CN110702803A - 一种维格列汀对映体的检测方法 - Google Patents
一种维格列汀对映体的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及药物检测技术领域,尤其涉及一种维格列汀对映体的检测方法。本发明提供的检测方法,采用多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱,等度洗脱即可分离维格列汀对映体和维格列汀及其杂质,分离度大于1.5。实验表明,维格列汀及其异构体的检测限为1.0μg/ml,定量限为2.1μg/ml,说明方法灵敏度高。维格列汀对映体在2.0μg/ml~12.5μg/ml的浓度范围内,线性相关系数R为0.9997,线性良好。并且,该方法的准确度和重复性良好;在辅料成分存在的条件下进行检测,未见干扰。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测技术领域,尤其涉及一种维格列汀对映体的检测方法。
背景技术
维格列汀是一种具有选择性、竞争性、可逆的DPP-4抑制剂。维格列汀通过与DPP-4结合形成DPP-4复合物而抑制该酶的活性,在提高GLP-l浓度,促使胰岛B细胞产生胰岛素的同时,降低胰高血糖素浓度,从而降低血糖。且对体重无明显影响。健康人体药动学研究表明,口服维格列汀吸收迅速,生物利用度约为85%。达峰时间为给药后1~2h,血浆半衰期为1.5~4.5h,蛋白结合率低(4%~17%)。其体内过程具有线性药动学特征,多次口服给药后未出现药物蓄积,其药动学参数不受食物影响。
维格列汀及维格列汀中常见杂质见下表:
表1:维格列汀及维格列汀中常见杂质
维格列汀对映体是否具有维格列汀等同的生物利用度、线性药动学特征以及是否会在体内出现药物蓄积等都未可知,目前,这些对映体是作为维格列汀中的一种杂质加以控制。建立为维格列汀对映体的检测方法是非常有必要的,但是目前在国内专利和文献报道的均是关于维格列汀及组合物的制备方法、维格列汀杂质的制备方法以及维格列汀中间体异构体的检测方法,还没有专利和文献报道维格列汀对映体的检测方法。
发明内容
有鉴于此,本发明要解决的技术问题在于提供一种维格列汀对映体的检测方法。该方法准确性好,灵敏度高。
维格列汀对映体的高效液相色谱检测方法,其色谱条件为:
色谱柱:多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱;
洗脱程序:等度洗脱;
流动相由A液、B液、C液组成;A液、B液、C液的体积比为(35~65):(35~65):0.1;
A液为正庚烷、正己烷中至少一种;B液为乙醇、甲醇中至少一种;C液为氨水、三乙胺、二乙胺中至少一种。
所述氨水的浓度为25wt%。
本发明中,所述多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱的硅胶表面涂敷有:直链淀粉-三(3,5-二甲基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三(S-α-甲基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三(5-氨-2-甲基氨基甲酸酯)、直链淀粉-(3-氯-4-甲基苯基甲酸酯)、纤维素-三(4-甲基氨基甲酸酯)、纤维素-三苯基甲酸酯、纤维素-三苯基氨基氨基甲酸酯)、纤维素-三(3,5-二甲基氨基甲酸酯)或纤维素-(3-氯-4-甲基苯基甲酸酯)。
一些实施例中,所述色谱柱的硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲基氨基甲酸酯)。
本发明中,所述色谱柱内径3.0mm~4.6mm,柱长100mm~250mm,粒径3μm~5μm。
一些实施例中,所述色谱柱的尺寸为3.0mm×100mm、3.0mm×150mm、3.0mm×200mm、3.0mm×250mm、3.5mm×100mm、3.5mm×150mm、3.5mm×200mm、3.5mm×250mm、4.0mm×100mm、4.0mm×150mm、4.0mm×200mm、4.0mm×250mm、4.6mm×100mm、4.6mm×150mm、4.6mm×200mm、4.6mm×250mm。所述填料的粒径为:3μm、4μm或5μm。
在一些具体实施例中,所述色谱柱的尺寸为4.6mm×250mm,粒径5μm。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、氨水组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.1。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为50:50:0.1。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为35:65:0.1。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、氨水、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、氨水、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、甲醇、氨水组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.1。
本发明中,所述流动相由正庚烷、甲醇、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为50:50:0.1。
本发明中,所述流动相由正庚烷、甲醇、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为35:65:0.1。
本发明中,所述流动相由正庚烷、甲醇、氨水、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、甲醇、氨水、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、甲醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:40:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、甲醇、氨水组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:35:5:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、甲醇、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:35:5:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、甲醇、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为60:35:5:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、甲醇、氨水、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:30:5:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、甲醇、氨水、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:30:5:0.05:0.05。
本发明中,所述流动相由正庚烷、乙醇、甲醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:30:5:0.03:0.03:0.04。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、氨水组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:35:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:35:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:35:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、氨水、三乙胺组成;体积比为65:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、氨水、二乙胺组成;体积比为65:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;65:35:0.02:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、甲醇、氨水组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:35:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、甲醇、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:35:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、甲醇、二乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:35:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、甲醇、氨水、三乙胺组成;体积比为65:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、甲醇、氨水、二乙胺组成;体积比为65:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、甲醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比65:35:0.02:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、甲醇、氨水组成;体积比为65:30:5:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、甲醇、三乙胺组成;体积比为(35~65):(35~65):0.1;具体的,体积比为65:30:5:0.1。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺组成;体积比为65:30:5:0.04。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、甲醇、氨水、三乙胺组成;体积比为65:30:5:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、甲醇、氨水、二乙胺组成;体积比为65:30:5:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正己烷、乙醇、甲醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比为65:30:5:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、三乙胺组成;体积比为30:30:35:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、二乙胺组成;体积比为30:30:35:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、氨水、三乙胺组成;体积比为30:30:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、氨水、二乙胺组成;体积比为30:30:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比为30:30:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、甲醇、氨水组成;体积比为30:30:35:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、甲醇、三乙胺组成;体积比为30:30:35:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、甲醇、二乙胺组成;体积比为30:30:35:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、甲醇、氨水、三乙胺组成;体积比为30:30:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、甲醇、氨水、二乙胺组成;体积比为30:30:35:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、甲醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比为30:30:35:0.02:0.02:0.01。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、甲醇、氨水组成;体积比为30:30:30:5:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、甲醇、三乙胺组成;体积比为30:30:30:5:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺组成;体积比为30:30:30:5:0.04。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、甲醇、氨水、三乙胺组成;体积比为30:30:30:5:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、甲醇、氨水、二乙胺组成;体积比为30:30:30:5:0.02:0.02。
本发明中,所述流动相由正庚烷、正己烷、乙醇、甲醇、氨水、三乙胺、二乙胺组成;体积比为30:30:30:5:0.02:0.02:0.01。
本发明中,所述高效液相色谱检测的样品溶解液由B液和水组成,所述B液与水的体积比为(85~95):(1~5)。
一些实施例中,所述样品溶解液由乙醇和水组成,体积比为(85~95):(1~5);具体为9:1。
一些实施例中,所述样品溶解液由甲醇和水组成,体积比为(85~95):(1~5);具体为9:1。
本发明中,所述高效液相色谱检测的进样量为5μL~50μL,流速0.5mL/min~1.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为5μL,流速0.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为5μL,流速0.8mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为5μL,流速1.0mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为5μL,流速1.2mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为5μL,流速1.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为10μL,流速0.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为10μL,流速0.8mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为10μL,流速1.0mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为10μL,流速1.2mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为10μL,流速1.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为20μL,流速0.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为20μL,流速0.8mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为20μL,流速1.0mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为20μL,流速1.2mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为20μL,流速1.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为30μL,流速0.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为30μL,流速0.8mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为30μL,流速1.0mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为30μL,流速1.2mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为30μL,流速1.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为40μL,流速0.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为40μL,流速0.8mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为40μL,流速1.0mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为40μL,流速1.2mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为40μL,流速1.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为50μL,流速0.5mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为50μL,流速0.8mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为50μL,流速1.0mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为50μL,流速1.2mL/min。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的进样量为50μL,流速1.5mL/min。
本发明中,所述等度洗脱的时间为17min、18min、19min、20min、25min、30min、40min、50min、60min。具体实施例中,所述等度洗脱的时间为30min。
本发明中,所述高效液相色谱检测的波长为210nm~230nm;柱温为25℃~45℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为210nm;柱温为25℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为210nm;柱温为30℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为210nm;柱温为35℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为210nm;柱温为40℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为210nm;柱温为45℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为220nm;柱温为25℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为220nm;柱温为30℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为220nm;柱温为35℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为220nm;柱温为40℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为220nm;柱温为45℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为230nm;柱温为25℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为230nm;柱温为30℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为230nm;柱温为35℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为230nm;柱温为40℃。
一些实施例中,所述高效液相色谱检测的波长为230nm;柱温为45℃。
本发明中,根据出峰时间对维格列汀对映体定性,峰面积百分比法对维格列汀对映体定量。
本发明中,维格列汀对映体的出峰时间为15min~17.0min。
一个具体实施例中,对映体的出峰时间为15.95min或15.337min。
具体的,维格列汀对映体的高效液相色谱检测方法,其色谱条件为:
色谱柱:Daicel AD-H,4.6×250mm,5μm
洗脱程序:等度洗脱30min;
流动相为:由正庚烷、乙醇、甲醇和氨水组成,体积比为60:35:5:0.04。
所述高效液相色谱检测的进样量为20μl,流速0.8ml/min。检测的波长为210nm;柱温为35℃。
本发明提供的检测方法,采用多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱,等度洗脱即可分离维格列汀对映体和维格列汀及其杂质,分离度大于1.5。实验表明,维格列汀及其异构体的检测限为1.0μg/ml,定量限为2.1μg/ml,说明方法灵敏度高。维格列汀对映体在2.0μg/ml~12.5μg/ml的浓度范围内,线性相关系数R为0.9997,线性良好。并且,该方法的准确度和重复性良好;在辅料成分存在的条件下进行检测,未见干扰。
附图说明
图1示混合溶液的检测色谱图;
图2示定量限图谱;
图3示维格列汀对映体的标准曲线;
图4示维格列汀的标准曲线;
图5示抗干扰检测结果;
图6示对比例1色谱条件下检测混合溶液的色谱图;
图7示对比例2色谱条件下检测混合溶液的色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种维格列汀对映体的检测方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材、仪器皆为普通市售品,皆可于市场购得。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1
1.1色谱条件:
色谱柱:Daicel AD-H尺寸:4.6×250mm,5μm
流动相成分:正庚烷-乙醇-甲醇-氨水(60:35:5:0.04)。
柱温:35℃
上样量:20μl
流速:0.8ml/min
等度洗脱30min。
检测波长:210
1.2维格列汀及维格列汀中常见杂质对维格列汀对映体检测干扰实验
配制溶液:
空白溶液:90vol%乙醇水溶液。
稀释剂:90vol%乙醇水溶液。
各单标溶液:以稀释剂配制,含0.008mg/ml维格列汀杂质1;
以稀释剂配制,含0.008mg/ml维格列汀杂质2;
以稀释剂配制,含0.008mg/ml维格列汀杂质3;
以稀释剂配制,含0.008mg/ml维格列汀对映体;
混合溶液:以稀释剂配制,含维格列汀杂质1、2、3、维格列汀对映体各0.008mg/ml和4mg/ml维格列汀的混合溶液。
取空白溶液、各单标溶液和混合溶液按空白溶液—各单标溶液—混合溶液的顺序分别进样,采用1.1的色谱条件检测。其中,混合溶液色谱图如图1。
结果显示维格列汀对映体在15~16.0min出峰,维格列汀峰及相关杂质均在17~20min左右出峰,二者分离度大于1.5,实现完全分离。空白溶液及维格列汀杂质1、2、3在维格列汀对映体出峰时间处无杂峰,所以空白溶液以及维格列汀杂质1、2、3对维格列汀对映体的检测无干扰。
1.3检测限和定量限
配制溶液:
空白溶液:90vol%乙醇水溶液。
稀释剂:90vol%乙醇水溶液。
系统适应性溶液:以稀释剂配制,含维格列汀对映体0.008mg/ml、维格列汀4mg/ml。
检测限溶液:称取维格列汀及对映体对照品稀释至信噪比为3。
定量限溶液:称取维格列汀及对映体对照品稀释至信噪比大于10。
取系统适用性溶液、检测限溶液和定量限溶液分别进样检测,采用1.1的色谱条件检测,系统适用性溶液连续进样5针,图谱如图2,检测结果如表2:
表2检测限和定量结果
5针系统适应性溶液中维格列汀的峰面积分别为1.6845、1.6528、1.6515、1.6982、1.6762,计算得到它们的RSD为1.21%,小于2.0%,说明方法进样精密度良好。维格列汀与其对映体的分离度1.88大于1.5,达到完全分离。
实验结果显示维格列汀及其异构体的检测限为1.0μg/ml,定量限为2.1μg/ml,说明方法灵敏度高。
1.4线性考察
精密称取维格列汀和维格列汀对映体适量,采用乙醇-水(9:1)为稀释剂,配制含维格列汀及对映体均为2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、8μg/ml、10μg/ml、12μg/ml的线性标准溶液,按上述检测方法进样检测。检测结果如下:
表3维格列汀对映体线性考察
表4维格列汀线性考察
结果显示:维格列汀对映体在2.0μg/ml~12.5μg/ml的浓度范围内,线性相关系数R为0.9997,线性良好。维格列汀在2.0μg/ml~12.0μg/ml的浓度范围内,线性相关系数R为0.9997,线性良好。另计算得到维格列汀对映体校正因子为1.002,在0.9~1.1的范围内,说明可以采用主成分千分之一自身对照法计算对映体的含量。
1.5重复性和准确度考察
取维格列汀适量,用乙醇-水(9:1)溶解制成维格列汀4mg/ml的溶液进样,测得维格列汀中对映体的含量为0.00%。
取维格列汀和对映体各适量,用乙醇-水(9:1)溶解制成含维格列汀4mg/ml、含对映体4μg/ml的溶液,平行配制3份。另同法配制含维格列汀4mg/ml、含对映体8μg/ml的溶液,平行配制6份。另同法配制含维格列汀4mg/ml、含对映体12μg/ml的溶液,平行配制3份。取上述溶液分别进样以考察方法重复性和准确度。
表5准确度考察结果
表6重复性考察结果如下:
结果显示,方法准确度和重复性良好。
1.6盐酸二甲双胍维格列汀片中维格列汀对映体检测
配制溶液:
稀释剂:90vol%乙醇水溶液。
系统适应性溶液:以稀释剂配制,含维格列汀对映体0.008mg/ml、维格列汀4mg/ml。
盐酸二甲双胍溶液:以稀释剂配制,含盐酸二甲双胍80mg/ml。
盐酸二甲双胍维格列汀空白辅料溶液:以水配制,溶质为制剂盐酸二甲双胍维格列汀片(来自深圳翰宇药业股份有限公司(自制)公司)的辅料成分的水溶液,其中不含有维格列汀或盐酸二甲双胍。
由图5可知,在相同的色谱条件下,盐酸二甲双胍的出峰时间为4min,而维格列汀对映体的出峰时间为15~16.0min,二者出峰时间相距较远,互相不产生干扰,因此,当存在盐酸二甲双胍时,并不对维格列汀对映体的检测造成干扰。说明此方法能够适用于维格列汀及其组合药物中的维格列汀异构体的检测。辅料成分的水溶液在维格列汀异构体出峰位置没有杂质峰出现,说明辅料对于维格列汀异构体的检测没有干扰。
对比例1
尺寸:4.6×250mm,10μm
流动相成分:2mM硫酸铜
柱温:30℃
上样量:20μl
流速:0.8ml/min
等度洗脱30min。
检测波长:210nm
以上述色谱条件对混合溶液(以稀释剂配制,含维格列汀杂质1、2、3、维格列汀对映体各0.008mg/ml和4mg/ml维格列汀)进行检测,色谱图如图6。
如图所示,维格列汀及各杂质和维格列汀异构体堆积在一起,没有任何分离度。所以仅在规定的手型填料下才能得到较好的分离和峰型。
对比例2
色谱柱:Daicel AD-H
尺寸:4.6×250mm,5μm
流动相成分:正庚烷-乙醇-甲醇(60:35:5)
柱温:35℃
上样量:20μl
流速:0.8ml/min
等度洗脱30min。
检测波长:210nm
以上述色谱条件对混合溶液(以稀释剂配制,含维格列汀杂质1、2、3、维格列汀对映体各0.008mg/ml和4mg/ml维格列汀)进行检测,色谱图如图7。结果显示,色谱峰明显拖尾严重,峰型变差,会影响分离和方法准确性。
以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.维格列汀对映体的高效液相色谱检测方法,其检测条件为:
色谱柱:多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱;
洗脱程序:等度洗脱;
流动相由A液、B液、C液组成;A液、B液、C液的体积比为(35~65):(35~65):0.1;
A液为正庚烷、正己烷中至少一种;B液为乙醇、甲醇中至少一种;C液为氨水、三乙胺、二乙胺中至少一种。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述多糖衍生物正相涂敷型手性色谱柱的硅胶表面涂敷有:直链淀粉-三(3,5-二甲基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三(S-α-甲基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三(5-氨-2-甲基氨基甲酸酯)、直链淀粉-(3-氯-4-甲基苯基甲酸酯)、纤维素-三(4-甲基氨基甲酸酯)、纤维素-三苯基甲酸酯、纤维素-三苯基氨基氨基甲酸酯)、纤维素-三(3,5-二甲基氨基甲酸酯)或纤维素-(3-氯-4-甲基苯基甲酸酯)。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法,其特征在于,所述色谱柱内径3.0mm~4.6mm,柱长100mm~250mm,粒径3μm~5μm。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述流动相由正庚烷、乙醇、甲醇和氨水组成,其中,正庚烷、乙醇、甲醇和氨水的体积比为60:35:5:0.04。
5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱检测的样品溶解液由B液和水组成,所述B液与水的体积比为(85~95):(1~5)。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱检测的进样量为5μL~50μL,流速0.5mL/min~1.5mL/min。
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述等度洗脱的时间为30min。
8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱检测的波长为210nm~230nm;柱温为25℃~45℃。
9.根据权利要求1~7任一项所述的检测方法,其特征在于,根据出峰时间对维格列汀对映体定性,峰面积百分比法对维格列汀对映体定量。
10.根据权利要求8所述的检测方法,其特征在于,维格列汀对映体的出峰时间为15min~17.0min。
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