CN111487420A - 一种人血红蛋白的胶体金试纸条及其制备方法和用途 - Google Patents

一种人血红蛋白的胶体金试纸条及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111487420A
CN111487420A CN202010071549.5A CN202010071549A CN111487420A CN 111487420 A CN111487420 A CN 111487420A CN 202010071549 A CN202010071549 A CN 202010071549A CN 111487420 A CN111487420 A CN 111487420A
Authority
CN
China
Prior art keywords
human hemoglobin
monoclonal antibody
human
test strip
mouse anti
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010071549.5A
Other languages
English (en)
Inventor
荆志强
唐小梅
穆春雷
李�灿
韩晓亮
王建铭
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Xiandai Gaoda Biotechnology Co ltd
Biochain Beijing Science and Technology Inc
Original Assignee
Beijing Xiandai Gaoda Biotechnology Co ltd
Biochain Beijing Science and Technology Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Xiandai Gaoda Biotechnology Co ltd, Biochain Beijing Science and Technology Inc filed Critical Beijing Xiandai Gaoda Biotechnology Co ltd
Publication of CN111487420A publication Critical patent/CN111487420A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/721—Haemoglobin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57419—Specifically defined cancers of colon
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • G01N2333/805—Haemoglobins; Myoglobins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/06—Gastro-intestinal diseases
    • G01N2800/065—Bowel diseases, e.g. Crohn, ulcerative colitis, IBS

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本申请提供了一种人血红蛋白胶体金试纸条，其特征在于，在所述试纸条上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫含有第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit‑MAb 1，所述反应膜上还有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit‑MAb 2。本申请制备的人血红蛋白胶体金试纸条，除了可以在医院完成常规检测外，还可以带至家中自行完成检测，可以准确定量，量化了样本检测指标，避免了人工判读的主观性，具有方便、有效的特点，更加适用于对下消化道出血性疾病及结直肠癌的临床诊断和疗效观察，降低癌症死亡率，提高人们生活质量。

Description

一种人血红蛋白的胶体金试纸条及其制备方法和用途
技术领域
本申请属于肿瘤标志物检测领域，具体地，本申请涉及用于检测人血红蛋白的胶体金纸条及其制备方法和用途。
背景技术
据《中国卫生和计划生育统计年鉴2015》数据显示，在我国由于疾病引起死亡的人数中，癌症已成为第一因素。尤其在城市人口中，癌症导致的死亡人数以27％的比例远超心脏病。全国每天的癌症新发病例超过1万人，因此，癌症已经成为影响我国国民健康的重要杀手。但是，在我国癌症发病率与世界水平相当的情况下，死亡率高于世界水平(中国癌症死亡率高于全球平均水平17％)。这其中除了有因为我国特色高发肿瘤是国际上治疗水平较低的消化道肿瘤外，更重要的原因是我国癌症一经发现多处于中晚期。据Cancerstatistics，2018数据显示，美国所有癌症5年生存率白种人为68％，黑种人为61％。相对应的中国肿瘤患者5年生存率仅有36.9％。
导致中国肿瘤患者死亡率和5年生存率低下的重要因素就是癌症的早前诊断尚未得到充分的重视。有希望治愈的癌症，由于直至癌症晚期才做出诊断，导致治疗效果大打折扣，造成患者的过早死亡。以美国男性高发癌症——前列腺癌检测为例，自80年代后期在无症状人群中采用前列腺特异性抗原(PSA)进行筛查后，直接导致2010～2013年前列腺癌以每年大于10％的速率下降。而美国50岁及以上成年人由于使用结肠镜的比例大幅度的上升(由2000年21％上升为2015年的60％)，导致结直肠癌的发病率下降20％左右。因此，癌症的早期诊断和早期治疗，对无症状高风险人群以及提高癌症患者生存率有着十分重要的意义，亦为减少政府卫生公共事业费用支出以及减轻患者家庭负担带来巨大福音。
而由于结肠镜具有创伤、容易使肠道感染及肠镜检查费用偏高、居民健康知识薄弱，多数是有明显不适症状再去医院检查等特点，致使在我国很难将结肠镜用于普通人群的结直肠癌筛查。而被世界卫生组织和世界胃肠镜检查协会推荐作为粪便潜血试验的胶体金免疫层析试纸条目前均是定性试纸条，所测结果仅显示定性结果，且因不同人的视觉偏差等影响，致使目前其并没有在家中测试、使用、推广。而本发明中的一种人血红蛋白的胶体金试纸条以及含有该试纸条的试剂盒，既具备大型的POCT多功能免疫检测仪器的定量的功能，又可以进行半定量、定性检测，具备取样简便、操作方便、仪器设备简单便携、使用成本低的特点，完全符合我国目前的现状，可广泛用于结直肠癌的筛查。
发明内容
本申请要解决的技术问题是，临床使用结直肠癌和消化道出血性疾病的筛查诊断的影像学技术，不能够普遍用于基层医疗系统及家庭，假阳性率高，且无法对结直肠癌和消化道出血性疾病病人的病情进行持续性的监测、做出预后判断。目前对结直肠癌和消化道出血性疾病的早期诊断尚缺乏特异性的实验室检测方法。
因此，迫切需要研发一种能够普遍用于基层医疗系统及家庭，准确定量人血红蛋白，有效、方便的结直肠癌和消化道出血性疾病早期诊断方法。
基于现有技术的不足，本申请的目的在于提供一种人血红蛋白的胶体金试纸条，本申请还提供了该试纸条的制备方法及其在制备癌症和消化道出血性疾病检测试剂盒中的用途。
具体来说，本申请涉及如下内容：
1.一种人血红蛋白胶体金试纸条，其特征在于，在所述试纸条上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫含有第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1，所述反应膜上还有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2。
2.如第1项所述的试纸条，其特征在于，所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1是靶向人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1不同的抗体。
3.如第1或2项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为0.1-0.583μg/cm2，优选为0.15～0.5μg/cm2，进一步优选为0.2～0.416μg/cm2，最优选为0.25～0.333μg/cm2。
4.如第1～3中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上Triton X-100的含量为0.01～0.09mg/cm2，优选为0.02～0.08mg/cm2，进一步优选为0.03～0.07mg/cm2，最优选为0.04～0.06mg/cm2。
5.如第1～4中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为3～30μg/cm2，优选为6～24μg/cm2，进一步优选为9～18μg/cm2，最优选为12～15μg/cm2。
6.如第1～5中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条上的检测线为1～3条，优选为1条。
7.一种人血红蛋白胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
制备胶体金颗粒；
将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1结合，形成胶体金标记的鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物；
将所述鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物在玻璃纤维素膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条。
8.如第7项所述的制备方法，其特征在于，所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1是靶向人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1不同的抗体。
9.如第7或8项所述的制备方法，其特征在于，所述将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的质量比为8.57～50:1，优选为10～33.33:1,进一步优选为12～25:1最优选为15～20:1。
10.如第7～9中任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述鼠抗人血红蛋白单克隆抗体胶体金结合物在玻璃纤维素膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为10～58.33μg/mL，优选为15～50μg/mL，进一步优选为20～41.67μg/mL,最优选为25～33.33μg/mL。
11.如第10项所述的制备方法，其特征在于，所述金结合物重悬液含有Triton X-100，所述Triton X-100的含量为1～9mg/mL，优选为2～8mg/mL，进一步优选为3～7mg/mL，最优选为4～6mg/mL。
12.如第7～11中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液中第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为0.3～3.0mg/mL，优选为0.6～2.4mg/mL，进一步优选为0.9～1.8mg/mL，最优选为1.2～1.5mg/mL。
13.如第7～12中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述将含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成1～3条检测线，优选为1条。
14.如第1-6中任一项所述的试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
制备胶体金颗粒；
将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1结合，形成胶体金标记的鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物；
将所述鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物在玻璃纤维素膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条。
15.如第1-6中任一项所述的试纸条在制备下消化道出血性疾病和癌症检测试剂盒中的用途，其特征在于，所述下消化道出血性疾病为腺瘤、息肉，所述癌症为结直肠癌。
16.如第15项所述的用途，其特征在于，所述试剂盒用于检测粪便样本。
17.如第15或16项所述的用途，其特征在于，所述下消化道出血性疾病和癌症检测试剂盒利用下述步骤来进行检测：
将一定量的检测样本滴加到试纸条的样本垫；
一段时间后，将试纸条插入检测仪中，判读结果。
18.如第17项所述的用途，其特征在于，所述检测样本的用量为70～120μL。
19.如第17项所述的用途，其特征在于，所述一段时间为5～10min。
20.一种消化道出血性疾病检测试剂盒，所述试剂盒包含第1-6项中任一项所述的试纸条或者利用第7-13中任一项所述的方法制备的试纸条。
21.如第20项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于下消化道出血性疾病和癌症的检测，所述下消化道出血性疾病为腺瘤、息肉，所述癌症为结直肠癌。
22.如第21项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测粪便样本。
附图说明
图1本申请的胶体金试纸条的结构图。
附图标记：
1样本垫 5PVC胶板
2金结合物垫 6检测线
3反应膜 7质控线
4吸收垫
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本申请，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本申请，并非用于限制本申请。
除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本申请还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本申请作进一步的说明，但不用来限制本申请的范围。
如图1所示，在本申请的人血红蛋白胶体金试纸条上，从加样端开始依次形成有样本垫1，金结合物垫2，反应膜3和吸收垫4。其中反应膜3上有检测线6和质控线7。所述样本垫材质为玻璃纤维素膜，用于滴加检测样本。所述金结合物垫材质为玻璃纤维素膜。所述反应膜材质为硝酸纤维素膜。所述检测线为1～3条，例如可以是1条，2条或3条，优选为1条。
具体的，金结合物垫2是在玻璃纤维素膜上喷涂胶体金标记的第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物形成的。金结合物垫2含第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1，第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1是靶向人血红蛋白的抗体，含量为0.1-0.583μg/cm2，优选为0.15～0.5μg/cm2，进一步优选为0.2～0.416μg/cm2，最优选为0.25～0.333μg/cm2。金结合物垫2还可含有酪蛋白钠，含量为0.0334～0.334mg/cm2。金结合物垫2还可含有Triton X-100，含量为0.01～0.09mg/cm2，优选为0.02～0.08mg/cm2，进一步优选为0.03～0.07mg/cm2，最优选为0.04～0.06mg/cm2。具体的，反应膜3上喷涂，含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液，形成检测线6；和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液，形成质控线7。反应膜3上第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2可以是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1不同的抗体，也可以是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1相同的抗体，含量为3～30μg/cm2，优选为6～24μg/cm2，进一步优选为9～18μg/cm2，最优选为12～15μg/cm2。
本申请还提供了一种检测人血红蛋白胶体金试纸条的制备方法，所述方法包括：制备胶体金颗粒；将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1结合，形成胶体金标记的第一鼠抗人血红蛋白抗体Fit-MAb 1胶体金结合物；将第一鼠抗人血红蛋白抗体Fit-MAb 1胶体金结合物在玻璃纤维素膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成检测线和质控线；将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条。将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白抗体Fit-MAb 1结合，胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的质量比为8.57～50:1，优选为10～33.33:1，进一步优选为12～25:1最优选为15～20:1。将第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物在玻璃纤维素膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为10～58.33μg/mL，优选为15～50μg/mL,进一步优选为20～41.67μg/mL,最优选为25～33.33μg/mL。将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1结合，包括使用酪蛋白钠作为稳定剂，与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的质量比为285.71～1666.67:1。金结合物重悬液含有Triton X-100，Triton X-100的含量为1～9mg/mL，优选为2～8mg/mL，进一步优选为3～7mg/mL，最优选为4～6mg/mL。含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液中第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为0.3～3.0mg/mL，优选为0.6～2.4mg/mL，进一步优选为0.9～1.8mg/mL，最优选为1.2～1.5mg/mL。也可用Tween-20作为表面活性剂。
在本文中使用的所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1是靶向人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2可以是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1不同的抗体，也可以是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1相同的抗体，优选为靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1不同的抗体。例如，第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1可以是购自杭州贤至生物科技有限公司的由2C11克隆株的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，或奥创生物技术(山东)有限公司的Ab3或Ab1或Ab11克隆株的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2可以是购自杭州贤至生物科技有限公司的由10C4克隆株的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，或奥创生物技术(山东)有限公司的Ab4或Ab2或Ab10克隆株的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
本申请还提供了所述的试纸条在制备下消化道出血性疾病和癌症检测试剂盒中的用途，其特征在于，所述下消化道出血性疾病为腺瘤、息肉，所述癌症为结直肠癌。所述试剂盒用于检测粪便样本。所述下消化道出血性疾病和癌症检测试剂盒利用下述步骤来进行检测：将一定量的检测样本滴加到试纸条的样本垫；一段时间后，将试纸条插入检测仪中，判读结果。所述检测样本的用量为70-120μL，例如可以是70μL，80μL，90μL，100μL，110μL，120μL。所述一段时间为5-10min，例如可以是5min，6min，7min，8min，9min，10min。
所述检测仪可为半定量检测仪。可以进行半定量或定性检测。
检测结果的判断标准如下：
其中，
a)结果大于200ng/mL：仪器显示阳性；
b)结果≥80ng/mL，≤200ng/mL：仪器显示可疑；
c)结果小于80ng/mL：仪器显示阴性；
d)无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
所述检测仪可为定量检测仪。检测结果的判断标准如下：
其中，
正常检测时，POCT多功能免疫检测仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，单位为：ng/mL。
本申请还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含上述试纸条或利用上述方法制备的试纸条。所述试剂盒用于下消化道出血性疾病和癌症的检测，所述下消化道出血性疾病为腺瘤、息肉，所述癌症为结直肠癌。所述试剂盒用于检测粪便样本。
本申请制备的试纸条检测时需用其配套的样本缓冲液进行取样、稀释：用采便器的采便棒三点采样(共约10mg～50mg，相当于火柴头大小，以全部覆盖采便棒螺旋沟槽为最佳)加到采便器中(2ml样本缓冲液)，将盖拧紧，与样本缓冲液充分混匀，再点样。
对于样本缓冲液没有具体的限定，例如可以使用Tris缓冲液等缓冲体系，只要是不会影响样品检测的缓冲液体系即可。
本申请制备的试纸条和试剂盒能够有效的检测下消化道出血性疾病和癌症，并且具有很高的灵敏性和特异性。其中，结直肠癌的灵敏性可以高达70.00％以上，甚至可以高达90％以上，在优选条件下可以高达93％以上，在正常人中的特异性可以高达75％以上，甚至可以高达95％以上，在优选条件下可以高达98.00％以上。下消化道出血性疾病的灵敏性在优选条件下可以高达33％以上，在正常人中的特异性在优选条件下可以高达96％以上。
在本申请中，灵敏性是指患有明确临床疾病的患者的样本，其检测结果呈阳性的比率。正常人中的特异性是指没有特定临床疾病的筛查人群的样本，其检测结果呈阴性的比率。
实施例
实施例1
在下述实施例中，除非另外说明，实施例中使用的物质均为市售的产品。
(1)制备胶体金颗粒
取氯金酸1.0g，平衡至室温，量取2.0mL纯化水，加入装有氯金酸的玻璃瓶中，反复吹打至氯金酸完全溶解。将溶解的氯金酸倒入容器中，并用纯化水反复冲洗氯金酸玻璃瓶5次，洗液倒回容器中。用纯化水将溶液定容至10.0mL。盖紧瓶盖，充分摇晃15min，混合均匀，配制成10％的氯金酸溶液。
量取10％氯金酸溶液0.3mL，加入到100.0mL纯化水中，边加热边搅拌至沸腾。量取0.54mL的10％柠檬酸三钠溶液，迅速、一次性加入到沸腾的氯金酸溶液中，继续加热煮沸2min，关掉热源用预热加热5min。冷却至室温后加纯化水定容至100.0mL，得到含有胶体金颗粒的溶液。
(2)第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb1和第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2
在本实施例以及下述实施例中，使用了由杭州贤至生物科技有限公司销售的抗体，其中第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1是购买自杭州贤至生物科技有限公司的由2C11克隆株的杂交瘤细胞分泌的，第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2是购买自杭州贤至生物科技有限公司的由10C4克隆株的杂交瘤细胞分泌的。
(3)胶体金标记的鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物的制备
取100.0mL(0.03g)胶体金于三角瓶中，准确加入2.0mL 0.1M的碳酸钾溶液，混匀，静置10min。取0.6mg步骤(2)中的第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1，在快速搅拌条件下，将第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1逐滴加入到三角瓶中，室温放置40min。取10.0mL 10％酪蛋白溶液，在快速搅拌条件下，逐滴加入到三角瓶中，室温静置15min。得到胶体金标记的第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物。
(4)金结合物垫的制备
将上述胶体金结合物在12000rpm，4℃离心40min，小心弃去上清液，加入胶体金结合物重悬液至原体积60％(60.0mL)，使得复溶后第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb1的含量为10μg/mL，将复溶液在玻璃纤维素膜上喷涂，喷涂量为0.01mL/cm2，喷涂完毕后置于干燥间干燥5h即得金结合物垫，之后于室温干燥器内保存。其中，胶体金结合物重悬液的制备如下：
称取硼酸1.2375g，硼砂2.86g，蔗糖500.0g，牛血清白蛋白60.00g，Triton X-1001g，加纯化水700.0mL，搅拌使充分溶解后，加入浓盐酸适量，搅拌均匀，调节pH至8.8±0.1。充分搅拌溶解后定容至1000.0mL。
(5)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜。
取步骤(2)中的第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb23 mg，加入到5.0mL0.05M PBS中，充分混匀后用0.05MPBS缓冲液定容至终体积10.0mL，使第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的终浓度为0.3mg/mL。将含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液按照喷涂量10μL/cm2喷涂到硝酸纤维素膜上，形成检测线1条。
取羊抗鼠IgG多克隆抗体(来源于洛阳佰泰科生物技术有限公司)20.0mg，加入到5.0mL 0.05M PBS缓冲液中，充分混匀后用0.05MPBS缓冲液定容至终体积10.0mL，使羊抗鼠IgG多克隆抗体的终浓度为2.0mg/mL。将含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液按照喷涂量10μL/cm2喷涂到硝酸纤维素膜上，形成质控线。将包被完毕检测线和质控线的反应膜放入干燥车间干燥5h。
(6)将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条。
经计算，制备得到的试纸条上，金结合物垫上第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为0.1μg/cm2，反应膜上第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为3μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量为0.01mg/cm2。
实施例2
(1)制备胶体金颗粒
制备步骤与实施例1相同。
(2)第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1和第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2
使用的抗体与实施例1相同。
(3)胶体金标记的第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物的制备
与实施例1中的区别在于，取1.5mg第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1。其它反应条件与实施例1相同。
(4)金结合物垫的制备
与实施例1中的区别在于，使得复溶后第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为25.0μg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(5)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜。
与实施例1中的区别在于，使第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的终浓度为1.2mg/mL。形成的检测线条数为2条。其它反应条件与实施例1相同。
(6)与实施例1中的步骤相同。
经计算，制备得到的试纸条上，金结合物垫上第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为0.25μg/cm2，反应膜上第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为12μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量为0.01mg/cm2。
实施例3
(1)制备胶体金颗粒
制备步骤与实施例1相同。
(2)第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1和第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2
使用的抗体与实施例1相同。
(3)胶体金标记的第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物的制备
与实施例1中的区别在于，取2.0mg第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1。其它反应条件与实施例1相同。
(4)金结合物垫的制备
与实施例1中的区别在于，使得复溶后第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为33.3μg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(5)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜。
与实施例1中的区别在于，使第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的终浓度为1.5mg/mL。形成的检测线条数为2条。其它反应条件与实施例1相同。
(6)与实施例1中的步骤相同。
经计算，制备得到的试纸条上，金结合物垫上第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为0.333μg/cm2，反应膜上第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为15μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量为0.01mg/cm2。
实施例4
(1)制备胶体金颗粒
制备步骤与实施例1相同。
(2)第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb1和第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb2
使用的抗体与实施例1相同。
(3)胶体金标记的第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb1胶体金结合物的制备
与实施例1中的区别在于，取3.5mg第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb1。其它反应条件与实施例1相同。
(4)金结合物垫的制备
与实施例1中的区别在于，使得复溶后第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb1的含量为58.3μg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(5)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜。
与实施例1中的区别在于，使第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的终浓度为3.0mg/mL。形成的检测线条数为3条。其它反应条件与实施例1相同。
(6)与实施例1中的步骤相同。
经计算，制备得到的试纸条上，金结合物垫上第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为0.583μg/cm2，反应膜上第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为30μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量为0.01mg/cm2。
上述4个实施例制备试纸条的具体的反应条件如表1所示。
表1.不同实施例制备试纸条的反应条件
Figure BDA0002377434030000151
实施例5人血红蛋白在结直肠癌患者和正常健康人样本中的检测
将实施例1中制备的试纸条，用于结直肠癌患者的半定量检测。
具体地，将实施例1制备的试纸条插入半定量检测仪器(型号GD-010)中，以30例结直肠癌治疗前的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
其中，
a)结果大于200ng/mL：仪器显示阳性；
b)结果≥80ng/mL，≤200ng/mL：仪器显示可疑；
c)结果小于80ng/mL：仪器显示阴性；
d)无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
最后，测得30例结直肠癌治疗前粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表2所示。根据表2的检测结果，本试纸条检测结直肠癌的灵敏性为73.33％(22/30)，在正常人中的特异性为98.33％(59/60)。
表2.结直肠癌治疗前粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果
样本编号 检测结果 样本编号 检测结果 样本编号 检测结果
非正常人-1 阳性 正常人-1 阴性 正常人-31 阴性
非正常人-2 阳性 正常人-2 阴性 正常人-32 阴性
非正常人-3 阳性 正常人-3 阴性 正常人-33 阴性
非正常人-4 阴性 正常人-4 阴性 正常人-34 阴性
非正常人-5 阳性 正常人-5 阴性 正常人-35 阴性
非正常人-6 阳性 正常人-6 阴性 正常人-36 阴性
非正常人-7 阴性 正常人-7 阴性 正常人-37 阴性
非正常人-8 阳性 正常人-8 阴性 正常人-38 阴性
非正常人-9 阳性 正常人-9 阴性 正常人-39 阴性
非正常人-10 阳性 正常人-10 阴性 正常人-40 阴性
非正常人-11 可疑 正常人-11 阴性 正常人-41 阴性
非正常人-12 阳性 正常人-12 阴性 正常人-42 阴性
非正常人-13 阳性 正常人-13 阴性 正常人-43 阴性
非正常人-14 阴性 正常人-14 阴性 正常人-44 可疑
非正常人-15 阴性 正常人-15 阴性 正常人-45 阴性
非正常人-16 阳性 正常人-16 阴性 正常人-46 阴性
非正常人-17 阳性 正常人-17 阴性 正常人-47 阴性
非正常人-18 可疑 正常人-18 阴性 正常人-48 阴性
非正常人-19 阳性 正常人-19 阴性 正常人-49 阴性
非正常人-20 阳性 正常人-20 阴性 正常人-50 阴性
非正常人-21 阴性 正常人-21 阴性 正常人-51 阴性
非正常人-22 阳性 正常人-22 阴性 正常人-52 阴性
非正常人-23 阳性 正常人-23 阴性 正常人-53 阴性
非正常人-24 阴性 正常人-24 阴性 正常人-54 阴性
非正常人-25 阳性 正常人-25 阴性 正常人-55 阴性
非正常人-26 阳性 正常人-26 阴性 正常人-56 阴性
非正常人-27 阴性 正常人-27 阴性 正常人-57 阴性
非正常人-28 阳性 正常人-28 阴性 正常人-58 阴性
非正常人-29 阳性 正常人-29 阴性 正常人-59 阴性
非正常人-30 阴性 正常人-30 阴性 正常人-60 阴性
实施例6血红蛋白在结直肠癌患者和正常健康人样本中的检测
将实施例2制备的试纸条，用于结直肠癌患者的定量检测。
具体地，将实施例2备的试纸条插入定量检测仪器(POCT多功能免疫检测仪，型号GD-010)中，以30例结直肠癌治疗前的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
正常检测时，POCT多功能免疫检测仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，单位为：ng/mL。
最后，测得30例结直肠癌治疗前粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表3示。根据表3检测结果(检测结果大于200ng/mL为阳性，小于等于80ng/mL为阴性)，本试纸条检测结直肠癌的灵敏性为83.33％(25/30)，在正常人中的特异性为98.33％(59/60)。
表3.结直肠癌治疗前粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果(ng/mL)
Figure BDA0002377434030000171
Figure BDA0002377434030000181
实施例7血红蛋白在结直肠癌患者和正常健康人样本中的检测
将实施例3制备的试纸条，用于结直肠癌患者的定量检测。
具体地，将实施例3备的试纸条插入定量检测仪器(POCT多功能免疫检测仪，型号GD-010)中，以30例结直肠癌治疗前的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
正常检测时，POCT多功能免疫检测仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，单位为：ng/mL。
最后，测得30例结直肠癌治疗前粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表4示。根据表4检测结果(检测结果大于200ng/mL为阳性，小于等于80ng/mL为阴性)，本试纸条检测结直肠癌的灵敏性为90.0％(27/30)，在正常人中的特异性为96.67％(58/60)。
表4.结直肠癌治疗前粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果(ng/mL)
Figure BDA0002377434030000182
Figure BDA0002377434030000191
实施例8血红蛋白在结直肠癌患者和正常健康人样本中的检测
将实施例4制备的试纸条，用于结直肠癌患者的定量检测。
具体地，将实施例4备的试纸条插入定量检测仪器(POCT多功能免疫检测仪，型号GD-010)中，以30例结直肠癌治疗前的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
正常检测时，POCT多功能免疫检测仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，单位为：ng/mL。
最后，测得30例结直肠癌治疗前粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表5示。根据表5检测结果(检测结果大于200ng/mL为阳性，小于等于80ng/mL为阴性)，本试纸条检测结直肠癌的灵敏性为93.33％(28/30)，在正常人中的特异性为78.33％(47/60)。
表5.结直肠癌治疗前粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果(ng/mL)
样本编号 检测结果 样本编号 检测结果 样本编号 检测结果
非正常人-1 665.08 正常人-1 ＜30 正常人-31 ＜30
非正常人-2 389.56 正常人-2 58.35 正常人-32 86.94
非正常人-3 439.02 正常人-3 42.17 正常人-33 48.02
非正常人-4 227.62 正常人-4 40.42 正常人-34 ＜30
非正常人-5 521.34 正常人-5 ＜30 正常人-35 74.16
非正常人-6 469.47 正常人-6 99.08 正常人-36 89.74
非正常人-7 88.06 正常人-7 ＜30 正常人-37 59.23
非正常人-8 1212.33 正常人-8 59.55 正常人-38 82.36
非正常人-9 396.02 正常人-9 67.34 正常人-39 49.08
非正常人-10 485.49 正常人-10 126.09 正常人-40 ＜30
非正常人-11 262.39 正常人-11 58.24 正常人-41 73.09
非正常人-12 1455.07 正常人-12 ＜30 正常人-42 71.22
非正常人-13 564.41 正常人-13 68.33 正常人-43 ＜30
非正常人-14 329.65 正常人-14 ＜30 正常人-44 208.54
非正常人-15 68.21 正常人-15 58.36 正常人-45 118.69
非正常人-16 411.63 正常人-16 44.12 正常人-46 74.99
非正常人-17 523.56 正常人-17 ＜30 正常人-47 44.36
非正常人-18 277.05 正常人-18 67.03 正常人-48 64.52
非正常人-19 1366.24 正常人-19 55.66 正常人-49 93.51
非正常人-20 550.27 正常人-20 68.83 正常人-50 105.31
非正常人-21 116.03 正常人-21 57.69 正常人-51 63.16
非正常人-22 264.35 正常人-22 ＜30 正常人-52 120.47
非正常人-23 771.58 正常人-23 115.72 正常人-53 52.36
非正常人-24 51.57 正常人-24 36.43 正常人-54 88.09
非正常人-25 331.55 正常人-25 58.97 正常人-55 47.08
非正常人-26 688.45 正常人-26 ＜30 正常人-56 90.66
非正常人-27 255.69 正常人-27 48.25 正常人-57 76.72
非正常人-28 446.53 正常人-28 49.96 正常人-58 51.07
非正常人-29 1056.15 正常人-29 ＜30 正常人-59 44.11
非正常人-30 401.22 正常人-30 62.13 正常人-60 68.33
实施例9血红蛋白在腺瘤和正常健康人样本中的半定量检测
将实施例3制备的试纸条，用于腺瘤患者的半定量检测。
具体地，将实施例3备的试纸条插入半定量检测仪器(POCT多功能免疫检测仪，型号GD-010)中，以30例腺瘤的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
其中，
a)结果大于200ng/mL：仪器显示阳性；
b)结果≥80ng/mL，≤200ng/mL：仪器显示可疑；
c)结果小于80ng/mL：仪器显示阴性；
d)无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
最后，测得30例腺瘤粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表2所示。根据表2的检测结果，本试纸条检测腺瘤的灵敏性为33.33％(10/30)，在正常人中的特异性为96.67％(58/60)。
表6.腺瘤患者粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果
Figure BDA0002377434030000211
Figure BDA0002377434030000221
实施例10血红蛋白在腺瘤和正常健康人样本中的定量检测
将实施例3制备的试纸条，用于腺瘤患者的定量检测。
具体地，将实施例3制备的试纸条插入定量检测仪器(POCT多功能免疫检测仪，型号GD-010)中，以30例腺瘤的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
正常检测时，POCT多功能免疫检测仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，单位为：ng/mL。
最后，测得30例腺瘤患者粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表4示。根据表4检测结果(检测结果大于200ng/mL为阳性，小于等于80ng/mL为阴性)，本试纸条检测腺瘤的灵敏性为33.33％(10/30)，在正常人中的特异性为96.67％(58/60)。
表7.腺瘤患者粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果(ng/mL)
Figure BDA0002377434030000222
Figure BDA0002377434030000231
实施例11血红蛋白在息肉和正常健康人样本中的半定量检测
将实施例3制备的试纸条，用于息肉患者的半定量检测。
具体地，将实施例3制备的试纸条插入半定量检测仪器(POCT多功能免疫检测仪，型号GD-010)中，以30例息肉患者的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
其中，
a)结果大于200ng/mL：仪器显示阳性；
b)结果≥80ng/mL，≤200ng/mL：仪器显示可疑；
c)结果小于80ng/mL：仪器显示阴性；
d)无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
最后，测得30例息肉患者粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表2所示。根据表2的检测结果，本试纸条检测息肉的灵敏性为26.67％(8/30)，在正常人中的特异性为96.67％(58/60)。
表8.息肉患者粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果
Figure BDA0002377434030000241
Figure BDA0002377434030000251
实施例12血红蛋白在息肉和正常健康人样本中的定量检测
将实施例3制备的试纸条，用于息肉患者的定量检测。
具体地，将实施例3备的试纸条插入定量检测仪器(POCT多功能免疫检测仪，型号GD-010)中，以30例息肉患者的粪便样本(均获得自博尔诚科技有限公司)和60例正常人的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
正常检测时，POCT多功能免疫检测仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，单位为：ng/mL。
最后，测得30例息肉患者粪便样本和60例正常人的粪便样本结果如下表4示。根据表4检测结果(检测结果大于200ng/mL为阳性，小于等于80ng/mL为阴性)，本试纸条检测息肉的灵敏性为26.67％(10/30)，在正常人中的特异性为96.67％(58/60)。
表9.息肉患者粪便样本(非正常人)和正常人粪便样本检测结果(ng/mL)
Figure BDA0002377434030000252
Figure BDA0002377434030000261
尽管本申请已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本申请的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化，这对本领域技术人员是显而易见的。可以理解，本申请不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (10)

1.一种人血红蛋白胶体金试纸条，其特征在于，在所述试纸条上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫含有第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1，所述反应膜上还有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2。
2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1是靶向人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1不同的抗体。
3.如权利要求1或2所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为0.1-0.583μg/cm2，优选为0.15～0.5μg/cm2，进一步优选为0.2～0.416μg/cm2，最优选为0.25～0.333μg/cm2。
4.如权利要求1～3中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上Triton X-100的含量为0.01～0.09mg/cm2，优选为0.02～0.08mg/cm2，进一步优选为0.03～0.07mg/cm2，最优选为0.04～0.06mg/cm2。
5.如权利要求1～4中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的含量为3～30μg/cm2，优选为6～24μg/cm2，进一步优选为9～18μg/cm2，最优选为12～15μg/cm2。
6.如权利要求1～5中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条上的检测线为1～3条，优选为1条。
7.一种人血红蛋白胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
制备胶体金颗粒；
将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1结合，形成胶体金标记的鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物；
将所述鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1胶体金结合物在玻璃纤维素膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1是靶向人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 2是靶向人血红蛋白的、与所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1不同的抗体。
9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述将胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的质量比为8.57～50:1，优选为10～33.33:1,进一步优选为12～25:1最优选为15～20:1。
10.如权利要求7～9中任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述鼠抗人血红蛋白单克隆抗体胶体金结合物在玻璃纤维素膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗人血红蛋白单克隆抗体Fit-MAb 1的含量为10～58.33μg/mL，优选为15～50μg/mL，进一步优选为20～41.67μg/mL,最优选为25～33.33μg/mL。
CN202010071549.5A 2019-01-29 2020-01-21 一种人血红蛋白的胶体金试纸条及其制备方法和用途 Pending CN111487420A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2019100875824 2019-01-29
CN201910087582 2019-01-29
CN201910087557 2019-01-29
CN2019100875576 2019-01-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111487420A true CN111487420A (zh) 2020-08-04

Family

ID=71812328

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010071549.5A Pending CN111487420A (zh) 2019-01-29 2020-01-21 一种人血红蛋白的胶体金试纸条及其制备方法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111487420A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060188939A1 (en) * 2005-02-16 2006-08-24 Ping Gao Fecal sample test device and methods of use
CN104515859A (zh) * 2014-12-17 2015-04-15 杭州慧缘泰医疗器械有限公司 血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒及其制备方法、检测方法
US20150219658A1 (en) * 2012-07-09 2015-08-06 Schebo Biotech Ag Test kit (combi quick test) for the synchronous proof of biomarkers in faeces for detecting of pathological changes in the gastrointestinal tract, particularly in the intestine
CN105467124A (zh) * 2015-12-18 2016-04-06 厦门稀土材料研究所 一种检测便隐血的胶体金双联试纸条及其制备方法
CN108614110A (zh) * 2018-05-03 2018-10-02 常州领航量子生物医疗科技有限公司 一种测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060188939A1 (en) * 2005-02-16 2006-08-24 Ping Gao Fecal sample test device and methods of use
US20150219658A1 (en) * 2012-07-09 2015-08-06 Schebo Biotech Ag Test kit (combi quick test) for the synchronous proof of biomarkers in faeces for detecting of pathological changes in the gastrointestinal tract, particularly in the intestine
CN104515859A (zh) * 2014-12-17 2015-04-15 杭州慧缘泰医疗器械有限公司 血红蛋白、血红蛋白-结合珠蛋白复合物、转铁蛋白联检试剂盒及其制备方法、检测方法
CN105467124A (zh) * 2015-12-18 2016-04-06 厦门稀土材料研究所 一种检测便隐血的胶体金双联试纸条及其制备方法
CN108614110A (zh) * 2018-05-03 2018-10-02 常州领航量子生物医疗科技有限公司 一种测定肠粘膜损伤的联合检测试剂盒及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111024954A (zh) 联合检测covid-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法
CN205538992U (zh) 一种检测试纸盘及检测试纸盘盒
CN110221084B (zh) 一种快速检测he4和ca125的纳米硒试剂盒
US20120022793A1 (en) Biomarkers for the diagnosis of prostate cancer in a non-hypertensive population
CN110361547A (zh) 一种化学发光定量检测粪便潜血的试剂及其检测方法和其在检测下消化道健康的用途
CN101566633A (zh) 一种诊断评价或测定癌症并预知所述疾病严重性的方法
CN102854324A (zh) 快速无损伤性检测肝肿瘤标志物的方法以及采用的试纸条
CN105717308A (zh) 快速定量检测粪便乳铁蛋白的免疫层析试剂盒
CN110283909A (zh) Zbtb20蛋白或其特异性抗体在贲门癌检测试剂盒中的应用
CN101539574B (zh) Survivin抗体的应用及以其制备的食管癌免疫层析检测试纸条
CN206038696U (zh) 一种定量钙卫蛋白检测免疫层析试纸条
US20170322228A1 (en) Method, kit and test strip for detecting kawasaki disease
CN206038688U (zh) 一种免疫层析检测试纸条的荧光定量光谱检测系统
CN112881708A (zh) 用于检测人淀粉样蛋白-β的胶体金免疫层析试纸及其制备
CN110045105B (zh) 柯萨奇A16病毒IgA抗体量子点免疫荧光层析试纸条及试剂盒
CN111487420A (zh) 一种人血红蛋白的胶体金试纸条及其制备方法和用途
CN106932592A (zh) 检测人表面活性蛋白a的胶体金试纸条及其制备方法和应用
CN111879924A (zh) 快速诊断血红蛋白、结合珠蛋白-血红蛋白复合物的胶体金免疫层析检测试纸及制备方法
JP7081861B1 (ja) ＬＩＰに基づいてＵＭＯＤを修飾した尿中のＮｅｕ５Ｇｃを識別する尿路上皮癌の検査用キット、およびその製造方法
CN110412282A (zh) Vegf多肿瘤标记物的荧光免疫层析联合检测试剂盒
CN115166238A (zh) 羊布鲁氏菌病初筛和确诊一体化抗体检测试纸条
CN114563580A (zh) 家用便隐血检测试条及其制备方法和包含其的检测盒
JPH0580053A (ja) ヒト子宮体癌細胞の免疫化学的検出方法
CN113740542A (zh) 一种幽门螺杆菌（Hp）抗原和大便隐血（Fit）联检胶体金试纸条及其制备方法和用途
CN105842461A (zh) 子宫肉瘤早中期快速诊断试剂盒及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination