CN111437443A - 一种新型真皮基质脱细胞方法 - Google Patents

一种新型真皮基质脱细胞方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111437443A
CN111437443A CN202010311429.8A CN202010311429A CN111437443A CN 111437443 A CN111437443 A CN 111437443A CN 202010311429 A CN202010311429 A CN 202010311429A CN 111437443 A CN111437443 A CN 111437443A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dermal matrix
acellular
decellularization
placing
novel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010311429.8A
Other languages
English (en)
Inventor
蒋彩云
李志宏
郭雅楠
柏玮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Baiao Ruipai Tianjin Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Baiao Ruipai Tianjin Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baiao Ruipai Tianjin Biological Technology Co ltd filed Critical Baiao Ruipai Tianjin Biological Technology Co ltd
Priority to CN202010311429.8A priority Critical patent/CN111437443A/zh
Publication of CN111437443A publication Critical patent/CN111437443A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/362—Skin, e.g. dermal papillae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3695—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the function or physical properties of the final product, where no specific conditions are defined to achieve this

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种新型真皮基质脱细胞方法，全程采用含有结构稳定剂的溶液处理真皮，包括脱细胞前的浸泡、组织脱细胞、脱细胞后的清洗，包括⑴将真皮基质置于含结构稳定剂的PBS缓冲液中，2‑8℃，200‑500Pa低压浸泡20min‑2h；⑵将真皮基质置于含有结构稳定剂的脱细胞溶液中，2‑8℃，80‑200rpm震荡处理4‑6h；⑶将真皮基质置于含有结构稳定剂的脱细胞溶液中，2‑4℃，超声高压处理30‑60min；超声功率20‑40Hz，压强为200‑500MPa。结构稳定剂包括丝素蛋白、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、蔗糖中的两种或三种。本发明的脱细胞方法制备的真皮基质，外观更为柔软有韧性，且热稳定性、机械性能和生物活性成分保留量均有所提高，增加了材料的亲水性和细胞亲和性，能够诱导细胞长入。

Description

一种新型真皮基质脱细胞方法
技术领域
本发明属于生物医用材料领域，涉及真皮基质脱细胞技术，尤其是一种新型真皮基质脱细胞方法。
背景技术
皮肤由表皮层、真皮层和皮下组织构成，真皮层是一层致密结缔组织，组成成分有胶原纤维、成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞、血管等。胶原纤维主要是由Ⅰ型胶原蛋白构成，种属间差异很小，而外源细胞、组织液、核酸、脂质是引起免疫原性的因素。真皮基质作为外源组织植入人体时，需要去除细胞、核酸等上述因素才能避免出现免疫排斥反应。真皮基质可来自异体皮、猪皮、牛皮、羊皮等。
目前常用的脱细胞方法有物理法(如搅拌、震荡、超声、低渗和高渗)、化学法(如酸、碱、表面活性剂)、酶法(如胰蛋白酶、DNase等)、有机溶剂(如乙醇、丙酮等)，这四种方法处理过程中都会造成真皮基质结构不同程度的损伤，降解基质中的活性因子，导致材料机械性能降低、热稳定性差、生物相容性差。因此在动物真皮脱细胞过程中，如何高效去除免疫原性，同时最大化维持真皮基质三维结构稳定性和保留蛋白聚糖、生长因子等生物活性成分，是当前的技术难点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种在脱细胞过程中有效避免真皮基质结构损伤、确保其机械性能高、热稳定性及生物相容性高的新型真皮基质脱细胞方法。
本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：
一种新型真皮基质脱细胞方法，包括以下步骤：
⑴脱细胞前结构稳定剂的浸泡：
a含结构稳定剂的PBS缓冲液的配制：将PBS溶液与结构稳定剂室温100-150rpm震荡混匀5-15min；
b将真皮基质置于上述步骤a配置的混合液中，2-8℃，低压浸泡20min-2h，低压压力为：200-500Pa，浸泡比例为溶液体积：真皮基质湿重＝1-3:1(w/v)；
⑵脱细胞过程：
a含有结构稳定剂的脱细胞溶液的配制：将脱细胞溶液与结构稳定剂室温80-200rpm震荡混匀15-30min；
b将真皮基质置于上述⑵a配制的脱细胞混合液中，2-8℃，80-200rpm震荡处理4-6h，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝5-10:1(w/v)；
c将步骤⑵b处理后的真皮基质置于⑵a配制的脱细胞溶液中，2-4℃，超声高压处理30-60min，超声功率20-40Hz，压强为200-500Mpa，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝1-3:1(w/v)；
⑶等渗清洗：将真皮基质置于⑴a配制的含有结构稳定剂的PBS缓冲液中，2-8℃，80-150rpm震荡处理24-48h，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝10-20:1(w/v)。
而且，所述的结构稳定剂为丝素蛋白、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、蔗糖中的两种或三种。
而且，所述结构稳定剂组分的质量浓度为：
丝素蛋白：5％-20％
甘露醇：1％-3％
甘氨酸：0.5％-3％
精氨酸：0.5％-3％
蔗糖：1％-3％。
而且，所述的脱细胞试剂为酶类或表面活性剂。
而且，所述酶类脱细胞试剂为为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、无花果蛋白酶、磷脂酶A2、核酸酶、Dispase中的一种或多种。
而且，所述表面活性剂为Triton X-100、CHAPS、SDS、DCA中的两种或三种。
而且，表面活性剂浓度为0.01％-2％。
本发明的优点和积极效果是：
1、本发明中的脱细胞方法，通过结构稳定剂浸泡，使稳定剂紧密地包裹临近的蛋白质分子，得到黏度很高扩散系数很低的聚合体。脱细胞过程中，脱细胞试剂去除基质中的细胞后，优先与基质表面游离的结构稳定剂反应，这样使得基质表面稳定剂浓度比溶液中稳定剂的总体浓度低,表面张力增加，基质中的蛋白分子的化学势升高而提高了结构上的稳定性。
2、本发明的脱细胞方法结合了物理法(机械振荡和高压渗透)、化学法(表面活性剂)和酶法，交错连续地脱去真皮基质中的细胞成分，并且在脱细胞过程中全程含有结构稳定剂的保护，使得制备的脱细胞真皮基质外观更为柔软有韧性，热稳定性、机械性能和生物活性成分保留量均有所提高，增加了材料的亲水性和细胞亲和性，能够诱导细胞长入。
附图说明
图1为本发明的HE染色结果图，其中1-1为未脱细胞猪真皮基质，1-2为无结构稳定剂处理脱细胞猪真皮基质，1-3为含结构稳定剂处理脱细胞猪真皮基质；
图2为不同处理猪真皮基质中DNA残留量；
图3为不同处理猪真皮基质中EGF的含量；
图4为不同处理猪真皮基质中bFGF的含量。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
实施例1
(1)取新鲜的小牛牛皮(购自屠宰场)，使用取皮机去除牛皮的表皮层和皮下组织，制得0.5mm真皮网状层，立即浸泡于0.1％新洁尔灭溶液中，消毒去脂30min，PBS清洗干净。
(2)使用纯化水配置含结构稳定剂10％丝素蛋白、2.5％精氨酸和1％蔗糖的PBS缓冲液，室温下120rpm/min震荡混匀10min，0.45μm水系滤膜过滤除菌。将上面制备的牛真皮置于混合液中，4℃低压浸泡30min，压力为300Pa，浸泡比例为溶液体积：真皮基质湿重＝1:1(w/v)。
(3)使用纯化水配置含有10％丝素蛋白、2.5％精氨酸、1％蔗糖、0.25％胰酶、0.15％无花果蛋白酶和PBS的脱细胞混合液，室温下120rpm/min震荡混匀15min，0.45μm水系滤膜过滤除菌。将牛真皮置于脱细胞混合液中，4℃震荡处理4h，转速为120rpm/min，处理比例为混合液体积：异种真皮基质湿重＝6:1(w/v)。将牛真皮取出后再次置于脱细胞混合液中，4℃超声高压处理30min，超声功率20Hz，压强为300Mpa，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝1:1(w/v)。
(4)将牛真皮置于如(2)制备的PBS混合液中，4℃震荡处理24h，转速为80rpm/min。处理比例为混合液体积：异种真皮基质湿重＝10:1(w/v)。
(5)采用0.9％灭菌生理盐水4℃超声清洗10次，5min/次。清洗后的真皮基质采用4℃湿态保存。
(6)将牛脱细胞真皮基质剪裁为0.3cm×4cm的长条，用皮革收缩测定仪检测其热皱缩温度，实验结果表明，同无结构稳定剂处理的脱细胞真皮相比，本发明脱细胞方法制备的牛真皮热皱缩温度高，即热稳定性好(见表1)。
表.1不同处理牛真皮基质的热皱缩温度
Figure BDA0002457994580000031
热皱缩温度(Ts)：将异种ADM剪裁为0.3cm×4cm的长条，用皮革热皱缩温度仪测定，以纯水为介质，从室温开始加热，每分钟加热2℃。
实施例2
(1)取新鲜猪皮(购自屠宰场)，使用取皮机去除猪皮的表皮层和皮下组织，制得0.7mm真皮网状层，立即浸泡于0.1％新洁尔灭溶液中，消毒去脂30min，PBS清洗干净。
(2)使用纯化水配置含结构稳定剂2.5％甘露醇、1％甘氨酸、1％蔗糖的PBS缓冲液，室温下震荡混匀5min，转速为100rpm/min，0.45μm水系滤膜过滤除菌。将上面制备的猪真皮置于混合液中，4℃低压浸泡1h，压力为500Pa，浸泡比例为溶液体积：真皮基质湿重＝1:1(w/v)。
(3)使用纯化水配置含有3％甘露醇、1％甘氨酸、1％蔗糖、0.5％SDS、2％TrionX-100和PBS的脱细胞混合液，室温下180rpm/min震荡混匀30min，0.45μm水系滤膜过滤除菌。将猪真皮置于脱细胞混合液中，4℃震荡处理6h，转速为180rpm/min，处理比例为混合液体积：异种真皮基质湿重＝8:1(w/v)。将猪真皮取出后再次置于脱细胞混合液中，4℃超声高压处理1h，超声功率40Hz，压强为200Mpa，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝2:1(w/v)。
(4)将猪真皮置于如(2)配置的PBS混合液中，4℃震荡处理48h，转速为100rpm/min。处理比例为混合液体积：异种真皮基质湿重＝20:1(w/v)。
(5)采用0.9％灭菌生理盐水4℃超声清洗10次，5min/次。清洗后的真皮基质采用4℃湿态保存。
(6)将猪脱细胞真皮组织进行石蜡包埋和HE染色，观察真皮中胶原纤维形态结构和残留的细胞核成分(见图1)。实验结果表明，同无结构稳定剂处理的脱细胞真皮相比，都没有发现残留的细胞核，细胞去除较为彻底，但是本发明脱细胞方法制备的猪真皮胶原纤维排列更为致密规律，结构更加完整。
实施例3
(1)取新鲜猪皮(购自屠宰场)，使用取皮机去除猪皮的表皮层和皮下组织，制得0.7mm真皮网状层，立即浸泡于0.1％新洁尔灭溶液中，消毒去脂30min，PBS清洗干净。
(2)使用纯化水配置含结构稳定剂5％丝素蛋白、3％精氨酸的PBS缓冲液，室温震荡处理5min，转速为120rpm/min，0.45μm水系滤膜过滤除菌。将上面制备的猪真皮置于混合液中，2℃低压浸泡20min，压力为200Pa，浸泡比例为溶液体积：真皮基质湿重＝2:1(w/v)。
(3)使用纯化水配置含有5％丝素蛋白、3％精氨酸、0.25％胰蛋白酶、1％TrionX-100和PBS的脱细胞混合液，180rpm/min室温下震荡混匀20min，0.45μm水系滤膜过滤除菌。将猪真皮置于脱细胞混合液中，4℃震荡处理4h，转速为180rpm/min，处理比例为混合液体积：异种真皮基质湿重＝8:1(w/v)。将猪真皮取出后再次置于脱细胞混合液中，2℃超声高压处理45min，超声功率40Hz，压强为400Mpa，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝2:1(w/v)。
(4)将猪真皮置于如(2)配置的PBS混合液中，4℃震荡处理24h，转速为110rpm/min。处理比例为混合液体积：异种真皮基质湿重＝15:1(w/v)。
(5)采用0.9％灭菌生理盐水4℃超声清洗10次，5min/次。清洗后的真皮基质采用4℃湿态保存。
(6)采用荧光染色法测定猪脱细胞真皮组织的DNA残留量，采用ELISA试剂盒检测EGF残留量和bFGF残留量。实验结果表明，同无结构稳定剂处理的脱细胞真皮相比，DNA残留量差异不显著，但是含结构稳定剂的脱细胞方法制备的猪真皮基质EGF和bFGF残留量更高，即结构稳定剂能够保留真皮基质中的生物活性因子(图2,图3,图4)。
DNA残留量：根据《中华人民共和国药典2015版四部》3407外源性DNA残留量测定法和YY/T0606-2014《组织工程医疗产品第25部分：动物源性生物材料DNA残留量测定方法：荧光染色法》，采用荧光染色法测定不同处理后猪真皮基质的DNA残留量。测定结果见图2。
生长因子含量的测定：采用ELISA试剂盒检测猪真皮基质中的生长因子含量。测定结果见图3，图4。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例和附图，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例和附图所公开的内容。

Claims (7)

1.一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：包括以下步骤：
⑴脱细胞前结构稳定剂的浸泡：
a含结构稳定剂的PBS缓冲液的配制：将PBS溶液与结构稳定剂室温100-150rpm震荡混匀5-15min；
b将真皮基质置于上述步骤a配置的混合液中，2-8℃，低压浸泡20min-2h，低压压力为200-500Pa，浸泡比例为溶液体积：真皮基质湿重＝1-3:1(w/v)；
⑵脱细胞过程：
a含有结构稳定剂的脱细胞溶液的配制：将脱细胞溶液与结构稳定剂室温80-200rpm震荡混匀15-30min；
b将真皮基质置于上述⑵a配制的脱细胞混合液中，2-8℃，80-200rpm震荡处理4-6h，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝5-10:1(w/v)；
c将步骤⑵b处理后的真皮基质置于⑵a配制的脱细胞溶液中，2-4℃，超声高压处理30-60min，超声功率20-40Hz，压强为200-500MPa，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝1-3:1(w/v)；
⑶等渗清洗：将真皮基质置于⑴a配制的含有结构稳定剂的PBS缓冲液中，2-8℃，80-150rpm震荡处理24-48h，处理比例为混合液体积：真皮基质湿重＝10-20:1(w/v)。
2.根据权利要求1所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述的结构稳定剂为丝素蛋白、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、蔗糖中的两种或三种。
3.根据权利要求2所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述结构稳定剂组分的质量浓度为：
丝素蛋白：5％-20％
甘露醇：1％-3％
甘氨酸：0.5％-3％
精氨酸：0.5％-3％
蔗糖：1％-3％。
4.根据权利要求1所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述的脱细胞试剂为酶类或表面活性剂。
5.根据权利要求4所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述酶类脱细胞试剂为为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、无花果蛋白酶、磷脂酶A2、核酸酶、Dispase中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：所述表面活性剂为Triton X-100、CHAPS、SDS、DCA中的两种或三种。
7.根据权利要求6所述的一种新型真皮基质脱细胞方法，其特征在于：表面活性剂浓度为0.01％-2％。
CN202010311429.8A 2020-04-20 2020-04-20 一种新型真皮基质脱细胞方法 Pending CN111437443A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010311429.8A CN111437443A (zh) 2020-04-20 2020-04-20 一种新型真皮基质脱细胞方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010311429.8A CN111437443A (zh) 2020-04-20 2020-04-20 一种新型真皮基质脱细胞方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111437443A true CN111437443A (zh) 2020-07-24

Family

ID=71653481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010311429.8A Pending CN111437443A (zh) 2020-04-20 2020-04-20 一种新型真皮基质脱细胞方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111437443A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112957534A (zh) * 2021-04-06 2021-06-15 海南大学 一种脱细胞真皮基质材料的制备方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101496915A (zh) * 2009-01-16 2009-08-05 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 去基底膜无细胞的异种真皮网状层支架及其制备方法
CN101642565A (zh) * 2008-08-07 2010-02-10 陕西北美基因股份有限公司 血红蛋白类氧载体冻干制剂的制备方法
KR20110098490A (ko) * 2010-02-26 2011-09-01 (주)시지바이오 무세포 진피 기질의 제조 방법 및 그로부터 제조된 무세포 진피 기질
CN102470149A (zh) * 2009-08-18 2012-05-23 生命细胞公司 用于处理组织的方法
CN104288837A (zh) * 2014-09-11 2015-01-21 杨淑珍 一种脱细胞真皮基质及其制备方法和用途
CN104667336A (zh) * 2013-03-28 2015-06-03 北京桀亚莱福生物技术有限责任公司 一种用于覆盖烧伤创伤创面的人体生物敷料及其应用
CN104888274A (zh) * 2015-05-19 2015-09-09 暨南大学 一种具有天然水平糖胺聚糖的脱细胞基质及其制备与应用
CN105126170A (zh) * 2015-08-18 2015-12-09 深圳兰度生物材料有限公司 脱细胞真皮基质及其制备方法
CN105833353A (zh) * 2016-05-09 2016-08-10 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 一种生物工程脱细胞真皮基质的制备及用途
CN106581770A (zh) * 2016-12-29 2017-04-26 北京桀亚莱福生物技术有限责任公司 一种硬脑膜补片、制备方法及在硬脑膜损伤修复中的应用

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101642565A (zh) * 2008-08-07 2010-02-10 陕西北美基因股份有限公司 血红蛋白类氧载体冻干制剂的制备方法
CN101496915A (zh) * 2009-01-16 2009-08-05 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 去基底膜无细胞的异种真皮网状层支架及其制备方法
CN102470149A (zh) * 2009-08-18 2012-05-23 生命细胞公司 用于处理组织的方法
KR20110098490A (ko) * 2010-02-26 2011-09-01 (주)시지바이오 무세포 진피 기질의 제조 방법 및 그로부터 제조된 무세포 진피 기질
US20120329034A1 (en) * 2010-02-26 2012-12-27 Wook Chun Method For Producing An Acellular Dermal Matrix, And Acellular Dermal Matrix Produced By Same
CN102869392A (zh) * 2010-02-26 2013-01-09 Cg生物技术有限公司 无细胞真皮基质的制备方法及由其制备的无细胞真皮基质
CN104667336A (zh) * 2013-03-28 2015-06-03 北京桀亚莱福生物技术有限责任公司 一种用于覆盖烧伤创伤创面的人体生物敷料及其应用
CN104288837A (zh) * 2014-09-11 2015-01-21 杨淑珍 一种脱细胞真皮基质及其制备方法和用途
CN104888274A (zh) * 2015-05-19 2015-09-09 暨南大学 一种具有天然水平糖胺聚糖的脱细胞基质及其制备与应用
CN105126170A (zh) * 2015-08-18 2015-12-09 深圳兰度生物材料有限公司 脱细胞真皮基质及其制备方法
CN105833353A (zh) * 2016-05-09 2016-08-10 拜欧迪赛尔（北京）生物科技有限公司 一种生物工程脱细胞真皮基质的制备及用途
CN106581770A (zh) * 2016-12-29 2017-04-26 北京桀亚莱福生物技术有限责任公司 一种硬脑膜补片、制备方法及在硬脑膜损伤修复中的应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙东坡等: "蛋白质冷冻干燥制品中的保护剂及其保护机制", 《药学进展》 *
孙亨等: "组织脱细胞方法的研究进展", 《四川解剖学杂志》 *
田烨等: "生物制品冻干保护方法研究进展", 《中国医药生物技术》 *
赵宇等: "脱细胞技术及其在组织工程中的应用研究进展", 《中国修复重建外科杂志》 *
龚居霞等: "槲皮素改性脱细胞猪真皮基质的研究", 《皮革科学与工程》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112957534A (zh) * 2021-04-06 2021-06-15 海南大学 一种脱细胞真皮基质材料的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6171101B2 (ja) 動物脱細胞化組織マトリックス材料を製造するための方法及びその製造された組織マトリックス材料
CN105126170A (zh) 脱细胞真皮基质及其制备方法
CN107397972A (zh) 一种动物皮脱细胞基质敷料的制备方法以及所得的敷料
CN105797212A (zh) 一种用于皮肤难愈合创面修复的脱细胞羊膜制备方法及应用
CN114377206B (zh) 一种脱细胞基质生物材料的制备方法
CN107233622B (zh) 一种脱细胞组织膜的制备方法
CN112618799B (zh) 鱼皮脱细胞真皮基质及其制备方法和应用
CN104383601A (zh) 一种骨骼肌脱细胞基质生物补片及其制备方法
CN109675112B (zh) 一种人源的脱细胞真皮基质的制备方法
CN112516058A (zh) 一种载氨基酸的改性羊膜面膜及其制备方法
CN113476667A (zh) 一种鱼皮脱细胞真皮基质支架及其制备方法和应用
CN109701078B (zh) 一种基于脱细胞真皮基质的生物海绵及其制备方法
Łabuś et al. Tissue engineering in skin substitute
CN102178981B (zh) 一种软骨修复支架材料的制备方法
CN111437443A (zh) 一种新型真皮基质脱细胞方法
CN107412867B (zh) 一种异种脱细胞真皮基质的制备方法
CN106693056A (zh) 交联引导组织再生膜及其制备方法
CN115607739B (zh) 一种生物肩袖补片及其制备方法
CN112618796A (zh) 一种脱细胞真皮基质材料及其制备方法和应用
CN114306755B (zh) 一种后巩膜加固术用生物补片及其制备方法
Kumar et al. Extraction techniques for the decellularization of rat dermal constructs
CN109550082A (zh) 一种脱细胞基质凝胶的制备方法
CN114306744A (zh) 脱细胞真皮复合成纤维细胞外泌体修复材料及其制备方法
JP2005185507A (ja) 皮膚の分離無細胞化方法、無細胞化真皮マトリックス及びその製造方法並びに無細胞化真皮マトリックスを用いた複合培養皮膚
TWI791290B (zh) 膠原蛋白顆粒於促進毛囊生成或血管生成之用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200724