CN116515651A - 一株扣囊复膜酵母菌株及其在黄酒酿造中的应用 - Google Patents

一株扣囊复膜酵母菌株及其在黄酒酿造中的应用 Download PDF

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Abstract

一株扣囊复膜酵母菌株及其在黄酒酿造中的应用，包括将筛选出来的扣囊复膜酵母C‑3斜面菌种接种于活化液体培养基，摇床振荡培养，随后将得到的培养物接种至第一种子培养基，摇床振荡培养，再次将得到的培养物接种至第二种子培养基，振荡培养获得酵母种子培养物；在进行大米蒸煮后，将其加水冷却，再分别加入适量的酒曲、水、活性干酵母及其酵母种子培养物混合均匀后进行黄酒的酿造。本发明的扣囊复膜酵母C‑3能够产酯香，具有淀粉酶活、糖化酶活和蛋白酶活，加入到黄酒酿造过程中，能够加快原料中淀粉的转化率，改善了黄酒的风味。

Description

一株扣囊复膜酵母菌株及其在黄酒酿造中的应用
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一株扣囊复膜酵母菌株及其在黄酒酿造中的应用。
背景技术
黄酒是世界上最古老的酒类之一，因其酿造技术独树一帜，因此成为东方酿造界的典型代表和楷模。根据其地域的差异，黄酒在酿造过程中采用的原辅料和酿造方式也有所不同，因此导致酿造过程中产生的微生物种群也有所差异。
据研究报道，以粳米为原料酿造黄酒会产生以下方面的问题：原料利用率低，因粳米中含有一定含量的直链淀粉，其不易与水分子结合，导致吸水率降低，不利于大米蒸煮过程中的完全糊化，使得在后续黄酒发酵过程不易被酵母霉菌等微生物利用，会造成发酵不完全，酒精量生成不高的现象；另外一方面是仅仅以粳米为原料发酵黄酒，加入传统发酵中需要的酿酒曲和活性干酵母，其酿造酒的风味较差，主要体现在酒精产量、氨基酸含量种类及挥发性风味物质的差异上。以粳米为原料发酵的酒液其苦味及涩味氨基酸占比较大，作为风味物质的前体物质，会使得黄酒产生不良的风味。除此之外，以粳米为原料酿造的黄酒高级醇含量较高，会在一定程度上损坏酒体的口味，味苦涩，饮用会使人头痛，饮后易上头、易醉。
黄酒的酿造体系是一个极其复杂的生态系统，酿酒体系中的细菌、酵母菌和非酿酒酵母菌及霉菌等多种微生物种群，它们在发酵过程中的相互作用，共同促进了黄酒风味物质的代谢。大多数集中在对酿酒酵母及霉菌的研究上，对非酿酒酵母的相关研究鲜见报道。
非酿酒酵母-扣囊复膜酵母，属于酵母菌的一种，又被成为扣囊复膜孢酵母，扣囊拟内孢霉。扣囊复膜酵母广泛存在于各种酒曲中，能够产淀粉酶、酸性蛋白酶和β-葡萄糖苷酶，且其所产的酶都具有较高的活性；除此之外，扣囊复膜酵母还具有一定的产香产酯的能力。在酿酒工业中，这些酶活性决定了扣囊复膜酵母能够以各种原料为底物，进行发酵产酒精；其产香产酯能力又在不同程度条件下增加酒的香气，丰富了酒的风味。这些都决定了扣囊复膜酵母在酿酒工业中有极大的研究价值和发展潜力。
发明内容
本发明的目的在于提供一株扣囊复膜酵母菌株及其在黄酒酿造中的应用。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一株扣囊复膜酵母菌株，所述扣囊复膜酵母菌株为扣囊复膜酵母菌株(Saccharomycopsis fibuligera)C-3，已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期为2022年12月19日，菌种保藏编号为CCTCC NO:M 20221986。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：扣囊复膜酵母菌株(Saccharomycopsis fibuligera)C-3在黄酒酿造中的应用。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种黄酒酿造方法，采用权利要求1所述的扣囊复膜酵母菌株发酵生产黄酒。
优选的技术方案为：包含如下步骤：
步骤1：将扣囊复膜酵母菌株C-3斜面菌种接种于活化培养基，28-30℃条件下振荡培养40-48h，随后将得到的培养物接种至第一种子培养基，28-30℃条件下振荡培养32-36h，再将得到的培养物接种至第二种子培养基，28-30℃条件下振荡培养32-36h，获得酵母种子培养物；
步骤2：对大米进行蒸煮后，将其加水冷却，再分别加入酒曲、水、活性干酵母及步骤1得到的酵母培养物，混合均匀后进行黄酒的酿造。
优选的技术方案为：步骤2中，种子培养物浓度为0.5-5х106CFU/mL。
优选的技术方案为：步骤2中，酿造时的温度为28-30℃，时间为40-48h。
优选的技术方案为：所述第一种子培养基的原料配方包括：水100mL，酵母粉1g，葡萄糖2g，蛋白胨2g；121℃灭菌15min。
优选的技术方案为：所述第二种子培养基的原料配方包括：水100mL，粳米3g，酵母粉0.3g，蛋白胨0.6g，121℃灭菌15min；
优选的技术方案为：对大米进行蒸煮后，将其加水冷却，再加入活化30min的安琪活性干酵母和黄酒酿酒曲，最后加入酵母种子培养物，搅拌均匀启动发酵；其中前发酵期为0-5天，需要4-5h搅拌一次，温度控制在25-32℃，6-18天为后发酵阶段，温度控制在18-25℃。
优选的技术方案为：加入活性干酵母和黄酒酿酒曲的同时加入酵母种子培养物。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：
1、本发明的扣囊复膜酵母C-3具有淀粉酶活、糖化酶活和蛋白酶活，有利于黄酒酿造过程中原料的分解与利用。
2、本发明的扣囊复膜酵母C-3作为非酿酒酵母，具有产香产酯特性，应用于黄酒的发酵过程有利于改善黄酒的风味，提高黄酒的品质。
附图说明
图1菌株C-3镜检照片及YPD培养基上的菌落形态观察。
图2菌株C-3淀粉酶活和蛋白酶活的表征。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
请参阅图1-2。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整。提供以下实施例以便更好地理解本发明，而非限制本发明。以下实施例中的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买所得。
生物材料的保藏：
扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)C-3已于2022年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20221986，中国典型培养物保藏中心地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号。
以下实施例所述试剂或材料若无说明，均为市售。
实施例1：一株扣囊复膜酵母及其在黄酒酿造中的应用
筛选过程：
1.称取10g酒药样品，用研钵将其磨成粉末，用无菌水溶解稀释，利用振荡器振荡均匀后分别采用平板划线与稀释涂布法接种于孟加拉红培养基上，置于28℃恒温培养箱中培养48h～72h，对典型的典型菌落进行挑选，挑选典型的的单一菌落于新的马铃薯培养基和YPD琼脂培养基分离纯化几次，直至得到纯种的初筛菌株。
2.菌株筛选及菌落形态观察
将初筛得到的菌株接种到马铃薯培养基上，经过前期产酯香、产酒精、产气、耐酒精、耐糖等基本生理生化实验性能的测定，最终筛选出一株性能较优的酵母菌。将其接种到YPD琼脂培养基、观察其基础菌落形态。通过提取该菌株的DNA，测定28sDNA序列(SEQNO.1)，并进入NCBI数据库进行比对，结合生理生化性质，确定该菌株为扣囊复膜酵母。扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)C-3已于2022年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20221986，中国典型培养物保藏中心地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号。
3.菌株在平板上产酶活能力试验
(1)平板产淀粉酶活力试验
改良的察氏培养基配方：3g硝酸钠，1g磷酸氢二钾，0.5g硫酸镁(七水)，0.5g氯化钾，0.01g硫酸亚铁，20g可溶性淀粉，20g琼脂粉，定容到1L，PH7.0-7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min。
若待测的菌株可以利用以可溶性淀粉为唯一碳源，菌株周围的淀粉会被消耗，在平板上滴加碘液时，会在菌落周围呈现透明圈。以此来判断是否具有产淀粉酶活的能力。
(2)平板产蛋白酶活力试验
酪蛋白培养基配方(g/L)：4g干酪素，0.36g磷酸二氢钾,1.07g磷酸氢二钾,0.014g氯化锌，0.002g氯化钾，0.5g硫酸镁(七水)，0.16g氯化钠，20g琼脂粉，定容到1L，pH 6.5-7.0，121℃高压蒸汽灭菌20min。
4.菌株耐糖、耐酸、耐酒精性能试验
(1)耐糖性能试验
向已灭菌的YPD液体培养基，加入不同质量的葡萄糖，使得培养基的糖质量浓度分别为0、5、10、15、20、25％，每管接种相同浓度的酵母菌株，每组做3个平行，于28℃培养48h，在OD540处测其浊度，作为判断酵母菌的耐糖能力。
(2)耐酸性能试验
向已灭菌的YPD液体培养基，分别使用PH计调节PH值为3，4，5，6，7，每管接种相同浓度的酵母菌株，每组做3个平行，于28℃培养48h，在OD540处测其浊度，作为判断酵母菌的耐酸能力。
(3)耐酒精性能试验
向已灭菌的YPD液体培养基，加入不同体积的无水乙醇，使得培养基中乙醇体积分数分别为0、5、8、10、15％，每管接种相同浓度的酵母菌株，每组做3个平行，于28℃培养48h，在OD540处测其浊度，作为判断酵母菌的耐酒精能力。
5.试饭法测定菌株在发酵液中的酶活
称取40g粳米，经一定时长的浸泡后，添加60g水，置于高压蒸汽灭菌锅中，在110℃保温15min，将蒸煮好的米饭自然冷却至室温，再分别加入40mL无菌水，1mL浓度为107CFU/mL的酵母菌悬液，将其静置于28℃恒温培养箱中，按照米醪发酵的进程，每过一段时间取5g饭样于三角瓶中，加入45g蒸馏水浸泡30min，经8000r/min进行15min的离心后，取上清液备用以测定淀粉酶活、糖化酶活和酸性蛋白酶活所用。
6.扣囊复膜酵母菌在黄酒酿造中的应用
6.1菌株C-3的扩大培养
将菌株C-3斜面菌种1环接种于装有10mL活化液体培养基的18*180的试管中，于28℃下静置培养48h。将培养结束的试管培养液轻轻振荡均匀，用无菌吸管接0.1mL加入装有10mL培养基的试管，振荡均匀后于28℃培养24-36h。再将10mL培养物全部接种至装有800mL种子培养基1的1L三角瓶中，于28℃下培养24h,再将培养物接种至装有10L种子培养基2的发酵罐中，于28℃培养24h，获得酵母种子培养物。
6.2菌株在黄酒发酵过程中的应用
称取1000g粳米，加入1500ml的自来水(符合生活饮用水标准GB 5749-2022)，于室温下浸泡48h，沥干水分。向浸泡后的米通入蒸汽蒸煮15min，温度控制在110℃，蒸煮结束后，米饭加水冷却至40℃左右，再向其中加入原料量0.25％的酒曲、0.02％的活性干酵母及107CFU/mL的扣囊酵母菌混合均匀，置于25-32℃下进行5天的前发酵，每隔4-5h搅拌一次，之后将温度控制在18-25℃，进行6-18天的后发酵阶段。
表1菌株C-3耐酒精性能比较
酒精浓度 OD值
0 0.577±0.081
5％ 0.390±0.018
8％ 0.402±0.026
10％ 0.431±0.047
15％ 0.314±0.01
表2菌株C-3耐酸性能比较
pH OD值
3 0.525±0.018
4 0.702±0.016
5 1.068±0.070
6 0.880±0.076
7 0.636±0.062
表3菌株C-3耐糖性能比较
糖浓度 OD值
0 0
5％ 0.676±0.062
10％ 0.935±0.071
15％ 0.574±0.057
20％ 0.451±0.043
从表1可以看出，随着发酵液中酒精含量的升高，菌株C-3的生长所受的抑制会有明显的增强。当酒精含量为15％时，发酵液的浊度OD540低于0.3，说明该菌株耐酒精能力较强。表2是菌株C-3耐酸能力的试验，可以看到酵母菌的生长随着pH的升高呈现先促进再抑制的趋势，当pH值高于5时，酵母菌的生长则受到抑制。表3是菌株C-3耐糖能力的试验，与耐酸性能呈现相似的趋势，菌株的生长随着糖含量的升高呈现先促进后抑制的现象。黄酒发酵液的PH在3-7.5左右，酒精度大于8％，不超过15％。因此综合判断该菌株适用于黄酒的发酵体系。
表4试饭法测定菌株在发酵液中的酶活
发酵天数 淀粉酶活(U/mg) 糖化酶活(U/mg) 蛋白酶活(U/mg)
1 19.303±2.814 10.570±1.791 1.850±0.596
2 28.755±1.407 23.545±1.343 9.139±2.286
3 42.436±3.166 28.609±2.238 19.442±2.000
4 29.252±3.518 18.482±3.133 10.958±2.571
5 23.282±2.111 15.950±1.343 3.685±1.429
7 15.323±5.628 8.355±1.028 2.473±0.857
为了进一步确定菌株C-3在黄酒发酵液中的酶活变化，分别测定了发酵第1、2、3、5、7天的淀粉酶活、糖化酶活和蛋白酶活。从以上三个图可以看出，该菌株在黄酒发酵液中的酶活均在第三天达到最高值，而后呈现下降的趋势，猜想前期酶活升高可能是发酵前期，微生物生长较活跃，发酵体系的状态适合酵母菌的生长代谢，后期酶活降低可能是微生物的生长代谢消耗原料中的营养物质。
表5黄酒发酵过程中总糖含量的测定
发酵天数 对照组 扣囊酵母组
1 182.398±8.168 163.697±3.501
2 143.344±6.612 136.744±7.390
3 124.367±25.671 124.917±27.226
5 54.076±2.256 47.943±0.506
7 31.084±2.207 31.359±3.189
表6黄酒发酵过程中还原糖含量的测定
发酵天数 对照组 扣囊酵母组
1 75.908±2.439 109.132±4.236
2 72.004±4.365 90.704±2.311
3 75.363±1.155 84.350±3.081
5 32.607±1.541 36.147±2.182
7 28.976±3.595 29.521±2.311
表7黄酒发酵过程中氨基氮含量的测定
表8黄酒发酵过程中酒精含量的测定(酒精度不高)
发酵天数 对照组 扣囊酵母组
1 2.170±0.212 2.875±0.205
2 3.415±0.573 4.790±0.453
3 5.400±0.552 7.525±0.474
5 8.740±0.113 9.100±0.042
7 9.155±0.177 9.185±0.092
以上四个表反映了对照组和加菌组黄酒发酵过程中总糖、还原糖、氨基氮和酒精含量的变化。从总糖含量变化图可以看出发酵前三天对照组的总糖含量比加菌发酵组高，但是在发酵前三天加菌组的还原糖含量比对照组的还原糖含量高，这一趋势出现的原因可能是菌株C-3具有淀粉酶活和糖化酶活，具有分解淀粉，将其转化为多聚糖和还原糖的能力，发酵后期由于发酵体系中微生物的代谢利用，酵母菌将糖类转化为产物酒精，因此糖类含量呈现下降趋势。氨基氮含量可以大致反映黄酒发酵过程中氨基酸含量的变化。从图中可以看出，在整个黄酒过程中，对照组发酵的黄酒中的氨基氮含量始终比加菌发酵黄酒含量高，原因可能是由于加入菌株C-3使得微生物之间的协同作用加强，原料中的蛋白质被分解为氨基酸后又转化为其他风味物质所导致。酒精含量的变化和还原糖含量变化趋势相反，前期加菌发酵组酒精含量总是高于对照组，后期由于酵母的生长代谢及糖类的消耗，两组酒精含量趋于相等。
表9添加菌株C-3对黄酒发酵氨基酸含量及种类的影响
氨基酸是影响酿造酒感官评价的重要因素，尤其对酒体和口感影响较大。酒体方面，氨基酸的含量会影响酿造酒的色泽。一般来说，氨基酸的含量越高，酒体色泽越深，含量越低，则颜色越浅；在口感方面，氨基酸一般呈甜、鲜、酸、苦和涩的味道，其呈味特性使得其对酿造酒的口感有极大的影响，甚至中国黄酒与其他酒种的一大区别就是“氨基酸味”。从表1可以看出，在黄酒发酵过程中添加扣囊复膜酵母氨基酸的总含量整体上有所下降，其主要原因是苦味氨基酸含量的下降所导致，对照组苦味氨基酸含量为504.057mg/L，而添加扣囊复膜酵母发酵的黄酒苦味氨基酸含量仅为377.824mg/L。尤其以组氨酸、亮氨酸、精氨酸、苯丙氨酸含量下降的最为明显，分别下降了21.4％、30.1％、28.5％、34.0％。苦味氨基酸占比显著降低也降低了其对风味的影响，以酪氨酸为代表的涩味氨基酸含量也显著下降，从39.010mg/L下降到24.290mg/L。而以天冬氨酸为代表的鲜味氨基酸和以蛋氨酸为代表的甜味氨基酸在扣囊复膜酵母组发酵的黄酒中其含量显著增加，值得提及的是，甘氨酸仅在扣囊复膜酵母发酵的黄酒酒液中检测到。因此，添加扣囊复膜酵母进行黄酒发酵可以有效地改善黄酒的风味和口感。
表10添加菌株C-3对挥发性风味化合物种类及含量的影响
在两种黄酒发酵中共检测到45种挥发性化合物。其中添加扣囊复膜酵母对黄酒中香气化合物的种类和含量有显著影响。黄酒发酵主要是利用微生物的产酶水解原料，结合酵母的发酵作用进行酿造，黄酒香气与风味的形成和在发酵过程中产生的多种微生物代谢产物等物质有关，黄酒的风味是多种不同类型的挥发性风味化合物之间微妙平衡产生的结果，而不是由某个单一的一种或一类物质的风味化合物所决定的。
此次黄酒发酵中醇类物质是含量最丰富的风味成分。对照组发酵黄酒的醇类总含量为35.223mg/L，添加菌株C-3发酵的黄酒醇类总含量为74.700mg/L，分别占据对照组和加菌发酵实验组的91％和79％。黄酒中的醇类物质主要有异丁醇、异戊醇、异丙醇、苯乙醇。其中异丁醇、异戊醇和异丙醇是主要的高级醇成分，其风味主要是刺激味，含量过高容易使人上头，从表中可以看出，添加菌株C-3发酵的黄酒其高级醇含量显著下降。苯乙醇是黄酒主要的特征风味物质，其具有柔和、愉快而长久的玫瑰香气。与对照组相比，添加菌株C-3发酵的黄酒中苯乙醇含量增加了5倍以上。酯类物质是对照组和添加菌株C-3发酵的黄酒中含量仅次于醇类的风味成分。酯类有着良好的芳香气味，也是影响黄酒风味的主要原因之一。添加菌株C-3发酵的黄酒中酯类含量较高，为13.234mg/L，是对照组酯类含量的6倍左右，其中主要是乙酸苯乙酯、乙酸乙酯、辛酸乙酯含量较高导致。酸类是此次发酵黄酒中含量较低的物质，虽然添加菌株C-3发酵的黄酒中其酸类含量比对照组高，但酸类具有良好的中和作用，可以大大中和加菌黄酒中高级醇和多元醇含量较高的问题，减少刺激味的形成，可以在一定程度上改善黄酒的风味，一次提高黄酒的风味。
SEQ NO.1：
AAGTAAAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAATGTTATTTGTTTTTAGACCTGCGCTTAACTGCGCGGTTTAATAAACTCTTATACACAGTGTTTTTGTTTGCGAATTTGGTTTAGTTTGTTGGTTTTCATTCGAAAGGATGAAGATTGATTGCTAAATCTTATTCAGCTTTTTAAACTCAGATCTCTTTTTAAGAGAAATGTATTTTTTTAATTACAACTAGTCGATTTTACAAACTAAAAGTTTAAAACTTTCAGCAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAATTGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGATTTTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCATATTGCGCTCTATAGTATTCTATAGAGCATGCCTGTTTGAGCGTCATTTCTCTCTTAAACCTTTGGGTTTAGTATTGAAGGTTGTGTTAGCTTCTGCTAACTCCTTTGAAATGACTTGGCAATTGATTGAGTTTTCCATATATTTGCTTAAGGATTTAATATTAGGTTCTACCAACTTATTAAATACCCTTTTGCGAAGGACTTACTCGTGTATCAAGGCCTTATAACTTTGTCATTAATTTTGACCTCAAATCAGGTAAGGATACCCGCTGAACTTAA
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例，并非企图具以对本发明做任何形式上之限制，是以，凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更，皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。

Claims (9)

1.一株扣囊复膜酵母菌株，其特征在于：所述扣囊复膜酵母菌株为扣囊复膜酵母菌株（Saccharomycopsis fibuligera）C-3，已保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏日期为2022年12月19日，菌种保藏编号为CCTCC NO:M 20221986。
2.根据权利要求1所述的扣囊复膜酵母菌株，其特征在于：在黄酒酿造中的应用。
3.一种黄酒酿造方法，其特征在于：采用权利要求1所述的扣囊复膜酵母菌株发酵生产黄酒。
4.根据权利要求3所述的黄酒酿造方法，其特征在于：包含如下步骤：
步骤1：将扣囊复膜酵母菌株C-3斜面菌种接种于活化培养基，28-30℃条件下振荡培养40-48h，随后将得到的培养物接种至第一种子培养基，28-30℃条件下振荡培养32-36h，再将得到的培养物接种至第二种子培养基，28-30℃条件下振荡培养32-36h，获得酵母种子培养物；
步骤2：对大米进行蒸煮后，将其冷却至室温，再分别加入酒曲、水、活性干酵母及步骤1得到的酵母种子培养物，混合均匀后进行黄酒的酿造。
5.根据权利要求4所属的黄酒酿造方法，其特征在于：步骤2中，酵母培养物浓度为0.5-5х106CFU/mL，
再以1%接种量加入到黄酒的发酵体系中。
6.根据权利要求4所述的黄酒酿造方法，其特征在于：步骤2中，酿造时的温度为28-30℃，时间为40-48h。
7.根据权利要求4所述的黄酒酿造方法，其特征在于：所述第二种子培养基的原料配方包括：水100mL，粳米3g，酵母粉0.3g，蛋白胨0.6g，121℃灭菌15min。
8.根据权利要求4所述的黄酒酿造方法，其特征在于：对大米进行蒸煮后，将其冷却至室温，加入1：1（w/v）的水，再加入活化30min的安琪活性干酵母和黄酒酿酒曲，最后加入酵母种子培养物，搅拌均匀启动发酵；其中前发酵期为0-5天，需要4-5h搅拌一次，温度控制在25-32℃，6-18天为后发酵阶段，温度控制在18-25℃。
9.根据权利要求9所述的黄酒酿造方法，其特征在于：加入活性干酵母和黄酒酿酒曲的同时加入扣囊复膜酵母C-3种子培养物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116918903A (zh) * 2023-08-04 2023-10-24 浙江省农业科学院 产蛋白酶酵母在西兰花发酵饲料中的应用

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