CN111450308A

CN111450308A - 一种多功能止血海绵及其制备方法与应用

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Publication number: CN111450308A
Application number: CN202010519574.5A
Authority: CN
Inventors: 王兴; 徐聪聪
Original assignee: Beijing University of Chemical Technology
Current assignee: Beijing University of Chemical Technology
Priority date: 2020-06-09
Filing date: 2020-06-09
Publication date: 2020-07-28
Anticipated expiration: 2040-06-09
Also published as: CN111450308B

Abstract

本发明涉及一种多功能止血海绵及其制备方法与应用。该多功能止血海绵是由甲基丙烯酰化壳聚糖、聚乙二醇二丙烯酸酯及氧化石墨烯复合溶液经水热合成反应和冷冻干燥制成的可压缩、易携带、多孔多功能止血海绵。本发明获得的止血海绵具有较强的机械强度、快速的液体吸收能力(＜120ms)以及一定的抗菌能力，可以迅速富集血液成分加速凝血并抑制治疗过程中的微生物感染。该止血海绵独特的选择性粘附性能，可在应急止血时封闭伤口防止血液流失同时降低移除材料时发生二次出血的几率。该海绵具有良好的生物相容性、无毒性、制备简单及方便携带等特点，可用于各种创面以及腔道的快速止血和创面愈合等领域。

Description

一种多功能止血海绵及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于医用生物材料技术领域，涉及一种多功能止血海绵及其制备方法与应用。

背景技术

在战场和药物治疗期间失控的出血可能会导致严重的并发症，例如失血性休克，微生物感染和多器官衰竭，甚至危及生命。磨损不当的材料会增加伤口处理的难度并引起继发性创伤，导致受伤者的痛苦和死亡率大大增加。而对于止血材料而言，海绵类止血敷料有其特殊性，辅助物理压迫和术后敷料的移除往往是必须的，而这带来了的亟待解决的挑战：在形成血凝块之前的大量失血以及血凝块在止血敷料上的粘附可能会导致后续手术过程中出现疼痛，继发性出血，甚至可能出现伤口敷料去除过程中的赋形剂残留等现象，从而增大手术难度。此外，近年来，随着细菌感染病例的逐年增加，医疗器械的医院感染控制越来越受到界内人士的普遍关注。作为有效安全的海绵类止血剂，仅仅实现紧急状态下的快速止血是不够的，还要考虑到止血后的诸多情况，如止血辅料的清除，伤口的感染等风险。所以制备出安全有效、环境友好、具有高效抗菌性能的用于止血的高分子材料显得尤为迫切。

发明内容

本发明的目的在于克服现有海绵类止血材料的不足而提供一种制备简单、止血性能好、安全性高的具有选择性粘附性能的基于氧化石墨烯(GO)/壳聚糖(CMS)的新型多功能止血海绵材料，该材料在提供强力的止血效果的同时能有效避免止血后处理过程中出现的二次出血、伤口感染等风险，提高止血安全性。

为此，本发明第一方面提供了一种多功能止血海绵，其为由氧化石墨烯、聚乙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酰化壳聚糖复合交联形成的GO@CMS复合止血海绵，并且，所述GO@CMS复合止血海绵表面还吸附有抗菌剂。

本发明中，所述多功能止血海绵的主要止血成分为氧化石墨烯及壳聚糖；优选地，所述氧化石墨烯占甲基丙烯酰化壳聚糖、氧化石墨烯和聚乙二醇二丙烯酸酯总体系质量的50％-70％。

本发明中，所述多功能止血海绵的吸液能力＜120ms。

本发明第二方面提供了一种如本发明第一方面所述的多功能止血海绵的制备方法，其包括：

步骤A，室温下，将甲基丙烯酰化壳聚糖溶液、氧化石墨烯溶液和聚乙二醇二丙烯酸酯搅拌混合，得到棕黑色混合液，加入引发剂溶液，得到反应混合液；

步骤B，将反应混合液导入反应釜模具中，进行交联反应，获得交联产物；

步骤C，将交联产物洗涤后，将所获得的纯化的水凝胶冷冻干燥，得到GO@CMS复合止血海绵；

步骤D，GO@CMS复合止血海绵浸入抗菌剂溶液中吸附抗菌剂后，再次冻干获得多功能GO@CMS复合止血海绵成品。

根据本发明方法，所述氧化石墨烯、聚乙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酰化壳聚糖的质量比为(2-7):(1-2):1，并且，氧化石墨烯占甲基丙烯酰化壳聚糖、氧化石墨烯和聚乙二醇二丙烯酸酯总体系质量的50％-70％；

本发明中，所述甲基丙烯酰化壳聚糖溶液由甲基丙烯酰化壳聚糖溶于水形成；优选地，所述甲基丙烯酰化壳聚糖溶液的浓度为1～30mg/mL。

本发明中，所述氧化石墨烯溶液由氧化石墨烯溶于水形成；优选地，所述氧化石墨烯溶液的浓度为1～50mg/mL。

本发明中，所述引发剂溶液由引发剂溶于水形成；优选地，所述引发剂溶液的浓度为0.1～2.0mg/mL；进一步优选地，所述引发剂包括过硫酸铵。

本发明中，所述抗菌剂溶液由抗菌剂溶于水中形成；优选抗菌剂溶液的浓度为1mg/mL；进一步优选地，所述抗菌剂为包括妥布霉素。

在本发明的一些实施例中，在步骤B中，所述交联反应的温度为60～80℃，所述交联反应的时间为2～8小时。

根据本发明的一些实施方式，甲基丙烯酰化壳聚糖通过以下步骤制备：

S1，将脱乙酰壳聚糖原料溶解酸性溶液中制成壳聚糖溶液；

S2，向壳聚糖溶液中添加甲基丙烯酸酐，混合后反应，含有甲基丙烯酰化壳聚糖的乳状悬浮液；

S3，将含有甲基丙烯酰化壳聚糖的乳状悬浮液在水中透析，并将透析产物冷冻干燥，获得干燥的白色絮状甲基丙烯酰化壳聚糖。

在本发明的一些实施例中，所述甲基丙烯酰化壳聚糖的双键接枝率为20％-45％。

本发明中，所述酸性溶液由酸溶于水制成；优选地，所述酸溶液的浓度为1％～10％(v/v)；进一步优选地，所述酸包括醋酸。

在本发明的一些实施例中，所述壳聚糖溶液中壳聚糖的含量为40-60mg/mL。

在本发明的一些实施例中，在步骤S2中，甲基丙烯酸酐的用量为每个壳聚糖重复单元的0.1～1.0的摩尔当量。

根据本发明方法，在步骤S2中，壳聚糖溶液与甲基丙烯酸酐混合后的混合物在室温持续摇动反应；优选地，所述反应的时间为1～5小时。

本发明第三方面提供了如本发明第一方面所述的氧化石墨烯/壳聚糖多功能止血海绵或如本发明第二方面所述的方法制备的氧化石墨烯/壳聚糖多功能止血海绵在制备止血材料中的应用。

本发明克服了现有海绵类止血材料的不足而提供一种制备简单、止血性能好、安全性高的具有选择性粘附性能的基于氧化石墨烯/壳聚糖的新型多功能止血海绵材料，该材料在提供强力的止血效果的同时能有效避免止血后处理过程中出现的二次出血、伤口感染等风险，提高止血安全性。该海绵具有较强的机械强度、快速止血性能及一定的抗菌能力，在放大生产方面具有制备简单，材料易得廉价等优点。

附图说明

下面结合附图来对本发明作进一步详细说明：

图1是实施例1中的氧化石墨烯/交联壳聚糖复合海绵GO@CMS的宏观图；

图2是实施例1中的氧化石墨烯/交联壳聚糖复合海绵GO@CMS的微观图(SEM图)；

图3是实施例2中的在大鼠股动脉止血模型中，GO@CMS、CMS和纱布的止血时间。

具体实施方式

为使本发明容易理解，下面将详细说明本发明。但在详细描述本发明前，应当理解本发明不限于描述的具体实施方式。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式，而并不表示限制性的。

在提供了数值范围的情况下，应当理解所述范围的上限和下限和所述规定范围中的任何其他规定或居间数值之间的每个居间数值均涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中，并且也涵盖在本发明内，服从规定范围中任何明确排除的限度。在规定的范围包含一个或两个限度的情况下，排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包含在本发明中。

除非另有定义，本文中使用的所有术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以在本发明的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。

Ⅰ.术语

本发明所述用语“多功能性”是指止血海绵加速凝血、抗微生物感染及材料的选择粘附性。

本发明所述用语“GO@CMS复合止血海绵”是指构成止血海绵的复合材料“氧化石墨烯”和“壳聚糖”为“壳聚糖”包覆“氧化石墨烯”的复合结构，其中符号“@”代表包覆或复合结构。

甲基丙烯酰化壳聚糖、氧化石墨烯和聚乙二醇二丙烯酸酯总体系是指由甲基丙烯酰化壳聚糖、氧化石墨烯和聚乙二醇二丙烯酸酯形成的混合物。

本发明中所用“水”一词，在没有特别指定的情况下，是指去离子水、超纯水或蒸馏水。

本文所述用语“约”，“大约”，“基本上”和“主要”，当与组分，浓度，温度或其它物理或化学性质或特性的范围结合使用时，覆盖可能存在于属性或特性的范围的上限和/或下限中的变化，包括例如由舍入，测量方法或其他统计变化导致的变化。如本文所述，与量，重量等相关的数值，被定义的“约”是每个特定值的所有数值加或减1％。例如，用语“约10％”应理解为“9％至11％”。

Ⅱ.实施方案

如前所述，目前迫切需要制备出安全有效、环境友好、具有高效抗菌性能的用于止血的高分子材料。基于此，本发明人对于止血高分子材料进行了大量的研究。本发明人注意到氧化石墨烯(GO)作为一种二维纳米碳材料，具有亲水、电负性和易于修饰的性质。并且GO纳米片可以激活Src激酶并从细胞内释放钙离子而引发血小板聚集，促进凝血。申请号201410262747.4的中国专利公开了一种交联石墨烯海绵的制备方法及其外伤止血的应用，是由氧化石墨烯与氨基交联剂反应制得。该交联石墨烯海绵具有超快吸水性能，可迅速富集血液成分，达到止血的效果。申请号201910417710.7的中国专利公开了一种外伤止血海绵及其制备方法和应用，是由氧化石墨烯与氨基交联剂复合沸石微粒制得。上述方法均由GO与氨基交联剂反应制得，导致GO部分还原，而还原态石墨烯并不刺激凝血，石墨烯海绵以吸收浓缩血浆作用促进止血。因此，利用氧化态GO羧基阴离子与阳离子聚合物复合，设计止血材料将有助于保持GO的氧化度，从而提高复合材料的凝血刺激。

壳聚糖是自然界中唯一的带正电荷的天然碱性多糖，具有多种生物活性，如促进创口修复愈合、止血镇痛、抗菌抑菌的功能。而壳聚糖表面的正电荷与血细胞表面的负电荷之间的静电相互作用，可加速血细胞聚集粘附，是壳聚糖止血活性的主要原因。目前，以壳聚糖及其衍生物为主的生物止血材料已是公认的有效止血剂。但是，壳聚糖本体材料的止血作用较弱，同时壳聚糖较强的湿粘性也对材料的移除造成风险。

本发明人研究发现，通过引入GO纳米片的方式能够复合强化以壳聚糖或衍生物为主的生物止血材料，并由此获得一种止血性能好、安全性高、无剥离造成二次出血风险的止血海绵材料，籍此获得本发明。

因此，本发明第一方面所涉及的多功能止血海绵为由氧化石墨烯、聚乙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酰化壳聚糖复合交联形成的GO@CMS复合止血海绵，并且，所述GO@CMS复合止血海绵表面还吸附有抗菌剂。

本发明中，所述多功能止血海绵的主要止血成分为氧化石墨烯及壳聚糖，因此，本发明所涉及的多功能止血海绵可以理解为一种基于氧化石墨烯/壳聚糖的新型多功能性止血海绵，所述多功能性是指加速凝血、抗微生物感染及材料的选择粘附性。

在本发明的一些优选的实施例中，所述氧化石墨烯占甲基丙烯酰化壳聚糖、氧化石墨烯和聚乙二醇二丙烯酸酯总体系质量的50％-70％。

本发明中，所述多功能止血海绵的吸液能力＜120ms；研究结果表明，该海绵具有较强的机械强度、快速止血性能及一定的抗菌能力。

本发明第二方面所涉及的如本发明第一方面所述的多功能止血海绵的制备方法包括：

步骤一，甲基丙烯酰化壳聚糖MAC的制备：

1)将分子量为20000～200000的脱乙酰壳聚糖原料溶解于酸性溶液中配置成壳聚糖溶液；

2)向壳聚糖溶液中添加每个壳聚糖重复单元0.1～1.0摩尔当量的甲基丙烯酸酐，使混合物在室温持续摇动下反应1～5小时，制成含有甲基丙烯酰化壳聚糖的乳状悬浮液；

3)将含有甲基丙烯酰化壳聚糖的乳状悬浮液在水中透析，并将透析产物冷冻干燥，获得干燥的白色絮状MAC(甲基丙烯酰化壳聚糖)。

步骤二，溶液配制：

1)配置壳聚糖溶液，取步骤一得到的MAC复溶制成浓度为1～30mg/mL的MAC溶液；

2)配置GO溶液，称取GO加入到蒸馏水中，制得1～30mg/mL的GO溶液；

3)配置引发剂溶液，称取过硫酸铵加入到蒸馏水中，制得0.1～2.0mg/mL引发剂溶液；

4)配制抗菌剂溶液，称取妥布霉素溶于水中，制得浓度为1mg/mL的抗菌剂溶液。

步骤三，基于氧化石墨烯/壳聚糖的多功能止血海绵GO@CMS的制备：

1)取上述步骤二中配制的MAC溶液、GO溶液和聚乙二醇二丙烯酸酯在室温条件下充分搅拌混合，得到棕黑色混合液。加入引发剂溶液，得到反应混合液；

2)将所得反应混合液导入水热反应釜模具中，60～80℃反应2～8小时得交联产物；

3)将交联产物洗涤后，将所获得的纯化的水凝胶冷冻干燥，得到GO@CMS复合止血海绵；

4)将GO@CMS复合止血海绵浸入抗菌剂溶液中吸附抗菌剂后，再次冻干获得多功能GO@CMS复合止血海绵成品。

上述步骤三中，所述氧化石墨烯、聚乙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酰化壳聚糖的质量比为(2-7):(1-2):1，并且，氧化石墨烯占甲基丙烯酰化壳聚糖、氧化石墨烯和聚乙二醇二丙烯酸酯总体系质量的50％-70％。

上述步骤三中，聚乙二醇二丙烯酸酯的分子量为400-5000，分子量增大，聚乙二醇二丙烯酸酯的双键转化率有所增加，但水溶性相对降低。

上述步骤一中的酸溶液是指1％～10％(v/v)的醋酸溶液。

本发明中采用NMR表征合成的甲基丙烯酰化壳聚糖结构和甲基丙烯酸化程度，所述甲基丙烯酰化壳聚糖的双键接枝率为20％-45％。

本发明的多功能止血海绵是由甲基丙烯酰化壳聚糖、聚乙二醇二丙烯酸酯及氧化石墨烯复合溶液经水热合成反应和冷冻干燥制成的可压缩、易携带、多孔多功能止血海绵。本发明获得的止血海绵具有较强的机械强度、快速的液体吸收能力(＜120ms)以及一定的抗菌能力，可以迅速富集血液成分加速凝血并抑制治疗过程中的微生物感染。该止血海绵独特的选择性粘附性能，可在应急止血时封闭伤口防止血液流失同时降低移除材料时发生二次出血的几率。该海绵具有良好的生物相容性、无毒性、制备简单及方便携带等特点，可用于各种创面以及腔道的快速止血和创面愈合等领域。

本发明第三方面如本发明第一方面所述的氧化石墨烯/壳聚糖多功能止血海绵或如本发明第二方面所述的方法制备的氧化石墨烯/壳聚糖多功能止血海绵在制备用于外伤止血的止血材料中的应用。

本发明中利用高速相机记录液滴进入材料过程测定所述多功能止血海绵的吸液能力，具体如下：

液体吸附速率测定：将去离子水缓慢滴到材料表面，让水自由渗入材料中。用高速相机记录整个过程，然后使用视频处理器将视频截成图片(每帧40ms)，通过计算水滴进入材料中所需图片数量来确定材料吸水速率。

本发明中采用NMR表征合成的甲基丙烯酰化壳聚糖结构和甲基丙烯酸化程度，所述双键接枝率用以下公式计算：

双键接枝率(DM)＝(I_DB/η_HDB)/(I_{glycosaminering}/η_{Hglycosaminering})

其中，I_DB：双键质子峰积分；

I_{glycosaminering}：糖胺环(glycosaminering)的积分；

η_HDB和η_{Hglycosaminering}分别为双键和糖胺环中的质子数。

Ⅲ.实施例

以下通过具体实施例对于本发明进行具体说明。下文所述实验方法，如无特殊说明，均为实验室常规方法。下文所述实验材料，如无特别说明，均可由商业渠道获得。

SD大鼠(Sprague-Dawly大鼠)，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。动物购入时体重约为250g，群居饲养，6只/笼。动物房内保持恒温、恒湿条件(温度20-25℃，湿度60％±10％)。实验开始前，动物在动物房适应性饲养3天，自由饮水进食。在实验过程中，大鼠接受的所有实验操作均符合实验动物伦理学要求，遵守国家和北京化工大学生物医学伦理委员会和中日友好医院实验动物福利伦理委员会颁布的条例，并获得北京化工大学生物医学伦理委员会和中日友好医院实验动物福利伦理委员会的批准。

实施例1：

(1)甲基丙烯酰化壳聚糖MAC制备

称取1.2g脱乙酰壳聚糖原料(Mw＝20000，壳聚糖的脱乙酰度在85％-99.9％之间)溶解于20mL的醋酸溶液(1％)中，加入每个壳聚糖重复单元0.1摩尔当量的甲基丙烯酸酐，使混合物在室温持续摇动下反应1小时。经透析冻干得到甲基丙烯酰化壳聚糖(DM＝23％)。

(2)交联壳聚糖海绵CMS及多功能GO@CMS复合止血海绵的制备

取步骤(1)制备好的MAC复溶得到20mg/mL MAC溶液，以4.5:2:1的质量比依次加入氧化石墨烯溶液、聚乙二醇二丙烯酸酯(Mw＝400)和MAC溶液，保证氧化石墨烯占总体系质量百分比的60％。体系中加入1.5mg/mL引发剂后80℃反应2小时得交联产物。洗涤，将上述纯化的水凝胶冷冻干燥，得到壳聚糖氧化石墨烯的止血海绵。将所得海绵吸附抗菌剂，冻干，得到最终产品——基于氧化石墨烯/壳聚糖的多功能止血海绵，该止血海绵的宏观形貌(普通相机)如图1所示，其微观结构(SEM图，Hitachi S-4700扫描电镜，日本日立集团)如图2所示。从图1和图2可以看出，所述止血海绵是具有多孔结构(宏观+微观)的海绵状固体，其可直接用于外伤止血。

取步骤(2)制备好的止血海绵用于大鼠(250g)股动脉损伤止血实验；用手术刀将股动脉切断，把止血海绵贴合于创面，按压止血。止血时间25s，失血量0.8g。

实施例2：

(1)甲基丙烯酰化壳聚糖MAC制备

称取1.2g脱乙酰壳聚糖原料(Mw＝50000，壳聚糖的脱乙酰度在85％-99.9％之间)溶解于20mL的醋酸溶液(5％)中，加入每个壳聚糖重复单元1摩尔当量的甲基丙烯酸酐，使混合物在室温持续摇动下反应5小时。经透析冻干得到甲基丙烯酰化壳聚糖(DM＝35％)。

(2)交联壳聚糖海绵CMS及多功能GO@CMS复合止血海绵的制备

取步骤(1)制备好的MAC复溶得到30mg/mL MAC溶液，以7:2:1的质量比依次加入氧化石墨烯溶液、聚乙二醇二丙烯酸酯(Mw＝800)和MAC溶液，保证氧化石墨烯占总体系质量百分比的70％。体系中加入2mg/mL引发剂后70℃反应4小时得交联产物。洗涤，将上述纯化的水凝胶冷冻干燥，得到壳聚糖氧化石墨烯的止血海绵。将所得海绵吸附抗菌剂，冻干，得到最终产品——基于氧化石墨烯/壳聚糖的多功能止血海绵。所得海绵可直接用于外伤止血。

取步骤(2)制备好的交联壳聚糖海绵CMS和GO@CMS复合止血海绵用于大鼠(250g)股动脉损伤止血实验，并以纱布作为对照；用手术刀将股动脉切断，把止血海绵贴合于创面，按压止血，结果表明，纱布失血量接近4g，交联壳聚糖海绵CMS失血量为1.0g，本发明的GO@CMS复合止血海绵的失血量0.6g；止血时间如图3所示，从图3可以看出，纱布基本没有止血作用，交联壳聚糖海绵CMS的止血时间为36s，而本发明的GO@CMS复合止血海绵的止血时间20s。

实施例3：

(1)甲基丙烯酰化壳聚糖MAC制备

称取1.2g脱乙酰壳聚糖原料(Mw＝100000，壳聚糖的脱乙酰度在85％-99.9％之间)溶解于30mL的醋酸溶液(10％)中，加入每个壳聚糖重复单元0.5摩尔当量的甲基丙烯酸酐，使混合物在室温持续摇动下反应3小时。经透析冻干得到甲基丙烯酰化壳聚糖(DM＝43％)。

(2)交联壳聚糖海绵CMS及多功能GO@CMS复合止血海绵的制备

取步骤(1)制备好的MAC复溶得到5mg/mL MAC溶液，以2:1:1的质量比依次加入氧化石墨烯溶液、聚乙二醇二丙烯酸酯(Mw＝2000)和MAC溶液，保证氧化石墨烯占总体系质量百分比的50％。体系中加入1mg/mL引发剂后60℃反应8小时得交联产物。洗涤，将上述纯化的水凝胶冷冻干燥，得到壳聚糖氧化石墨烯的止血海绵。将所得海绵吸附抗菌剂，再次，冻干，得到最终产品——基于氧化石墨烯/壳聚糖的多功能止血海绵。所得海绵可直接用于外伤止血。

取步骤(2)制备好的止血海绵用于大鼠(250g)股动脉损伤止血实验；用手术刀将股动脉切断，把止血海绵贴合于创面，按压止血。止血时间15s，失血量0.5g。

应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明做出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。

Claims

1.一种多功能止血海绵，其为由氧化石墨烯、聚乙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酰化壳聚糖复合交联形成的氧化石墨烯@壳聚糖复合止血海绵，并且，所述氧化石墨烯@壳聚糖复合止血海绵表面还吸附有抗菌剂。

2.根据权利要求1所述的多功能止血海绵，其特征在于，所述多功能止血海绵的主要止血成分为氧化石墨烯及壳聚糖；优选地，氧化石墨烯占所述氧化石墨烯@壳聚糖复合止血海绵总质量的50％-70％；进一步优选地，所述多功能止血海绵的吸液能力＜120ms。

3.如权利要求1或2所述的多功能止血海绵的制备方法，其包括：

步骤C，将交联产物洗涤后，将所获得的纯化的水凝胶冷冻干燥，得到氧化石墨烯@壳聚糖复合止血海绵；

步骤D，氧化石墨烯@壳聚糖复合止血海绵浸入抗菌剂溶液中吸附抗菌剂后，再次冻干获得多功能氧化石墨烯@壳聚糖复合止血海绵成品。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述氧化石墨烯、聚乙二醇二丙烯酸酯和甲基丙烯酰化壳聚糖的质量比为(2-7):(1-2):1，并且，氧化石墨烯占甲基丙烯酰化壳聚糖、氧化石墨烯和聚乙二醇二丙烯酸酯总体系质量的50％-70％；

优选地，所述甲基丙烯酰化壳聚糖溶液由甲基丙烯酰化壳聚糖溶于水形成；进一步优选地，所述甲基丙烯酰化壳聚糖溶液的浓度为1～30mg/mL；

和/或，优选地，所述氧化石墨烯溶液由氧化石墨烯溶于水形成；进一步优选地，所述氧化石墨烯溶液的浓度为1～30mg/mL；

和/或，优选地，所述引发剂溶液由引发剂溶于水形成；进一步优选地，所述引发剂溶液的浓度为0.1～2.0mg/mL；更进一步优选地，所述引发剂包括过硫酸铵；

和/或，所述抗菌剂溶液由抗菌剂溶于水中形成，优选抗菌剂溶液的浓度为1mg/mL，进一步优选地，所述抗菌剂为包括妥布霉素。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，

在步骤B中，所述交联反应的温度为60～80℃，所述交联反应的时间为2～8小时。

6.根据权利要求3-5中任意一项所述的方法，其特征在于，甲基丙烯酰化壳聚糖通过以下步骤制备：

S1，将脱乙酰壳聚糖原料溶解酸性溶液中制成壳聚糖溶液；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，

所述甲基丙烯酰化壳聚糖的双键接枝率为20％-45％；

和/或，所述酸性溶液由酸溶于水制成；优选地，所述酸溶液的浓度为1％～10％(v/v)；进一步优选地，所述酸包括醋酸。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述壳聚糖溶液中壳聚糖的含量为40-60mg/mL；和/或，在步骤S2中，甲基丙烯酸酐的用量为每个壳聚糖重复单元的0.1～1.0的摩尔当量。

9.根据权利要求6-8中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，壳聚糖溶液与甲基丙烯酸酐混合后的混合物在室温持续摇动反应；优选地，所述反应的时间为1～5小时。

10.如权利要求1或2所述的氧化石墨烯/壳聚糖多功能止血海绵或如权利要求3-9中任意一项所述的方法制备的氧化石墨烯/壳聚糖多功能止血海绵在制备止血材料中的应用。