CN113740542A - 一种幽门螺杆菌（Hp）抗原和大便隐血（Fit）联检胶体金试纸条及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种幽门螺杆菌抗原和大便隐血联检胶体金试纸条，其从加样端依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫上含有第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp‑Ab1和/或第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb‑Ab1，所述反应膜上含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp‑Ab2和/或第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb‑Ab2。所述试纸条，可准确量化样本检测指标，避免人工判读的主观性，除可在医院完成常规检测，还可在家中自行检测，与单个待检物质的试纸条相比，实现了一份样本同时检测多个指标。Hp抗原指标适用幽门螺杆菌感染的辅助诊断、根除治疗效果评价；Fit指标适用于下消化道出血性疾病及结直肠癌的临床诊断、疗效观察。二者联检更适用消化道肿瘤的普筛，降低癌症死亡率。

Description

一种幽门螺杆菌(Hp)抗原和大便隐血(Fit)联检胶体金试纸 条及其制备方法和用途
技术领域
本申请属于肿瘤标志物检测领域，具体地，本申请涉及用于检测幽门螺杆菌(Hp)抗原和人血红蛋白的胶体金纸条及其制备方法和用途。
背景技术
据《中国卫生和计划生育统计年鉴2015》数据显示，在我国由于疾病引起死亡的人数中，癌症已成为第一因素。尤其在城市人口中，癌症导致的死亡人数以27％的比例远超心脏病。全国每天的癌症新发病例超过1万人，因此，癌症已经成为影响我国国民健康的重要杀手。但是，在我国癌症发病率与世界水平相当的情况下，死亡率高于世界水平(中国癌症死亡率高于全球平均水平17％)。这其中除了有因为我国特色高发肿瘤是国际上治疗水平较低的消化道肿瘤外，更重要的原因是我国癌症一经发现多处于中晚期。据Cancerstatistics，2018数据显示，美国所有癌症5年生存率白种人为68％，黑种人为61％。相对应的中国肿瘤患者5年生存率仅有36.9％。
导致中国死亡率和5年生存率低下的重要因素就是癌症的早前诊断尚未得到充分的重视。有希望治愈的癌症，由于直至癌症晚期才做出诊断，导致治疗效果大打折扣，造成患者的过早死亡。以美国男性高发癌症—前列腺癌检测为例，自80年代后期在无症状人群中采用前列腺特异性抗原(PSA)进行筛查后，直接导致2010～2013年前列腺癌以每年大于10％的速率下降。而美国50岁及以上成年人由于使用结肠镜的比例大幅度的上升(由2000年21％上升为2015年的60％)，导致结直肠癌的发病率下降20％左右。因此，癌症的早期诊断和早期治疗，对无症状高风险人群以及提高癌症患者生存率有着十分重要的意义，亦为减少政府卫生公共事业费用支出以及减轻患者家庭负担带来巨大福音。
目前，我们大部分二级以上医院已经普及了X光、超声、LDCT、核磁等大型影像学设备，同时为减少穿刺活检和侵入性探查给患者带来的痛苦许多公司开发出了的液体活检技术。不可否认这些先进的仪器设备和诊断技术为癌症的诊断和筛查做出了重要的贡献。但是这些设备和技术使用和维护成本高，且需要专业人员进行操作，因此在进行更广泛人群的早期筛查检测会受到极大的限制。应用蛋白肿瘤标志物是目前进行肿瘤早期诊断、筛查以及进行疗效观察的重要技术手段。其常以抗原、酶、蛋白或肽类激素等形式存在于患者的肿瘤细胞、体液或排泄物中，通过生化或者免疫技术可以特异性识别并应用于肿瘤诊断中。大量的肿瘤标志物在临床上已经开发注册应用。但是，目前的大型医院主要应用的以化学发光试剂及其配套设备，亦存在着试剂和设备费用高昂，后期维护成本高的门槛，会极大增加患者的医疗成本。灵活便携、使用成本低、简单培训即可操作、低损伤乃至无损伤、取样简便、可实现床旁检测的基于检测蛋白肿瘤标志物的癌症早期检测的解决方案和解决方法是目前国内广大基层社区医院和诊所急需的。
Hp在世界各地广泛存在，已有大量研究证实，Hp感染与慢性胃炎、消化性溃疡以及胃癌等疾病有关。但是，胃癌的发病机制目前尚不完全清楚，有关研究还在进行之中。一般认为幽门螺杆菌仅寄居于人类，人是唯一的传染源，并且Hp感染在家庭内有明显的聚集现象，自愈率几乎为零。2017年世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单显示，幽门螺杆菌属于I类致癌物，可诱发胃癌和淋巴增生性胃淋巴瘤等肿瘤的发生。目前，经流行病学调查显示，全世界不同地区、不同性别和不同年龄段人群均有较高的Hp感染，因此，预防Hp感染，研究Hp的致病机制和寻找有效的治疗药物和方案，对于Hp感染的病情缓解、并发症减少以及改善预后均有积极作用。
大便隐血(Fit)检测过程简单、操作方便，患者经济负担小，依从性好，是下消化道出血性疾病筛查的有效手段。在中华医学会消化病学会等专业组织达成的“中国早期结直肠癌及癌前病变筛查与诊治共识”中，将大便隐血(Fit)检测列为早期结直肠癌筛查的初筛实验，推荐对粪便中隐血进行数值检测，可量化测定粪便中低浓度血红蛋白。
目前查询到的检测Hp感染主要为尿素呼气试验(UBT)或者基于胶体金免疫层析技术的定性检测，前者检测成本高昂，后者无法实现指标的量化。Fit检测市场上亦以定性检测为主，上述检测方法均不利于将来的临床应用。
发明内容
本申请要解决的技术问题是：目前临床使用消化道癌症的筛查诊断技术，不具有指标量化，结果不够直观，成本高昂且检测仪器须后期维护，检测假阳性率高，结果重复性不好，操作复杂不能够普遍用于基层医疗系统及家庭，检测样本覆盖不全，一个样本无法检测多个指标，且无法将消化道癌症的病情进行早期诊断和后期疗效观察相结合，不适合在临床应用，适用性不够广泛。目前，在临床检测领域尚无Hp抗原和Fit联合的检测方法。
因此，迫切需要研发一种能够普遍用于基层医疗系统及家庭，准确定量幽门螺杆菌抗原和人血红蛋白，有效、方便、灵敏度和特异性高，且能够同时检测多种消化道疾病及消化道癌症的早期诊断方法。
基于现有技术的不足，本申请的目的在于提供一种幽门螺杆菌抗原和人血红蛋白的胶体金试纸条，本申请还提供了该试纸条的制备方法及其在制备消化道癌症检测试剂盒中的用途。
具体来说，本申请涉及如下内容：
1.一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条，其特征在于，在所述试纸条上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫上含有第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1，所述反应膜上含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2和第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2。
2.一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条，其特征在于，所述试纸条包括试纸条1和试纸条2，在所述试纸条1上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫上含有第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1，所述反应膜上含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2；在所述试纸条2上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫上含有第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1，所述反应膜上含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2。
3.如项1或2所述的试纸条，其特征在于，所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1为识别幽门螺杆菌抗原的抗体，所述第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2为识别幽门螺杆菌抗原的、与所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1不同的抗体。
4.如项1～3中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1为识别人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2为识别人血红蛋白的、与所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1不同的抗体。
5.如项1～4中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为0.33-1.33μg/cm2，优选为0.50-1.17μg/cm2，最优选为0.67-1.00μg/cm2。
6.如项1～5中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为0.50-1.33μg/cm2，优选为0.67-1.17μg/cm2，最优选为0.83-1.00μg/cm2。
7.如项1～6中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上Triton X-100的含量为66.67-1000.00μg/cm2，优选为166.67-666.67μg/cm2，最优选为333.33-500.00μg/cm2。
8.如项1～7中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为5.00-30.00μg/cm2，优选为10.00-25.00μg/cm2，最优选为15.00-20.00μg/cm2。
9.如项1～8中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为5.00-35.00μg/cm2，优选为10.00-30.00μg/cm2，最优选为18.00-20.00μg/cm2。
10.一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
制备胶体金颗粒；
将胶体金颗粒分别与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物；
将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物等比例混匀后在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hp检测线、Hb检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条。
11.一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)制备胶体金颗粒，将胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物；
将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hp检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条1；
(2)制备胶体金颗粒，将胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物；
将鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中将含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hb检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条2。
12.如项10或11所述的制备方法，其特征在于，所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1为识别幽门螺杆菌抗原的抗体，所述第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2为识别幽门螺杆菌抗原的、与所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1不同的抗体。
13.如项10～12中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1为识别人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2为识别人血红蛋白的、与所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1不同的抗体。
14.如项10～13中任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的质量比为(7.5-30)：1，优选为(8.6-20)：1，最优选为(10-15)：1。
15.如项10～14中任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的质量比为(7.5-20)：1，优选为(8.6-15)：1，最优选为(10-12)：1。
16.如项10～15中任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物等比例混合后在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为10.00-40.00μg/mL，优选为15.00-35.00μg/mL，最优选为20.00-30.00μg/mL。
17.如项10～16中任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物等比例混合后在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为15.00-40.00μg/mL，优选为20.00-35.00μg/mL，最优选为25.00-30.00μg/mL。
18.如项10～17中任一项所述的制备方法，其特征在于，将所述胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，所述金结合物重悬液含有Triton X-100，所述Triton X-100的含量为2.00-30.00g/L，优选为5.00-20.00g/L，最优选为10.00-15.00g/L。
19.如项10～18中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液中第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为0.50-3.00mg/mL，优选为1.00-2.50mg/mL，最优选为1.50-2.00mg/mL。
20.如项10～19中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液中第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为0.50-3.50mg/mL，优选为1.00-3.00mg/mL，最优选为1.80-2.00mg/mL。
21.如项1-9中任一项所述的试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
制备胶体金颗粒；
将胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物；
将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物等比例混匀后在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hp检测线、Hb检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条。
22.如项1-9中任一项所述的试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)制备胶体金颗粒，将胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物；
将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hp检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条1；(2)制备胶体金颗粒，将胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物；
将鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中将含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hb检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条2。
23.如项1-9中任一项所述的试纸条在制备胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症检测试剂盒中的用途，其特征在于，所述胃部疾病为胃部炎症和其它胃部疾病，所述下消化道出血性疾病为腺瘤和息肉，所述消化道癌症为胃癌和结直肠癌。
24.如项23所述的用途，其特征在于，所述试剂盒用于检测粪便样本。
25.如项23或24所述的用途，其特征在于，所述胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症检测试剂盒利用下述步骤来进行检测：
将一定量的检测样本滴加到试纸条的样本垫；
一段时间后，肉眼观测检测线、质控线或将试纸条插入检测仪中，判读结果。
26.如权利要求25所述的用途，其特征在于，所述判读方法包括肉眼定性判读，和/或仪器判读，其中仪器判读方法可分为定性和定量判读。
27.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含项1-9中任一项所述的试纸条或者利用项10-22中任一项所述的方法制备的试纸条。
28.如项27所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症的检测，所述胃部疾病为胃部炎症和其它胃部疾病，所述下消化道出血性疾病为腺瘤和息肉，所述消化道癌症为胃癌和结直肠癌。
29.如项27或28所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测粪便样本。
附图说明
图1本申请的胶体金试纸条的结构图(一)。
图2本申请的胶体金试纸条的结构图(二)。
附图标记
图1：
1样本垫2金结合物垫3反应膜4吸收垫311Hp检测线312Hb检测线32质控线
图2：
11试纸条1样本垫 21试纸条1金结合物垫 31试纸条1反应膜 41试纸条1吸收垫311Hp检测线 321试纸条 1质控线
12试纸条2样本垫 22试纸条2金结合物垫 32试纸条2反应膜 42试纸条2吸收垫312Hb检测线 322试纸条 2质控线
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本申请，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本申请，并非用于限制本申请。
除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本申请还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本申请作进一步的说明，但不用来限制本申请的范围。
如图1所示，在本申请的Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条上，从加样端开始依次形成有样本垫1，金结合物垫2，反应膜3和吸收垫4。其中反应膜3上有Hp检测线311、Hb检测线312和质控线32。所述样本垫材质为玻璃纤维素膜，用于滴加检测样本。所述金结合物垫材质为玻璃纤维素膜。所述反应膜3材质为硝酸纤维素膜。
具体的，金结合物垫2是在玻璃纤维素膜上喷点胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物形成的。金结合物垫2含第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1，第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1为识别幽门螺杆菌抗原的抗体，含量为0.33-1.33μg/cm2，优选为0.50-1.17μg/cm2，最优选为0.67-1.00μg/cm2；第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1为识别人血红蛋白的抗体，含量为0.50-1.33μg/cm2，优选为0.67-1.17μg/cm2，最优选为0.83-1.00μg/cm2。金结合物垫2还可含有Triton X-100，含量为66.67-1000.00μg/cm2，优选为166.67-666.67μg/cm2，最优选为333.33-500.00μg/cm2。具体的，反应膜3上喷涂，含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液，形成Hp检测线311，所述反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为5.00-30.00μg/cm2，优选为10.00-25.00μg/cm2，最优选为15.00-20.00μg/cm2；含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液，形成Hb检测线312，所述反应膜上第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为5.00-35.00μg/cm2，优选为10.00-30.00μg/cm2，最优选为18.00-20.00μg/cm2；和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液，形成质控线32，其中Hp检测线311和Hb检测线312的位置可以互换。
如图2所示，在本申请的Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条包括两条试纸条，在试纸条1上，从样端开始依次形成有样本垫11，金结合物垫21，反应膜31和吸收垫41。其中反应膜31上有Hp检测线311和质控线321。所述样本垫材质为玻璃纤维素膜，用于滴加检测样本。所述金结合物垫材质为玻璃纤维素膜。所述反应膜31材质为硝酸纤维素膜。在试纸条2上，从样端开始依次形成有样本垫12，金结合物垫22，反应膜32和吸收垫42。其中反应膜32上有Hb检测线312和质控线322。所述样本垫材质为玻璃纤维素膜，用于滴加检测样本。所述金结合物垫材质为玻璃纤维素膜。所述反应膜32材质为硝酸纤维素膜。
具体的，在试纸条1上，金结合物垫21是在玻璃纤维素膜上喷点胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物形成的。金结合物垫21含第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1，第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1为识别幽门螺杆菌抗原的抗体，含量为0.33-1.33μg/cm2，优选为0.50-1.17μg/cm2，最优选为0.67-1.00μg/cm2。金结合物垫21还可含有TritonX-100，含量为66.67-1000.00μg/cm2，优选为166.67-666.67μg/cm2，最优选为333.33-500.00μg/cm2。具体的，反应膜31上喷涂，含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液，形成Hp检测线311，所述反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为5.00-30.00μg/cm2，优选为10.00-25.00μg/cm2，最优选为15.00-20.00μg/cm2；和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液，形成质控线321。具体的，在试纸条2上，金结合物垫22是在玻璃纤维素膜上喷点胶体金标记的鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物形成的。金结合物垫22含第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1，第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1为识别人血红蛋白的抗体，含量为0.50-1.33μg/cm2，优选为0.67-1.17μg/cm2，最优选为0.83-1.00μg/cm2。金结合物垫22还可含有Triton X-100，含量为66.67-1000.00μg/cm2，优选为166.67-666.67μg/cm2，最优选为333.33-500.00μg/cm2。具体的，反应膜32上喷涂，含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液，形成Hb检测线312，所述反应膜上第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为5.00-35.00μg/cm2，优选为10.00-30.00μg/cm2，最优选为18.00-20.00μg/cm2；和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液，形成质控线322。
在本文中使用的所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1为识别幽门螺杆菌抗原的抗体，所述第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2为识别幽门螺杆菌抗原的、与所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1不同的抗体，也可以是识别幽门螺杆菌抗原的、与所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1相同的抗体，优选为识别幽门螺杆菌抗原的、与所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1不同的抗体。本领域技术人员可以理解具有这种功能的抗体均可以使用，例如，第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1可以是购自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb1的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2可以是购自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb2的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
在本文中使用的所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1为识别人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2为识别人血红蛋白的、与所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1不同的抗体，也可以是识别人血红蛋白的、与所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1相同的抗体，优选为识别人血红蛋白的、与所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1不同的抗体。本领域技术人员可以理解具有这种功能的抗体均可以使用，例如，第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1可以是购自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb1的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2可以是购自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb2的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。
本申请还提供了一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：制备胶体金颗粒；将胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物；将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物等比例混匀后在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hp检测线、Hb检测线和质控线；将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条。将所述胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的质量比为(7.5-30)：1，优选为(8.6-20)：1，最优选为(10-15)：1。将所述胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的质量比为(7.5-20)：1，优选为(8.6-15)：1，最优选为(10-12)：1。将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为10.00-40.00μg/mL，优选为15.00-35.00μg/mL，最优选为20.00-30.00μg/mL。将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为15.00-40.00μg/mL，优选为20.00-35.00μg/mL，最优选为25.00-30.00μg/mL。将所述胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，所述金结合物重悬液含有Triton X-100，所述Triton X-100的含量为2.00-30.00g/L，优选为5.00-20.00g/L，最优选为10.00-15.00g/L。所述含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液中第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为0.50-3.00mg/mL，优选为1.00-2.50mg/mL，最优选为1.50-2.00mg/mL。所述含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液中第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为0.50-3.50mg/mL，优选为1.00-3.00mg/mL，最优选为1.80-2.00mg/mL。
本申请还提供了一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：制备胶体金颗粒；将胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物；将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hp检测线和质控线；将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条1；制备胶体金颗粒，将胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物；将鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中将含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hb检测线和质控线；将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并裁切得到试纸条2。将所述胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的质量比为(7.5-30)：1，优选为(8.6-20)：1，最优选为(10-15)：1。将所述胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，所述胶体金颗粒与第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的质量比为(7.5-20)：1，优选为(8.6-15)：1，最优选为(10-12)：1。将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为10.00-40.00μg/mL，优选为15.00-35.00μg/mL，最优选为20.00-30.00μg/mL。将所述鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，复溶后所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为15.00-40.00μg/mL，优选为20.00-35.00μg/mL，最优选为25.00-30.00μg/mL。将所述胶体金结合物在玻璃纤维膜上喷涂，包括将所述胶体金结合物用金结合物重悬液复溶，所述金结合物重悬液含有Triton X-100，所述Triton X-100的含量为2.00-30.00g/L，优选为5.00-20.00g/L，最优选为10.00-15.00g/L。所述含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液中第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为0.50-3.00mg/mL，优选为1.00-2.50mg/mL，最优选为1.50-2.00mg/mL。所述含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液中第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为0.50-3.50mg/mL，优选为1.00-3.00mg/mL，最优选为1.80-2.00mg/mL。
本申请还提供了所述的试纸条在制备胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症检测试剂盒中的用途，其特征在于，所述胃部疾病为胃部炎症和其它胃部疾病，所述下消化道出血性疾病为腺瘤和息肉，所述癌症为胃癌和结直肠癌。所述试剂盒用于检测粪便样本。所述胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症检测试剂盒利用下述步骤来进行检测：将一定量的检测样本用样本缓冲液处理后滴加到试纸条的样本垫；一段时间后，肉眼观测检测线或将试纸条插入检测仪中，判读结果。所述检测样本的用量为70-120μL，例如可以是70μL，80μL，90μL，100μL，110μL，120μL。所述一段时间为5-10min，例如可以是5min，6min，7min，8min，9min，10min。
所述判读方法包括肉眼定性判读，和/或仪器判读，其中仪器判读方法可分为定性和定量判读。
肉眼判读是指在自然光条件下，在检测卡正上方垂直观测检测线位置，若观测到有明显的红色条带，则为阳性；否则为阴性。具体检测标准如下：
①Hp阳性：检测线有明显红色条带。
②Hp阴性：检测线无明显红色条带。
③Fit阳性：检测线有明显红色条带。
④Fit阴性：检测线无明显红色条带。
⑤无效：质控线无明显红色条带，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
所述检测仪可以进行定性检测，检测结果的定性判断标准如下：
①Hp阳性：检测结果大于或等于1×105CFU/mL，仪器显示阳性。
②Hp阴性：检测结果小于1×105CFU/mL，仪器显示阴性。
③Fit阳性：检测结果大于或等于100ng/mL，仪器显示阳性。
④Fit阴性：检测结果小于100ng/mL，仪器显示阴性。
⑤无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
所述检测仪可以进行定量检测。正常检测时，胶体金免疫层析分析仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，Hp抗原指标单位为CFU/mL，Fit指标单位为ng/mL。
本申请还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含上述试纸条或利用上述方法制备的试纸条。所述试剂盒用于胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症的检测，所述胃部疾病为胃部炎症和其它胃部疾病，所述下消化道出血性疾病为腺瘤和息肉，所述消化道癌症为胃癌和结直肠癌。所述试剂盒用于检测粪便样本。
本申请制备的试纸条检测时需用其配套的样本缓冲液进行取样、稀释：用采便器的采便棒三点采样(共约10mg～50mg，相当于火柴头大小，以全部覆盖采便棒螺旋沟槽为最佳)加到采便器中(2mL样本缓冲液)，将盖拧紧，与样本缓冲液充分混匀，再点样。
对于样本缓冲液没有具体的限定，例如可以使用磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或几种，只要是不会影响样品检测的缓冲液体系即可。
本申请制备的试纸条和试剂盒能够有效的检测胃部疾病(如胃部炎症、其它胃部疾病)，下消化道出血性疾病(如腺瘤、息肉)，消化道癌症(如胃癌、结直肠癌)。并且具有很高的灵敏性和特异性。其中，Hp检测指标中胃部疾病的灵敏性可以高达33％以上，在优选的情况下可以高达63％以上，胃癌的灵敏性可以高达50％以上，在优选的情况下可以高达83％以上，在正常人中的特异性可以高达87％以上，在优选的情况下可以高达96％以上。Fit检测指标中下消化道出血性疾病(腺瘤、息肉)的灵敏性为可以高达16％以上，在优选的情况下可以高达43％以上，结直肠癌的灵敏性可以高达46％以上，在优选的情况下可以高达90％以上，在正常人中的特异性可以高达94％以上，在优选的情况下可以高达100％以上。
在本申请中，灵敏性是指患有明确临床疾病的患者的样本，其检测结果呈阳性的比率。正常人中的特异性是指没有特定临床疾病的筛查人群的样本，其检测结果呈阴性的比率。
实施例实施例1
在下述实施例中，除非另外说明，实施例中使用的物质均为市售的产品。
(1)制备胶体金颗粒
取氯金酸1.00g，平衡至室温，量取2.0mL纯化水，加入装有氯金酸的玻璃瓶中，反复吹打至氯金酸完全溶解。将溶解的氯金酸倒入容器中，并用纯化水反复冲洗氯金酸玻璃瓶5次，洗液倒回容器中。用纯化水将溶液定容至10.0mL。盖紧瓶盖，充分摇晃15min，混合均匀，配制成10％的氯金酸溶液。
量取10％氯金酸溶液0.3mL，加入到100.0mL纯化水中，边加热边搅拌至沸腾。量取0.6mL的10％柠檬酸三钠溶液，迅速、一次性加入到沸腾的氯金酸溶液中，继续加热煮沸2min，关掉热源用余热加热5min。冷却至室温后加纯化水定容至100.0mL，得到含有胶体金颗粒的溶液。
(2)第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2
在本实施例以及下述实施例中，使用了由公司销售的抗体，其中第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1是购买自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb1的杂交瘤细胞分泌的，第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2是购买自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb2的杂交瘤细胞分泌的。
(3)第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1和第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2
在本实施例以及下述实施例中，使用了由公司销售的抗体，其中第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1是购买自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb1的杂交瘤细胞分泌的，第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2是购买自奥创生物技术(山东)有限公司的由克隆株mAb2的杂交瘤细胞分泌的。
(4)鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物的制备
分别取100.0mL(0.03g)胶体金于两个三角瓶中，准确加入3.5mL 0.1M的碳酸钾溶液，混匀，静置10min。取1.00mg步骤(2)中的第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1加入一个三角瓶(三角瓶1)中、取1.50mg第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1加入另一个三角瓶(三角瓶2)中，在快速搅拌条件下，将第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1逐滴加入到三角瓶1中、将第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1逐滴加入到三角瓶2中，室温放置40min。取5.0mL 10％酪蛋白溶液，在快速搅拌条件下，分别逐滴加入到两个三角瓶中，室温静置15min。在三角瓶1中得到胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物，和在三角瓶2中得到鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物。
(5)金结合物垫的制备
将上述两种胶体金结合物在12000rpm，4℃离心40min，小心弃去上清液，各加入胶体金结合物重悬液至原体积(100.0mL)，使得复溶后第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为10.00μg/mL，将其复溶液在一条玻璃纤维素膜上喷涂，使得复溶后第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为15.00μg/mL，喷涂完毕后置于干燥间干燥3h即得金结合物垫21，将其复溶液在另一条玻璃纤维素膜上喷涂，喷涂量均为0.033mL/cm2，喷涂完毕后置于干燥间干燥3h即得金结合物垫22，之后于室温干燥器内保存。
其中，胶体金结合物重悬液的制备如下：
称取三羟甲基氨基甲烷6.06g，蔗糖50.00g，牛血清白蛋白5.00g，PEG2000010.00g，Triton X-100 2.00g，PC300 1.0mL，加纯化水700.0mL，搅拌使充分溶解后，加入浓盐酸适量，搅拌均匀，调节pH至7.4。充分搅拌溶解后定容至1000.0mL。
(6)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜
取步骤(2)中的第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab25.00mg、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab25.00mg，分别加入到5.0mL 0.05M PBS中，充分混匀后均用0.05MPBS缓冲液定容至终体积10.0mL，使第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的终浓度为0.50mg/mL，并将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液喷涂到一条硝酸纤维素膜上，使第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的终浓度为0.50mg/mL，并将含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液喷涂到另一条硝酸纤维素膜上，喷涂量均为10.0μL/cm2，在一条硝酸纤维素膜上形成Hp检测线311和在另一条硝酸纤维素膜上形成Hb检测线312。
取羊抗鼠IgG多克隆抗体(来源于洛阳佰泰科生物技术有限公司)20.00mg，加入到5.0mL 0.05M PBS缓冲液中，充分混匀后用0.05MPBS缓冲液定容至终体积10.0mL，使羊抗鼠IgG多克隆抗体的终浓度为2.00mg/mL。将含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液按照喷涂量10.0μL/cm2分别喷涂到上述两条硝酸纤维素膜上，形成质控线321和322。将包被完毕检测线和质控线的反应膜31和32放入干燥车间干燥5h。
(7)将样本垫11、金结合物垫21、反应膜31、吸收垫41粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条1；将样本垫12、金结合物垫22、反应膜32、吸收垫42粘贴在另一PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条2
经计算，制备得到的试纸条1上，金结合物垫上第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为0.33μg/cm2，反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为5.00μg/cm2；试纸条2上，第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为0.50μg/cm2，第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为5.00μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量均为66.67μg/cm2。
实施例2
(1)制备胶体金颗粒
制备步骤与实施例1相同。
(2)第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(3)第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1和第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(4)鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物的制备
与实施例1中的区别在于，取2.00mg步骤(2)中的第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1、2.50mg第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1。其它反应条件与实施例1相同。
(5)金结合物垫的制备
与实施例1中的区别在于，使得复溶后第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为20.00μg/mL、第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为25.00μg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(6)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜
与实施例1中的区别在于，使第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的终浓度为1.50mg/mL、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的终浓度为1.80mg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(7)与实施例1中的步骤相同
经计算，制备得到的试纸条1上，金结合物垫上第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为0.67μg/cm2，反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为15.00μg/cm2；试纸条2上，第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为0.83μg/cm2，第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为18.00μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量均为66.67μg/cm2。
实施例3
(1)制备胶体金颗粒
制备步骤与实施例1相同。
(2)第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(3)第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1和第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(4)鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物的制备
与实施例1中的区别在于，取3.00mg步骤(2)中的第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1、3.00mg第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1。其它反应条件与实施例1相同。
(5)金结合物垫的制备
与实施例1中的区别在于，使得复溶后第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为30.00μg/mL、第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为30.00μg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(6)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜
与实施例1中的区别在于，使第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的终浓度为2.00mg/mL、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的终浓度为2.00mg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(7)与实施例1中的步骤相同
经计算，制备得到的试纸条1上，金结合物垫上第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为1.00μg/cm2，反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为20.00μg/cm2；试纸条2上，第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为1.00μg/cm2，第二鼠抗Fit单克隆抗体Hb-Ab2的含量为20.00μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量均为66.67μg/cm2。
实施例4
(1)制备胶体金颗粒
制备步骤与实施例1相同。
(2)第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(3)第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1和第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(4)鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物的制备
与实施例1中的区别在于，取4.00mg步骤(2)中的第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1、4.00mg第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1。其它反应条件与实施例1相同。
(5)金结合物垫的制备
与实施例1中的区别在于，使得复溶后第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为40.00μg/mL、第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为40.00μg/mL。其它反应条件与实施例1相同。
(6)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜
与实施例1中的区别在于，使第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的终浓度为3.00mg/mL、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的终浓度为3.50mg/mL。
(7)与实施例1中的步骤相同
经计算，制备得到的试纸条1上，金结合物垫上第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为1.33μg/cm2，反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为30.00μg/cm2；试纸条2上，第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为1.33μg/cm2，第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为35.00μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量均为66.67μg/cm2。
实施例5
(1)制备胶体金颗粒
制备步骤与实施例1相同。
(2)第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(3)第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1和第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2
使用的抗体与实施例1相同。
(4)鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物的制备
分别取100.0mL(0.03g)胶体金于两个三角瓶中，准确加入3.5mL 0.1M的碳酸钾溶液，混匀，静置10min。取3.00mg步骤(2)中的第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1、3.00mg第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1在快速搅拌条件下，分别将第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1、第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1逐滴加入到各自三角瓶中，室温放置40min。取5.0mL10％酪蛋白溶液，在快速搅拌条件下，逐滴加入到三角瓶中，室温静置15min。得到胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物。
(5)金结合物垫的制备
将上述胶体金结合物在12000rpm，4℃离心40min，小心弃去上清液，各加入胶体金结合物重悬液至1/2体积(50.0mL)，使得复溶后第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为60.00μg/mL、第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为60.00μg/mL，二者等比例混匀后将复溶液在玻璃纤维素膜上喷涂，喷涂量为0.033mL/cm2，喷涂完毕后置于干燥间干燥3h即得金结合物垫，之后于室温干燥器内保存。
其中，胶体金结合物重悬液的制备如下：
称取三羟甲基氨基甲烷6.06g，蔗糖50.00g，牛血清白蛋白5.00g，PEG2000010.00g，Triton X-100 2.00g，PC300 1.0mL，加纯化水700.0mL，搅拌使充分溶解后，加入浓盐酸适量，搅拌均匀，调节pH至7.4。充分搅拌溶解后定容至1000.0mL。
(6)在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜
取步骤(2)中的第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab220.00mg、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab220.00mg，分别加入到5.0mL 0.05M PBS中，充分混匀后用0.05MPBS缓冲液定容至终体积10.0mL、使第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的终浓度为2.00mg/mL，第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的终浓度为2.00mg/mL。将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的溶液、含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液按照喷涂量10.0μL/cm2喷涂到一条硝酸纤维素膜上，分别形成Hp检测线311和Hb检测线312。
取羊抗鼠IgG多克隆抗体(来源于洛阳佰泰科生物技术有限公司)20.00mg，加入到5.0mL 0.05M PBS缓冲液中，充分混匀后用0.05MPBS缓冲液定容至终体积10.0mL，使羊抗鼠IgG多克隆抗体的终浓度为2.00mg/mL。将含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液按照喷涂量10.0μL/cm2喷涂到硝酸纤维素膜上，形成质控线。将包被完毕检测线和质控线的反应膜放入干燥车间干燥5h。
(7)将样本垫1、金结合物垫2、反应膜3、吸收垫4粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条
经计算，制备得到的试纸条上，金结合物垫上第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为1.00μg/cm2、第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为1.00μg/cm2，反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为20.00μg/cm2、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为20.00μg/cm2。金结合物垫上Triton X-100的含量均为66.67μg/cm2。
上述5个实施例制备试纸条的具体的反应条件如表1所示。
表1：不同实施例制备试纸条的反应条件
Figure BDA0002513226120000231
实施例6
将实施例1制备的试纸条，用于胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症的肉眼定性检测。
具体地，将实施例1制备的试纸条用于肉眼定性检测，以30例胃部疾病(胃部炎症或其他胃部疾病)且无下消化道出血(腺瘤、息肉)患者的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)，30例胃癌患者且无下消化道出血(腺瘤、息肉)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)、30例下消化道出血(腺瘤、息肉)且无Hp感染的患者粪便样本，30例肠癌患者且无Hp感染的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)和30例正常人(无Hp感染且无下消化道出血症状)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2.0mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
①Hp阳性：检测线有明显红色条带。
②Hp阴性：检测线无明显红色条带。
③Fit阳性：检测线有明显红色条带。
④Fit阴性：检测线无明显红色条带。
⑤无效：质控线无明显红色条带，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
测试结果如下表2示。根据表2检测结果，本试纸条Hp抗原检测指标：检测胃部疾病的灵敏度为33.33％(10/30)，胃癌的灵敏性为50.00％(15/30)，特异性(包括正常人、腺瘤、息肉、肠癌)为96.67％(87/90)；Fit检测指标：检测下消化道出血(腺瘤、息肉)的灵敏度为16.67％(5/30)，肠癌的灵敏性为46.67％(14/30)，特异性(包括正常人、胃部其它疾病、胃癌)为100.00％(90/90)。
表2：实施例1的试纸条检测各类型样本的结果
Figure BDA0002513226120000241
Figure BDA0002513226120000251
实施例7
将实施例2制备的试纸条，用于胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症的仪器定性检测。
具体地，将实施例2备的试纸条插入胶体金免疫层析分析仪器(GD-010)中，以30例胃部疾病(胃部炎症或其他胃部疾病)且无下消化道出血(腺瘤、息肉)患者的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)，30例胃癌患者且无下消化道出血(腺瘤、息肉)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)、30例下消化道出血(腺瘤、息肉)且无Hp感染的患者粪便样本，30例肠癌患者且无Hp感染的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)和30例正常人(无Hp感染且无下消化道出血症状)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
①Hp阳性：检测结果大于或等于1×105CFU/mL，仪器显示阳性。
②Hp阴性：检测结果小于1×105CFU/mL，仪器显示阴性。
③Fit阳性：检测结果大于或等于100ng/mL，仪器显示阳性。
④Fit阴性：检测结果小于100ng/mL，仪器显示阴性。
⑤无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
测试结果如下表3示。根据表3检测结果，本试纸条Hp抗原检测指标：检测胃部疾病的灵敏度为60.00％(18/30)，胃癌的灵敏性为76.67％(23/30)，特异性(包括正常人、腺瘤、息肉、肠癌)为93.33％(84/90)；Fit检测指标：检测下消化道出血(腺瘤、息肉)的灵敏度为30.00％(9/30)，肠癌的灵敏性为80.00％(24/30)，特异性(包括正常人、胃部其它疾病、胃癌)为97.78％(88/90)。
表3：实施例2的试纸条检测各类型样本的结果
Figure BDA0002513226120000261
Figure BDA0002513226120000271
实施例8
将实施例3制备的试纸条，用于胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症的仪器定量检测。
具体地，将实施例3备的试纸条插入胶体金免疫层析分析仪器(GD-010)中，以30例胃部疾病(胃部炎症或其他胃部疾病)且无下消化道出血(腺瘤、息肉)患者的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)，30例胃癌患者且无下消化道出血(腺瘤、息肉)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)、30例下消化道出血(腺瘤、息肉)且无Hp感染的患者粪便样本，30例肠癌患者且无Hp感染的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)和30例正常人(无Hp感染且无下消化道出血症状)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
正常检测时，胶体金免疫层析分析仪自动计算被测物的测试结果并将其浓度值显示在屏幕上，Hp抗原指标单位为CFU/mL，Fit指标单位为ng/mL。仪器显示Hp抗原指标的值越大，则有胃部疾病或胃癌的几率越大，当该值大于等于1×105CFU/mL时，表示有患有胃部疾病或胃癌的风险高，当该值小于1×105CFU/mL时，表示患者有胃部疾病或胃癌的风险低；仪器显示Fit指标的值越大，则有下消化道出血或肠癌的几率越大，当该值大于等于100ng/mL时，表示有患有下消化道出血或肠癌的风险高，当该值小于100ng/mL时，表示患有下消化道出血或肠癌的风险低。
测试结果如下表4示。根据表4检测结果，本试纸条Hp抗原检测指标：检测胃部疾病的灵敏度为63.33％(19/30)，胃癌的灵敏性为80.00％(24/30)，特异性(包括正常人、腺瘤、息肉、肠癌)为92.22％(83/90)；Fit检测指标：检测下消化道出血(腺瘤、息肉)的灵敏度为40.00％(12/30)，肠癌的灵敏性为83.33％(25/30)，特异性(包括正常人、胃部疾病、胃癌)为97.78％(88/90)。
表4：实施例3的试纸条检测各类型样本的结果
Figure BDA0002513226120000281
Figure BDA0002513226120000291
实施例9
将实施例4制备的试纸条，用于胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症的仪器定性检测。
具体地，将实施例4备的试纸条插入胶体金免疫层析分析仪器(GD-010)中，以30例胃部疾病(胃部炎症或其他胃部疾病)且无下消化道出血(腺瘤、息肉)患者的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)，30例胃癌患者且无下消化道出血(腺瘤、息肉)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)、30例下消化道出血(腺瘤、息肉)且无Hp感染的患者粪便样本，30例肠癌患者且无Hp感染的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)和30例正常人(无Hp感染且无下消化道出血症状)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
①Hp阳性：检测结果大于或等于1×105CFU/mL，仪器显示阳性。
②Hp阴性：检测结果小于1×105CFU/mL，仪器显示阴性。
③Fit阳性：检测结果大于或等于100ng/mL，仪器显示阳性。
④Fit阴性：检测结果小于100ng/mL，仪器显示阴性。
⑤无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
测试结果如下表5示。根据表5检测结果，本试纸条Hp抗原检测指标：检测胃部疾病的灵敏度为56.67％(17/30)，胃癌的灵敏性为70.00％(21/30)，特异性(包括正常人、腺瘤、息肉、肠癌)为87.78％(79/90)；Fit检测指标：检测下消化道出血(腺瘤、息肉)的灵敏度为43.33％(13/30)，肠癌的灵敏性为90.00％(27/30)，特异性(包括正常人、胃部其它疾病、胃癌)为94.44％(85/90)。表5：实施例4的试纸条检测各类型样本的结果
Figure BDA0002513226120000301
Figure BDA0002513226120000311
实施例10
将实施例5制备的试纸条，用于胃部疾病、下消化道出血性疾病和消化道癌症的仪器定性检测。
具体地，将实施例5备的试纸条插入胶体金免疫层析分析仪器(GD-010)中，以30例胃部疾病(胃部炎症或其他胃部疾病)且无下消化道出血(腺瘤、息肉)患者的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)，30例胃癌患者且无下消化道出血(腺瘤、息肉)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)、30例下消化道出血(腺瘤、息肉)且无Hp感染的患者粪便样本，30例肠癌患者且无Hp感染的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)和30例正常人(无Hp感染且无下消化道出血症状)的粪便样本(获得自博尔诚科技有限公司)为检测样本，通过三点法采集样本，将样本(10mg～50mg，相当于火柴头大小的样本)加入含有2mL样本稀释液(80mMTris缓冲液)的采便器中，充分混匀后滴加2滴样本至试纸条的样品垫，加样10分钟后，进行结果判读：
①Hp阳性：检测结果大于或等于1×105CFU/mL，仪器显示阳性。
②Hp阴性：检测结果小于1×105CFU/mL，仪器显示阴性。
③Fit阳性：检测结果大于或等于100ng/mL，仪器显示阳性。
④Fit阴性：检测结果小于100ng/mL，仪器显示阴性。
⑤无效：仪器提示无显示或结果错误，表明试验无效，应用新的检测试纸条重新测试。
测试结果如下表6示。根据表6检测结果，本试纸条Hp抗原检测指标：检测胃部疾病的灵敏度为60.00％(18/30)，胃癌的灵敏性为83.33％(25/30)，特异性(包括正常人、腺瘤、息肉、肠癌)为92.22％(83/90)；Fit检测指标：检测下消化道出血(腺瘤、息肉)的灵敏度为33.33％(10/30)，肠癌的灵敏性为76.67％(23/30)，特异性(包括正常人、胃部其它疾病、胃癌)为95.56％(86/90)。
表6：实施例5的试纸条检测各类型样本的结果
Figure BDA0002513226120000321
Figure BDA0002513226120000331
Figure BDA0002513226120000341
尽管本申请已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本申请的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化，这对本领域技术人员是显而易见的。可以理解，本申请不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (10)

1.一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条，其特征在于，在所述试纸条上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫上含有第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1，所述反应膜上含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2和第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2。
2.一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条，其特征在于，所述试纸条包括试纸条1和试纸条2，在所述试纸条1上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫上含有第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1，所述反应膜上含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2；在所述试纸条2上，从加样端开始依次形成有样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫上含有第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1，所述反应膜上含有第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2。
3.如权利要求1或2所述的试纸条，其特征在于，所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1为识别幽门螺杆菌抗原的抗体，所述第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2为识别幽门螺杆菌抗原的、与所述第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1不同的抗体。
4.如权利要求1～3中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1为识别人血红蛋白的抗体，所述第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2为识别人血红蛋白的、与所述第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1不同的抗体。
5.如权利要求1～4中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1的含量为0.33-1.33μg/cm2，优选为0.50-1.17μg/cm2，最优选为0.67-1.00μg/cm2。
6.如权利要求1～5中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1的含量为0.50-1.33μg/cm2，优选为0.67-1.17μg/cm2，最优选为0.83-1.00μg/cm2。
7.如权利要求1～6中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上Triton X-100的含量为66.67-1000.00μg/cm2，优选为166.67-666.67μg/cm2，最优选为333.33-500.00μg/cm2。
8.如权利要求1～7中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2的含量为5.00-30.00μg/cm2，优选为10.00-25.00μg/cm2，最优选为15.00-20.00μg/cm2。
9.如权利要求1～8中任一项所述的试纸条，其特征在于，所述反应膜上第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的含量为5.00-35.00μg/cm2，优选为10.00-30.00μg/cm2，最优选为18.00-20.00μg/cm2。
10.一种Hp抗原和Fit联检胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
制备胶体金颗粒；
将胶体金颗粒分别与第一鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1和第一鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1结合，形成胶体金标记的鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物；
将所述鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab1胶体金结合物和鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab1胶体金结合物等比例混匀后在玻璃纤维膜上喷涂、干燥得到金结合物垫；
在硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，得到反应膜，其中分别将含有第二鼠抗Hp单克隆抗体Hp-Ab2、第二鼠抗血红蛋白单克隆抗体Hb-Ab2的溶液和含有羊抗鼠IgG多克隆抗体的溶液喷涂到硝酸纤维素膜上，形成Hp检测线、Hb检测线和质控线；
将样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫粘贴在PVC胶板上，使样本垫、金结合物垫、反应膜、吸收垫沿样品的流动方向依次排列，并使裁切得到试纸条。
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