CN111458431B - 奥利司他中间体的异构体的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种奥利司他中间体的异构体的检测方法。方法为:对照品溶液的制备:取奥利司他中间体的对映异构体对照品,加溶剂溶解,得对映异构体对照品溶液;待测样品溶液的制备:取待测样品,加溶剂溶解,得待测样品溶液;对所述对映异构体对照品溶液和待测样品溶液进行液相色谱检测;所述液相色谱的色谱条件包括:流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,等度洗脱;所述等度洗脱中,保持所述流动相A、所述流动相B和所述流动相C的体积比为(95±5):(5±2):(0.1±0.05)。上述方法可使奥利司他中间体及其对映异构体的色谱峰实现有效分离,为奥利司他中间体工业化生产提供简便、准确、快速、可靠的检测方法。
Description
技术领域
本发明涉及分析测试领域,特别是涉及奥利司他中间体的异构体的检测方法。
背景技术
奥利司他(Orlistat)为非作用于中枢神经系统的肥胖症治疗药,仅作用于胃肠道,通过抑制胃肠道的脂肪酶,阻止三酰甘油水解为游离脂肪酸和单酰基甘油酯,减少肠腔黏膜对膳食中脂肪(三酰甘油)的吸收,促使脂肪排除体外。其副作用少,它是全球唯一的OTC减肥药,它的发现与应用不仅解救了无数的肥胖病人,更为其他类似的减肥药物的研究提供了宝贵的研究经验与开发思路。成为当前应用最广且最受欢迎的新型减肥药之一,因此,它也一直是对人们强有吸引力的合成目标。
奥利司他合成过程中,奥利司他中间体,CAS号为96829-59-3,结构如式I所示,属于胞外胞内均有的脂溶性次级代谢产物,而且代谢副产物又多,其手性纯度以及异构体含量直接影响奥利司他的疗效。
发明内容
目前,并未发现奥利司他中间体的异构体的检测方法的相关文献及报道,为了加强奥利司他中间体质量控制,本发明提供一种奥利司他中间体的异构体的检测方法。
具体技术方案为:
一种奥利司他中间体的异构体的检测方法,包括以下步骤:
对照品溶液的制备:取奥利司他中间体的对映异构体对照品,加溶剂溶解,得对映异构体对照品溶液;
待测样品溶液的制备:取待测样品,加溶剂溶解,得待测样品溶液;
对所述对映异构体对照品溶液和待测样品溶液进行液相色谱检测;
所述液相色谱的色谱条件包括:
流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,等度洗脱;
所述等度洗脱中,保持所述流动相A、所述流动相B和所述流动相C的体积比为(95±5):(5±2):(0.1±0.05)。
在一些优选的实施例中,所述等度洗脱中,保持所述流动相A、所述流动相B和所述流动相C的体积比为95:5:0.1。
在一些优选的实施例中,溶解所述奥利司他中间体的对映异构体对照品的溶剂为正己烷和异丙醇的混合溶剂。
在一些优选的实施例中,所述混合溶剂中,所述正己烷和所述异丙醇的体积比为1:(0.5-2)。
在一些优选的实施例中,所述对照品溶液的浓度为1μg/mL-1.5μg/mL。
在一些优选的实施例中,溶解所述待测样品的溶剂为正己烷和异丙醇的混合溶剂。
在一些优选的实施例中,所述混合溶剂中,所述正己烷和所述异丙醇的体积比为1:(0.5-2)。
在一些优选的实施例中,所述待测样品溶液的浓度为0.2mg/mL-0.8mg/mL。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:色谱柱选自大赛璐色谱柱。
在一些优选的实施例中,所述色谱柱为chiralcel AD-H。
在一些优选的实施例中,所述液相色谱检测采用检测器为紫外检测器。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:检测波长为190nm-230nm。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:进样量为18μL-22μL。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:流速为0.8ml/min-1.2ml/min。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:柱温为20℃-30℃。
在一些优选的实施例中,进行液相色谱检测后,采用面积归一法计算所述奥利司他中间体的异构体的含量。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明采用液相色谱法检测了奥司利他中间体的对映异构体,以正己烷为流动相A,以异丙醇为流动相B,改善了奥司利他中间体与对映异构体的分离效果,同时,以二乙胺为流动相C,改善了色谱峰的峰型,使奥利司他中间体及其对映异构体色谱峰实现有效分离,最后奥利司他的对映异构体通过色谱峰保留时间定性,峰面积定量,为奥利司他中间体工业化生产提供简便、准确、快速、可靠的检测方法。
附图说明
图1为实施例1待测样品的液相色谱图;
图2为实施例1对映异构体对照品线性回归曲线;
图3为实施例2待测样品的液相色谱图;
图4为实施例3待测样品的液相色谱图;
图5为系统适用性试验溶液的液相色谱图;
图6为对比例1对照品溶液的液相色谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施方式。相反地,提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
奥利司他(Orlistat)为非作用于中枢神经系统的肥胖症治疗药,仅作用于胃肠道,通过抑制胃肠道的脂肪酶,阻止三酰甘油水解为游离脂肪酸和单酰基甘油酯,减少肠腔黏膜对膳食中脂肪(三酰甘油)的吸收,促使脂肪排除体外。其副作用少,它是全球唯一的OTC减肥药,它的发现与应用不仅解救了无数的肥胖病人,更为其他类似的减肥药物的研究提供了宝贵的研究经验与开发思路。成为当前应用最广且最受欢迎的新型减肥药之一,因此,它也一直是对人们强有吸引力的合成目标。
奥利司他中间体,CAS号为96829-59-3,结构如式I所示,属于胞外胞内均有的脂溶性次级代谢产物,而且代谢副产物又多,其手性纯度以及异构体含量直接影响奥利司他的疗效。
本发明所述的奥利司他中间体的异构体是上述奥利司他中间体的对映异构体。
目前,并未发现奥利司他中间体的异构体的检测方法的相关文献及报道,为了加强奥利司他中间体质量控制,本发明提供一种奥利司他中间体的异构体的检测方法。
具体技术方案为:
一种奥利司他中间体的异构体的检测方法,包括以下步骤:
对照品溶液的制备:取奥利司他中间体的对映异构体对照品,加溶剂溶解,得对映异构体对照品溶液;
待测样品溶液的制备:取待测样品,加溶剂溶解,得待测样品溶液;
对所述对映异构体对照品溶液和待测样品溶液进行液相色谱检测;
所述液相色谱的色谱条件包括:
流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,等度洗脱;
所述等度洗脱中,保持保持所述流动相A、所述流动相B和所述流动相C的体积比为(95±5):(5±2):(0.1±0.05)。
具体地,对所述对映异构体对照品溶液进行液相色谱检测,可获得对照图谱,其包含有效分离的奥利司他中间体的对映异构体的特征峰。对待测样品溶液进行液相色谱检测,可获得待测样品图谱,其包含待测样品溶液的特征峰。将待测样品图谱与对照图谱进行比较,记录与奥利司他中间体的对映异构体的特征峰保留时间一致的峰,根据面积归一法计算可得待测样品中,奥利司他中间体的对映异构体的含量。
可以理解地,还可以采用与对映异构体对照品溶液相同的方法,制备奥利司他中间体的对照品溶液,将奥利司他中间体的对照品溶液进行液相色谱检测,可获得奥利司他中间体的对照谱图,将待测样品图谱与奥利司他中间体的对照谱图进行比较,记录与奥利司他中间体的特征峰保留时间一致的峰,根据面积归一法计算可得待测样品中,奥利司他中间体的含量。
奥利司他的对映异构体通过色谱峰保留时间定性,峰面积定量,为奥利司他中间体工业化生产提供简便、准确、快速、可靠的检测方法。
在一些优选的实施例中,溶解所述奥利司他中间体的对映异构体对照品的溶剂为正己烷和异丙醇的混合溶剂。
在一些优选的实施例中,所述混合溶剂中,所述正己烷和所述异丙醇的体积比为1:(0.5-2)。具体地,所述混合溶剂中,所述正己烷和所述异丙醇的体积比包括但不限与以下比例:1:0.5、1:06、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2。
在一些优选的实施例中,所述对照品溶液的浓度为1μg/mL-1.5μg/mL。具体地,所述对照品溶液的浓度包括但不限于1μg/mL、1.1μg/mL、1.2μg/mL、1.3μg/mL、1.4μg/mL、1.5μg/mL。
在一些优选的实施例中,溶解所述待测样品的溶剂为正己烷和异丙醇的混合溶剂。
在一些优选的实施例中,所述混合溶剂中,所述正己烷和所述异丙醇的体积比为1:(0.5-2)。具体地,所述混合溶剂中,所述正己烷和所述异丙醇的体积比包括但不限与以下比例:1:0.5、1:06、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2。
在一些优选的实施例中,所述待测样品溶液的浓度为0.2mg/mL-0.8mg/mL。具体地,所述待测样品溶液的浓度包括但不限于0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL。
通过调控色谱条件,尤其是优化流动相A、流动相B和流动相C的体积比,可以优化奥司利他中间体与对映异构体的分离效果,实现奥利司他中间体及其对映异构体色谱峰的有效分离。
具体地,所述等度洗脱中,保持所述流动相A、所述流动相B和所述流动相C的体积比包括但不限于90:3:0.05、91:3:0.05、92:3:0.05、93:3:0.05、94:3:0.05、95:3:0.05、96:3:0.05、97:3:0.05、98:3:0.05、99:3:0.05、100:3:0.05、90:4:0.05、91:4:0.05、92:4:0.05、93:4:0.05、94:4:0.05、95:4:0.05、96:4:0.05、97:4:0.05、98:4:0.05、99:4:0.05、100:4:0.05、90:5:0.05、91:5:0.05、92:5:0.05、93:5:0.05、94:5:0.05、95:5:0.05、96:5:0.05、97:5:0.05、98:5:0.05、99:5:0.05、100:5:0.05、90:6:0.05、91:6:0.05、92:6:0.05、93:6:0.05、94:6:0.05、95:6:0.05、96:6:0.05、97:6:0.05、98:6:0.05、99:6:0.05、100:6:0.05、90:7:0.05、91:7:0.05、92:7:0.05、93:7:0.05、94:7:0.05、95:7:0.05、96:7:0.05、97:7:0.05、98:7:0.05、99:7:0.05、100:7:0.05、90:3:0.1、90.1:3:0.1、92:3:0.1、93:3:0.1、94:3:0.1、95:3:0.1、96:3:0.1、97:3:0.1、98:3:0.1、99:3:0.1、0.100:3:0.1、90:4:0.1、90.1:4:0.1、92:4:0.1、93:4:0.1、94:4:0.1、95:4:0.1、96:4:0.1、97:4:0.1、98:4:0.1、99:4:0.1、0.100:4:0.1、90:5:0.1、91:5:0.1、92:5:0.1、93:5:0.1、94:5:0.1、95:5:0.1、96:5:0.1、97:5:0.1、98:5:0.1、99:5:0.1、100:5:0.1、90:6:0.1、91:6:0.1、92:6:0.1、93:6:0.1、94:6:0.1、95:6:0.1、96:6:0.1、97:6:0.1、98:6:0.1、99:6:0.1、100:6:0.1、90:7:0.1、91:7:0.1、92:7:0.1、93:7:0.1、94:7:0.1、95:7:0.1、96:7:0.1、97:7:0.1、98:7:0.1、99:7:0.1、100:7:0.1、90:3:0.15、90.15:3:0.15、92:3:0.15、93:3:0.15、94:3:0.15、95:3:0.15、96:3:0.15、97:3:0.15、98:3:0.15、99:3:0.15、0.1500:3:0.15、90:4:0.15、90.15:4:0.15、92:4:0.15、93:4:0.15、94:4:0.15、95:4:0.15、96:4:0.15、97:4:0.15、98:4:0.15、99:4:0.15、0.1500:4:0.15、90:5:0.15、91:5:0.15、92:5:0.15、93:5:0.15、94:5:0.15、95:5:0.15、96:5:0.15、97:5:0.15、98:5:0.15、99:5:0.15、100:5:0.15、90:6:0.15、91:6:0.15、92:6:0.15、93:6:0.15、94:6:0.15、95:6:0.15、96:6:0.15、97:6:0.15、98:6:0.15、99:6:0.15、100:6:0.15、90:7:0.15、91:7:0.15、92:7:0.15、93:7:0.15、94:7:0.15、95:7:0.15、96:7:0.15、97:7:0.15、98:7:0.15、99:7:0.15、100:7:0.15。
在一些更优选的实施例中,所述等度洗脱中,保持所述流动相A和所述流动相B的体积比为95:5:0.1。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:色谱柱选自大赛璐色谱柱。
在一些优选的实施例中,所述色谱柱为chiralcel AD-H。
在一些优选的实施例中,所述液相色谱检测采用检测器为紫外检测器。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:检测波长为190nm-230nm。具体地,所述检测波长包括但不限于190nm、200nm、210nm、220nm、230nm。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:进样量为18μL-22μL。具体地,所述进样量包括但不限于18μL、19μL、20μL、21μL、22μL。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:流速为0.8mL/min-1.2mL/min。具体地,所述流速包括但不限于0.8mL/min、0.9mL/min、1.0mL/min、1.1mL/min、1.2mL/min。
在一些优选的实施例中,所述色谱条件包括:柱温为20℃-30℃。具体地,所述柱温包括但不限于20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃。
在上述优选的色谱条件下,奥利司他中间体及其异构体之间的分离度可大于1.5,甚至在一些具体的实施例中,奥利司他中间体及其异构体之间的分离度大于3。
以下具体实施方式中,若无特别说明,均可来源与市售
其中,色谱柱为大赛璐色谱柱chiralcel AD-H(4.6*250mm,5μm)。
奥利司他中间体对照品可购自中山奕安泰医药科技有限公司。
奥利司他中间体对映异构体对照品可购自中山奕安泰医药科技有限公司。
以下结合具体实施例对本发明的奥利司他中间体的异构体的检测方法进行说明。
实施例1
本实施例提供一种奥利司他中间体的异构体的检测方法,包括以下步骤:
(1)对照品溶液的制备:取奥利司他中间体的对映异构体对照品适量,精密称定,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含1.25μg的对映异构体的溶液,即为对照品溶液。
(2)待测样品溶液的制备:取待测样品1,精密称定,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含0.5mg的待测样品的溶液,即为待测样品溶液1。
(3)取所述对映异构体对照品溶液和待测样品1,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图。
色谱条件为:
色谱柱:chiralcel AD-H(4.6*250mm,5μm);
进样量:20μL;
流速:1.0ml/min;
柱温:室温;
检测器:紫外;
检测波长:210nm;
流动相:流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,流动相A、流动相B和流动相C的体积比为95:5:0.1。
洗脱方式:等度洗脱。
待测样品色谱图如图1所示,其含有与对映异构体对照品保留时间一致的色谱峰,对映异构体对照品线性回归曲线如图2所示,采用面积归一化法对待测样品进行对映异构体含量的计算以及手性纯度,检测结果见表1。
表1
批号 | 分离度 | 理论塔板数 | 对映异构体 | 手性纯度 |
待测样品1 | 3.38 | 8838 | 0.08% | 99.92% |
实施例2
本实施例提供一种奥利司他中间体的异构体的检测方法,包括以下步骤:
(1)对照品溶液的制备:取奥利司他中间体的对映异构体对照品适量,精密称定,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含1.25μg的对映异构体的溶液,即为对照品溶液。
(2)待测样品溶液的制备:取待测样品2,精密称定,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含0.5mg的待测样品的溶液,即为待测样品溶液2。
(3)取所述对映异构体对照品溶液和待测样品2,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图。
色谱条件为:
色谱柱:chiralcel AD-H(4.6*250mm,5μm);
进样量:20μL;
流速:1.0ml/min;
柱温:室温;
检测器:紫外;
检测波长:210nm;
流动相:流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,流动相A、流动相B和流动相C的体积比为95:5:0.1。
洗脱方式:等度洗脱。
待测样品色谱图如图3所示,其含有与对映异构体对照品保留时间一致的色谱峰,采用面积归一化法对待测样品进行对映异构体含量的计算以及手性纯度,检测结果见表2。
表2
批号 | 分离度 | 理论塔板数 | 对映异构体 | 手性纯度 |
待测样品2 | 3.13 | 8695 | 0.09% | 99.91% |
实施例3
本实施例提供一种奥利司他中间体的异构体的检测方法,包括以下步骤:
(1)对照品溶液的制备:取奥利司他中间体的对映异构体对照品适量,精密称定,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含1.25μg的对映异构体的溶液,即为对照品溶液。
(2)待测样品溶液的制备:取待测样品3,精密称定,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含0.5mg的待测样品的溶液,即为待测样品溶液3。
(3)取所述对映异构体对照品溶液和待测样品3,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图。
色谱条件为:
色谱柱:chiralcel AD-H(4.6*250mm,5μm);
进样量:20μL;
流速:1.0ml/min;
柱温:室温;
检测器:紫外;
检测波长:210nm;
流动相:流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,流动相A、流动相B和流动相C的体积比为95:5:0.1。
洗脱方式:等度洗脱。
待测样品色谱图如图4所示,其含有与对映异构体对照品保留时间一致的色谱峰,采用面积归一化法对待测样品进行对映异构体含量的计算以及手性纯度,检测结果见表3。
表3
批号 | 分离度 | 理论塔板数 | 对映异构体 | 手性纯度 |
待测样品3 | 2.98 | 9290 | 0.12% | 99.88% |
实施例4系统适用性试验
取实施例1-3配制的对照品溶液作为系统适用性溶液。具体方法为:
(1)奥利司他中间体对照品及其对映异构体工作对照品适量,分别精密称定,置同一容量瓶中,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含0.5mg奥利司他中间体和1.25μg奥利司他中间体的对映异构体的溶液,即为系统适用性试验溶液。
(2)精密量取系统适用性试验溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图。
色谱条件为:
色谱柱:chiralcel AD-H(4.6*250mm,5μm);
进样量:20μL;
流速:1.0ml/min;
柱温:室温;
检测器:紫外;
检测波长:210nm;
流动相:流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,流动相A、流动相B和流动相C的体积比为95:5:0.1。
洗脱方式:等度洗脱。
记录色谱图,如图5和表4所示。奥利司他中间体与其对映异构体之间的分离度大于1.5,表明系统适用性良好。
表4
对比例流动相的考察
按照实施例1-3配制的对照品溶液的方法制备对照品溶液,考察流动相对对照品溶液色谱图的影响。具体方法为:
(1)对照品溶液的制备:取奥利司他中间体对照品及奥利司他中间体对映异构体对照品适量,分别精密称定,置同一容量瓶中,加体积比为1:1的正己烷和异丙醇的混合溶剂,制成每1ml约含0.5mg奥利司他中间体和1.25μg奥利司他中间体的对映异构体的溶液,即为对照品溶液。
(2)精密量取所述对照品溶液,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图。
色谱条件为:
色谱柱:chiralcel AD-H(4.6*250mm,5μm);
进样量:20μL;
流速:1.0ml/min;
柱温:室温;
检测器:紫外;
检测波长:210nm;
流动相:流动相A为正己烷,流动相B为异丙醇,流动相C为二乙胺,流动相A、流动相B和流动相C的体积比为90:10:0.1。
洗脱方式:等度洗脱。
记录色谱图,如图6所示。
从图6可以看出:对照品溶液中的奥利司他中间体与其对映异构体无法有效的分离。
从以上实验结果可以看出,采用本发明所述的检测方法得到的待测样品色谱图中,如果待测样品中含有奥利司他中间体及其对映异构体,奥利司他中间体及其对映异构体色谱峰实现有效分离,通过采用面积归一法,可计算奥利司他的对映异构体的含量和手型纯度,本发明为奥利司他中间体工业化生产提供简便、准确、快速、可靠的检测方法。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (8)
2.根据权利要求1所述的奥利司他中间体的异构体的检测方法,其特征在于,溶解所述奥利司他中间体的对映异构体对照品的溶剂为正己烷和异丙醇的混合溶剂。
3.根据权利要求2所述的奥利司他中间体的异构体的检测方法,其特征在于,所述混合溶剂中,正己烷和所述异丙醇的体积比为1:(0.5-2)。
4.根据权利要求1所述的奥利司他中间体的异构体的检测方法,其特征在于,溶解所述待测样品的溶剂为正己烷和异丙醇的混合溶剂。
5.根据权利要求4所述的奥利司他中间体的异构体的检测方法,其特征在于,所述混合溶剂中,正己烷和所述异丙醇的体积比为1:(0.5-2)。
6.根据权利要求1-5任一项所述的奥利司他中间体的异构体的检测方法,其特征在于,所述色谱条件包括:检测波长为190nm-230nm。
7.根据权利要求1-5任一项所述的奥利司他中间体的异构体的检测方法,其特征在于,所述色谱条件包括:流速为0.8ml/min-1.2ml/min。
8.根据权利要求1-5任一项所述的奥利司他中间体的异构体的检测方法,其特征在于,所述色谱条件包括:进样量为18μL-22μL,柱温为10℃-30℃。
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