CN111378670B

CN111378670B - 一种分离的中黑盲蝽Taiman基因及其编码的蛋白

Info

Publication number: CN111378670B
Application number: CN202010137563.0A
Authority: CN
Inventors: 陈利珍; 薛汇; 黄星星; 任俊; 张航
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Huazhong Agricultural University
Priority date: 2020-03-01
Filing date: 2020-03-01
Publication date: 2021-07-20
Anticipated expiration: 2040-03-01
Also published as: CN111378670A

Abstract

本发明涉及昆虫基因工程技术领域。具体涉及一种分离的中黑盲蝽Taiman基因及其编码的蛋白。所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。将本发明的Taiman基因的dsRNA通过显微注射至中黑盲蝽初羽化雌虫体内，检测发现Taiman基因表达量在整个生育期均被极显著抑制，抑制Taiman基因的表达显著减少了中黑盲蝽卵巢内卵的数量和中黑盲蝽的终生产卵量，最终影响了中黑盲蝽的生殖能力和种群的发展。Taiman基因可作为抗中黑盲蝽转基因植物培育的备选基因。

Description

一种分离的中黑盲蝽Taiman基因及其编码的蛋白

技术领域

本发明涉及昆虫基因工程技术领域。具体涉及一种分离的中黑盲蝽Taiman基因及其编码的蛋白。

背景技术

中黑盲蝽(Adelphocorissuturalis)属于半翅目盲蝽科苜蓿盲蝽属，是一种高度杂食性害虫，广泛的分布于日本、中国、朝鲜以及前苏联，中黑盲蝽的寄主范围非常广泛，其主要危害棉花，大豆，苜蓿等，1997年转基因Bt棉花商业化种植以来，很好的控制了靶标鳞翅目害虫的危害，但对于非靶标害虫中黑盲蝽逐渐由次要害虫上升为主要害虫，并呈进一步蔓延和大面积灾变的发展趋势。目前对于盲蝽科害虫的防治主要是以化学防治为主，由于中黑盲蝽危害较为隐蔽，活动迅速敏捷，且容易转移寄主危害，严重影响化学药剂的防治效果。由于长期大量使用化学农药带来的环境压力以及抗药性等问题，开发和利用符合环保、健康、持续发展理念的无公害防治措施成为了当前的防治热点。

科学研究发现，保幼激素在昆虫变态和生殖方面起到关键作用，保幼激素能够促进昆虫卵黄发生和卵子的生成。保幼激素的分子作用依赖于由两种bHLH-PAS转录因子组成的细胞内受体复合物(Methoprenetolerant,Met)和Taiman(Tai)。Tai/Met异源二聚体在保幼激素信号通路中起到关键调控作用。越来越多的化学农药的使用导致害虫抗药性的增强，寻找科学环保的杀虫策略迫在眉睫。随着科学技术的发展，更多的通过转基因植物来达到防治害虫的手段受到人们的关注，也是科学环保杀虫的重要战略。Taiman基因对昆虫的生殖调控可以应用到转基因植物对中黑盲蝽防治中来，促进绿色环保、科学治虫理念的发展。

发明内容

本发明的目的是提供的中黑盲蝽Taiman基因。

本发明的再一目的是提供上述中黑盲蝽Taiman基因所编码的蛋白。

本发明的再一目的是提供含有上述中黑盲蝽Taiman基因的重组质粒。

本发明的再一目的是提供含有上述中黑盲蝽Taiman基因的重组细胞。

本发明的再一目的是提供抗中黑盲蝽的转基因植物。

本发明的再一目的是提供提高植物中黑盲蝽抗性的方法。

根据本发明的中黑盲蝽Taiman基因，其核苷酸序列如SEQIDNo:1所示。

SEQIDNO：1ATGTCGACGCTTCTCGCCGAAAATGCAGGGTTGGTCCGATGTGAGCTGCCATCAGACCCCCTGTGGGCTAAGATGAGCTCTACCGGAGCCAGCTCTAAGAAGCGAAAGAAACCCGACACAAAACCCCAGTCTCAACTCGCCAAAAGCCTTAATGAAAAACGTAGGCGTGAGCTTGAAAACGTGTTCATCGAAGAGCTGGCTGAACTCATATCGGCGAGCTTTGCTGATATGAGCTCGCTCGCTGTCAAGCCCGACAAGTGCGCTATACTTCAAGAAACTGTAAACCAGATCAAGCACATAAAAGAGCAAGAGGCCGCAGCGACGATAGACGCAGTTCAACAGGGAGAAGTTTCCTCGTCGAAACCTACCATCCTCACTAACGACTTTTTTGGTCCACTTCTGTTAGAGGCTCTCGAAGGTTTCCTTTTCGTAGTCAACCAAGACGGCAAAGTAGAGTACGTGACTGATAACATCGCCACGTTCATCAAATTCTCGAAAGACGAGGTTTTGGGAAAGCCCGTCTATAACATCCTTCACCACGGGGACCATGGCCGTTTCAACTCCGCCCTCCTGCCTACGGTTTGGTCCACTCTTGAAGGCTCCTCCTCGTCTGTCGTAGCCTCAGGAGGTGGTTCTTCCTCCAATTCGTCGAACCCTCCGCGGAATCGAACTTTCAACTGCCGATTCCTCATCAAACCTCCTGACGACTCGAACCAAACCGTCGAGGAGAAACAGCAGAGGGTATCGAAGTATGAGAATATGCAAGTTGTCCAGATCAATTCGACGCAAATCGCTCAATTGACATCAGGCGGCGACAAGGACGAAGAGGGCAACGATATCGGTCCGTGCCTCATGTGCGTGGCTCGGCGGATTATGCCGAACGAGAAACATCACGCGGGGACGTCCATGGAACAGTTTTCAATGAAAATGGACCCCCAAGGGAAGATCATCGGAATAGACACGACGGGGTTGTCGCCAGGGTTATCCCAATTCATCGTCAAGAAAGATCTCCTTGGAAGAAATCTCGACGACATAGTTCATGCTGGCGATTTTAGCAAAGTATCGAATCATGTGAAAGACGTTCAATCCCATTCGCATGGAACTTCATCTATCTACAGGATACGGGTGACTTCACCGAACTCCGGTGACAAATACATTCACGTGCAGACTAAGTCCAAGCTTTTCAAATCAATGTCTGAGCCGGACTTCATAATGTCTACCCACTCCATCGTTACCGCGGGTGGAGAAGAGCAGTCATTCAATATGGTGGAAGCGAATTCGCCTGCGTCTATAAGCGGGCAGAGCACATCCAGCTCTATGGGAAACCAAATGATGTTGTCTGGAACTGTCAACGGTGCTCCTATTAGAAGTGAAAACACCCCTAGTAGCGTGAGTTCTTCAGAGCTGGCAAACACCATCAACTCACTCAGCAATACCTCCAATTTTCAAACTGTGTCTCTGAACCAGGGTCTGGTTTCCAACGAACTTAGTCACGATATCACTTTCGCAGACCTGTTTCCTTCGACTACTTGGCCTGACATTGGTGAACGGATCGGAACGGGGTTGGCCGAACGAGGAAGTTGGGAAAGATCCGAATCCCGTGCTTCCATGACATCAGCATCTAGTCCATTAGCGCCTGCCCCCGCCACACCATCCTTCTCGAACTCCAATTTCCCCTTCTCGCCTCCCGTCATGGACGAAAAGGAGTCGAATGAAGCGCAAGGAGGCGGCAATCCCTGCCGGCTAAGGAACCTCCTGACTGAAGGGCTTGGAGCGATAAAGAGAGAATCGACAGACTCAGAGTCTGGAGCCGGTGGCGGGGGCAATAGCTCTCAGGAACATCCTGGTGAGAAAAACAAGTACAGCCTCCTTACCAAAATCCTGAATGAAAAGGAAGAAGACCAGCAGGGGTCGGGACACCATTCAGAGCAGTCATCTCACAACAAGCCTAAGAACAACATGTTACTGCAGCTGTTGAACAAAAACGACGATGACGATATGGAGCAGAAGGGAGGAGCGAGTGATGATCTTCTGCTCAATAATTTGGGGCTTGGCTCCCTGACCTCAACGCAGGCTGAGACCATCAGACGAGGCACGAAGCGCCCAAGCTCTGAAGACAACCAGGGAATGGGGAGTGGTGGAAACACTCCACAGGGTGGTGATGATGGTCCGAACTCGGCCAAACGACCTGCCAACTCCCTTTTGGACACTGTACCTCCGTCTGCGCCAGTTTCATCTTCTTCAGTCAACTCGAAGCTGTGGGAGAAAAACCGGATGTTGGCCTCGTTACTGGCAAACCCTCCATCCACTCCCACCACAATCCCTCCTGTACCTGCCAGTGTCATTTCCGCCACGCCTCAGGACAAGTTACCACGAGTTATTAAAAATAATGCCCAAAATTCTTGGTCTGGCTGTAACGTTCAACAAGGAGGCGGGATTCCTCAATCTCCTCAGGGAGCTGGAGGTCAGGCTATTGGGCGACAGGGAACTGGGCAAACCCTTCATTCCGTTTCTTCACCTGACTTCCGGTGGGCCGGTGAAGACTCATCGGACCCTTACCTCTCTCATCTGTTAGATCAAGTGATAGAAATAGCTCCCGAAGATTCCCCTGCTCTAGCTAACATAATAAATTCTATTGAAGCAAACTCCCAAGGGGTTTTGGGTGGAAGCCCTTTCCAGCAAGATCAACTCACCGCTGAAAAGATCAACGAACGGATGGCAATTAATGCCATTCAAAAGTCGCTTATGCAATGCGAGACGTTGCAAAAAACACCTGTTTATACTGTTTCTCAGCTATCCTCCGTTCAAGGACAGCAACAATTTCCTCCTCCACCTGTTTATCAACAGAATAGGCAACGATTGACCTTATCTGCTGGTCTGAGGCAAGCACAGTACAACCTTGGACCTCAACAACAGCAACTGTTGATACAGCAGCAGCAACAGCGGACTAAACTGTTGCAACAACAAACTAAGCAGCGGTTGTTACAGTTGCAACAGCAACAACAGCTGCTAATTCCTTCTAATGCTGCTGCCACATCGGGGGATCCTTCCGGAATCCATAATATTGACTCTCTTATGAATAACACGGTTGCGCCCAACGTTTCTCTTCAGAGGTCATCTAGCGTTCCTGATTCCCAGCTGTCGCCAGTCGGAAGCTATAGTGGCTCTGGTGCCAGCACGCCCAACATCATCGGATCTGGGAGCTCACAGATATCACCTGGCCAGAGGCAACCCTTCTCTCCGCAACCTTTCTCTCCTGTAAATGGTGGTATGAATAGTTTCCAAGGAAGTGGAGGGAGTGGAGGTTCAACTACTCCTAACCAGAGTGGGCAAGTTGTAACCTCACAAGGAGCGCAGCAGGCTCGTATGAGTCCTAGTTCGCTTCAGAATTTCCAGCAGGCTCAACTGTCCCCTCGGCTTTCACAGGGACAAACGGCAGGTTATGTTCAGACCCAGAGCACTTCATGGTCCCAACAACAAGCCAATAGGATCTCAATTCAACAACAACAAAACCCTATGCTCAATGCCCAGCTCACTGGCGGCAGTTATAACTCCAGTGGTGCTAGAAACTACAACCCTGGAACCCCTCCTGGTGCTGGGGGTGGAACGCCTCCCACCTCTGCAGCAGGCAGTGGCAGTCGTACAGGTCTGCCACCCGTCCGGTCTCTAACCAGTCCAGGATCACGGCAGAGTCCGTTCCCTCCCGAACTGTCACCAACGGCAGCAGGGAGTGCCACCAACTACCAGTTTAGAATCCAAAGGTCACTTTCAGGACCAACCCACCAGTCAGTCGTTCCTCAAGCAACCACTCATCTTCCAGGAGGTCCAATAGGAGGAGGTGGATGCAGCCGGATGTACAAGGAGCAGGTCCCTTACCACCACCACTACCATCCCCCCCATGTGACCCATCAACACCCCCAACATCCTCTCATTTACCAACCACACCCCACGGACCAGGGTTATCCTGGCCAGGGATACCCTGATGGCTACAGACAACACCCGACGGGTAAGTTCCCTGTCCTCCAGGTACACGGACACAAACACGACCCCCACCTTCCGACACCATAG

根据本发明的上述中黑盲蝽Taiman基因所编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNo:2所示。

MSTLLAENAGLVRCELPSDPLWAKMSSTGASSKKRKKPDTKPQSQLAKSLNEKRRRELENVFIEELAELISASFADMSSLAVKPDKCAILQETVNQIKHIKEQEAAATIDAVQQGEVSSSKPTILTNDFFGPLLLEALEGFLFVVNQDGKVEYVTDNIATFIKFSKDEVLGKPVYNILHHGDHGRFNSALLPTVWSTLEGSSSSVVASGGGSSSNSSNPPRNRTFNCRFLIKPPDDSNQTVEEKQQRVSKYENMQVVQINSTQIAQLTSGGDKDEEGNDIGPCLMCVARRIMPNEKHHAGTSMEQFSMKMDPQGKIIGIDTTGLSPGLSQFIVKKDLLGRNLDDIVHAGDFSKVSNHVKDVQSHSHGTSSIYRIRVTSPNSGDKYIHVQTKSKLFKSMSEPDFIMSTHSIVTAGGEEQSFNMVEANSPASISGQSTSSSMGNQMMLSGTVNGAPIRSENTPSSVSSSELANTINSLSNTSNFQTVSLNQGLVSNELSHDITFADLFPSTTWPDIGERIGTGLAERGSWERSESRASMTSASSPLAPAPATPSFSNSNFPFSPPVMDEKESNEAQGGGNPCRLRNLLTEGLGAIKRESTDSESGAGGGGNSSQEHPGEKNKYSLLTKILNEKEEDQQGSGHHSEQSSHNKPKNNMLLQLLNKNDDDDMEQKGGASDDLLLNNLGLGSLTSTQAETIRRGTKRPSSEDNQGMGSGGNTPQGGDDGPNSAKRPANSLLDTVPPSAPVSSSSVNSKLWEKNRMLASLLANPPSTPTTIPPVPASVISATPQDKLPRVIKNNAQNSWSGCNVQQGGGIPQSPQGAGGQAIGRQGTGQTLHSVSSPDFRWAGEDSSDPYLSHLLDQVIEIAPEDSPALANIINSIEANSQGVLGGSPFQQDQLTAEKINERMAINAIQKSLMQCETLQKTPVYTVSQLSSVQGQQQFPPPPVYQQNRQRLTLSAGLRQAQYNLGPQQQQLLIQQQQQRTKLLQQQTKQRLLQLQQQQQLLIPSNAAATSGDPSGIHNIDSLMNNTVAPNVSLQRSSSVPDSQLSPVGSYSGSGASTPNIIGSGSSQISPGQRQPFSPQPFSPVNGGMNSFQGSGGSGGSTTPNQSGQVVTSQGAQQARMSPSSLQNFQQAQLSPRLSQGQTAGYVQTQSTSWSQQQANRISIQQQQNPMLNAQLTGGSYNSSGARNYNPGTPPGAGGGTPPTSAAGSGSRTGLPPVRSLTSPGSRQSPFPPELSPTAAGSATNYQFRIQRSLSGPTHQSVVPQATTHLPGGPIGGGGCSRMYKEQVPYHHHYHPPHVTHQHPQHPLIYQPHPTDQGYPGQGYPDGYRQHPTGKFPVLQVHGHKHDPHLPTP

本发明还提供了包含上述中黑盲蝽Taiman基因的重组质粒。

本发明还提供了包含上述中黑盲蝽Taiman基因的重组细胞，例如含有上述中黑盲蝽Taiman基因的重组植物细胞，昆虫细胞，真菌等。

本发明还提供了抗中黑盲蝽的转基因植物，所述转基因植物含有黑盲蝽Taiman基因的干扰序列。

根据本发明的具体实施方式，所述黑盲蝽Taiman基因的干扰序列通过使用以下特异性引物扩增而得：

上游引物序列dsTAI-F：5’GCACAGTACAACCTTGGACC3’，

下游引物序列dsTAI-R：5’GTTGAACCTCCACTCCCTCC3’。

根据本发明的提高植物中黑盲蝽抗性的方法，包括向植物中导入黑盲蝽Taiman基因的干扰序列的步骤。

将本发明的Taiman基因的dsRNA通过显微注射至中黑盲蝽初羽化雌虫体内，检测发现Taiman基因表达量在整个生育期均被极显著抑制，抑制Taiman基因的表达显著减少了中黑盲蝽卵巢内卵的数量和中黑盲蝽的终生产卵量，最终影响了中黑盲蝽的生殖能力和种群的发展。Taiman基因可作为抗中黑盲蝽转基因植物培育的备选基因。

附图说明

图1显示注射Taiman基因干扰序列的dsRNA后，Taiman基因的沉默效率。其中“**”表示p<0.01。图中英文缩写含义：“dsTAI”表示注射Taiman基因dsRNA的处理组；“dsGFP”表示注射GFP基因dsRNA的对照组.

图2显示注射Taiman基因干扰序列的dsRNA对中黑盲蝽生殖能力的影响，A图：注射Taiman基因干扰序列的dsRNA对中黑盲蝽卵巢内卵数量的影响；B图：注射Taiman基因干扰序列的dsRNA对中黑盲蝽终生产卵量的影响。“**”表示差异极显著性：“**”P<0.01。图中英文缩写含义：“dsTAI”表示注射Taiman基因干扰序列dsRNA的处理组；“dsGFP”表示注射GFP基因dsRNA的对照组。

具体实施方式

实施方式中所使用的技术，包括TRIzol法提取RNA、cDNA克隆、PCR扩增与检测和合成dsRNA等分子生物学技术，均为本领域内技术人员已知的常规技术。所使用的仪器设备、试剂等均为本领域技术人员可通过公关途径或商业途径获得。

实施例1：中黑盲蝽Taiman基因的克隆与分析

TRIzol法提取中黑盲蝽RNA，使用RTMasterMix(perfectrealtime)试剂盒将提取的总RNA合成cDNA模板(具体步骤按照试剂盒说明书)。设计引物序列如下。

上游引物序列TAI-F：5'-CGCTTATGCAATGCGAGACG-3'，

下游引物序列TAI-R：5'-GCCAGTGAGCTGGGCATTGA-3'。

以中黑盲蝽cDNA为模板，利用上述引物TAI-F和TAI-R，进行PCR扩增。回收的PCR产物与pEASY-T1载体进行连接，重组载体转化入感受态细胞T1，氨苄抗性LB培养基过夜培养。培养过夜后，挑取8个阳性克隆进行PCR验证，将菌落PCR扩增为阳性的克隆取新鲜菌液送测序。

Taiman基因开放阅读框架全长4068bp，编码1355个氨基酸残基(SEQIDNO：2)，预测分子质量为144.9kDa，理论等电点为4.73。

实施例2：合成dsRNA

根据实施例1中得到的Taiman基因序列，设计特异性扩增引物(5'-端加上T7

启动子序列)，用于Taiman基因的dsRNA片段的扩增，设计的特异性引物如下：

上游引物序列dsTAI-F：GCACAGTACAACCTTGGACC，

下游引物序列dsTAI-R：GTTGAACCTCCACTCCCTCC。

以中黑盲蝽cDNA为模板，利用上述引物dsTAI-F和dsTAI-R进行PCR扩增，将PCR产物连接到pEASY-T1载体。挑取菌落PCR检测为阳性的单菌落，送测序，检测基因序列的正确性，对测序正确的单菌落，6mlLB+AMP培养基过夜摇菌培养。

提取含有目的片段的质粒，以该质粒为模板，使用上述特异性引物dsTAI-F和dsTAI-R进行第二次PCR扩增，PCR体系和反应程序同上。

将第二次PCR的产物利用酚氯仿抽提法纯化，合成dsRNA，将dsRNA浓度稀释为10μg/μl备用。

实施例3注射Taiman基因dsRNA后基因的沉默效率及其对雌虫卵巢内卵的数量和生殖力变化情况

以绿色荧光蛋白基因(GFP)双链dsRNA作为对照，将Taiman基因dsRNA通过显微注射法从中黑盲蝽后胸与腹部节间膜的最外侧注射进入新羽化雌虫体内。

如图1所示，沉默效率检测：分别收集注射处理后4天、6天、8天、10天、12天、14天、16天和18天的中黑盲蝽全虫，提取RNA并反转录为cDNA后，使用日本Takara公司的

PremixExTaq^TMII和Bio-RadDetectioniQ2System检测Taiman基因的沉默效应。

卵巢内卵数量统计：注射dsRNA11天后，利用体式显微镜解剖雌虫卵巢，每个处理解剖20头未交配雌虫，3个生物学重复，观察卵巢形态，统计并分析中黑盲蝽卵巢内卵的数量。

生殖力：雌虫注射dsRNA后，与新羽化的雄虫一一配对，放入一次性塑料杯内(5cm×7cm)交配，若发现雄虫死亡，马上补充新的性成熟的雄虫，以40对虫子为一个处理组，3个生物学重复，统计终生产卵量，以此评价注射Taiman基因dsRNA对中黑盲蝽产卵量的影响。

试验结果显示：

(1)Taiman沉默效率

与对照组相比，注射Taiman基因的dsRNA后，Taiman基因表达量在整个生育期显著下降，说明该中黑盲蝽Taiman基因的干扰序列可显著抑制Taiman基因的表达。

(2)注射Taiman基因dsRNA对中黑盲蝽雌虫卵巢内卵数量的影响

注射处理11天后，解剖雌虫卵巢，统计卵巢内卵的数量并观察卵巢形态，与对照组相比，注射Taiman基因dsRNA处理组的中黑盲蝽卵巢内卵的数量减少了44.34％(见图2中的A图)。说明注射Taiman基因的dsRNA可显著减少了中黑盲蝽雌虫卵巢内卵的数量。

(3)注射Taiman基因dsRNA对中黑盲蝽生殖能力的影响

新羽化雌虫注射dsRNA处理后与雄虫交配，统计终生产卵量，与对照组相比，处理组的中黑盲蝽产卵量下降了75.5％(见图2中的B图)。可见将Taiman基因干扰后，显著抑制了中黑盲蝽卵巢内卵的数量与雌虫生殖力，对中黑盲蝽的生殖能力和种群的发展产生了不利影响。因此本发明提供的RNA干扰序列可应用于转基因抗中黑盲蝽植物的开发。进一步开发其蛋白可应用于中黑盲蝽的生物防治。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> 一种分离的中黑盲蝽Taiman基因及其编码的蛋白

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 4068

<212> DNA

<213> 中黑盲蝽(Adelphocoris suturalis)

<400> 1

atgtcgacgc ttctcgccga aaatgcaggg ttggtccgat gtgagctgcc atcagacccc 60

ctgtgggcta agatgagctc taccggagcc agctctaaga agcgaaagaa acccgacaca 120

aaaccccagt ctcaactcgc caaaagcctt aatgaaaaac gtaggcgtga gcttgaaaac 180

gtgttcatcg aagagctggc tgaactcata tcggcgagct ttgctgatat gagctcgctc 240

gctgtcaagc ccgacaagtg cgctatactt caagaaactg taaaccagat caagcacata 300

aaagagcaag aggccgcagc gacgatagac gcagttcaac agggagaagt ttcctcgtcg 360

aaacctacca tcctcactaa cgactttttt ggtccacttc tgttagaggc tctcgaaggt 420

ttccttttcg tagtcaacca agacggcaaa gtagagtacg tgactgataa catcgccacg 480

ttcatcaaat tctcgaaaga cgaggttttg ggaaagcccg tctataacat ccttcaccac 540

ggggaccatg gccgtttcaa ctccgccctc ctgcctacgg tttggtccac tcttgaaggc 600

tcctcctcgt ctgtcgtagc ctcaggaggt ggttcttcct ccaattcgtc gaaccctccg 660

cggaatcgaa ctttcaactg ccgattcctc atcaaacctc ctgacgactc gaaccaaacc 720

gtcgaggaga aacagcagag ggtatcgaag tatgagaata tgcaagttgt ccagatcaat 780

tcgacgcaaa tcgctcaatt gacatcaggc ggcgacaagg acgaagaggg caacgatatc 840

ggtccgtgcc tcatgtgcgt ggctcggcgg attatgccga acgagaaaca tcacgcgggg 900

acgtccatgg aacagttttc aatgaaaatg gacccccaag ggaagatcat cggaatagac 960

acgacggggt tgtcgccagg gttatcccaa ttcatcgtca agaaagatct ccttggaaga 1020

aatctcgacg acatagttca tgctggcgat tttagcaaag tatcgaatca tgtgaaagac 1080

gttcaatccc attcgcatgg aacttcatct atctacagga tacgggtgac ttcaccgaac 1140

tccggtgaca aatacattca cgtgcagact aagtccaagc ttttcaaatc aatgtctgag 1200

ccggacttca taatgtctac ccactccatc gttaccgcgg gtggagaaga gcagtcattc 1260

aatatggtgg aagcgaattc gcctgcgtct ataagcgggc agagcacatc cagctctatg 1320

ggaaaccaaa tgatgttgtc tggaactgtc aacggtgctc ctattagaag tgaaaacacc 1380

cctagtagcg tgagttcttc agagctggca aacaccatca actcactcag caatacctcc 1440

aattttcaaa ctgtgtctct gaaccagggt ctggtttcca acgaacttag tcacgatatc 1500

actttcgcag acctgtttcc ttcgactact tggcctgaca ttggtgaacg gatcggaacg 1560

gggttggccg aacgaggaag ttgggaaaga tccgaatccc gtgcttccat gacatcagca 1620

tctagtccat tagcgcctgc ccccgccaca ccatccttct cgaactccaa tttccccttc 1680

tcgcctcccg tcatggacga aaaggagtcg aatgaagcgc aaggaggcgg caatccctgc 1740

cggctaagga acctcctgac tgaagggctt ggagcgataa agagagaatc gacagactca 1800

gagtctggag ccggtggcgg gggcaatagc tctcaggaac atcctggtga gaaaaacaag 1860

tacagcctcc ttaccaaaat cctgaatgaa aaggaagaag accagcaggg gtcgggacac 1920

cattcagagc agtcatctca caacaagcct aagaacaaca tgttactgca gctgttgaac 1980

aaaaacgacg atgacgatat ggagcagaag ggaggagcga gtgatgatct tctgctcaat 2040

aatttggggc ttggctccct gacctcaacg caggctgaga ccatcagacg aggcacgaag 2100

cgcccaagct ctgaagacaa ccagggaatg gggagtggtg gaaacactcc acagggtggt 2160

gatgatggtc cgaactcggc caaacgacct gccaactccc ttttggacac tgtacctccg 2220

tctgcgccag tttcatcttc ttcagtcaac tcgaagctgt gggagaaaaa ccggatgttg 2280

gcctcgttac tggcaaaccc tccatccact cccaccacaa tccctcctgt acctgccagt 2340

gtcatttccg ccacgcctca ggacaagtta ccacgagtta ttaaaaataa tgcccaaaat 2400

tcttggtctg gctgtaacgt tcaacaagga ggcgggattc ctcaatctcc tcagggagct 2460

ggaggtcagg ctattgggcg acagggaact gggcaaaccc ttcattccgt ttcttcacct 2520

gacttccggt gggccggtga agactcatcg gacccttacc tctctcatct gttagatcaa 2580

gtgatagaaa tagctcccga agattcccct gctctagcta acataataaa ttctattgaa 2640

gcaaactccc aaggggtttt gggtggaagc cctttccagc aagatcaact caccgctgaa 2700

aagatcaacg aacggatggc aattaatgcc attcaaaagt cgcttatgca atgcgagacg 2760

ttgcaaaaaa cacctgttta tactgtttct cagctatcct ccgttcaagg acagcaacaa 2820

tttcctcctc cacctgttta tcaacagaat aggcaacgat tgaccttatc tgctggtctg 2880

aggcaagcac agtacaacct tggacctcaa caacagcaac tgttgataca gcagcagcaa 2940

cagcggacta aactgttgca acaacaaact aagcagcggt tgttacagtt gcaacagcaa 3000

caacagctgc taattccttc taatgctgct gccacatcgg gggatccttc cggaatccat 3060

aatattgact ctcttatgaa taacacggtt gcgcccaacg tttctcttca gaggtcatct 3120

agcgttcctg attcccagct gtcgccagtc ggaagctata gtggctctgg tgccagcacg 3180

cccaacatca tcggatctgg gagctcacag atatcacctg gccagaggca acccttctct 3240

ccgcaacctt tctctcctgt aaatggtggt atgaatagtt tccaaggaag tggagggagt 3300

ggaggttcaa ctactcctaa ccagagtggg caagttgtaa cctcacaagg agcgcagcag 3360

gctcgtatga gtcctagttc gcttcagaat ttccagcagg ctcaactgtc ccctcggctt 3420

tcacagggac aaacggcagg ttatgttcag acccagagca cttcatggtc ccaacaacaa 3480

gccaatagga tctcaattca acaacaacaa aaccctatgc tcaatgccca gctcactggc 3540

ggcagttata actccagtgg tgctagaaac tacaaccctg gaacccctcc tggtgctggg 3600

ggtggaacgc ctcccacctc tgcagcaggc agtggcagtc gtacaggtct gccacccgtc 3660

cggtctctaa ccagtccagg atcacggcag agtccgttcc ctcccgaact gtcaccaacg 3720

gcagcaggga gtgccaccaa ctaccagttt agaatccaaa ggtcactttc aggaccaacc 3780

caccagtcag tcgttcctca agcaaccact catcttccag gaggtccaat aggaggaggt 3840

ggatgcagcc ggatgtacaa ggagcaggtc ccttaccacc accactacca tcccccccat 3900

gtgacccatc aacaccccca acatcctctc atttaccaac cacaccccac ggaccagggt 3960

tatcctggcc agggataccc tgatggctac agacaacacc cgacgggtaa gttccctgtc 4020

ctccaggtac acggacacaa acacgacccc caccttccga caccatag 4068

<210> 2

<211> 1355

<212> PRT

<213> 中黑盲蝽(Adelphocoris suturalis)

<400> 2

Met Ser Thr Leu Leu Ala Glu Asn Ala Gly Leu Val Arg Cys Glu Leu

1 5 10 15

Pro Ser Asp Pro Leu Trp Ala Lys Met Ser Ser Thr Gly Ala Ser Ser

20 25 30

Lys Lys Arg Lys Lys Pro Asp Thr Lys Pro Gln Ser Gln Leu Ala Lys

35 40 45

Ser Leu Asn Glu Lys Arg Arg Arg Glu Leu Glu Asn Val Phe Ile Glu

50 55 60

Glu Leu Ala Glu Leu Ile Ser Ala Ser Phe Ala Asp Met Ser Ser Leu

65 70 75 80

Ala Val Lys Pro Asp Lys Cys Ala Ile Leu Gln Glu Thr Val Asn Gln

85 90 95

Ile Lys His Ile Lys Glu Gln Glu Ala Ala Ala Thr Ile Asp Ala Val

100 105 110

Gln Gln Gly Glu Val Ser Ser Ser Lys Pro Thr Ile Leu Thr Asn Asp

115 120 125

Phe Phe Gly Pro Leu Leu Leu Glu Ala Leu Glu Gly Phe Leu Phe Val

130 135 140

Val Asn Gln Asp Gly Lys Val Glu Tyr Val Thr Asp Asn Ile Ala Thr

145 150 155 160

Phe Ile Lys Phe Ser Lys Asp Glu Val Leu Gly Lys Pro Val Tyr Asn

165 170 175

Ile Leu His His Gly Asp His Gly Arg Phe Asn Ser Ala Leu Leu Pro

180 185 190

Thr Val Trp Ser Thr Leu Glu Gly Ser Ser Ser Ser Val Val Ala Ser

195 200 205

Gly Gly Gly Ser Ser Ser Asn Ser Ser Asn Pro Pro Arg Asn Arg Thr

210 215 220

Phe Asn Cys Arg Phe Leu Ile Lys Pro Pro Asp Asp Ser Asn Gln Thr

225 230 235 240

Val Glu Glu Lys Gln Gln Arg Val Ser Lys Tyr Glu Asn Met Gln Val

245 250 255

Val Gln Ile Asn Ser Thr Gln Ile Ala Gln Leu Thr Ser Gly Gly Asp

260 265 270

Lys Asp Glu Glu Gly Asn Asp Ile Gly Pro Cys Leu Met Cys Val Ala

275 280 285

Arg Arg Ile Met Pro Asn Glu Lys His His Ala Gly Thr Ser Met Glu

290 295 300

Gln Phe Ser Met Lys Met Asp Pro Gln Gly Lys Ile Ile Gly Ile Asp

305 310 315 320

Thr Thr Gly Leu Ser Pro Gly Leu Ser Gln Phe Ile Val Lys Lys Asp

325 330 335

Leu Leu Gly Arg Asn Leu Asp Asp Ile Val His Ala Gly Asp Phe Ser

340 345 350

Lys Val Ser Asn His Val Lys Asp Val Gln Ser His Ser His Gly Thr

355 360 365

Ser Ser Ile Tyr Arg Ile Arg Val Thr Ser Pro Asn Ser Gly Asp Lys

370 375 380

Tyr Ile His Val Gln Thr Lys Ser Lys Leu Phe Lys Ser Met Ser Glu

385 390 395 400

Pro Asp Phe Ile Met Ser Thr His Ser Ile Val Thr Ala Gly Gly Glu

405 410 415

Glu Gln Ser Phe Asn Met Val Glu Ala Asn Ser Pro Ala Ser Ile Ser

420 425 430

Gly Gln Ser Thr Ser Ser Ser Met Gly Asn Gln Met Met Leu Ser Gly

435 440 445

Thr Val Asn Gly Ala Pro Ile Arg Ser Glu Asn Thr Pro Ser Ser Val

450 455 460

Ser Ser Ser Glu Leu Ala Asn Thr Ile Asn Ser Leu Ser Asn Thr Ser

465 470 475 480

Asn Phe Gln Thr Val Ser Leu Asn Gln Gly Leu Val Ser Asn Glu Leu

485 490 495

Ser His Asp Ile Thr Phe Ala Asp Leu Phe Pro Ser Thr Thr Trp Pro

500 505 510

Asp Ile Gly Glu Arg Ile Gly Thr Gly Leu Ala Glu Arg Gly Ser Trp

515 520 525

Glu Arg Ser Glu Ser Arg Ala Ser Met Thr Ser Ala Ser Ser Pro Leu

530 535 540

Ala Pro Ala Pro Ala Thr Pro Ser Phe Ser Asn Ser Asn Phe Pro Phe

545 550 555 560

Ser Pro Pro Val Met Asp Glu Lys Glu Ser Asn Glu Ala Gln Gly Gly

565 570 575

Gly Asn Pro Cys Arg Leu Arg Asn Leu Leu Thr Glu Gly Leu Gly Ala

580 585 590

Ile Lys Arg Glu Ser Thr Asp Ser Glu Ser Gly Ala Gly Gly Gly Gly

595 600 605

Asn Ser Ser Gln Glu His Pro Gly Glu Lys Asn Lys Tyr Ser Leu Leu

610 615 620

Thr Lys Ile Leu Asn Glu Lys Glu Glu Asp Gln Gln Gly Ser Gly His

625 630 635 640

His Ser Glu Gln Ser Ser His Asn Lys Pro Lys Asn Asn Met Leu Leu

645 650 655

Gln Leu Leu Asn Lys Asn Asp Asp Asp Asp Met Glu Gln Lys Gly Gly

660 665 670

Ala Ser Asp Asp Leu Leu Leu Asn Asn Leu Gly Leu Gly Ser Leu Thr

675 680 685

Ser Thr Gln Ala Glu Thr Ile Arg Arg Gly Thr Lys Arg Pro Ser Ser

690 695 700

Glu Asp Asn Gln Gly Met Gly Ser Gly Gly Asn Thr Pro Gln Gly Gly

705 710 715 720

Asp Asp Gly Pro Asn Ser Ala Lys Arg Pro Ala Asn Ser Leu Leu Asp

725 730 735

Thr Val Pro Pro Ser Ala Pro Val Ser Ser Ser Ser Val Asn Ser Lys

740 745 750

Leu Trp Glu Lys Asn Arg Met Leu Ala Ser Leu Leu Ala Asn Pro Pro

755 760 765

Ser Thr Pro Thr Thr Ile Pro Pro Val Pro Ala Ser Val Ile Ser Ala

770 775 780

Thr Pro Gln Asp Lys Leu Pro Arg Val Ile Lys Asn Asn Ala Gln Asn

785 790 795 800

Ser Trp Ser Gly Cys Asn Val Gln Gln Gly Gly Gly Ile Pro Gln Ser

805 810 815

Pro Gln Gly Ala Gly Gly Gln Ala Ile Gly Arg Gln Gly Thr Gly Gln

820 825 830

Thr Leu His Ser Val Ser Ser Pro Asp Phe Arg Trp Ala Gly Glu Asp

835 840 845

Ser Ser Asp Pro Tyr Leu Ser His Leu Leu Asp Gln Val Ile Glu Ile

850 855 860

Ala Pro Glu Asp Ser Pro Ala Leu Ala Asn Ile Ile Asn Ser Ile Glu

865 870 875 880

Ala Asn Ser Gln Gly Val Leu Gly Gly Ser Pro Phe Gln Gln Asp Gln

885 890 895

Leu Thr Ala Glu Lys Ile Asn Glu Arg Met Ala Ile Asn Ala Ile Gln

900 905 910

Lys Ser Leu Met Gln Cys Glu Thr Leu Gln Lys Thr Pro Val Tyr Thr

915 920 925

Val Ser Gln Leu Ser Ser Val Gln Gly Gln Gln Gln Phe Pro Pro Pro

930 935 940

Pro Val Tyr Gln Gln Asn Arg Gln Arg Leu Thr Leu Ser Ala Gly Leu

945 950 955 960

Arg Gln Ala Gln Tyr Asn Leu Gly Pro Gln Gln Gln Gln Leu Leu Ile

965 970 975

Gln Gln Gln Gln Gln Arg Thr Lys Leu Leu Gln Gln Gln Thr Lys Gln

980 985 990

Arg Leu Leu Gln Leu Gln Gln Gln Gln Gln Leu Leu Ile Pro Ser Asn

995 1000 1005

Ala Ala Ala Thr Ser Gly Asp Pro Ser Gly Ile His Asn Ile Asp Ser

1010 1015 1020

Leu Met Asn Asn Thr Val Ala Pro Asn Val Ser Leu Gln Arg Ser Ser

1025 1030 1035 1040

Ser Val Pro Asp Ser Gln Leu Ser Pro Val Gly Ser Tyr Ser Gly Ser

1045 1050 1055

Gly Ala Ser Thr Pro Asn Ile Ile Gly Ser Gly Ser Ser Gln Ile Ser

1060 1065 1070

Pro Gly Gln Arg Gln Pro Phe Ser Pro Gln Pro Phe Ser Pro Val Asn

1075 1080 1085

Gly Gly Met Asn Ser Phe Gln Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr

1090 1095 1100

Thr Pro Asn Gln Ser Gly Gln Val Val Thr Ser Gln Gly Ala Gln Gln

1105 1110 1115 1120

Ala Arg Met Ser Pro Ser Ser Leu Gln Asn Phe Gln Gln Ala Gln Leu

1125 1130 1135

Ser Pro Arg Leu Ser Gln Gly Gln Thr Ala Gly Tyr Val Gln Thr Gln

1140 1145 1150

Ser Thr Ser Trp Ser Gln Gln Gln Ala Asn Arg Ile Ser Ile Gln Gln

1155 1160 1165

Gln Gln Asn Pro Met Leu Asn Ala Gln Leu Thr Gly Gly Ser Tyr Asn

1170 1175 1180

Ser Ser Gly Ala Arg Asn Tyr Asn Pro Gly Thr Pro Pro Gly Ala Gly

1185 1190 1195 1200

Gly Gly Thr Pro Pro Thr Ser Ala Ala Gly Ser Gly Ser Arg Thr Gly

1205 1210 1215

Leu Pro Pro Val Arg Ser Leu Thr Ser Pro Gly Ser Arg Gln Ser Pro

1220 1225 1230

Phe Pro Pro Glu Leu Ser Pro Thr Ala Ala Gly Ser Ala Thr Asn Tyr

1235 1240 1245

Gln Phe Arg Ile Gln Arg Ser Leu Ser Gly Pro Thr His Gln Ser Val

1250 1255 1260

Val Pro Gln Ala Thr Thr His Leu Pro Gly Gly Pro Ile Gly Gly Gly

1265 1270 1275 1280

Gly Cys Ser Arg Met Tyr Lys Glu Gln Val Pro Tyr His His His Tyr

1285 1290 1295

His Pro Pro His Val Thr His Gln His Pro Gln His Pro Leu Ile Tyr

1300 1305 1310

Gln Pro His Pro Thr Asp Gln Gly Tyr Pro Gly Gln Gly Tyr Pro Asp

1315 1320 1325

Gly Tyr Arg Gln His Pro Thr Gly Lys Phe Pro Val Leu Gln Val His

1330 1335 1340

Gly His Lys His Asp Pro His Leu Pro Thr Pro

1345 1350 1355

Claims

1.中黑盲蝽Taiman基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。

2.权利要求1所述的中黑盲蝽Taiman基因所编码的蛋白。

3.包含权利要求1所述的中黑盲蝽Taiman基因的重组质粒。

4.权利要求1所述中黑盲蝽Taiman基因的干扰序列用于抑制中黑盲蝽Taiman基因表达的应用，其特征在于，所述中黑盲蝽Taiman基因的干扰序列通过使用以下特异性引物扩增而得：

上游引物序列dsTAI-F：5’GCACAGTACAACCTTGGACC3’，

下游引物序列dsTAI-R：5’GTTGAACCTCCACTCCCTCC3’。