CN111411096A - 一种转氨酶催化剂和一种酶催化合成(r)-1-萘乙胺的方法 - Google Patents

一种转氨酶催化剂和一种酶催化合成(r)-1-萘乙胺的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医药中间体技术领域，具体涉及一种转氨酶催化剂，还涉及一种酶催化合成(R)‑1‑萘乙胺的方法，其包括以下步骤：向反应容器中加入表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体和1‑萘乙酮，水浴加热，并机械搅拌；边搅拌边加入有机溶剂或水，氨基供体和磷酸吡哆醛的水溶液；反应结束后，后处理，即得所述(R)‑1‑萘乙胺。本发明所述的转氨酶催化剂，易于获得，手性选择性高；同时，本发明所述的酶催化合成(R)‑1‑萘乙胺的方法操作简单，反应条件温和，反应结束稳定，能够直接生成(R)‑1‑萘乙胺，其光学纯度在99％以上，从而避免了繁琐的化学拆分步骤与冗长的化学反应路线。

Description

一种转氨酶催化剂和一种酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法
技术领域
本发明涉及医药中间体技术领域，具体涉及一种转氨酶催化剂，还涉及一种酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法。
背景技术
光学纯的(R)-1-萘乙胺是一种重要的医药中间体，其制备方法通常包括：以萘乙酮为原料，加氨水生成亚胺，然后在高温高压条件下加氢得到消旋的萘乙胺，进一步实施化学手性拆分：以手性的天冬氨酸或酒石酸为手性拆分剂，加溶剂加热条件下，形成对映体盐；再利用对映体盐溶解度的不同进行拆分，分离并制备R构型和S构型两种构型的萘乙胺。可见，萘乙胺的拆分过程需用到大量有机试剂，碱性物质，产生大量废水，通常一次性拆分R构型产物ee值可达到98％以上，收率达30％以上。
现有工艺中，萘乙胺的合成步骤冗长，例如包含萘乙酮加氨水生成亚胺，高温高压加氢，拆分等步骤。其中，氨水气味大，存在环境污染问题；而高温高压加氢则对设备要求高，存在安全隐患；手性拆分收率不高，从而导致工业生产成本较高。
因此，亟需提供一种酶法合成(R)-1-萘乙胺的方法，以期在温和的反应条件下，制得高光学纯度的目标产物。
发明内容
针对现有技术中存在的种种技术缺陷，本发明旨在提供一种全新的转氨酶催化剂，同时提供一种酶法合成(R)-1-萘乙胺的方法，其操作简单，反应条件温和，反应结束稳定，无需化学拆分，能够直接生成(R)-1-萘乙胺。
具体地，本发明第一方面提供了一种转氨酶催化剂，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且所述转氨酶催化剂的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，具体见下表1：
表1转氨酶催化剂的核苷酸序列与氨基酸序列
Figure BDA0002445789830000021
Figure BDA0002445789830000031
同时，本发明第二方面提供了一种酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其反应方程式为：
Figure BDA0002445789830000032
其中，在磷酸吡哆醛和转氨酶催化剂的存在下，作为反应底物的1-萘乙酮与氨基供体反应生成(R)-1-萘乙胺；
其中，所述转氨酶催化剂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且所述转氨酶催化剂的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
优选地，上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法具体包括以下步骤：
S1：向反应容器中加入表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体和1-萘乙酮，水浴加热，并机械搅拌；
S2：边搅拌边加入有机溶剂或水，氨基供体和磷酸吡哆醛的水溶液；
S3：反应结束后，后处理，即得所述(R)-1-萘乙胺。
优选地，上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法具体包括以下步骤：
S1：向反应容器中加入表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体和1-萘乙酮，水浴加热，并机械搅拌；
S2：边搅拌边加入有机溶剂，氨基供体和磷酸吡哆醛的水溶液；
S3：反应结束后，减压蒸馏，以去除有机溶剂和过量的氨基供体；
S4：过滤，除去重组大肠杆菌湿菌体，后处理，即得所述(R)-1-萘乙胺。
此外，值得说明的是，含有所述转氨酶催化剂的酶粉和酶液也可以作为反应的催化剂，相同固含量的酶粉、酶液和重组大肠杆菌湿菌体表现出的催化效果相同。
进一步优选地，在上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中，所述氨基供体选自以下任一种：异丙胺，叔丁胺，苯乙氨。
进一步优选地，在上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中，所述有机溶剂选自以下任一种：乙酸乙酯，乙酸异丙酯，乙酸丁酯，异丙醇，正丁醇，甲基叔丁基醚，甲苯。
最优选地，在上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中，所述有机溶剂为异丙醇，其能提高酶的活性。
进一步优选地，在上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中，所述磷酸吡哆醛的水溶液中磷酸吡哆醛的浓度为1～10mM。
进一步优选地，在上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中，所述后处理包括：
取滤液，向其中加入无机酸水溶液，降温结晶，以得到(R)-1-萘乙胺无机酸盐固体；然后加入氢氧化钠，萃取，静置分层，除去溶剂后，即得到(R)-1-萘乙胺。
进一步优选地，在上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中，作为反应底物的所述1-萘乙酮的浓度为100～600g/L，所述氨基供体的浓度为1.8～2.5M，所述重组大肠杆菌湿菌体的浓度为90～180g/L。
应当说明的是，上述优选实施方式中各物质的浓度，例如，1-萘乙酮的浓度、氨基供体的浓度、重组大肠杆菌湿菌体的浓度等均是相对于催化体系总体积(例如反应罐的有效容积)而言的，换言之，上述浓度描述的是它们分别相对于催化体系总体积的浓度。
进一步优选地，在上述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中，所述重组大肠杆菌湿菌体的制备步骤包括：
将目的基因序列委外合成，然后使用分子试剂盒，利用特意的酶切位点连接到大肠杆菌的质粒上，即得到含有目的基因的重组质粒。然后将重组质粒通过电转化转移到大肠杆菌感受态细胞中。电转化步骤如下：感受态细胞从-80℃冰箱取出后，解冻15分钟；15min后，立即在超净台内取40ul的解冻的感受态细胞加到电转杯中，加入1ul质粒；用电转化仪电击转化；电击后立即加入1ml的培养基，轻轻混匀菌体后转移到无菌的BD管中，然后进行摇瓶培养，即得到重组大肠杆菌湿菌体。
总之，本发明所提供的技术方案与现有技术相比至少具备以下有益效果：
本发明所述的转氨酶催化剂，易于获得，手性选择性高，能够将1-萘乙酮转化成(R)-1-萘乙胺；同时，本发明所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法操作简单，反应条件温和，反应结束稳定，能够直接生成(R)-1-萘乙胺，其光学纯度在99％以上，从而避免了繁琐的化学拆分步骤与冗长的化学反应路线。
总之，所述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法十分有利于在大规模工业化生产过程中推广应用。
附图说明
图1示出了所述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中不同溶剂对应的转化率；
图2示出了所述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中不同底物浓度对应的转化率；
图3示出了所述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中不同底物浓度对应的产物量；
图4示出了所述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中不同底物浓度对应的转化率；
图5示出了所述酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法中不同底物浓度对应的产物浓度。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
根据一个优选实施例的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其反应方程式为：
Figure BDA0002445789830000061
其中，在磷酸吡哆醛和转氨酶催化剂的存在下，作为反应底物的1-萘乙酮与氨基供体反应生成(R)-1-萘乙胺；
其中，所述转氨酶催化剂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且所述转氨酶催化剂的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
并且包括以下步骤：
S1：向反应容器中加入表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体和1-萘乙酮，水浴加热，并机械搅拌；
S2：边搅拌边加入有机溶剂，氨基供体和磷酸吡哆醛的水溶液；
S3：反应结束后，减压蒸馏，以去除有机溶剂和过量的氨基供体；
S4：过滤，除去重组大肠杆菌湿菌体，后处理，即得所述(R)-1-萘乙胺。
在一个优选实施例中，所述氨基供体选自以下任一种：异丙胺，叔丁胺，苯乙氨。
在一个优选实施例中，所述有机溶剂选自以下任一种：乙酸乙酯，乙酸异丙酯，乙酸丁酯，异丙醇，正丁醇，甲基叔丁基醚，甲苯。
在一个优选实施例中，所述磷酸吡哆醛的水溶液中磷酸吡哆醛的浓度为1～10mM。
在一个优选实施例中，所述后处理包括：
取滤液，向其中加入盐酸水溶液，降温结晶，以得到(R)-1-萘乙胺盐酸盐固体；然后加入氢氧化钠，萃取，静置分层，除去溶剂后，即得到(R)-1-萘乙胺。
在一个进一步优选的实施例中，所述萃取的过程所采用的溶剂为二氯甲烷。
在一个优选实施例中，作为反应底物的所述1-萘乙酮的浓度为100～600g/L，所述氨基供体的浓度为1.8～2.5M，所述重组大肠杆菌湿菌体的浓度为90～180g/L。
实施例1
本实施例旨在比较不同溶剂对反应转化率的影响，具体实验条件包括：
反应体系总体积：5ml；
1-萘乙酮(底物)浓度：100g/L；
重组大肠杆菌湿菌体浓度：100g/L；
异丙胺浓度：2M；
PLP浓度：2mM；
溶剂分别采用：乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、异丙醇、正丁醇、甲基叔丁基醚、甲苯；
反应温度：30℃；
反应时间：1h，3h，4h，5h，21h，24h；
具体反应结果如图1所示，可见异丙醇(IPA)作为反应溶剂时，酶活性最佳。
实施例2
本实施例旨在实施底物梯度实验，具体实验条件包括：
反应体系总体积：5ml；
1-萘乙酮(底物)浓度：300-916g/L(全底物)；
重组大肠杆菌湿菌体浓度：100g/L；
异丙胺浓度：2M；
PLP浓度：2mM；
异丙醇浓度：37％；
反应温度：30℃；
反应时间：1h，2h，4h，24.5h；
具体反应结果如图2和3所示，可见底物浓度为500g/L时，24.5h底物累积量最大。
实施例3
1)向三口烧瓶中，加入90g表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体，450g1-萘乙酮，置于30℃水浴锅中，机械搅拌；
2)边搅拌边加入270ml异丙醇，144ml异丙胺和9ml PLP水溶液；
3)以200r/min的转速搅拌反应48小时；
4)反应结束后，55℃减压蒸馏，除去异丙醇以及异丙胺；
5)过滤，滤液加入250ml 3M盐酸水溶液，降温结晶得到萘乙胺盐酸盐固体140g，然后加氢氧化钠游离，用100ml二氯甲烷萃取，静置分层，取有机相，蒸馏除溶剂得到目标产物(R)-1-萘乙胺108g，经检测，目标产物ee值＞99％。
实施例4
向三口烧瓶中，加入表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体，1-萘乙酮，异丙胺，PLP，TEOA缓冲液，置于30℃水浴锅中，机械搅拌反应24小时；
具体实验条件包括：
反应体系总体积：5ml；
1-萘乙酮(底物)浓度：100-500g/L；
重组大肠杆菌湿菌体浓度：100g/L；
异丙胺浓度：4M；
PLP浓度：2mM；
TEOA缓冲液浓度：0.1M(pH＝10)
反应温度：30℃；
取样时间：1h，3h，5h，21h，24h；
具体反应结果如图4和5所示，可见水相反应在500g/L底物条件下反应24小时产物积累量可以达到150g/L左右。
实施例5
向三口烧瓶中，加入30.0g表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体，150.0g1-萘乙酮，置于30℃水浴锅中，机械搅拌。边搅拌边依次加入异丙醇90ml，异丙胺48ml，PLP水溶液3ml。三口烧瓶置于水浴锅中，维持反应体系温度30℃；以400r/min的转速机械搅拌反应48小时；48小时后反应结束，逐渐升温至55℃，减压蒸馏，除去异丙醇以及异丙胺。然后，减压过滤，收集滤液，转移至1L三口瓶中，水浴，搅拌状态下加入400ml 8％稀硫酸溶液，pH＜2；调酸后，混合液温度升到65℃，加热搅拌2小时；接着，冷却至38℃以下，再加入100ml二氯甲烷萃取一次，分液放出下层有机相后，水相再用100ml二氯甲烷洗涤一次。水相在搅拌下滴加30％NaOH水溶液90ml，pH＞13，加入100ml二氯甲烷萃取，静置分液；水相再用100ml二氯甲烷洗涤一次，合并有机相。有机相升温至100℃，水泵减压抽30min，后改用油泵抽真空，升温至140-150℃，蒸馏收集得到无色至略黄透明液体30g，其为目标产物(R)-1-萘乙胺，经检测，目标产物ee值＞99％。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
序列表
<110> 宁波酶赛生物工程有限公司
<120> 一种转氨酶催化剂和一种酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 972
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
atggcaagca tggataaagt cttcagcggc tattacgcgc gtcaaaaact gctggaacgc 60
tctgataacc cgtttagcaa aggcatcgcg tacgttgaag gtaaatttgt tctgccgagc 120
gacgcacgta ttccgctgct ggacccgggt tttatgcaga gcgacgcgac ctacactacc 180
attagcgttt gggacggccg ctttttccgt ctggacgatc atctgaaacg tctgctggaa 240
tcctgcgaca aaatgcgcct gaaatttccg ctggcactga gcagcgttcg caaaatcctg 300
gcggaaatgg ttgcgaaatc tggtattcgc gatgcgatgg tcaacattat tgttacccgc 360
ggtctgaccg gcgttcgcgg tcgccaaccg gaagacctgt acaacaacaa catctacctg 420
ctggttctgc cgtatatctg gctgatggca ccggaaaaac aacgtcacgg cggccatgca 480
attattaccc gtaccgttcg tcgtaccccg ccgggcgcat tcgatccgac cattaaaaac 540
tttcagtggg gcgatctgaa aaaaggcgat ttcgaagcaa acgatcgcgg cgcaacctat 600
ccgtttctga ccgacggcga tacccacctg accgaaggta gcggttttaa catcgtcctg 660
gtcaaaaacg gcatcatcta caccccggat cgcggcgttc tggaaggtat tacccgtcag 720
agcgttattg acgttgcacg cgcaaacagt attgatattc gcctggaagt cgtcccggtt 780
gaagcggcgt atcacagcga cgaaatcttc atgaccagca ccgctggcgg tattatgccg 840
attaccctgc tggacggtca accggttaac ggcggtcagg taggcccgat taccaaaaag 900
atttgggacg gctactggga gatgcattac aataacgcgt atagctttcc ggtcgattac 960
ggtagcgatt aa 972
<210> 2
<211> 323
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 2
Met Ala Ser Met Asp Lys Val Phe Ser Gly Tyr Tyr Ala Arg Gln Lys
1 5 10 15
Leu Leu Glu Arg Ser Asp Asn Pro Phe Ser Lys Gly Ile Ala Tyr Val
20 25 30
Glu Gly Lys Phe Val Leu Pro Ser Asp Ala Arg Ile Pro Leu Leu Asp
35 40 45
Pro Gly Phe Met Gln Ser Asp Ala Thr Tyr Thr Thr Ile Ser Val Trp
50 55 60
Asp Gly Arg Phe Phe Arg Leu Asp Asp His Leu Lys Arg Leu Leu Glu
65 70 75 80
Ser Cys Asp Lys Met Arg Leu Lys Phe Pro Leu Ala Leu Ser Ser Val
85 90 95
Arg Lys Ile Leu Ala Glu Met Val Ala Lys Ser Gly Ile Arg Asp Ala
100 105 110
Met Val Asn Ile Ile Val Thr Arg Gly Leu Thr Gly Val Arg Gly Arg
115 120 125
Gln Pro Glu Asp Leu Tyr Asn Asn Asn Ile Tyr Leu Leu Val Leu Pro
130 135 140
Tyr Ile Trp Leu Met Ala Pro Glu Lys Gln Arg His Gly Gly His Ala
145 150 155 160
Ile Ile Thr Arg Thr Val Arg Arg Thr Pro Pro Gly Ala Phe Asp Pro
165 170 175
Thr Ile Lys Asn Phe Gln Trp Gly Asp Leu Lys Lys Gly Asp Phe Glu
180 185 190
Ala Asn Asp Arg Gly Ala Thr Tyr Pro Phe Leu Thr Asp Gly Asp Thr
195 200 205
His Leu Thr Glu Gly Ser Gly Phe Asn Ile Val Leu Val Lys Asn Gly
210 215 220
Ile Ile Tyr Thr Pro Asp Arg Gly Val Leu Glu Gly Ile Thr Arg Gln
225 230 235 240
Ser Val Ile Asp Val Ala Arg Ala Asn Ser Ile Asp Ile Arg Leu Glu
245 250 255
Val Val Pro Val Glu Ala Ala Tyr His Ser Asp Glu Ile Phe Met Thr
260 265 270
Ser Thr Ala Gly Gly Ile Met Pro Ile Thr Leu Leu Asp Gly Gln Pro
275 280 285
Val Asn Gly Gly Gln Val Gly Pro Ile Thr Lys Lys Ile Trp Asp Gly
290 295 300
Tyr Trp Glu Met His Tyr Asn Asn Ala Tyr Ser Phe Pro Val Asp Tyr
305 310 315 320
Gly Ser Asp

Claims (9)

1.一种转氨酶催化剂，其特征在于，所述转氨酶催化剂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且所述转氨酶催化剂的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，其反应方程式为：
Figure FDA0002445789820000011
其中，在磷酸吡哆醛和转氨酶催化剂的存在下，作为反应底物的1-萘乙酮与氨基供体反应生成(R)-1-萘乙胺；
其中，所述转氨酶催化剂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且所述转氨酶催化剂的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求2所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：向反应容器中加入表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体和1-萘乙酮，水浴加热，并机械搅拌；
S2：边搅拌边加入有机溶剂或水，氨基供体和磷酸吡哆醛的水溶液；
S3：反应结束后，后处理，即得所述(R)-1-萘乙胺。
4.根据权利要求2所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：向反应容器中加入表达所述转氨酶催化剂的重组大肠杆菌湿菌体和1-萘乙酮，水浴加热，并机械搅拌；
S2：边搅拌边加入有机溶剂，氨基供体和磷酸吡哆醛的水溶液；
S3：反应结束后，减压蒸馏，以去除有机溶剂和过量的氨基供体；
S4：过滤，除去重组大肠杆菌湿菌体，后处理，即得所述(R)-1-萘乙胺。
5.根据权利要求4所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，所述氨基供体选自以下任一种：异丙胺，叔丁胺，苯乙氨。
6.根据权利要求4所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自以下任一种：乙酸乙酯，乙酸异丙酯，乙酸丁酯，异丙醇，正丁醇，甲基叔丁基醚，甲苯。
7.根据权利要求4所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，所述磷酸吡哆醛的水溶液中磷酸吡哆醛的浓度为1～10mM。
8.根据权利要求4所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，所述后处理包括：
取滤液，向其中加入无机酸水溶液，降温结晶，以得到(R)-1-萘乙胺无机酸盐固体；然后加入氢氧化钠，萃取，静置分层，除去溶剂后，即得到(R)-1-萘乙胺。
9.根据权利要求4所述的酶催化合成(R)-1-萘乙胺的方法，其特征在于，作为反应底物的所述1-萘乙酮的浓度为100～600g/L，所述氨基供体的浓度为1.8～2.5M，所述重组大肠杆菌湿菌体的浓度为90～180g/L。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113881720A (zh) * 2020-12-31 2022-01-04 上海合全药物研发有限公司 一种转氨酶及使用其进行催化制备的方法
WO2023169184A1 (en) * 2022-03-10 2023-09-14 Enzymaster (Ningbo) Bio-Engineering Co., Ltd. Biocatalyst and method for the synthesis of ubrogepant intermediates

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019128894A1 (en) * 2017-12-26 2019-07-04 Enzymaster (Ningbo) Bio-Engineering Co., Ltd. Engineered transaminase polypeptides and uses thereof
CN110724675A (zh) * 2019-10-31 2020-01-24 宁波酶赛生物工程有限公司 转氨酶催化剂和酶法合成(r)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019128894A1 (en) * 2017-12-26 2019-07-04 Enzymaster (Ningbo) Bio-Engineering Co., Ltd. Engineered transaminase polypeptides and uses thereof
CN110724675A (zh) * 2019-10-31 2020-01-24 宁波酶赛生物工程有限公司 转氨酶催化剂和酶法合成(r)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J S SHIN等: "Kinetic resolution of chiral amines with omega-transaminase using an enzyme-membrane reactor", 《BIOTECHNOL BIOENG》 *
卢定强等: "手性1-(1-萘基)乙胺的制备及其药物应用最新进展", 《现代化工》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113881720A (zh) * 2020-12-31 2022-01-04 上海合全药物研发有限公司 一种转氨酶及使用其进行催化制备的方法
CN113881720B (zh) * 2020-12-31 2023-08-25 上海合全药物研发有限公司 一种转氨酶及使用其进行催化制备的方法
WO2023169184A1 (en) * 2022-03-10 2023-09-14 Enzymaster (Ningbo) Bio-Engineering Co., Ltd. Biocatalyst and method for the synthesis of ubrogepant intermediates

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