烷酮、磷酸、2-哌啶甲酸、L-焦谷氨酸、核糖、柠檬酸、山梨醇、肌醇和蔗糖，即滇黄精与多花黄精中均含有上述17种差异代谢物。
得到所述三种药用黄精品种的特征性代谢产物后，本发明根据所述特征性代谢产物可以实现三种药用黄精品种的鉴别；进一步地，根据各特征性代谢产物的含量，可以实现三种药用黄精的品质鉴定与质量控制，有助于鉴别市售药用黄精的真伪以及品质(如有效成分含量较高，则品质较好)。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1仪器与试药
1.1仪器：Agilent7000B-5977C气相-色谱质谱仪。
1.2试药：三种药用黄精(黄精、滇黄精与多花黄精)为一至三年生块茎，色谱级甲醇，色谱级吡啶，其他试剂均为分析纯，衍生化试剂和邻苯二酚购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
2三种药用黄精样品的制备
2.1三种药用黄精样品代谢物的提取
取三种药用黄精块茎(液氮速冻，并置于-80℃低温冰箱中保存)作为实验材料，将块茎于液氮中研磨至粉末状，过80目筛，取筛下粉末进行后续处理，每种药用黄精样品平行设置6份。取100mg粉末于2mL离心管中，加入1.4mL甲醇(-20℃预冷)，涡旋振荡1min，加入60μL邻苯二酚的甲醇溶液(邻苯二酚的浓度为0.2mg/mL)，再涡旋振荡1min；用石蜡膜将离心管口密封，放入超声清洗器中40℃超声30min；超声结束后4000rpm离心20min，取1.4mL上清液于10mL离心管中并加入750μL氯仿和1.4mL超纯水(4℃预冷)，涡旋振荡1min后4000rpm离心20min，吸取上层甲醇/水混合液1mL置于1.5mL离心管中，分别得到三种药用黄精样品的提取液。
2.2三种药用黄精样品代谢物的衍生化处理
用氮气吹干1.5mL离心管中的提取液，加入60μL盐酸羟胺的吡啶溶液(盐酸羟胺的浓度为20mg/mL)，用石蜡膜密封并涡旋振荡30s，置于烘箱中60℃条件下处理120min，随后加入60μL衍生化试剂(由N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)和三甲基氯硅烷(TMCS)组成，具体为99wt％BSTFA+1wt％TMCS)，用石蜡膜密封并于60℃条件下反应90min，反应结束后12000rpm离心10min，吸取上清液作为三种药用黄精样品的衍生液，置于进样瓶中，即得待测样品。
3三种药用黄精样品代谢物的检测
气相色谱条件：DB-5石英毛细管柱60m×250μm×0.25μm；分流进样，进样量为1μL，分流比为10:1；进样口温度为280℃；离子源温度为250℃；接口温度为250℃；升温程序：初始温度为40℃，保持5min，以8℃/min速度升温至280℃，保持5min；载气为氦气，载气流速为1mL/min；溶剂延迟时间为14min，质量检测范围(m/z)为33～600。
质谱条件：电喷雾电离(ESI)源，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，全扫描方式，电子能量为70eV；四极杆扫描范围(m/z)为35～780。
三种药用黄精样品代谢物检测所得TIC谱图如图1所示。
4数据处理及分析
将步骤3得到的GC-MS原始数据经GCMSTranslator软件转换为CDF格式文件，之后利用R2.7.2软件进行初步处理(如滤噪、峰匹配、基线校准、面积归一化等，从而去除由于柱流失、样品制备中引起的杂质峰等外界因素的干扰)，然后在EXCEL软件中进行编辑，数据经过初步处理之后结合SPSS19.0软件进行聚类分析并导入Simca-p14.1软件中进行多元统计分析，包括主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)，结果如图2～6所示。
图2为三种药用黄精样品的聚类分析图，由图2可知，三种药用黄精样品区分为明显的三类，说明三种药用黄精样品在聚类分析中可被明显区分。
图3为三种药用黄精样品的PCA得分图，其中，1代表多花黄精，2代表滇黄精，3代表黄精；图4为黄精与滇黄精OPLS-DA的S-plot图，图5为黄精与多花黄精OPLS-DA的S-plot图，图6为滇黄精与多花黄精OPLS-DA的S-plot图。由图3可知，黄精、滇黄精和多花黄精呈现明显的分离趋势，说明这三种药用黄精在代谢物成分上存在明显的差异，且R2X＝0.735，说明PCA模型拟合较好，预测准确度较高。由图4～6可知，黄精vs滇黄精(R2Y＝0.998，Q2＝0.963)、黄精vs多花黄精(R2Y＝0.998，Q2＝0.981)、滇黄精vs多花黄精(R2Y＝0.99，Q2＝0.952)的三组比较中R2Y与Q2都接近于1，说明OPLS-DA模型可解释度高。因此，代谢组学可以用于鉴别三种药用黄精品种。
进一步通过PCA与OPLS-DA的S-plot筛选出VIP>1组分，并结合t检验，筛选出有统计学差异(p<0.05)的组分作为差异代谢物。其中，黄精与滇黄精中筛选出13种差异代谢物，黄精与多花黄精中筛选出19种差异代谢物，滇黄精与多花黄精中筛选出17种差异代谢物(具体结果见表1)，这些差异代谢物可以作为特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别；同时根据各特征性代谢产物的含量，可以实现三种药用黄精的品质鉴定与质量控制。
表1三种药用黄精的特征性代谢产物
Figure BDA0002528732140000101
Figure BDA0002528732140000111
Figure BDA0002528732140000121
表1中，*代表显著差异，0.01<p<0.05；**代表极显著差异，p≤0.01。
由以上实施例可知，本发明在上述条件下将三种药用黄精进行提取和衍生化处理，利用气相色谱-质谱能够更全面的检测药用黄精中的非挥发性代谢物，提高检测的准确性；三种药用黄精的分离度高，峰形好；三种药用黄精被明显区分，且构建的模型可解释度与预测准确性高，为三种药用黄精品质鉴定和质量控制提供了快速、准确的方法，有助于鉴别市售药用黄精的真伪以及品质。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种鉴别三种药用黄精品种的方法，所述三种药用黄精为黄精、滇黄精和多花黄精，包括以下步骤：
(1)将黄精样品、滇黄精样品和多花黄精样品分别研磨后分散于甲醇中，得到黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液；
(2)将所述黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液分别与邻苯二酚的甲醇溶液混合，之后依次进行超声和第一固液分离，所得第一液体物料分别于氯仿-水混合溶剂中进行提取，之后经第二固液分离，所得第二液体物料分别为黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液；
(3)将所述黄精样品的提取液、滇黄精样品的提取液和多花黄精样品的提取液中的溶剂去除后分别与盐酸羟胺的吡啶溶液混合进行第一衍生化处理，之后与衍生化试剂混合进行第二衍生化处理，经第三固液分离，所得第三液体物料分别为黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液；其中，所述衍生化试剂包括N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷；
(4)以所述黄精样品的衍生液、滇黄精样品的衍生液和多花黄精样品的衍生液作为待测样品进行气相色谱-质谱分析，并将所得数据进行多元统计学分析，根据所得特征性代谢产物，实现三种药用黄精品种的鉴别。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述研磨的方式为液氮研磨；研磨后所得粉末过80目筛，取筛下物备用。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述黄精样品的甲醇分散液、滇黄精样品的甲醇分散液和多花黄精样品的甲醇分散液中药用黄精与甲醇的用量比均为100mg：1.4mL；所述邻苯二酚的甲醇溶液中邻苯二酚的浓度为0.2mg/mL；所述黄精样品的甲醇分散液中黄精样品与邻苯二酚的甲醇溶液的用量比为100mg：60μL；
所述第一液体物料与氯仿-水混合溶剂中的氯仿以及水的体积比为1.4mL：750μL：1.4mL。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述超声的温度为40℃，时间为30min；所述提取的方式为涡旋振荡1min。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述盐酸羟胺的吡啶溶液中盐酸羟胺的浓度为20mg/mL，所述盐酸羟胺的吡啶溶液与黄精样品的提取液的体积比为60μL：1mL。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述第一衍生化处理的温度为60℃，时间为120min。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂中N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的质量比为99:1，所述衍生化试剂与黄精样品的提取液的体积比为60μL：1mL。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述第二衍生化处理的温度为60℃，时间为90min。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行所述气相色谱-质谱分析时，气相色谱的操作条件包括：
DB-5石英毛细管柱60m×250μm×0.25μm；分流进样，进样量为1μL，分流比为10:1；进样口温度为280℃；离子源温度为250℃；接口温度为250℃；升温程序：初始温度为40℃，保持5min，以8℃/min速度升温至280℃，保持5min；载气为氦气，载气流速为1mL/min；溶剂延迟时间为14min；以m/z计，质量检测范围为33～600；
质谱的操作条件包括：
电喷雾电离源，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，全扫描方式，电子能量为70eV；以m/z计，四极杆扫描范围为35～780。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多元统计学分析包括主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析。
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