CN111423988A - 一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造方法 - Google Patents

一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造方法,具体包括消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)检测不同高盐稀态发酵罐中酱醪的酪氨酸含量,从中选出游离酪氨酸含量较发酵初期酪氨酸含量下降最为明显的酱醪中分离菌株,并用高盐培养基进行培养,得到耐盐菌原种;(2)观察耐盐菌的菌落形态和菌体显微形态;(3)将耐盐菌原种进行扩大培养,得到耐盐菌菌液;(4)将耐盐菌液接种到含高游离酪氨酸的酱醪中进行恒温发酵,筛选出游离酪氨酸含量<100mg/100g的那个酱醪,则所用菌液对应的耐盐菌为可消耗酪氨酸的耐盐菌。本发明通过分离出消耗酪氨酸的耐盐菌,用于黄豆酱酿造工艺,可以降低发酵后期酪氨酸的量,降低黄豆酱产生白点的风险。

Description

一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造 方法
技术领域
本发明属于黄豆酱酿造工艺领域,具体涉及一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造方法。
背景技术
黄豆酱是我国传统的调味酱,通常是以黄豆、面粉为原料,将黄豆炒熟磨碎后经过米曲霉等微生物发酵而制成的一种更容易被人体消化吸收的半流动状态的发酵调味食品。现有的黄豆酱在生产及贮藏过程中,经常出现形状不规则的白色结晶,俗称白点,并且随着黄豆酱商品货架期的延长,白点还会有增多的趋势,严重影响到黄豆酱成品的外观。由于所述白点像极了发霉变质的霉点,导致消费者误以为产品质量有问题而拒绝购买这类商品,因而出厂后才出现白点的黄豆酱都会遭遇到消费者/销售商的退货处理,使得企业遭受一定的经济损失。
现有技术中,早已对黄豆酱的白点问题有所关注,据现有研究资料可知,该白点的主要成分为氨基酸,由大量的酪氨酸和少量的苯丙氨酸组成。酪氨酸是构成蛋白质的20种氨基酸之一,属于芳香族氨基酸,游离的酪氨酸在水中的溶解度仅仅为0.0348(20℃),是难溶于水的氨基酸。
由于黄豆酱的生产菌种一般采用米曲霉作为生产菌种,形成豆酱风味物质的是米曲霉产生的蛋白质水解酶系。随着发酵过程的进行,大豆蛋白在蛋白酶的作用下水解成小分子肽,进而分解为多种氨基酸和少量短肽,在水解反应中会生成含有酪氨酸末端的肽链,再在酪氨酸羧肽酶的作用下生成酪氨酸,因游离的酪氨酸难溶于水,因此,当酪氨酸超出水的溶解度时就会先析出微小的晶核,随着蛋白质水解酶系的催化和水解,释放出更多的酪氨酸,使析出的晶体逐渐增大,累积形成肉眼可见的白点。本发明人在研究中发现,黄豆酱的白点最早可以在发酵初期的15天左右出现,然后随着发酵时间的推进,白点有可能逐渐增多或者逐渐增大。
现有技术中,对于在生产过程中出现的白点,生产企业通常可以采用人工目测黄豆酱的生胚或成品中瓶壁析出的白点,及时发现并处理掉;但却无法避免黄豆酱出厂后再出现肉眼可见的白点的情况,这一直是生产企业没能彻底解决的老大难问题。
目前,对于控制白点的生成主要有以下几种方法:
1.增大黄豆酱发酵酱醪中的酪氨酸的溶解度:
(1)有文献记载,在现有的黄豆酱生产中,有通过添加乳化剂PEG增大其溶解度来减少酪氨酸的析出;
(2)在研究豆瓣白点试验时,添加聚乙二醇或蔗糖脂肪酸酯,由于该类物质能增大酪氨酸的溶解度,所以能控制白点的产生。
但以上方法还停留在实验室阶段,并没能在生产中得到实施应用。
2.抑制黄豆酱发酵酱醪中的酪氨酸的生成:
(1)在研究腐乳白点控制时,添加冰醋酸抑制剂,发现产品中未出现白点的,这是因为冰醋酸除了抑制微生物生长,还能够调节卤汁pH,降低蛋白酶活。
(2)有文献指出,黄豆酱生产在发酵初期隔氧、前浇淋、换汁后搅拌结合的操作方法,能在一定程度上抑制消除发酵过程中白点的产生。
(3)降低种曲与黄豆面粉混合的接种量、降低黄豆蒸煮强度、降低混合料水分等。
其缺点是,使用以上方法降低酪氨酸浓度的同时其他氨基酸生成也会降低,造成黄豆酱的风味降低。
3.驯化用于黄豆酱发酵的菌株:
就生产菌种而言,根据酶生物合成产物阻遏原理,在黄豆酱专用种曲中,采用在培养基中添加酪氨酸的方法对米曲霉菌株进行驯化,以减少酪氨酸羧肽酶的合成,然后将驯化后的米曲霉菌株用于黄豆酱发酵。
与未驯化菌株相比,驯化菌株发酵的黄豆中酪氨酸含量大为减少,因此认为可以有效控制黄豆酱中白点的产生。但在生产工艺上限制酶的分泌会造成酶量不足,延长黄豆酱发酵时间。酪氨酸羧肽酶对酪氨酸的释放起主要作用,对菌株的驯化虽然能减少该酶的合成,但驯化的微生物一般没有发生基因变异,且驯化过程是可逆的,所以菌株的生产稳定性能还有待进一步探讨。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种消耗酪氨酸的耐盐菌。
本发明的第二目的在于提供一种消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法。
本发明的第三目的在于提供一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造方法,在避免白点隐患的同时,保证黄豆酱的品质不变。
本发明为实现上述第一发明目的,采用以下技术方案:
本发明提供一种消耗酪氨酸的耐盐菌,其是粉状毕赤酵母(Millerozymafarinosa),保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC),保藏编号为GDMCC No:60938,保藏单位地址广东省广州市先烈中路100号大院59号楼,保藏日期为2019年12月23日。
本发明为实现上述第二发明目的,采用以下技术方案:
一种上述消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,包括以下步骤:
(1)跟踪检测黄豆酱生产中的多个高盐稀态发酵罐中的酱醪在整个发酵过程中不同阶段的游离酪氨酸含量,从中选出在发酵过程中酱醪的游离酪氨酸含量较发酵初期酪氨酸含量下降最为明显的那罐酱醪,从该酱醪中分离出菌株,并用高盐培养基进行培养,得到耐盐菌原种;
(2)观察步骤(1)所得的耐盐菌的菌落形态和菌体显微形态,对其中多个菌落进行初步的分类,得到数个耐盐菌原种;
(3)将步骤(2)所得的数个耐盐菌原种分别在培养基中进行扩大培养,得到数种耐盐菌菌液;
(4)将步骤(3)所得的数种耐盐菌菌液分装并标注于不同的保藏管中进行低温保藏,备用;
(5)将所述数种耐盐菌菌液各取适量分别接种到黄豆酱酱醪中进行恒温发酵,发酵完成后检测各个酱醪中的游离酪氨酸含量情况,筛选出游离酪氨酸含量<100mg/100g的那个酱醪,其所用菌液对应步骤(3)、(4)的那个耐盐菌即为可消耗酪氨酸的耐盐菌。
本发明所述的黄豆酱采用的是高盐稀态发酵工艺生产的黄豆酱,其发酵所用的高盐稀态发酵罐为开放式发酵罐,天然露晒发酵,因此,不同的发酵罐中酱醪的菌群种类和数量不尽相同,即使是同一批次生产的酱醪分装在不同的发酵罐中进行发酵,也会出现不同的发酵罐中的酱醪所含的游离酪氨酸不同的情况;而在同一个发酵罐中的酱醪也会有多种不同的菌落。
本发明在上述步骤(1)中,所述高盐培养基中含食盐6%-30%。
本发明还可以采用以下优选地方案:
本发明在上述步骤(1)中所述的高盐培养基由以下组分构成:天然油500ml-1000ml、葡萄糖1%-10%、食盐6%-30%、酵母粉1%-20%、蛋白胨1%-20%、琼脂粉1.5%-2.0%。
本发明推荐的实施方案是,培养基由以下组分构成:天然油800ml、葡萄糖1%、食盐6%、酵母粉1%、蛋白胨5%、琼脂粉2.0%。
本发明在上述步骤(1)中,培养基培养耐盐菌的培养温度是28-35℃,培养时间2-3d。
本发明在上述步骤(3)中,耐盐菌原种扩大培养所采用的培养基由以下组分构成:天然油500ml-1000ml、葡萄糖1%-10%、食盐6%-30%、酵母粉1%-20%、蛋白胨1%-20%。
本发明在上述步骤(3)中,耐盐菌原种扩大培养的温度为28-35℃,培养时间为2-3d。
本发明在上述步骤(3)中得到的所述耐盐菌菌液细胞数达到1*105~1*109个/ml。
本发明在上述步骤(5)中,耐盐菌液接种到黄豆酱酱醪中的接种量为酱醪重量的5‰-20%,且接种前的酱醪中游离酪氨酸的含量为≥200mg/100g。
本发明在上述步骤(5)中,恒温发酵的温度为28-35℃,发酵时间为7-14d。
本发明为实现上述第三发明目的,采用以下技术方案:
一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造工艺,包括以下步骤:
(1)按黄豆酱高盐稀态发酵生产工艺,将蒸熟的黄豆与面粉、种曲混合培养制备成大曲;
(2)同时将上述通过消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法获得的消耗酪氨酸的耐盐菌用培养基进行培养,制备成种子液,然后将种子液接种到扩培罐中进行放大培养,得到耐盐菌菌液;
(3)将步骤(1)制得的大曲与盐水混合得到的酱醪加入发酵罐中,再加入步骤(2)的耐盐菌菌液进行晒露发酵;
(4)继续按高盐稀态发酵生产工艺完成黄豆酱后续的生产工序至黄豆酱成品。
采用本发明所述的黄豆酱酿造工艺生产的黄豆酱,能够利用所述消耗酪氨酸的耐盐菌有效地消耗游离酪氨酸,有效地控制了酱醪中的游离酪氨酸<100mg/100g。经本发明人对黄豆酱白点析出所做的梯度试验发现(参见下表),出厂的黄豆酱游离酪氨酸含量<100mg/100g,在货架期不会产生白点。
Figure BDA0002436006830000061
本发明优选的实施方案如下:
在本发明黄豆酱酿造工艺步骤(1)中,黄豆与面粉混合比例为1∶0.3~0.4。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(1)中,所述制备大曲的时间为38-40h。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(2)中,制备种子液的培养基由以下组分组成:天然油500ml-1000ml、葡萄糖1%-10%、食盐6%-30%、酵母粉1%-20%、蛋白胨1%-20%。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(2)所述的种子液培养温度为28-35℃,培养时间为2-3d。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(2)中,所述的种子液接种到扩培罐中的接种量为培养基总重量的5%-10%。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(2)所述的扩大培养温度为28-35℃,培养时间为2-3d。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(2)中所得的耐盐菌菌液中细胞数达到1*105~1*109个/ml。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(3)中,盐水的添加量为黄豆原料重量的2.0-2.2倍。进一步地,所述盐水为10-29波美的的盐水。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(3)中,所述的耐盐菌菌液加入到所述酱醪中接种量为酱醪重量的5‰-20%。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(3)中,所述晒露发酵时间为50-60d。
本发明黄豆酱酿造工艺步骤(3)中,所述的耐盐菌菌液加入到所述酱醪中的时间为发酵开始后0-40d。
本发明具有以下有益效果:
(1)本发明通过采用消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,从黄豆酱酱醪中筛选分离出能消耗酪氨酸的耐盐菌,用于黄豆酱酿造工艺,通过在黄豆酱酱醪中添加能消耗酪氨酸的耐盐菌,来有效地降低黄豆酱发酵后期酱醪中游离酪氨酸的含量,使黄豆酱中的游离酪氨酸的含量控制在<100mg/100g范围内,从而避免了黄豆酱在货架期产生白点的风险。
(2)本发明黄豆酱酿造工艺采用的是消耗黄豆酱酱醪中的游离酪氨酸的方法来降低酪氨酸含量,并不会影响酱醪发酵过程中的蛋白质分解,因此,能够在不影响黄豆酱品质的情况下,同时有效地解决黄豆酱在货架期中出现白点影响黄豆酱外观的问题,采用本发明生产的黄豆酱在总酸、氨基酸态氮、盐分、还原糖、pH、全氮实验与对照样无显著差异。
(3)采用本发明的黄豆酱酿造体系生产的黄豆酱无惧白点隐患,且品质良好,实现了黄豆酱工艺的升级。
附图说明
图1是本发明实施例中筛选分离得到的菌A的菌落形态;
图2是本发明实施例中筛选分离得到的菌A的显微形态;
图3是本发明实施例中筛选分离得到的菌B的菌落形态;
图4是本发明实施例中筛选分离得到的菌B的显微形态;
图5是本发明实施例中筛选分离得到的菌C的菌落形态;
图6是本发明实施例中筛选分离得到的菌C的显微形态;
图7是本发明实施例中筛选分离得到的菌D的菌落形态;
图8是本发明实施例中筛选分离得到的菌D的显微形态;
图9是本发明实施例中筛选分离得到的菌E的菌落形态;
图10是本发明实施例中筛选分离得到的菌E的显微形态;
图11是本发明实施例中筛选分离得到的菌F的菌落形态;
图12是本发明实施例中筛选分离得到的菌F的显微形态。
具体实施方式
下面结合具体的实施例,详细说明本发明的技术方案。
实施例1
一种消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,包括以下步骤:
(1)通过检测不同发酵罐中黄豆酱酪氨酸的含量,确认游离酪氨酸含量下降的发酵罐。从发酵罐的酱醪中分离菌株,并用培养基筛选出耐盐菌,所使用的培养基配方:天然油800ml、葡萄糖1%、食盐6%、酵母粉1%、蛋白胨5%,琼脂粉2.0%,培养温度30℃,培养时间2d,有氧培养,直到平板长出菌落,得到耐盐菌原种。
(2)观察分离得到的耐盐菌的菌落形态和菌体显微形态,一共分离得到6株耐盐菌,命名为菌A、B、C、D、E、F,结果见图1-12。菌A为酵母菌,菌落大,表面褶皱,花状,不透明,液体培养基中有白膜;菌B为酵母菌,表面光滑,不透明,黏稠,菌落颜色呈乳白色,容易用针挑起,带酒香;菌C为短杆菌,凝胶状、表面较光滑、湿润、与培养基结合紧密,不易挑取,正反颜色一致,有臭味;菌D为酵母菌,菌落中等,表面褶皱不光滑,圆形,不透明,后期产生褶皱;菌E球形细菌,菌落中等大小,凸起,黄色不透明,湿润,边缘整齐,菌落呈圆形,直径3mm左右;菌F为酵母菌,菌落大,表面呈花状,菌落正反面颜色不同。
(3)将获取的6个耐盐菌原种分别进行扩大培养,采用培养基配方为:天然油800ml、葡萄糖2%、食盐6%、酵母粉1%、蛋白胨1%,于30℃下,摇床培养2d,得到6种耐盐菌菌液,其中细胞数均达到1*109个/ml。
(4)将步骤(3)所得的数种耐盐菌菌液分装并标注于不同的保藏管中进行低温保藏,备用;
(5)将6种耐盐菌菌液按照接种量10%分别添加至含游离酪氨酸的酱醪中,对照样添加无菌培养基,30℃恒温发酵,每天搅拌,发酵10天送检游离酪氨酸,确认耐盐菌降低游离酪氨酸效果,结果见表1,游离酪氨酸含量下降,则该耐盐菌为可消耗酪氨酸的耐盐菌。
表1添加分离得到的6株耐盐菌后游离酪氨酸含量变化情况单位:mg/100g
菌种编号 菌A 菌B 菌C 菌D 菌E 菌F 对照
游离酪氨酸 20-80 160-180 180-220 180-200 200-220 170-190 230-270
结果显示,耐盐菌A对消耗黄豆酱游离酪氨酸有显著结果,经鉴定耐盐菌A为粉状毕赤酵母(Millerozyma farinosa)。后续将耐盐菌A-F添加到黄豆酱发酵罐中验证消减酪氨酸结果是否与实验室结果一致。
实施例2
一种黄豆酱酿造工艺,包括如下步骤:
(1)选用黄豆,经除杂、泡豆、蒸煮、冷却后加入种曲,与面粉按1∶0.4重量比充分混合,培养40h后制备成大曲。
(2)耐盐菌A-F菌液的制备:采用培养基配方:天然油800ml、葡萄糖2%、食盐6%、酵母粉1%、蛋白胨1%,将耐盐菌接种到培养基中,于30℃下,摇床培养2d,制备成种子液10L,细胞数达到1*109个/ml;将种子液以10%接种比例加入扩培罐100L,培养温度30℃,放大培养2d后,得到耐盐菌菌液,细胞数达到109个/ml,备用。
(3)将成熟的大曲与20波美的混合盐水,泵入发酵罐中,盐水的添加量为黄豆原料量的2.0倍。进行晒露发酵60天,在酿造10天时按照接种量10%将培养好的耐盐菌液泵入黄豆酱发酵罐中,发酵期间不进行搅拌通气,只进行复油操作。
(4)继续按高盐稀态发酵生产工艺完成黄豆酱后续的生产工序至黄豆酱成品。
实施例3
一种黄豆酱酿造工艺,包括如下步骤:
(1)选用黄豆,经除杂、泡豆、蒸煮、冷却后加入种曲,与面粉按1∶0.35重量比充分混合,培养38h后制备成大曲。
(2)耐盐菌A菌液的制备:采用培养基配方:天然油800ml、葡萄糖5%、食盐10%、酵母粉1%、蛋白胨1%,将耐盐菌接种到培养基中,于30℃下,摇床培养2d,制备成种子液10L,细胞数达到1*109个/ml;将种子液以10%接种比例加入扩培罐100L,培养温度30℃,放大培养2d后,得到耐盐菌菌液,细胞数达到109个/ml,备用。
(3)将成熟的大曲与20波美的混合盐水,泵入发酵罐中,盐水的添加量为黄豆原料量的2.0倍。进行晒露发酵60天,在酿造0天按照接种量10%将培养好的耐盐菌A液泵入黄豆酱发酵罐中,发酵期间不进行搅拌通气,只进行复油操作。
(4)继续按高盐稀态发酵生产工艺完成黄豆酱后续的生产工序至黄豆酱成品。
实施例4
一种黄豆酱酿造工艺,包括如下步骤:
(1)选用黄豆,经除杂、泡豆、蒸煮、冷却后加入种曲,与面粉按1∶0.4重量比充分混合,培养38h后制备成大曲。
(2)耐盐菌A菌液的制备:采用培养基配方:天然油500ml、葡萄糖3%、食盐8%、酵母粉2%、蛋白胨2%,将耐盐菌接种到培养基中,于30℃下,摇床培养2d,制备成种子液10L,细胞数达到1*109个/ml;将种子液以10%接种比例加入扩培罐100L,培养温度30℃,放大培养2d后,得到耐盐菌菌液,细胞数达到109个/ml,备用。
(3)将成熟的大曲与20波美的混合盐水,泵入发酵罐中,盐水的添加量为黄豆原料量的2.2倍。进行晒露发酵60天,在酿造21天按照接种量5%将培养好的耐盐菌液泵入黄豆酱发酵罐中,发酵期间不进行搅拌通气,只进行复油操作。
(4)继续按高盐稀态发酵生产工艺完成黄豆酱后续的生产工序至黄豆酱成品。
对比例
一种黄豆酱酿造工艺,包括如下步骤:
(1)选用黄豆,经除杂、泡豆、蒸煮、冷却后加入种曲,与面粉按1∶0.4的重量比充分混合,培养40h后制备成大曲。
(2)将成熟的大曲与20波美的混合盐水,泵入晒罐中,盐水的添加量为黄豆原料量的2.0倍。进行日晒夜露酿造60天。
性能检测
检测在不同发酵时间添加不同耐盐菌菌液完成发酵后酪氨酸含量的变化情况,以及添加菌A-F后黄豆酱风味、颜色、理化等指标的情况,结果如表2、表3:
表2不同发酵时间添加不同耐盐菌菌液酪氨酸含量的变化情况(mg/100g)
耐盐菌 添加菌液时间 添加菌液时游离酪氨酸含量 发酵60天游离酪氨酸含量
菌A 发酵第10天 213 44
菌A 发酵第0天 201 30
菌A 发酵第21天 252 78
菌B 发酵第10天 207 175
菌C 发酵第10天 218 200
菌D 发酵第10天 228 195
菌E 发酵第10天 205 208
菌F 发酵第10天 211 174
对照 —— 229 240
表3发酵60天后黄豆酱风味、颜色、理化等指标的情况
Figure BDA0002436006830000121
Figure BDA0002436006830000131
试验结果表明:实施例2中,在黄豆酱发酵期间在发酵10天,添加耐盐菌A-F都能降低酱醪中的游离酪氨酸,但添加耐盐菌B-F降低游离酪氨酸较小,在黄豆酱发酵期间添加菌A后酱醪中的游离酪氨酸为44mg/100g,降低游离酪氨酸效果显著。
不同发酵时间添加菌A都未对黄豆酱风味、颜色等指标有负面影响,其中总酸、氨基酸态氮、盐分、还原糖、pH、全氮实验和对照无显著差异,同时发酵过程中添加菌A的时间对最终发酵完成后游离酪氨酸含量有影响,添加时间越早,游离酪氨酸含量越低。
以上实施例仅是本发明的部分实施例,并不能作为对本发明保护范围的限制,任何基于本发明构思基础上做出的改进和变形,都落入本发明的保护范围之内,具体保护范围以权利要求书记载的为准。

Claims (10)

1.一种消耗酪氨酸的耐盐菌,其特征在于,所述消耗酪氨酸的耐盐菌是粉状毕赤酵母(Millerozyma farinosa),保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC),保藏编号为GDMCC No:60938,保藏单位地址广东省广州市先烈中路100号大院59号楼,保藏日期为2019年12月23日。
2.一种消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)跟踪检测黄豆酱生产中的多个高盐稀态发酵罐中的酱醪在整个发酵过程中不同阶段的游离酪氨酸含量,从中选出在发酵过程中酱醪的游离酪氨酸含量较发酵初期酪氨酸含量下降最为明显的那罐酱醪,从该酱醪中分离出菌株,并用高盐培养基进行培养,得到耐盐菌原种;
(2)观察步骤(1)所得的耐盐菌的菌落形态和菌体显微形态,对其中多个菌落进行初步的分类,得到数个耐盐菌原种;
(3)将步骤(2)所得的数个耐盐菌原种分别在培养基中进行扩大培养,得到数种耐盐菌菌液;
(4)将步骤(3)所得的数种耐盐菌菌液分装并标注于不同的保藏管中进行低温保藏,备用;
(5)将所述数种耐盐菌菌液各取适量分别接种到黄豆酱酱醪中进行恒温发酵,发酵完成后检测各个酱醪中的游离酪氨酸含量情况,筛选出游离酪氨酸含量<100mg/100g的那个酱醪,其所用菌液对应步骤(3)、(4)的那个耐盐菌即为可消耗酪氨酸的耐盐菌。
3.根据权利要求2所述消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,其特征在于,步骤(1)中,所述高盐培养基中含食盐6%-30%。
4.根据权利要求2或3所述消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,其特征在于,步骤(1)中,培养基培养耐盐菌的培养温度是28-35℃,培养时间2-3d;步骤(3)中,耐盐菌原种扩大培养的温度为于28-35℃,培养时间为2-3d。
5.根据权利要求4所述消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,其特征在于,步骤(3)中得到的所述耐盐菌菌夜细胞数达到1*105~1*109个/ml。
6.根据权利要求5所述消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,其特征在于,步骤(5)中,耐盐菌液接种到黄豆酱酱醪中的接种量为酱醪重量的5‰-20%,且接种前的酱醪中游离酪氨酸的含量为≥200mg/100g。
7.根据权利要求5所述消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法,其特征在于,步骤(5)中,恒温发酵的温度为28-35℃,发酵时间为7-14d。
8.一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造工艺,其特征在于,包括以下步骤:
(1)按黄豆酱高盐稀态发酵生产工艺,将蒸熟的黄豆与面粉、种曲混合培养制备成大曲;
(2)同时将上述通过消耗酪氨酸的耐盐菌的筛选分离方法获得的消耗酪氨酸的耐盐菌用培养基进行培养,制备成种子液,然后将种子液接种到扩培罐中进行放大培养,得到耐盐菌菌液;
(3)将步骤(1)制得的大曲与盐水混合得到的酱醪加入发酵罐中,再加入步骤(2)的耐盐菌菌液进行晒露发酵;
(4)继续按高盐稀态发酵生产工艺完成黄豆酱后续的生产工序至黄豆酱成品。
9.根据权利要求8所述黄豆酱酿造工艺,其特征在于,步骤(2)中,所述的种子液接种到扩培罐中的接种量为培养基总重量的5%-10%。
10.根据权利要求9所述黄豆酱酿造工艺,其特征在于,步骤(3)中,所述晒露发酵时间为50-60d;所述的耐盐菌菌液加入到酱醪中的时间为发酵开始后0-40d。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110358703A (zh) * 2019-06-13 2019-10-22 广东美味鲜调味食品有限公司 一种可减少酱油二次沉淀的良性乳酸菌菌株及其筛选方法及应用
CN112106934A (zh) * 2020-09-28 2020-12-22 天津科技大学 一种降低黄豆酱白点生成的黄豆酱及其发酵方法
CN113416660A (zh) * 2021-07-15 2021-09-21 宜宾五粮液股份有限公司 一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途
CN114088891A (zh) * 2021-11-12 2022-02-25 鹤山市东古调味食品有限公司 黄豆酱白点形成与控制的研究方法
CN114196558A (zh) * 2021-12-30 2022-03-18 好口味食品有限公司 一种耐盐型酵母的提取方法及应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015228833A (ja) * 2014-06-05 2015-12-21 公益財団法人野田産業科学研究所 味噌・醤油酵母の判別法
CN110101015A (zh) * 2019-04-12 2019-08-09 广东美味鲜调味食品有限公司 一种黄豆酱用酱胚的酿造工艺
CN110358703A (zh) * 2019-06-13 2019-10-22 广东美味鲜调味食品有限公司 一种可减少酱油二次沉淀的良性乳酸菌菌株及其筛选方法及应用
CN110771777A (zh) * 2019-11-22 2020-02-11 中国海洋大学 降解生物胺的酵母菌Millerozyma farinose及其在发酵食品中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015228833A (ja) * 2014-06-05 2015-12-21 公益財団法人野田産業科学研究所 味噌・醤油酵母の判別法
CN110101015A (zh) * 2019-04-12 2019-08-09 广东美味鲜调味食品有限公司 一种黄豆酱用酱胚的酿造工艺
CN110358703A (zh) * 2019-06-13 2019-10-22 广东美味鲜调味食品有限公司 一种可减少酱油二次沉淀的良性乳酸菌菌株及其筛选方法及应用
CN110771777A (zh) * 2019-11-22 2020-02-11 中国海洋大学 降解生物胺的酵母菌Millerozyma farinose及其在发酵食品中的应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QUANZENG WEI ET AL.: "Profiling of dynamic changes in the microbial community during the soy sauce fermentation process", 《APPLIED MICROBIAL AND CELL PHYSIOLOGY》, vol. 97, no. 20, 14 September 2013 (2013-09-14), pages 9111 - 9119, XP035328789, DOI: 10.1007/s00253-013-5146-9 *
刘志云等: "粉状毕赤酵母NGH的氨氮降解特性及除氨效果研究", 《家畜生态学报》, no. 03, 15 March 2016 (2016-03-15), pages 43 - 48 *
张慧林 等: "传统发酵豆酱的微生物群落结构和游离氨基酸组成及其相关性分析", 《食品科学》, vol. 40, no. 14, 25 July 2019 (2019-07-25), pages 193 *
曹宝忠等: "影响酱类质量因素及技术改进探讨", 《中国酿造》, no. 01, 15 January 2010 (2010-01-15), pages 115 - 117 *
王先秀: "有盐酱油发酵中耐高渗透压的乳酸菌和酵母菌的拮抗作用", 《食品科学》, no. 11, 30 November 1981 (1981-11-30), pages 8 - 11 *
程淑敏等: "生物胺降解菌在酱油中的应用", 《食品与发酵工业》, vol. 45, no. 04, 15 November 2018 (2018-11-15), pages 129 - 133 *
胡传旺 等: "酱醪细菌菌株的分离及功能分析", 《微生物学通报》, vol. 44, no. 8, 20 August 2017 (2017-08-20), pages 1899 - 1907 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110358703A (zh) * 2019-06-13 2019-10-22 广东美味鲜调味食品有限公司 一种可减少酱油二次沉淀的良性乳酸菌菌株及其筛选方法及应用
CN110358703B (zh) * 2019-06-13 2024-02-23 广东美味鲜调味食品有限公司 一种可减少酱油二次沉淀的良性乳酸菌菌株及其筛选方法及应用
CN112106934A (zh) * 2020-09-28 2020-12-22 天津科技大学 一种降低黄豆酱白点生成的黄豆酱及其发酵方法
CN113416660A (zh) * 2021-07-15 2021-09-21 宜宾五粮液股份有限公司 一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途
CN113416660B (zh) * 2021-07-15 2022-11-15 宜宾五粮液股份有限公司 一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途
CN114088891A (zh) * 2021-11-12 2022-02-25 鹤山市东古调味食品有限公司 黄豆酱白点形成与控制的研究方法
CN114088891B (zh) * 2021-11-12 2023-09-08 鹤山市东古调味食品有限公司 黄豆酱白点形成与控制的研究方法
CN114196558A (zh) * 2021-12-30 2022-03-18 好口味食品有限公司 一种耐盐型酵母的提取方法及应用

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