CN111487239A - 表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用 - Google Patents

表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111487239A
CN111487239A CN201911381283.8A CN201911381283A CN111487239A CN 111487239 A CN111487239 A CN 111487239A CN 201911381283 A CN201911381283 A CN 201911381283A CN 111487239 A CN111487239 A CN 111487239A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nanofiber
membrane
bacteria
bacterium
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201911381283.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111487239B (zh
Inventor
王栋
鲁振坦
张佳琪
黄煜
黄江西
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan Textile University
Original Assignee
Wuhan Textile University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan Textile University filed Critical Wuhan Textile University
Priority to CN201911381283.8A priority Critical patent/CN111487239B/zh
Publication of CN111487239A publication Critical patent/CN111487239A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111487239B publication Critical patent/CN111487239B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y15/00—Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N2021/7756—Sensor type
    • G01N2021/7759—Dipstick; Test strip
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明提供了一种表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用，属于生物化学技术领域。该表面功能化纳米纤维细菌检测膜为表面接枝有显色底物的功能化纳米纤维细菌检测膜，首先制备一种聚乙烯醇‑乙烯共聚物纳米纤维膜，对其进行表面功能化处理，然后在其表面接枝能够与细菌中的特异性酶发生酶促反应的显色底物，得到表面功能化纳米纤维细菌检测膜。将本发明制备的细菌检测膜浸泡在细菌悬浮液中，显色底物在细菌中的特异性酶的作用下发生酶促反应，解离出显色物质，通过测试细菌检测膜表面或溶液的荧光强度或吸光度或者颜色深度变化，实现对细菌浓度的可视化、快速、可靠和特异性的灵敏检测。

Description

表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物化学技术领域，尤其涉及一种表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用。
背景技术
细菌等微生物感染已严重威胁到了人类的生命安全，由细菌感染引发的疾病造成的死亡的人数已达全球总死亡人数的三分之一。因此，为了减少食源性和水源性细菌病原体的爆发，细菌等病原体的较早和精确检测显得尤为重要。然而，目前有害细菌的标准分析方法，例如传统的平板计数和聚合酶链反应(PCR)，是从样品中提取并培养细菌，再检测细菌的结构形态及代谢产物，实现对细菌的定性定量识别，方法特异、结果准确，但这些方法需要繁琐的样品准备和复杂的检测过程、耗费时间长，需要先进的仪器设备和专业的实验操作人员，不能满足临床和实际生活中对细菌浓度实时检测的需要。因此，开发快速、灵敏、高效的细菌实时检测方法，对于临床诊断和治疗、水质监测和食品安全检测等领域具有重要的意义。
比色法是一种不依赖于先进仪器设备和专业实验操作人员的一种快速的细菌检测的方法，其中基于酶促响应的比色法因其实用性和检测专一性的优点，被广泛应用。酶促比色法检测细菌是基于底物在酶的作用下，通过生物化学反应产生颜色变化，通过颜色变化确定细菌浓度的范围。但是此种方法确定的细菌浓度精确度较低，而且细菌浓度过大时，还需要进一步稀释确定其浓度范围。为了解决目前细菌检测的局限，细菌的试纸化检测成为最有效便捷的检测方法之一。
例如申请号为CN201810178510.6的发明专利公开了一种荧光型细菌检测膜和制备方法及其细菌检测的方法，该细菌检测膜包括基材层及设置在基材层上的检测层，基材层由功能化细菌检测膜组成，检测层由功能性阳离子聚合物和阴离子聚合物通过层层自组装的方式均匀交替组装设置在功能化细菌检测膜表面。利用细菌表面丰富的负电荷，在细菌存在的环境下，细菌会优先和膜表面的正电性聚合物相结合，从而破坏细菌检测层的完整性，并且细菌检测层的被破坏速度与细菌浓度成正比。该发明中因为正电性聚合物中含有荧光分子，因此，可以通过测定膜表面的荧光强度来探测膜表面细菌检测层被破坏的程度，进而确定细菌浓度。然而，此种方法通过静电吸附将含有荧光分子的正电性聚合物吸附在膜表面，又利用细菌的负电性进行监测，由于静电吸附作用力的稳定性低，易受到其他负电性强的物质的干扰，因此细菌浓度检测的可靠性较低。申请号为CN201810178518.2的专利公开了一种大肠杆菌检测膜和制备方法及其细菌检测的方法，糖基聚合物和苯硼酸聚合物通过层层自组装设置在纤维膜表面，其稳定性受溶液pH值及外界离子强度的影响较大，外界pH值及离子强度的变化，尤其是临近临界阈值的微小变化即可对检测结果带来较大干扰。申请号为CN201810178378.9的专利公开了一种接枝共聚制备大肠杆菌检测膜及细菌检测的方法，通过原子转移自由基聚合在纳米纤维膜表面接枝引入甘露糖聚合物，然后再与异硫氰酸荧光素功能化牛血清蛋白复合，制备得到大肠杆菌检测膜。在高蛋白含量环境中，检测物中的蛋白质会将异硫氰酸荧光素功能化牛血清蛋白从检测膜中置换至溶液中，从而导致检测结果的假阳性。Ebrahimi等希望在壳聚糖水凝胶表面接枝显色底物，通过测试荧光强度或吸光度值，实现大肠杆菌的浓度检测(ACS Applied materials&Interfaces，2015，7，20190-20199)。但该方法制备的水凝胶对大肠杆菌的响应时间较长，浸泡时间为100min左右，荧光强度或吸光度值才发生明显变化，而且水凝胶存在强度较低、容易被破坏的问题，在大肠杆菌悬浮液的作用下易吸水膨胀，对检测精度造成干扰。并且最终并未建立细菌浓度与荧光强度或吸光度值直接的定量相关性，未建立细菌浓度与细菌检测膜膜表面颜色的定量或定性关系，并未实现通过观察膜表面颜色的变化达到对细菌可视化检测的效果。
因此，如何实现快速、灵敏且可靠的细菌浓度检测，是亟待解决的问题。
发明内容
针对上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用，首先制备一种聚乙烯醇与聚乙烯共混表面功能化纳米纤维细菌检测膜，对其进行表面功能化处理，再在其表面接枝能够与细菌中的特异性酶发生酶促反应的显色底物，显色底物在细菌中的特异性酶的作用下，解离出显色物质，通过测试表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面或溶液中的荧光强度变化，确定细菌浓度，实现对细菌的快速、可靠和特异性的灵敏检测。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案实现：
一种表面功能化纳米纤维细菌检测膜，所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜为表面接枝有显色底物的功能化纳米纤维细菌检测膜，所述显色底物能够与细菌中的特异性酶发生酶促反应，解离出显色物质，以实现通过测定所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜的荧光强度或吸光度值，确定细菌浓度。
进一步的，所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜对不同浓度的细菌悬浮液具有荧光强度或吸光度的变化响应；所述功能化纳米纤维细菌检测膜的荧光强度或吸光度值随细菌浓度的增大而增大。
进一步的，所述显色底物包含但不限于为荧光显色底物或者非荧光显色底物；所述荧光显色底物包含但不限于为4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷；所述非荧光显色底物包含但不限于为对硝基酚-β-葡萄糖醛酸苷、羟基喹啉-β-葡萄糖醛酸苷、6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸苷、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸苷中的一种。
一种以上所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备方法，包括以下步骤：
S101.制备聚乙烯醇-乙烯共聚物纳米纤维悬浮液，通过高压气流喷涂制备得到聚乙烯醇-乙烯共聚物纳米纤维膜；
S102.将步骤S101所述聚乙烯醇-乙烯共聚物纳米纤维膜在氢氧化钠溶液中进行浸渍处理，取出后干燥，得到表面活化的纳米纤维膜；
S103.将步骤S102所述表面活化的纳米纤维膜在三聚氯氰溶液中进行浸渍处理，取出后清洗、干燥，得到表面接枝三聚氯氰的纳米纤维膜；
S104.将步骤S103得到的所述表面接枝三聚氯氰的纳米纤维膜在多胺类物质的溶液中进行浸渍处理，取出后清洗、干燥，得到表面接枝多胺类物质的纳米纤维膜；
S105.将步骤S104得到的所述表面接枝多胺类物质的纳米纤维膜浸渍在显色底物的PBS缓冲液中，再依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，在N2环境下，室温反应4～36h，得到表面接枝有显色底物的表面功能化纳米纤维细菌检测膜。
进一步的，在步骤S105中，所述显色底物的PBS缓冲液的浓度为0.1～10mg/mL；所述显色底物与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的浓度比为1：(0.5～3)，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的浓度比≥4:1。
进一步的，在步骤S102中，所述氢氧化钠溶液的浓度为1～3mol/L；所述浸渍处理的温度为30～40℃，时间为0.5～3h；在步骤S3中，所述三聚氯氰溶液的质量浓度为0.5％～20％，溶剂为1,4-二氧六环；所述浸渍处理的温度为30～40℃，时间为0.5～3h。
进一步的，在步骤S104中，所述多胺类物质的溶液的浓度为0.5～5mol/L，溶剂为无水乙醇；所述多胺类物质包含但不限于为丙二胺、己二胺、二乙烯三胺中的一种；所述浸渍处理的温度为30～40℃，时间为0.5～5h。
进一步的，将以上所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，或以上所述的制备方法制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜用于细菌浓度检测。
进一步的，所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜检测细菌浓度的方法包括以下步骤：
S201.配制若干组不同浓度的细菌悬浮液；
S202.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜分别浸泡在步骤S201所述若干组细菌悬浮液中，测试所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度、吸光度值或颜色深度随浸泡时间的变化，或者测试所述细菌悬浮液的荧光强度、吸光度值或颜色深度随浸泡时间的变化，得到所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的荧光强度或吸光度值与浸泡时间的关系曲线，或者得到所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的标准比色卡；
S203.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜浸泡在待测的细菌悬浮液中，测试所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者所述待测的细菌悬浮液的荧光强度、吸光度值或颜色深度随测试时间的变化，通过与步骤S202得到的所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的荧光强度或吸光度值与浸泡时间的关系曲线进行比较，或者与所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的标准比色卡进行比较，得到所述待测的细菌悬浮液的浓度。
有益效果
与现有技术相比，本发明提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用具有如下有益效果：
(1)本发明采用表面表面功能化的表面功能化纳米纤维细菌检测膜作为细菌检测膜，表面功能化纳米纤维细菌检测膜比表面积大，且对细菌的亲和性高，与细菌作用时接触面积较大，响应位点较多，在检测细菌时起到信号放大的效果，因此检测速率快；此外，表面功能化纳米纤维细菌检测膜与细菌悬浮液作用时，不溶胀，稳定性能较高，因此检测的精度较高。
(2)本发明首先采用碱性溶液对表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面进行活化处理，使得更多的活性羟基暴露于表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面，然后利用活性基团之间的反应，依次将三聚氯氰和多胺类物质接枝于表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面，最后通过酰胺化反应，将显色底物接枝于表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面。本发明利用化学接枝反应将显色底物固定在表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面，克服了现有技术中静电吸附作用的不稳定性的问题，检测层受溶液中pH值、离子强度、甚至不同种类的杂菌干扰能力较小；此外，本发明利用细菌中的酶催化显色底物发生酶促反应，解离出显色物质，通过测试表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面或溶液中的荧光强度，实现对细菌的特异性快速可视化检测，具有特异性和灵敏度高的优点。
(3)本发明采用水溶性的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作为交联剂，EDC-NHS具有无毒、生物相容性好的优点，有助于提高细菌检测的可靠性。
(4)本发明制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的功能类似试纸条，可制成一次性的检测试纸条，成本较低，且携带较为方便，对于实际样品的检测较为方便。
(5)本发明制备的纳米纤维细菌检测膜检测层与细菌响应后，膜表面的检测层颜色会发生改变，可以通过观察膜表面颜色的改变，实现对细菌浓度的定性可视化检测效果。
附图说明
图1为实施例1制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜与β-葡萄糖醛酸酶溶液共作用前后溶液荧光强度的变化曲线；
图2为表面功能化纳米纤维细菌检测膜与大肠杆菌悬浮液不同作用时间下，溶液荧光强度的变化曲线；
图3为表面功能化纳米纤维细菌检测膜与大肠杆菌悬浮液共作用时间与细菌溶液的荧光强度的变化曲线；
图4为实施例1制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜与不同浓度的大肠杆菌悬浮液共作用后溶液中荧光强度变化图片；
图5为实施例1制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜与不同浓度的大肠杆菌悬浮液共作用后表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面荧光强度变化图片；
图6为实施例1制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜与不同浓度的大肠杆菌悬浮液共作用后大肠杆菌悬浮液的荧光强度随其浓度变化的曲线；
图7为实施例1制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜及中间产物的红外光谱图。
具体实施方式
以下将对本发明各实施例的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施例，都属于本发明所保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种表面功能化纳米纤维细菌检测膜，为表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的聚乙烯醇-乙烯共聚物功能化纳米纤维细菌检测膜，所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜的厚度为200μm，纳米纤维直径约为200nm，其制备方法如下：
S101.采用两不相容体系熔融共混相分离技术，将聚乙烯醇-乙烯共聚物与醋酸丁酸纤维素熔融共混挤出，然后通过溶剂萃取去除醋酸丁酸纤维素，制备出纤维直径约为200nm的聚乙烯醇-乙烯共聚物(PVA-co-PE)纤维。再利用高强的机械剪切作用，将PVA-co-PE纳米纤维分散到溶度参数相近的溶剂中，制备出一种稳定的PVA-co-PE纳米纤维悬浮液，然后利用高压气流成型技术，将纳米纤维悬浮液喷涂制备得到PVA-co-PE纳米纤维膜；
S102.将步骤S101制备得到的PVA-co-PE纳米纤维膜在浓度为2mol/L的氢氧化钠溶液中进行浸渍处理，取出后干燥，得到表面活化的PVA-co-PE纳米纤维膜；
其中，所述PVA-co-PE纳米纤维膜的尺寸为2cm×2cm，每块表面功能化纳米纤维细菌检测膜对应10mL氢氧化钠溶液；所述浸渍处理的温度为37℃，时间为2h；
S103.将步骤S102制备得到的表面活化的PVA-co-PE纳米纤维膜在质量浓度为10％的三聚氯氰1,4-二氧六环溶液中进行浸渍处理，取出后，依次用1,4-二氧六环和去离子水混合溶液、丙酮和去离子水混合溶液、丙酮清洗，然后室温晾干，得到表面接枝三聚氯氰的PVA-co-PE纳米纤维膜；
其中，每块PVA-co-PE纳米纤维膜对应10mL三聚氯氰溶液；所述浸渍处理的温度为37℃，时间为2h；
S104.将步骤S103制备得到的表面接枝三聚氯氰的PVA-co-PE纳米纤维膜在浓度为3mol/L的丙二胺的无水乙醇溶液中进行浸渍处理，取出后用乙醇清洗3次，然后室温晾干，得到表面接枝丙二胺的PVA-co-PE纳米纤维膜；
其中，每块PVA-co-PE纳米纤维膜对应10mL丙二胺溶液；所述浸渍处理的温度为37℃，时间为3h；
S105.将步骤S104制备得到的表面接枝丙二胺的PVA-co-PE纳米纤维膜浸渍在浓度为5mg/mL的4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷(MUG)的PBS(PH＝7.4)缓冲液中，再按浓度分别为6mg/mL和1.5mg/mL，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，在N2环境下，室温反应12h，得到表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的PVA-co-PE纳米纤维膜。
从图7红外光谱图可以看出，通过以上步骤S101至步骤S105的方法，成功制备了表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的PVA-co-PE纳米纤维膜。
将本实施例制备的表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的PVA-co-PE纳米纤维膜浸泡在浓度为25U/mL的β-葡萄糖醛酸酶溶液中，反应5min。采用荧光分光光度计分别测定反应前后溶液中荧光强度的变化。如图1所示，为表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的表面功能化纳米纤维细菌检测膜与β-葡萄糖醛酸酶溶液共作用前后溶液荧光强度的变化。可以看出，溶液中的荧光强度在波长为400～500nm之间，有一个峰值；表面功能化纳米纤维细菌检测膜与细菌作用前，溶液中的荧光强度值较低；共作用5min后，溶液中的荧光强度值明显升高，说明显色物质被β-葡萄糖醛酸酶解离后存在于溶液中，因此溶液的荧光强度增加，相应地表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度值将降低。由此说明本发明制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜能够在特异性酶作用下，发生解离，产生荧光强度的变化。
进一步的将本实施例制备的表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的表面功能化纳米纤维细菌检测膜分别浸泡在浓度为102CFU/mL、103CFU/mL、104CFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL、107CFU/mL的大肠杆菌悬浮液中，解离30min后，观察溶液的荧光强度和表面功能化纳米纤维细菌检测膜的荧光强度，如图4和图5所示(图中从左到右大肠杆菌的浓度依次为107CFU/mL、106CFU/mL、105CFU/mL、104CFU/mL、103CFU/mL、102CFU/mL)。可以看出，随着大肠杆菌悬浮液浓度的增大，溶液和表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度均逐渐增强，由此说明本发明制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜能够在大肠杆菌中的β-葡萄糖醛酸酶的作用下，发生解离，进而产生荧光强度的变化。
实施例2～7
实施例2～7提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，与实施例1相比，不同之处在于，显色底物种类及表面功能化纳米纤维细菌检测膜厚度和纳米纤维直径如表1所示，其他与实施例1基本相同，在此不再赘述。
表1实施例2～7提供表面功能化纳米纤维细菌检测膜的组成
实施例 厚度/μm 纳米纤维直径/nm 显色底物
2 100 200 4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷
3 300 200 4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷
4 200 300 4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷
5 200 450 4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷
6 200 200 对硝基酚-β-葡萄糖醛酸苷
7 200 200 6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸苷
实施例8～17
实施例8～17提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，与实施例1相比，显色底物种类及表面功能化纳米纤维细菌检测膜厚度和纳米纤维直径与实施例1相同，不同之处在于，步骤S5中的制备条件如表2所示，其他与实施例1基本相同，在此不再赘述。
表2实施例8～17提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备条件
Figure BDA0002342313520000121
实施例18～23
实施例18～23提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，与实施例1相比，显色底物种类及表面功能化纳米纤维细菌检测膜厚度和纳米纤维直径与实施例1相同，不同之处在于，步骤S2中的制备条件如表3所示，其他与实施例1基本相同，在此不再赘述。
表3实施例18～23提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备条件
Figure BDA0002342313520000122
Figure BDA0002342313520000131
实施例24～29
实施例24～29提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，与实施例1相比，显色底物种类及表面功能化纳米纤维细菌检测膜厚度和纳米纤维直径与实施例1相同，不同之处在于，步骤S3中的制备条件如表4所示，其他与实施例1基本相同，在此不再赘述。
表4实施例24～29提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备条件
实施例 三聚氯氰溶液质量浓度％ 浸渍温度/℃ 浸渍时间/h
24 0.5 37 2
25 20 37 2
26 10 30 2
27 10 40 2
28 10 37 0.5
29 10 37 3
实施例30～37
实施例30～37提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，与实施例1相比，显色底物种类及表面功能化纳米纤维细菌检测膜厚度和纳米纤维直径与实施例1相同，不同之处在于，步骤S4中的制备条件如表5所示，其他与实施例1基本相同，在此不再赘述。
表5实施例30～37提供的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备条件
Figure BDA0002342313520000132
Figure BDA0002342313520000141
应用例1
将实施例1制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜应用于细菌浓度的检测，检测方法如下：
(1)通过测试表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者待测的细菌悬浮液的荧光强度确定细菌浓度，包括以下步骤：
S201.将实施例1制备的表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的表面功能化纳米纤维细菌检测膜裁剪成3cm×1cm的试样，分别配制浓度为102CFU/mL、103CFU/mL、104CFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL的5组大肠杆菌悬浮液；
S202.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜分别浸泡在步骤S201所述5组大肠杆菌悬浮液中，分别测试所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者所述大肠杆菌悬浮液的荧光强度随浸泡时间的变化，得到所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者所述大肠杆菌悬浮液的荧光强度与浸泡时间的关系曲线；
S203.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜浸泡在待测的大肠杆菌悬浮液中，测试所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述待测的细菌悬浮液的荧光强度随测试时间的变化，通过与步骤S202得到的所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的荧光强度与浸泡时间的关系曲线，得到所述待测的大肠杆菌悬浮液的浓度。
请参阅图2和图3(大肠杆菌悬浮液的浓度为106CFU/mL)所示，可以看出，大肠杆菌悬浮液的荧光强度在450nm左右出现荧光强度峰值，随着浸泡时间的延长，溶液中的荧光强度逐渐增大，这是因为解离出的显色物质越多，溶液中的显色物质越多；类似的，表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度值也随着浸泡时间的延长，逐渐增大，这是因为解离出的显色物质越多，吸附在表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的显色物质越多。从图3可以看出，在浸泡时间小于20min时，溶液荧光强度峰值随浸泡时间迅速增大，随着时间继续延长，溶液荧光强度峰值的增大速率逐渐减慢，说明本发明制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜具有较快的细菌浓度检测速率。结合图4、图5和图6可以看出，相同浸泡时间下，随着大肠杆菌悬浮液浓度的增大，溶液和表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度均逐渐增强，由此说明通过测定大肠杆菌悬浮液或表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度值，能够确定大肠杆菌悬浮液浓度。
(2)进一步的，还可以通过测试表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者待测的细菌悬浮液的荧光强度变化速率，确定细菌浓度，包括以下步骤：
S201.将实施例1制备的表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的表面功能化纳米纤维细菌检测膜裁剪成3cm×1cm的试样，测定其表面荧光强度值；然后配制6份浓度分别为102CFU/mL、103CFU/mL、104CFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL、107CFU/mL的大肠杆菌悬浮液，测试各悬浮液的荧光强度值；再将裁剪好的表面功能化纳米纤维细菌检测膜浸渍于上述大肠杆菌悬浮液中，分别在浸泡时间的等时间间隔的时间点上，采用荧光分光光度计测定表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度值和溶液的荧光强度值；
S202.根据步骤S201所述各时间点上表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度值和溶液荧光强度值，由多个前后变化的荧光强度的差值，分别计算得到在6种浓度的大肠杆菌悬浮液中，表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度和溶液的荧光强度的变化速率；然后通过曲线拟合得到荧光强度变化速率与大肠杆菌悬浮液浓度的标准关系曲线；
S203.将步骤S201中相同的裁剪好的表面功能化纳米纤维细菌检测膜试样，浸泡在待测的大肠杆菌悬浮液中，分别在浸泡时间的等时间间隔的时间点上，采用荧光分光光度计测定表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度和待测的大肠杆菌悬浮液的荧光强度值，并根据荧光强度变化值计算荧光强度的变化速率；
S204.根据步骤S203所述待测样品的荧光强度变化速率，结合步骤S302所述荧光强度变化速率与大肠杆菌悬浮液浓度的标准关系曲线，得到待测样品中的大肠杆菌浓度。
应用例2
通过表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者待测的细菌悬浮液的颜色深度变化，确定细菌浓度，包括以下步骤：
S201.将实施例1制备的表面接枝有4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷的表面功能化纳米纤维细菌检测膜裁剪成3cm×1cm的试样，分别配制浓度为102CFU/mL、103CFU/mL、104CFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL的5组大肠杆菌悬浮液；
S202.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜分别浸泡在步骤S201所述5组大肠杆菌悬浮液中，分别观察所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者所述大肠杆菌悬浮液的颜色深度随浸泡时间的变化，得到所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者所述大肠杆菌悬浮液的标准比色卡；
S203.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜浸泡在待测的大肠杆菌悬浮液中，观察所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述待测的细菌悬浮液的颜色深度随测试时间的变化，通过与步骤S202得到的所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的标准比色卡进行比对，得到所述待测的大肠杆菌悬浮液的浓度。
通过以上应用例，可以得出，本发明制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜既能定性又能定量的测定细菌浓度，通过制备标准比色卡，能够简单快捷的得到待测的细菌浓度，实现了可视化判断细菌浓度，而且纳米纤维细菌检测膜具有比表面积大和对细菌的亲和性高的优点，与细菌作用时接触面积较大，响应位点较多，在检测细菌时起到信号放大的效果，从而提高检测速率。此外，表面功能化纳米纤维细菌检测膜与细菌悬浮液作用时，不溶胀，稳定性较高，因此检测的精度较高。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种表面功能化纳米纤维细菌检测膜，其特征在于，所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜为表面接枝有显色底物的功能化纳米纤维细菌检测膜，所述显色底物能够与细菌中的特异性酶发生酶促反应，解离出显色物质，以实现通过测定所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜的荧光强度或吸光度值，确定细菌浓度。
2.根据权利要求1所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，其特征在于，所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜对不同浓度的细菌悬浮液具有荧光强度或吸光度的变化响应；所述功能化纳米纤维细菌检测膜的荧光强度或吸光度值随细菌浓度的增大而增大。
3.根据权利要求1所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，其特征在于，所述显色底物包括但不限于为荧光显色底物或者非荧光显色底物；所述荧光显色底物包括但不限于为4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷；所述非荧光显色底物包括但不限于为对硝基酚-β-葡萄糖醛酸苷、羟基喹啉-β-葡萄糖醛酸苷、6-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸苷或者5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸苷中的一种。
4.一种权利要求1至3中任一项权利要求所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S101.制备聚乙烯醇-乙烯共聚物纳米纤维悬浮液，通过高压气流喷涂制备得到聚乙烯醇-乙烯共聚物纳米纤维膜；
S102.将步骤S101所述聚乙烯醇-乙烯共聚物纳米纤维膜在氢氧化钠溶液中进行浸渍处理，取出后干燥，得到表面活化的纳米纤维膜；
S103.将步骤S102所述表面活化的纳米纤维膜在三聚氯氰溶液中进行浸渍处理，取出后清洗、干燥，得到表面接枝三聚氯氰的纳米纤维膜；
S104.将步骤S103得到的所述表面接枝三聚氯氰的纳米纤维膜在多胺类物质的溶液中进行浸渍处理，取出后清洗、干燥，得到表面接枝多胺类物质的纳米纤维膜；
S105.将步骤S104得到的所述表面接枝多胺类物质的纳米纤维膜浸渍在显色底物的PBS缓冲液中，再依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，在N2环境下，室温反应4～36h，得到表面接枝有显色底物的表面功能化纳米纤维细菌检测膜。
5.根据权利要求4所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备方法，其特征在于，在步骤S105中，所述显色底物的PBS缓冲液的浓度为0.1～10mg/mL；所述显色底物与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的浓度比为1：(0.5～3)，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的浓度比≥4:1。
6.根据权利要求4所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备方法，其特征在于，在步骤S102中，所述氢氧化钠溶液的浓度为1～3mol/L；所述浸渍处理的温度为30～40℃，时间为0.5～3h；在步骤S3中，所述三聚氯氰溶液的质量浓度为0.5％～20％，溶剂为1,4-二氧六环；所述浸渍处理的温度为30～40℃，时间为0.5～3h。
7.根据权利要求4所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜的制备方法，其特征在于，在步骤S104中，所述多胺类物质的溶液的浓度为0.5～5mol/L，溶剂为无水乙醇；所述多胺类物质包括但不限于为丙二胺、己二胺、二乙烯三胺中的任一种；所述浸渍处理的温度为30～40℃，时间为0.5～5h。
8.一种权利要求1至3中任一项权利要求所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜，或权利要求4至7中任一项权利要求所述的制备方法制备的表面功能化纳米纤维细菌检测膜在细菌浓度检测方面的应用。
9.根据权利要求8所述的表面功能化纳米纤维细菌检测膜在细菌浓度检测方面的应用，其特征在于，所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜检测细菌浓度的方法包括以下步骤：
S201.配制若干组不同浓度的细菌悬浮液；
S202.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜分别浸泡在步骤S201所述若干组细菌悬浮液中，测试所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜表面的荧光强度、吸光度值或颜色深度随浸泡时间的变化，或者测试所述细菌悬浮液的荧光强度、吸光度值或颜色深度随浸泡时间的变化，得到所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的荧光强度或吸光度值与浸泡时间的关系曲线，或者得到所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的标准比色卡；
S203.将所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜浸泡在待测的细菌悬浮液中，测试所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或者所述待测的细菌悬浮液的荧光强度、吸光度值或颜色深度随测试时间的变化，通过与步骤S202得到的所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的荧光强度或吸光度值与浸泡时间的关系曲线进行比较，或者与所述表面功能化纳米纤维细菌检测膜或所述细菌悬浮液的标准比色卡进行比较，得到所述待测的细菌悬浮液的浓度。
CN201911381283.8A 2019-12-27 2019-12-27 表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用 Active CN111487239B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911381283.8A CN111487239B (zh) 2019-12-27 2019-12-27 表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911381283.8A CN111487239B (zh) 2019-12-27 2019-12-27 表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111487239A true CN111487239A (zh) 2020-08-04
CN111487239B CN111487239B (zh) 2022-06-03

Family

ID=71794296

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911381283.8A Active CN111487239B (zh) 2019-12-27 2019-12-27 表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111487239B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113152091A (zh) * 2021-04-21 2021-07-23 东华大学 一种可视检测大肠杆菌和pH响应的多糖基水凝胶基织物及其制备方法
CN114657780A (zh) * 2022-03-21 2022-06-24 武汉纺织大学 用于过氧化氢荧光检测的纳米纤维膜的制备方法
CN115382002A (zh) * 2022-08-25 2022-11-25 东华大学 一种兼具智能抗菌及感染指示的海绵敷料及其制备方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0329697D0 (en) * 2003-12-22 2004-01-28 Prail Price Richardson Diagnos Detector
US20070196884A1 (en) * 2003-07-31 2007-08-23 Isrim S. Cons. A.R.L. Method For The Detection Of Coliforms And In Particular Escherichia Coli
CN102788787A (zh) * 2011-05-19 2012-11-21 北京化工大学 一种铬检测聚合物膜、制备方法及应用
CN103642894A (zh) * 2013-11-25 2014-03-19 广东环凯微生物科技有限公司 一种金黄色葡萄球菌特异性显色培养基
CN108303381A (zh) * 2018-03-05 2018-07-20 武汉纺织大学 接枝共聚制备铜绿假单胞菌检测膜及细菌检测的方法
CN108459161A (zh) * 2018-03-05 2018-08-28 武汉纺织大学 接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜及细菌检测的方法
CN108508003A (zh) * 2018-03-05 2018-09-07 武汉纺织大学 接枝共聚制备抗蛋白干扰能力的细菌检测膜及细菌检测的方法
CN110129406A (zh) * 2019-05-06 2019-08-16 上海源本食品质量检验有限公司 一种铜绿假单胞菌显色培养基及利用其快速检测的方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070196884A1 (en) * 2003-07-31 2007-08-23 Isrim S. Cons. A.R.L. Method For The Detection Of Coliforms And In Particular Escherichia Coli
GB0329697D0 (en) * 2003-12-22 2004-01-28 Prail Price Richardson Diagnos Detector
GB2409519A (en) * 2003-12-22 2005-06-29 Prail Price Richardson Diagnos Microorganism detector
CN102788787A (zh) * 2011-05-19 2012-11-21 北京化工大学 一种铬检测聚合物膜、制备方法及应用
CN103642894A (zh) * 2013-11-25 2014-03-19 广东环凯微生物科技有限公司 一种金黄色葡萄球菌特异性显色培养基
CN108303381A (zh) * 2018-03-05 2018-07-20 武汉纺织大学 接枝共聚制备铜绿假单胞菌检测膜及细菌检测的方法
CN108459161A (zh) * 2018-03-05 2018-08-28 武汉纺织大学 接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜及细菌检测的方法
CN108508003A (zh) * 2018-03-05 2018-09-07 武汉纺织大学 接枝共聚制备抗蛋白干扰能力的细菌检测膜及细菌检测的方法
CN110129406A (zh) * 2019-05-06 2019-08-16 上海源本食品质量检验有限公司 一种铜绿假单胞菌显色培养基及利用其快速检测的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BRIAN CRERAN ET AL.: "Detection of Bacteria Using Inkjet-Printed Enzymatic Test Strips", 《ASC APPLIED MATERIALS & INTERFACES》 *
WENWEN WANG ET AL.: "Amine-functionalized PVA-co-PE nanofibrous membrane as affinity membrance with high adsorption capacity for bilirubin", 《COLLOIDS AND SURFACES B: BIOINTERFACES 》 *
鲍晓凤等: "荧光观察方法检测水中大肠埃希氏菌的应用", 《食品安全质量检测学报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113152091A (zh) * 2021-04-21 2021-07-23 东华大学 一种可视检测大肠杆菌和pH响应的多糖基水凝胶基织物及其制备方法
CN114657780A (zh) * 2022-03-21 2022-06-24 武汉纺织大学 用于过氧化氢荧光检测的纳米纤维膜的制备方法
CN114657780B (zh) * 2022-03-21 2023-11-28 武汉纺织大学 用于过氧化氢荧光检测的纳米纤维膜的制备方法
CN115382002A (zh) * 2022-08-25 2022-11-25 东华大学 一种兼具智能抗菌及感染指示的海绵敷料及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111487239B (zh) 2022-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111487239B (zh) 表面功能化纳米纤维细菌检测膜及其制备方法和应用
CA1339881C (en) Process for specifically measuring endotoxin
US7214299B2 (en) Method for separation, identification and evaluation of microbes and cells
Sun et al. Applications of antibiofouling PEG-coating in electrochemical biosensors for determination of glucose in whole blood
US20030203477A1 (en) Apparatus and method for surface culture of microorganisms from bulk fluids
CN113049557A (zh) 一种生殖道分泌物多重荧光染色液及其制备方法和应用
CN111458516B (zh) 一种检测细菌耐药性的电化学发光生物传感器及其制备方法
US20030022270A1 (en) Automated epifluorescence microscopy for detection of bacterial contamination in platelets
CA1334276C (en) Process for preparing reagent for measuring endotoxin
CN107271410B (zh) 细菌或真菌的活性快速检测方法
CN105986000B (zh) 一种混合菌生物传感器检测污染物生物毒性的方法
Harkes et al. Physicochemical characterization of Escherichia coli: a comparison with gram-positive bacteria
Lin et al. Stimulus-responsive hydrogels: A potent tool for biosensing in food safety
US20020131900A1 (en) Sensor comprising a hydrophilic matrix material
JP7411583B2 (ja) 複雑なサンプル中のそのグラム信号に従って細菌を検出するための方法
CN114965644B (zh) 电化学发光体、电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用
US9580760B2 (en) Rapid detection of mold by accelerated growth and detection
Chen et al. Characterization of natural chitosan membranes from the carapace of the soldier crab Mictyris brevidactylus and its application to immobilize glucose oxidase in amperometric flow-injection biosensing system
TWI570241B (zh) 微生物檢測裝置之製造方法、微生物檢測方法、微生物檢測套組及裝置
CN111005158B (zh) 一种PEI@Ru@Nafion@PAN纳米纤维膜的制备方法及其应用
CN114410732A (zh) 一种高通量测定抗菌活性的方法
CN114113222A (zh) 基于固态纳米孔技术对脂多糖定性或菌种来源鉴定的方法
CN116337962A (zh) 一种基于聚多巴胺纳米球复合材料的亚硝酸盐电化学传感器的制备方法及应用
Rogacheva et al. Film polysaccharide matrices for immobilization of hydrophilic fluorescence probes
CN110938672A (zh) 一种利用药敏指示剂进行微生物药敏试验的检验方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant