CN111374906A - 一种具有抗衰功效的组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种具有抗衰功效的组合物及其制备方法,该组合物以有机锗、核糖核酸、卵磷脂、天然多糖、胶原和水经过高压微射流法制备得到;是针对影响皮肤老化产生的重要因素,如紫外线、自由基、MMPs等,开发出延缓衰老功效的组合物。本发明其各组份具有协同增效的作用,具有保湿、补充细胞外基质,清除自由基,增加I型胶原蛋白和弹性蛋白的表达,抑制MMPs的表达等功效,以增厚细胞外基质,达到抗衰的效果;同时本发明组合物结合高压微射流法制备的纳米微乳液,具有类脂质体结构,更加容易透皮吸收,补充细胞膜上的糖类和磷脂,有助于受损细胞重建屏障,维持活性,且多相包裹的结构十分稳定。
Description
技术领域
本发明属于化妆品开发领域,具体涉及一种延缓皮肤老化,具有抗衰功效的组合物及其制备方法。
背景技术
皮肤作为人体最大的器官,与人体的其他生物成分相似,皮肤在整个生命过程中经历复杂且累积的衰老过程。皮肤老化的临床特征表现为深皱纹,皮肤失去弹性,干燥,松弛,粗糙。皮肤的老化现象主要是人体受到内源性及外源性因素引起的,外在老化主要是由环境氧化诸多因素引起的,如太阳辐射,香烟烟雾或其他污染因素,其中紫外线辐射是光老化的主要因素。
皮肤老化的机制十分复杂。其中之一就是包括紫外线在内的各因素导致的细胞损伤以及由该损伤增加的细胞凋亡、蛋白酶如基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMPs)表达的增加导致的纤维成分如胶原蛋白的水解,和炎症细胞因子的增加导致的纤维束瓦解。其中MMPs在该过程中发挥着关键性的作用。MMPs且具有多种功能,如降解由胶原蛋白、蛋白多糖、弹性蛋白等形成的细胞外基质和降解在细胞表面上表达的蛋白质等。MMPs的降解作用导致细胞外基质的减少和变性,是皮肤形成皱纹、松弛等的重要因素。另外,由于炎症引起细胞产生的TNF-α、IL-1和IL-6等炎性细胞因子可通过诱导MMPs的产生,导致皮肤皱纹和松弛的形成。
目前市场上的抗衰老产品未考虑透皮吸收的影响,导致功效成分吸收较差,不具备长效的保湿及抗衰的效果,使用体验不佳。因此人们对新型的抗衰老产品的开发具有强烈的需求。
发明内容
为进一步阐明本发明,本申请案中使用的专业术语定义如下,除非另加指明。
本发明提供了一种具有抗衰功效组合物,具体技术方案如下:
一种具有抗衰功效的组合物,其为纳米微乳液形态,组份包括:有机锗、核糖核酸、卵磷脂、天然多糖、胶原和水,各组份经过高压微射流法制备得到。
进一步,所述一种具有抗衰功效组合物由以下重量份的组分组成:
有机锗:0.01~10份;
核糖核酸:0.01~10份;
卵磷脂:0.01~20份;
天然多糖:0.01~10份;
胶原:0.01~10份;
水:余量。
进一步,所述一种具有抗衰功效组合物由以下重量份的组分组成:
有机锗:0.5~6份;
核糖核酸:0.5~6份;
卵磷脂:0.5~15份;
天然多糖:0.5~6份;
胶原:0.05~4份;
水:余量。
进一步,所述一种具有抗衰功效组合物由以下重量份的组分组成:
有机锗:0.8~5份;
核糖核酸:0.8~5份;
卵磷脂:0.8~10份;
天然多糖:0.8~5份;
胶原:0.1~2份;
水:余量。
进一步,所述一种具有抗衰功效组合物的纳米微乳液形态的粒径为20~
80nm。
一种具有抗衰功效组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)将天然多糖与水混合,加热溶解,加入卵磷脂,加热分散,均质;
2)待温度降至40℃以下后,添加核糖核酸、胶原、有机锗,搅拌均匀,得到一个水包水型乳液;
3)将该水包水型乳液加入微射流高压均质机中,通过递增压力的方式处理三次,压力依次为1000bar、1200bar和1400bar,再用孔径100nm的超微滤膜过滤,得到所述具有抗衰功效的组合物。
有机锗(Repagermanium)也称为Ge-132,是一种水溶性有机锗化合物,是3-(三羟基锗基)丙酸(THGP;(HO)3GeCH2CH2COOH)的聚合物,其安全性已通过数项毒理学研究证实。有机锗最初是为医疗用途而开发的,并已在药理研究和临床试验中进行过测试。近年来,有机锗已在日本用作某些食品和化妆品中的成分,并在美国用作食品补充剂。有机锗具有诱导干扰素-γ并激活天然杀伤细胞和巨噬细胞的免疫刺激特性,这些作用可抑制肿瘤。此外,据报道,THGP是有机锗的水解单体,它可以与一些生物的顺式二醇化合物(如肾上腺素,ATP和核酸)相互作用,而且有机锗对烧伤具有治愈作用。晚期癌症和烧伤导致的坏死是由于坏死细胞中ATP的泄漏引起的,因此THGP可能有助于控制这些疾病的患者的疼痛。此外,松本等研究显示有机锗能促进大鼠受伤皮肤的快速伤口愈合。因此,可以预期含有有机锗的皮肤护理产品对真皮细胞具有保护作用。
核糖核酸:核糖核酸RNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息传递过程中的桥梁。tRNA的功能是携带符合要求的氨基酸,以mRNA为模板,合成蛋白质。其功效成份为核酸酶解产物核苷酸(嘌呤核苷酸,嘧啶核苷酸)及由残缺的核苷酸片断通过磷酸二酯键连接而成的寡核苷酸.核苷酸是核酸的基本单位.核酸只有降解成小分子核苷酸才能被人体吸收利用。核酸可以通过提供营养,修复人体衰老及受损的细胞基因,激发细胞潜在的活性,从而增强人体免疫力与抵抗力,延缓衰老。
卵磷脂:卵磷脂(1ecithin)一种含磷酸的类脂化合物,是构成细胞生物膜的基本组成成分,具有较高的营养价值和生理调节机能,并且作为一种天然的表面乳化剂,具有乳化、分散、润湿、速溶、脱膜、分离等作用。卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”,具有很好的功效如1、延缓衰老:细胞膜主要是由卵磷脂构成的,向人体补充卵磷脂,就意味着可以修补被损伤的细胞膜,改善细胞膜功能,使细胞膜软化和年轻化,增加细胞活性。通过对卵磷脂的摄取,就可以提高人体的代谢能力、自愈能力和抗体组织的再生能力,增强人体的生命活力,从根本上延缓衰老;2、养颜润肤:在正常人体内含有许多毒素,特别是在肠道内,当这些毒素含量过高时,便会随着血液循环沉积在皮肤上,从而形成色斑或青春痘。卵磷脂是一种天然的解毒剂,它能分解体内过多的毒素,并经肝脏和肾脏的处理排出体外,当体内的毒素降低到一定的浓度时,脸上的斑点和青春痘就会慢慢消失。卵磷脂还具有一定的亲水性,并有增加血红素的功能。每天摄取一定量的卵磷脂,能为皮肤提供充分的水分和氧气,使皮肤变得光滑柔润。卵磷脂作为人体每一个细胞不可缺少的物质,如果缺乏,会降低皮肤细胞的再生能力,导致皮肤粗糙、有皱纹。适当摄取卵磷脂可以保障皮肤再生活力,同时,卵磷脂良好的亲水性和亲油性,可以使皮肤有光泽。此外,卵磷脂所含的肌醇还能抑制脱发,使白发慢慢变黑。
天然多糖(chitin)又称几丁质,为N-乙酰葡糖胺通过β连接聚合而成的结构同多糖,广泛存在于甲壳类动物的外壳、昆虫的甲壳和真菌的胞壁中,也存在于一些绿藻中。天然多糖的蕴藏量在地球上的天然高分子中占第二位,估计每年自然界生物的合成量可达1×1011吨,仅次于纤维素。一般由虾蟹壳提炼的几丁质,约含有15%的胺基(-NH2)与85%的乙酰基(-COCH3)。几丁质不溶于一般的弱无机酸或有机溶剂,且不溶于碱液中,只溶于强无机酸。几丁质具有强吸湿性,保湿效果亦相当好,并且具有吸附重金属离子的功能。
胶原:胶原蛋白(Collagen)又称胶原,是由三条肽链拧成的螺旋形纤维状蛋白质其,单体是长圆柱状蛋白质,长度约为280nm,直径为1.4~1.5nm。它由3条多肽链彼此以超螺旋的形式缠绕而成。胶原蛋白是动物结缔组织重要的蛋白质,结缔组织除了含60~70%的水分外,胶原蛋白占了约20~30%,因为有高含量的胶原蛋白,结缔组织具有了一定的结构与机械力学性质,如张力强度、拉力、弹力等以达到支撑、保护的功能。
本发明提供一种新的延缓皮肤衰老的化妆品组合物,以克服现有技术存在的缺陷。本发明的目的是从皮肤老化的机理出发,从防止紫外线对皮肤的损伤,清除有害的自由基,增强细胞增殖活性,重构细胞外基质,降低MMPs类蛋白酶活性,防止Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型等多种胶原蛋白、蛋白多糖、弹性蛋白及层粘连蛋白等细胞外基质被降解,减少炎症因子对MMPs的诱导活性等方面来考虑。将有机锗、核糖核酸、卵磷脂、天然多糖、胶原进行复配,得到具有较强抗衰老效果的组合物,不仅充分发挥提取物各自的作用,而且还将产生协同增效的效应。同时结合高压微射流技术制备成纳米微乳液,增加了产品透皮吸收能力达到了长效保湿和抗衰老的功效。
附图说明:
图1为功效试验二抑制MDA形成效能柱状图;
图2为功效试验三MMPs mRNA表达量测定柱状图;
图3为临床试验一皮肤保湿测定柱状图;
图4为临床试验二皮肤抗皱效果测定柱状图;
具体实施方式:
下面的实施例对本发明的新方法作详细描述,但不意味着限制本发明的范围。如图1-4所示:
实施例1
一种具有抗衰功效的组合物,由以下重量份组分组成:
功效成分:有机锗10份、核糖核酸3份、卵磷脂4份、天然多糖6份、胶原1份,水余量:
上述的抗衰功效的组合物制备方法包括以下步骤:
1)将天然多糖与水混合,加热溶解,加入卵磷脂,加热分散,均质。
2)待温度降至40℃以下后,添加核糖核酸、胶原、有机锗,搅拌均匀,得到一个水包水型乳液。
3)将该水包水型乳液加入微射流高压均质机中,通过递增压力的方式处理三次(压力依次为1000bar、1200bar和1400bar),再用孔径100nm的超微滤膜过滤,得到抗衰功效的组合物。
实施例2
一种具有皮肤抗衰功效的组合物,由以下重量份组分组成:
功效成分:有机锗8份、核糖核酸4份、卵磷脂5份、天然多糖3份、胶原0.5份,水余量:
上述的抗衰功效的组合物制备方法包括以下步骤:
1)将天然多糖与水混合,加热溶解,加入卵磷脂,加热分散,均质。
2)待温度降至40℃以下后,添加核糖核酸、胶原、有机锗,搅拌均匀,得到一个水包水型乳液。
3)将该水包水型乳液加入微射流高压均质机中,通过递增压力的方式处理三次(压力依次为1000bar、1200bar和1400bar),再用孔径100nm的超微滤膜过滤,得到抗衰功效的组合物。
实施例3
一种具有皮肤抗衰功效的组合物,由以下重量份组分组成:
功效成分:有机锗8份、核糖核酸4份、卵磷脂5份、天然多糖3份、胶原0.5份,水余量:
上述的抗衰功效的组合物制备方法包括以下步骤:
1)将天然多糖与水混合,加热溶解,加入卵磷脂,加热分散,均质。
2)待温度降至40℃一下后,添加核糖核酸、胶原、有机锗,搅拌均匀,得到一个水包水型乳液。
3)将该水包水型乳液加入微射流高压均质机中,通过递增压力的方式处理三次(压力依次为1000bar、1200bar和1400bar),再用孔径100nm的超微滤膜过滤,得到抗衰功效的组合物。
为测定本发明抗衰功效的组合物在皮肤抗衰老方面的功效进行了细胞学和临床的实验研究,试验样品为实施例3的配方组成,具体实验如下:
1、MTT检测抗衰功效组合物对成纤维细胞活力的影响
(1)试验原理:MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
皮肤细胞受到UVB刺激后会产生大量活性氧簇ROS这些粒子因存在未配对的自由电子而具有很强的化学反应活性,包括超氧阴离子、过氧化氢(H2O2)、羟自由基等
(2)试验步骤:细胞按4x103/孔的密度接种于96孔板中,边缘孔不加细胞,只加无菌PBS,则每个实验组的重复孔为6个;在培养箱中培养,24h后待细胞状态稳定后按实验设计分组,对照组和UVB照射组只加对应体积的培养基,药物组(抗衰功效组合物)在UVB照射前2h加抗衰复合精华液预处理;UVB照射后,换新鲜培养基培养24小时从培养箱中取出96孔培养板,每孔加入20μL MTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。终止培养,小心吸去孔内培养液。每孔加入150μL二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
(3)试验结果:实验结果显示如表1,UVB照射组与对照组相比,细胞死亡率将近50%,在经过抗衰组合物处理后细胞数量增加且在抗衰功效组合物终浓度为0.1-3ug/ml范围内,细胞数量与抗衰组合物浓度成正比。
表1
2、抗衰功效组合物对H2O2损伤皮肤成纤维细胞MDA的影响
(1)试验原理:MDA(丙二醛)是细胞脂质过氧化反应的重要产物之一,通过测试MDA可以反应细胞脂质过氧化程度,MDA越多说明细胞损伤越严重。
(2)试验步骤:将生长状态良好的细胞消化后以2x105/孔的密度接种于6孔板中;待细胞长满70%-80%后,按实验设计分组;消化细胞,离心去上清后用400μL双蒸水反复冻融细胞裂解细胞;离心取上清按MDA试剂盒说明书进行测定。
(3)试验结果:测试结果如图1所示,H2O2组比对照组MDA高28%,抗衰功效组合物比对照组MDA高12%,提示H2O2损伤情况下细胞受到脂质过氧化损伤,抗衰功效组合物能够提高细胞抗氧化能力,减轻细胞受脂质过氧化损伤。
3、抗衰功效组合物液对细胞外基质分泌和降解功能的影响
(1)试验原理:MMPs是一种胶原酶,能够分解Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型胶原以及细胞外基质。成纤维细胞在UVB照射下MMPs表达增加,转录成为MMPs蛋白会降解胶原蛋白,加速细胞外基质分解引起皮肤老化。
(2)试验步骤:将细胞活力良好、増殖迅速的成纤维细胞以2x105/孔的密度接种到6孔板中,待细胞生长密度达到70%-80%后按实验设计将细胞分为对照组,UVB组和药物组(抗衰组合物)。UVB组和药物组在进行UVB照射时先弃掉培养皿中的旧培养基,用少量PBS覆盖照射以减少误差。UVB照射后对照组和UVB组尽用新鲜培养基孵育,药物组用含抗衰组合物的新鲜培养基孵育;
①基因水平:提取细胞总RNA,采用细胞总RNA提取试剂盒(艾伟迪生物)提取总RNA,按反转录试剂盒进行cDNA合成,将反转录cDNA的通过荧光定量PCR技术检测MMP-1、MMP-2、MMP-9等mRNA的表达量的变化如图2
②蛋白水平:细胞总蛋白提取,首先收集细胞采用RIPA细胞裂解液裂解,离心获得细胞总蛋白,其次将总蛋白进行SDS-PAGE电泳,Western Blot检测I型胶原蛋白和弹性蛋白的表达。
(3)试验结果:实验结果如图2显示,在基因水平上UVB照射组成纤维细胞的MMP-1、MMP-2、MMP-9表达明显高于正常对照组,而抗衰组合物组细胞MMP-1、MMP-2、MMP-9表达较UVB照射组低,但仍高于对照组。在蛋白质水平Western Blot显示抗衰功效组合物可增加I型胶原和弹性蛋白的表达。
为测试本发明抗衰组合物的功效,进行了临床实验研究,以下展示试用实施例2的临床实验数据:
临床试验1皮肤保湿测试
(1)试验方法:临床试验分别征求30名自愿者对含有抗衰组合物的产品进行测试;志愿者30名女性(年龄25-65岁)分成对照组和测试组;受试者按照要求在手臂标记点使用样品,产品使用频率为2次/天;分别在产品使用0天、14天、28天,用多功能皮肤测试仪MPA10探头测定受试者标记点水分含量变化,来评价抗衰功效组合物对皮肤保湿作用的影响。
(2)试验结果:由图3柱状图可知,与使用测试产品前相比较,使用14天后,志愿者保湿效果得到提升,而在28天的测试结果中可看到志愿者保湿能力出现较为明显的升高,说明抗衰组合物能够通过锁住水分和吸收外界水分来达到保湿效果,能够增加皮肤水分含量起到良好的保湿作用。
临床试验2皮肤抗皱效果测试
(1)试验方法:征召年龄在25至50的健康女性志愿者30名,检测并记录试验者面部情况。本测试要求试验者停止使用其他护肤品,产品使用频率为2次/天;分别在产品使用0天、14天、28天利用VISIA皮肤检测仪对志愿者的脸部皱纹进行测定。
(2)试验结果:由图4柱状图可知,与使用测试产品前相比较,使用14天后,志愿者脸部皱纹面积占比相比使用前降低,而在28天的测试结果中可看到志愿者脸部皱纹面积占比出现较为明显的降低,较初始值降低了30.6%,说明抗衰组合物能够通过抑制皮肤MMPs降解作用,释放皮肤组织中的胶原蛋白与弹性蛋白,提升皮肤紧致性,具有淡化皱纹功效。
上述说明示出并描述了本发明的优选实施例,如前所述,应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围,则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (6)
1.一种具有抗衰功效的组合物,其特征在于:其为纳米微乳液形态,组份包括:有机锗、核糖核酸、卵磷脂、天然多糖、胶原和水,各组份经过高压微射流法制备得到。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗衰功效的组合物,其特征在于:由以下重量份的组分组成:
有机锗:0.01~10份;
核糖核酸:0.01~10份;
卵磷脂:0.01~20份;
天然多糖:0.01~10份;
胶原:0.01~10份;
水:余量。
3.根据权利要求2所述的一种具有抗衰功效组合物,其特征在于:由以下重量份的组分组成:
有机锗:0.5~6份;
核糖核酸:0.5~6份;
卵磷脂:0.5~15份;
天然多糖:0.5~6份;
胶原:0.05~4份;
水:余量。
4.根据权利要求3所述的一种具有抗衰功效的组合物,其特征在于:由以下重量份的组分组成:
有机锗:0.8~5份;
核糖核酸:0.8~5份;
卵磷脂:0.8~10份;
天然多糖:0.8~5份;
胶原:0.1~2份;
水:余量。
5.根据权利要求4所述的一种具有抗衰功效的组合物,其特征在于:所述纳米微乳液的粒径为20~80nm。
6.如权利要求1-5任意一项所述的一种具有抗衰功效的组合物的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)将天然多糖与水混合,加热溶解,加入卵磷脂,加热分散,均质;
2)待温度降至40℃以下后,添加核糖核酸、胶原、有机锗,搅拌均匀,得到一个水包水型乳液;
3)将该水包水型乳液加入微射流高压均质机中,通过递增压力的方式处理三次,压力依次为1000bar、1200bar和1400bar,再用孔径100nm的超微滤膜过滤,得到所述具有抗衰功效的组合物。
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