CN111380735B - 一种高效环保生物组织处理液及其处理组织切片方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效环保生物组织处理液及其处理组织切片方法，属于病理诊断试剂技术领域。该生物组织处理液由如下体积份数的组分配制而成：醇类化合物30份‑70份，溶剂油30份‑70份，丙酮1份‑3份和二甲亚砜1份‑5份。本发明的一种高效环保生物组织处理液，配方简单，不含有甲醛、二甲苯、芳香环类物质，能够确保病理工作人员的身体健康和不污染环境，能够对病理组织切块进行固定、脱水和透明液处理，与常规组织处理液比较，可以将诊断速度从3‑5天缩短到2天以内，提高了诊断速度和效率，与常规病理组织切片处理液相比，并无差异，而且效果优于传统组织处理液，完全可以替代传统组织处理试剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效环保生物组织处理液及其处理组织切片方法，属于病理诊断试剂技术领域。
背景技术
据报道世界新确诊的癌症患者的数量在逐年增长，癌症患者的早期确诊和治疗是可以改善患者的生活质量的，并且能够得到及时的治疗控制。目前癌症的确诊依靠病理切片的判断，然而病理切片的处理过程需要固定、脱水、透明液处理、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色等十几步的处理过程，需要3-5天才能得到诊断结果，病人希望尽早获取诊断结果并得到及时治疗的心情急切。此外，常规病理诊断试剂如甲醛固定液、二甲苯透明液的毒副作用较大，对病理工作人员的身体毒害作用较大，增加了工作人员的患癌机率。所以研发一种快速处理液提高组织切片处理效率，减轻对病理工作人员的毒副作用，迫在眉睫。
发明内容
为解决现有生物组织的固定、脱水、透明液处理等过程对病理切片的处理程序繁琐、效率低下，导致病理切片的处理时间长，并且含有大量有毒试剂对于病理工作人员的毒副作用较大的问题，本发明提供了一种高效环保生物组织处理液，利用该生物组织处理液处理病理切片可以一次性完成组织固定、脱水和透明液处理，将病理诊断处理时间缩短、且试剂无毒不含苯，采用的技术方案如下：
本发明的目的在于提供一种生物组织处理液，该生物组织处理液由如下体积份数的组分配制而成：醇类化合物40份-70份，溶剂油40份-70份，丙酮1份-3份和二甲亚砜1份-5份。
优选地，所述高效环保生物组织处理液由如下体积份数的组分配制而成：醇类化合物55份，溶剂油40份，丙酮2份和二甲亚砜3份。
优选地，所述醇类化合物选自乙醇，聚乙二醇，丙二醇和异丙醇中的任意一种或多种的混合物。
更优选地，所述醇类化合物为由乙醇、聚乙二醇和丙二醇按照(8-12)：(1-3)：(1-2)的体积比混合而成。
更优选地，所述醇类化合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照(8-12)：(1-3)：(1-2)的体积比混合而成。
优选地，所述溶剂油选自D40溶剂油和D90溶剂油中的任意一种或两种的混合物。
优选地，所述溶剂油由D40溶剂油和D90溶剂油按照(1-9):(2-10)的体积比混合而成。
最优地，所述醇类化合物为由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照10：1：1的体积比混合而成，溶剂油由D40溶剂油和D90溶剂油按照6:4的体积比混合而成。
优选地，所述生物组织处理液是通过依次将醇类化合物、丙酮、二甲亚砜、溶剂油充分混合均匀配制而成的。
本发明还提供了一种利用上述生物组织处理液一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理的方法，该方法是将组织切块浸没在权利要求1所述的生物组织处理液中，然后在45℃-60℃下超声处理2min-15min，以一次性完成组织固定、脱水和透明液处理。超声处理后的组织切块直接用于浸蜡处理。
优选地，所述组织切块的尺寸不大于长10mm×宽8mm×高2.5mm。
本发明所述的醇类化合物可以是一种醇也可以是多种醇的混合物。
本发明所述D40溶剂油和D90溶剂油都可以通过商业途径购买获得。D40溶剂油是以馏份油为原料，经过130kPa高压加氢精制后分馏而成。D90环保溶剂油是以加裂馏份油或低硫直馏航煤为原料，经深度加氢精制后分馏而成。两者都具有溶解力强、挥发性好、安定性好、低硫、低芳、无毒、无味的特点。
本发明处理可以用于对生物组织进行处理，可以一次性完成组织固定、脱水和透明液处理，用于制备组织切片，生物组织可以是肝脏、肺、甲状腺、前列腺、肾脏、乳腺、卵巢、子宫等组织。本发明中二甲亚砜的作用是提高处理液对生物病理组织切块的渗透性，丙酮的作用是对生物组织切块进行固定和脱水，溶剂油的作用是浸蜡的前处理，为后续溶蜡做准备，醇类的作用是对生物组织切块进行固定和脱水。
二甲亚砜、丙酮和醇类化合物在处理液中的百分含量高，有利于固定和脱水；溶剂油的在处理液中的百分含量高，有利于后续的浸蜡处理，缩短浸蜡时间，因此，二甲亚砜、丙酮和醇类以及溶剂油的配比对于固定、脱水，以及后续的浸蜡处理尤其重要，本发明所提供的上述四种成分的配比可以获得较好的固定和脱水效果，同时后续还具有较好的脱蜡效果且利于缩短脱蜡时间。
本发明有益效果：
本发明的高效环保生物组织处理液，由醇类、丙酮、二甲亚砜、溶剂油(D40、D90)四类物质组成，配方简单，配制工艺便捷，且配方中不含有甲醛、二甲苯、芳香环类物质，能够确保病理工作人员的身体健康和不污染环境。
本发明的高效环保生物组织处理液能够对病理组织切块进行一次性完成固定、脱水和透明液处理，处理后的组织可以直接用于浸蜡处理，通常在制作病理组织切片的过程中在浸蜡处理之前需要依次进行固定、脱水和透明液处理，固定通常需要24h-72h，脱水一般需要1-2h，透明液处理也需要0.5h-1.0h，再加上中间环节的2h-4h,因此通常完成固定、脱水和透明液处理需要27h-32h,时间较长，而本发明研发了一种可以一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理的生物组织处理液，只需要2min-15min即可完成组织的固定、脱水和透明液处理，经过该处理液处理的组织可以直接用于后续浸蜡处理。
本发明生物组织处理液是一种可以替代传统组织处理试剂的生物组织处理液。经过实验发现，利用本发明生物组织处理液处理组织一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理代替传统的固定、脱水和透明液处理过程再制备病理切片的组织完整、硬度适中、组织无明显伸缩、染色鲜艳、层次分明，本发明处理液与传统诊断试剂处理的组织切片结果没有差异，甚至更好，完全可以替代传统组织处理试剂，且利用现有传统组织处理试剂制作病理切片得到诊断结果的时间大约3-5天，而利用本发明处理，显著缩短了时间，缩短诊断时间24h以上，提高了诊断速度和效率，为患者争取了宝贵的治疗时间，减少待确诊人员因为等待而引起的焦虑。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。
实施例1
本实施例提供了一种高效环保生物组织处理液，由以下体积份数的组分配制而成：醇类混合物40份、溶剂油70份、丙酮1份和二甲亚砜1份，其中：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为10:1:1混合而成；溶剂油由D40溶剂油和D90溶剂油组成，按照D40和D90的体积比为6:4混合而成。
本实施例的一种高效环保生物组织处理液的制备方法为：按照规定的体积份数依次将醇类混合物、丙酮、二甲亚砜、溶剂油，混合并搅拌均匀。
本实施例还提供了一种利用该生物组织处理液一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理的方法，该方法是将组织切块浸没在生物组织处理液中，然后在45℃-60℃下超声处理2min-15min，可以一次性完成组织固定、脱水和透明液处理。超声处理后的组织切块直接用于浸蜡处理。组织切块的尺寸不大于长10mm×宽8mm×高2.5mm。
实施例2
本实施例提供了一种高效环保生物组织处理液，由以下体积份数的组分配制而成：醇类混合物55份、溶剂油40份、丙酮2份和二甲亚砜3份；其中醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为10:1:1混合而成；溶剂油由D40溶剂油和D90溶剂油组成，按照D40溶剂油和D90溶剂油的体积比为6:4混合而成。
本实施例的一种高效环保生物组织处理液的制备方法同实施例1。
利用本实施例的生物组织处理液一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理的方法同实施例1。
实施例3
本实施例提供了一种高效环保生物组织处理液，由以下体积份数的组分配制而成：醇类混合物70份、溶剂油40份、丙酮3份和二甲亚砜5份；其中：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为10:1:1混合而成；溶剂油由D40溶剂油和D90溶剂油组成，按照D40溶剂油和D90溶剂油的体积比为6:4混合而成。
实施例4
本实施例与实施例2的区别在于：D40溶剂油和D90溶剂油的体积比为1:10混合而成。
实施例5
本实施例与实施例2的区别在于：D40溶剂油和D90溶剂油的体积比为1:2混合而成。
实施例6
本实施例与实施例2的区别在于：D40溶剂油和D90溶剂油的体积比为9:2混合而成。
实施例7
本实施例与实施例2的区别在于：D40溶剂油和D90溶剂油的体积比为9:10混合而成。
实施例8
本实施例与实施例2的区别在于：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为8:1:1混合而成。
实施例9
本实施例与实施例2的区别在于：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为8:3:2混合而成。
实施例10
本实施例与实施例2的区别在于：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为9:1:1混合而成。
实施例11
本实施例与实施例2的区别在于：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为9:3:2混合而成。
实施例12
本实施例与实施例2的区别在于：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为10:2:1混合而成。
实施例13
本实施例与实施例2的区别在于：醇类混合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照乙醇、聚乙二醇和异丙醇的体积比为10:3:2混合而成。
本实施例的一种高效环保生物组织处理液的制备方法同实施例1。
利用本实施例的生物组织处理液一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理的方法同实施例1。
为说明本发明高效环保生物组织处理液的效果，进行了如下实验：
1、将乳腺组织切块分别浸没在实施例1-13制备的生物组织处理液中，然后在50℃下超声处理以一次性完成组织固定、脱水和透明液处理，超声处理后的组织切块直接用于浸蜡处理，记录超声时间即为一次性完成组织固定、脱水和透明液处理的时间，然后将处理后的组织进行浸蜡、包埋、切片、展片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明液处理和封片处理，制备获得病理切片。记录从将组织切块浸没在生物组织处理液中开始至完成一次性固定、脱水、透明液处理所耗用的时间，记为用时A；以及紧接着的进行浸蜡、包埋、切片、展片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明液处理和封片处理所需要的时间，记为用时B，用时A和用时B之和即为病理切片制备时间。
显微镜观察病理切片完整性、硬度、伸缩和染色情况，汇总结果如表1所示。
表1汇总结果
由表1知，本发明的生物组织处理液能够对病理组织切块进行一次性完成固定、脱水和透明液处理，只需要10min左右即可完成，经过该生物组织处理液处理的组织可以直接用于后续浸蜡处理，经过实验发现，用生物组织处理液处理组织一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理代替传统的固定、脱水和透明液处理过程再制备病理切片的组织完整、硬度适中、组织无明显伸缩、染色鲜艳、层次分明，本发明处理液与传统诊断试剂处理的组织切片结果没有差异，甚至更好，完全可以替代传统组织处理试剂。
常规病理诊断试剂不但含有二甲苯、甲醛等有害物质，而且制备病理切片至少72h能够拿到诊断结果，而本发明的一种高效环保生物组织处理液没有甲醛、二甲苯等有毒有害物质，对医务人员身体没有伤害且不污染环境，并且48h以内即可获得病理切片的结果显著缩短了时间，提高了诊断速度和效率，为患者争取及时的宝贵治疗时间，减少等待确诊人员因为等待而引起的焦虑。
2、本实验利用实施例6的生物处理液对肝脏、肺、肾脏、胰腺、甲状腺、前列腺、肾脏、乳腺、卵巢、子宫等常见组织进行处理，研究发现，不同组织由于其组织自身组成结构不同，而导致超声时间会略有区别，透明液处理对于结构较简单的生物组织所需要的处理时间较短，如肝脏组织，只需要超声处理2min即可完成固定、脱水和透明液处理，用于后续制备病理切片所得切片的组织完整、硬度适中、组织无明显伸缩、染色鲜艳、层次分明；又如对甲状腺切块用本发明生物组织处理液处理3.5min即可完成固定、脱水和透明液处理，用于后续制备病理切片所得切片的组织完整、硬度适中、组织无明显伸缩、染色鲜艳、层次分明；对于结构复杂的组织，如甲状腺组织、胰腺组织和肾脏组织，都只需要超声处理10min即可完成固定、脱水和透明液处理，用于后续制备病理切片所得切片的组织完整、硬度适中、组织无明显伸缩、染色鲜艳、层次分明，因此，对于复杂结构的处理时间一般在10min左右即可完成，因此，通过本发明对于广泛采集不同类型的组织样本进行实验可知：利用本发明生物组织处理液处理组织的时间在2min-15min能够实现一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理，所制备的病理切片也都能够获得组织完整、硬度适中、组织无明显伸缩、染色鲜艳、层次分明的效果。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (5)
1.一种生物组织处理液，其特征在于，所述生物组织处理液由如下体积份数的组分配制而成：醇类化合物40份-55份，溶剂油40份-70份，丙酮1份-3份和二甲亚砜1份-5份；所述醇类化合物由乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照（8-10）：（1-3）：（1-2）的体积比混合而成；所述溶剂油由D40溶剂油和D90溶剂油按照（1-9）:（2-10）的体积比混合而成。
2.根据权利要求1所述的生物组织处理液，其特征在于，所述高效环保生物组织处理液由如下体积份数的组分配制而成：醇类化合物55份，溶剂油40份，丙酮2份和二甲亚砜3份。
3.根据权利要求1或2所述的生物组织处理液，其特征在于，所述醇类化合物为乙醇、聚乙二醇和异丙醇按照10：1：1 的体积比混合而成，溶剂油由D40溶剂油和D90溶剂油按照6:4的体积比混合而成。
4.根据权利要求1所述的生物组织处理液，其特征在于，所述生物组织处理液是通过依次将醇类化合物、丙酮、二甲亚砜、溶剂油充分混合均匀配制而成的。
5.一种利用权利要求1所述生物组织处理液一次性完成组织的固定、脱水和透明液处理的方法，其特征在于，所述方法是将组织切块浸没在权利要求1所述的生物组织处理液中，然后在45℃-60℃下超声处理2min-15min以一次性完成组织固定、脱水和透明液处理。
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