CN113416660B - 一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途 - Google Patents

一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明属于工业微生物发酵技术领域，具体涉及一种产2‑壬醇粉酵母菌株及其用途。本发明产2‑壬醇粉酵母菌株(Millerozymafarinosa)，保藏编号为CGMCC No.22621，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2021年5月27日；该菌株的菌体为圆形或椭圆型，出芽生殖；菌落呈白色，不透明，表面干燥呈粉状，边缘不整齐不扩散。本发明为微生物发酵产2‑壬醇提供了一种新方向。

Description

一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途
技术领域
本发明属于工业微生物发酵技术领域，具体涉及一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途。
背景技术
2-壬醇，英文名称：2-Nonanol，又名1-2-壬醇、正2-壬醇，甲基庚基甲醇，化学式：C9H20O，为无色液体，不溶于水，溶于乙醇等有机熔剂，沸点：193-194℃，熔点：-36--35℃。相对密度d25250.823～0.847，折射率n20D 1.4499～1.4307。具有浓郁的蜡香、青香、奶油香和果香。在苹果、香蕉、草莓、柑橘类水果中以游离或酯化状态天然存在。
2-壬醇是一种工业原料，可用作溶剂、有机合成中间体；用于制造增塑剂、表面活性剂、稳定剂、消泡剂；可用于调配干酪、蘑菇、椰子、奶油等食用香料，我国GB2760-86规定为允许使用的食用香料；还可用于调制奶油、桃、橙、柠檬、白柠檬和菠萝等型香精。
目前工业上有多种生产2-壬醇的方法，但还没有Millerozyma farinosa菌株产2-壬醇的相关报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种产2-壬醇的粉酵母菌株，在微生物发酵产2-壬醇方面提供一个新方向。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种产2-壬醇粉酵母菌株(Millerozyma farinosa)，所述菌株保藏编号为CGMCC No.22621；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2021年5月27日，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
其中，上述菌株具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
SEQ ID NO：1产2-壬醇粉酵母菌株核苷酸序列：
AAAAGAAACCAACAGGGATTGCCTTAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGCGTCTTCGGCGTCCGAGTTGTAATTTGAAGAAGGCTACTTTGGAGCTGGAGTTTGTCTAAGTTCCTTGGAACAGGACGTCACAGAGGGTGAGAATCCCGTGAGATAAGCTTCCCAGTTCTATGTAAAGTGCTTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCTTGAGATCAGACATGGTATTTTGTAAACCTTCTCTCTCGTGGAGGGGGCCCCTTGCAGTTTACTGGGCCAGCATCAGTTTGGGCGGTAGGATAATGACTAAGGAATGTGACTTGCCTTCGGGGAAGTGTTATAGCCTTGGTTGATACTGCCAGCCTAGACTGAGGACCGCGTCTTTGACAAGGATGTTGGCATAATGATCTTAAGC。
其中，上述菌株的菌体为圆形或椭圆型，出芽生殖；菌落呈白色，不透明，表面干燥呈粉状，边缘不整齐不扩散。
其中，上述菌株能发酵利用葡萄糖、半乳糖、甘油、N-乙酰氨基葡萄糖、海藻糖、侧金盏花醇、木糖醇和乙醇。
进一步的，上述菌株不可利用2-酮基-葡萄糖酸盐、L-阿拉伯糖、D-木糖、肌醇、山梨醇、α-甲基-D-葡萄糖、纤维二糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖和松三糖进行发酵。
本发明还提供上述粉酵母菌株用于生产2-壬醇的用途。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种可以正常发酵，高产2-壬醇的粉酵母菌株，在微生物发酵产2-壬醇方面提供了一个新方向。本发明产2-壬醇粉酵母菌株，用五粮粉液态静置发酵模拟窖池发酵，可产生多种风味物质，其中2-壬醇含量高达9.57mg/L。用五粮粉固态发酵模拟窖池发酵，可产生多种风味物质，其中2-壬醇含量高达11.91mg/L。
本发明提供的产2-壬醇的粉酵母菌株，于2021年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为CGMCC No.22621；分类学地位：Eukaryota；Fungi；Dikarya；Ascomycota；Saccharomycotina；Saccharomycetes；Saccharomycetales；Debaryomycetaceae；Millerozyma；Millerozyma farinosa；拉丁文学名：Millerozyma farinosa。
附图说明
图1为本发明粉酵母(Millerozyma farinosa)菌株显微形态图；
图2为本发明粉酵母(Millerozyma farinosa)菌株菌落形态图；
图3为本发明粉酵母(Millerozyma farinosa)菌株在五粮粉液态静置模拟浓香型白酒窖池发酵中代谢产物图谱，其中38.3min的物质为2-壬醇；
图4为本发明粉酵母(Millerozyma farinosa)菌株在五粮粉固态静置模拟浓香型白酒窖池发酵中代谢产物图谱，其中38.3min的物质为2-壬醇。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
实施例1菌株筛选
1、产2-壬醇酵母菌株的筛选：
发酵培养基：YPD液体培养基为商业用合成培养基(成分：葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母膏1％，)；
五粮粉糖化液：五粮粉打成细粉，五粮粉：水＝1：10混匀，水煮沸加入五粮粉，煮至稀粥状，冷却；加入1.8％液化酶，65℃保温3h；再加入1.8％糖化酶，62℃保温3h；过滤，将糖度终浓度调至12-13°P；以上培养基均121℃，0.1MPa灭菌15min。
五粮粉固态发酵培养基：五粮粉：水(1:0.7)拌匀，蒸熟至没有生心，补水30％，凉后加入适量糖化酶。
试验方法：
在五粮液酿酒车间和制曲车间外围环境空气样品中分离纯化出178株酵母菌，将所有酵母菌分别挑取一环入YPD液态培养基和五粮粉糖化液(50/100mL三角瓶)中，28℃，培养72h。用嗅闻法进行酵母菌产风味初筛。结果显示，有8株酵母发酵液有浓郁的蜡香和柑橘的复合气味，疑2-壬醇。
2、菌株的复筛：
发酵培养基：五粮粉糖化液，同上；五粮粉固态发酵培养基，同上。
液体扩大培养：活化初筛后的8株酵母菌株，以终浓度活菌数105-106，接入五粮粉糖化液中，装液量400mL/500mL三角瓶，密封，28℃静置培养72h。通过嗅闻法筛选出发酵液蜡香和柑橘复合气味最浓烈的一株菌，为WLY-Y-91。
固态培养：活化初筛后的8株酵母菌株，以1％接种量接种至五粮粉固态培养基中，混匀，密封，28℃静置培养72h。通过嗅闻法筛选出发酵液蜡香和柑橘复合气味最浓烈的一株菌，为WLY-Y-91。
实施例2粉酵母在五粮粉糖化发酵液中主要风味成分分析
发酵培养基：五粮粉糖化液，五粮粉打成细粉，五粮粉：水＝1：10混匀，水煮沸加入五粮粉，煮至稀粥状，冷却；加入1.8％液化酶，65℃保温3h；再加入1.8％糖化酶，62℃保温3h；过滤，将糖度终浓度调至12-13°P；以上培养基均121℃，0.1MPa灭菌15min。
培养菌株种子液，以终浓度活菌数105-106，接入五粮粉糖化液中，装液量400mL/500mL三角瓶，密封，28℃静置培养72h。发酵结束后，离心菌液，上清过0.22μm滤膜，最后利用顶空固相微萃取(HS-SPME)偶联气质联用法(GC-MS)测定其发酵液中风味物质成分含量。目标菌株WLY-Y-91在五粮粉糖化发酵液中产2-壬醇含量较高，高达9.57mg/L(如图3所示)。
实施例3粉酵母在五粮粉固态模拟发酵中主要风味成分分析
发酵培养基：五粮粉：水(1:0.7)拌匀，蒸熟至没有生心，补水30％，凉后加入适量糖化酶。
培养种子液，以1％接种量接种至五粮粉固态培养基中，混匀，密封，28℃静置培养72h。发酵结束后，取样品与10％乙醇1:1混匀，振荡30min，离心，上清过0.22μm滤膜，最后利用顶空固相微萃取(HS-SPME)偶联气质联用法(GC-MS)测定其固态发酵中风味物质成分含量。目标菌株WLY-Y-91在五粮粉固态培养基中发酵产2-壬醇含量较高，高达11.91mg/L(如图4所示)。
实施例4目标菌株的鉴定
1、梅里埃生理生化鉴定试剂盒鉴定：
API 20C AUX实验条是由19个同化测定的干粉底物的20个小杯所组成。小杯内含半固体微量培养基供接种，只有能以该底物为碳源的酵母菌才能生长。测定结果是以与对照生长物的比较而得；鉴定结果参照分析图谱索引或鉴定软件。
测试步骤：
①形态学试验。
加1滴菌悬液到RAT medium上，如检测到菌丝或假菌丝，记为阳性。该试验组成试条的第21个试验。
②准备试条和接种物。
③试条接种。
将上述混合悬液注入试条每个试孔中，将吸管的顶部靠在杯内缘加液体，以避免形成气泡。小心注入，表面呈平或稍凸。盖上培养盒，于28℃培养48-72h。
④判读试条。
28℃培养48或72h后，每个杯内生长反应情况与0杯(阴性对照)比较，比阴性对照更浑浊者，记为阳性。
该菌株的碳源同化试验结果如表1所示。
表1本发明粉酵母菌株的生理生化试验结果
Figure BDA0003164085730000041
注：“+”为阳性，“-”为阴性。
2、分子鉴定：
提取菌株基因组DNA，用酵母ITS通用引物对正向引物ITS1、反向引物ITS4扩增基因组DNA，反应条件为：94℃预变性5min后进入以下循环：94℃变性45s，55℃退火40s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min。经2％琼脂糖凝胶电泳鉴定结果良好。将PCR扩增产物寄送生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序，将测序结果在NCBI数据库上进行BLAST序列比对，确定为粉酵母，并命名为粉酵母(Millerozyma farinosa)WLY-Y-91。该菌已于2021年6月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.22621，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
实施例5本发明粉酵母菌株的形态特征及生物学特性鉴定
下述各试验中均要用到新活化的菌体，挑取少量菌体接种于YPD固体培养基中，28℃培养1-2d。
菌落及菌体形态观察：
将经活化的粉酵母菌株用接种环划线接种于YPD琼脂平板培养基上，28℃培养1-2d，观察菌落形态；用接种针挑取少量菌体，利用显微镜观察菌体形态；
菌体观察结果：菌体呈圆形或椭圆型，单核，出芽方式繁殖(如图1所示)。
菌落观察结果：菌落呈白色，不透明，表面干燥呈粉状，边缘不整齐不扩散(如图2所示)。
综述可知：本发明粉酵母(Millerozyma farinosa)菌株的细胞学特征为：菌体为圆形或椭圆型，出芽生殖；菌落呈白色，不透明，表面干燥呈粉状，边缘不整齐不扩散。生理生化特征为：能利用葡萄糖、半乳糖、甘油、N-乙酰氨基葡萄糖、海藻糖和侧金盏花醇，木糖醇、乙醇；不可利用2-酮基-葡萄糖酸盐，L-阿拉伯糖、D-木糖、肌醇、山梨醇、α-甲基-D-葡萄糖、纤维二糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖和松三糖进行发酵。本发明产2-壬醇粉酵母菌株，用五粮粉液态静置发酵模拟窖池发酵，可产生多种风味物质，其中2-壬醇含量高达9.57mg/L。用五粮粉固态发酵模拟窖池发酵，可产生多种风味物质，其中2-壬醇含量高达11.91mg/L。
序列表
<110> 宜宾五粮液股份有限公司
<120> 一种产2-壬醇粉酵母菌株及其用途
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 574
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
aaaagaaacc aacagggatt gccttagtaa cggcgagtga agcggcaaaa gctcaaattt 60
gaaatctggc gtcttcggcg tccgagttgt aatttgaaga aggctacttt ggagctggag 120
tttgtctaag ttccttggaa caggacgtca cagagggtga gaatcccgtg agataagctt 180
cccagttcta tgtaaagtgc tttcgaagag tcgagttgtt tgggaatgca gctctaagtg 240
ggtggtaaat tccatctaaa gctaaatatt ggcgagagac cgatagcgaa caagtacagt 300
gatggaaaga tgaaaagaac tttgaaaaga gagtgaaaaa gtacgtgaaa ttgttgaaag 360
ggaagggctt gagatcagac atggtatttt gtaaaccttc tctctcgtgg agggggcccc 420
ttgcagttta ctgggccagc atcagtttgg gcggtaggat aatgactaag gaatgtgact 480
tgccttcggg gaagtgttat agccttggtt gatactgcca gcctagactg aggaccgcgt 540
ctttgacaag gatgttggca taatgatctt aagc 574

Claims (2)

1. 一种产2-壬醇的酵母（Millerozyma farinosa），其特征在于：所述菌株保藏编号为CGMCC No.22621。
2.根据权利要求1所述的一种产2-壬醇的酵母（Millerozyma farinosa）用于生产2-壬醇的用途。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111423988A (zh) * 2020-04-01 2020-07-17 广东美味鲜调味食品有限公司 一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造方法
CN112175847A (zh) * 2020-11-11 2021-01-05 宜宾五粮液股份有限公司 丛梗孢酵母属新菌株及其用途
CN113151021A (zh) * 2021-05-17 2021-07-23 四川老坛子食品有限公司 一种酵母菌及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111423988A (zh) * 2020-04-01 2020-07-17 广东美味鲜调味食品有限公司 一种添加耐盐菌降低酱醪中游离酪氨酸含量的黄豆酱酿造方法
CN112175847A (zh) * 2020-11-11 2021-01-05 宜宾五粮液股份有限公司 丛梗孢酵母属新菌株及其用途
CN113151021A (zh) * 2021-05-17 2021-07-23 四川老坛子食品有限公司 一种酵母菌及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Profiling of dynamic changes in the microbial community during the soy sauce fermentation process;Wei Q等;《Appl Microbiol Biotechnol》;20130914;第97卷(第20期);9111-9119 *
不同等级五粮浓香原酒香气成分的差异性分析;刘明丽等;《安徽农业大学学报》;20200630;第47卷(第6期);869-878 *
泸型酒发酵过程中酵母菌演替规律及其对部分风味分子形成的影响;杨建刚等;《食品科学》;20181231;第39卷(第18期);166-172 *
适应性进化技术选育优良乙醇耐受性能Millerozyma farinosa;李莹等;《食品与发酵工业》;20211231;第47卷(第19期);1-6 *

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