CN111329851A

CN111329851A - 阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用

Info

Publication number: CN111329851A
Application number: CN202010210820.9A
Authority: CN
Inventors: 马鹏程; 李弘扬; 王程
Original assignee: Institute of Dermatology and Skin Disease Hospital of CAMS
Current assignee: Institute of Dermatology and Skin Disease Hospital of CAMS
Priority date: 2018-06-08
Filing date: 2018-07-11
Publication date: 2020-06-26
Also published as: CN108670963A

Abstract

阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用。特别是指在制备预防或治疗淋巴瘤、白血病和多发性骨髓瘤药物中的应用。所述的抗增殖药物是指其他与阿达帕林不发生拮抗作用的抗增殖药物。其他药物包括：红霉素、甲氨蝶呤、环磷酰胺、米托蒽醌、依托泊苷、阿糖胞苷、长春新碱、利妥昔单抗、硼替佐米、那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、卡非佐米、达雷木单抗、埃罗妥珠单抗、帕比司他、氮芥、长春碱、依托泊苷、多柔比星、博来霉素、长春碱和达卡巴嗪、丙卡巴肼和泼尼松。本发明是一个具有明显抗血液系统肿瘤活性的药物，并为血液系统肿瘤的治疗提供新的用药选择。

Description

阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及阿达帕林和其他与该药物不发生拮抗作用的抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，特别是阿达帕林治疗淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤中的新用途。

背景技术

细胞异常增殖性疾病是世界范围内的公共健康问题，我国作为人口大国，包括癌症在内的细胞异常增殖性疾病患者呈现逐年增加的发展趋势。尽管目前国内外在相关新药研发领域的投入越来越多，药物治疗的选择也呈多样化的发展，但目前临床上细胞毒类药物仍然是治疗细胞异常增殖性疾病的主力军。维A酸类药物应用于临床多年，该类药物主要通过激活维A酸受体（retinoid acid receptor，RAR）及维A酸X受体（retinoid Xreceptor，RXR）而发挥作用，具有体外抑制多种类型细胞增殖、诱导细胞分化和凋亡的作用，同时在临床治疗血液系统疾病和实体瘤方面也取得了一定的研究成果，如全反式维甲酸广泛应用于急性早幼粒白血病的临床治疗，疾病缓解率高，不良作用少；贝扎罗汀是美国FDA批准首个用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤的维A酸类药物。

阿达帕林是第三代合成的维A酸类药物，临床上其主要用于寻常型痤疮的局部治疗（美国专利US07642288B2）。此外，中国专利（CN 1642538A）授权阿达帕林可用于治疗痤疮、牛皮癣和角化症等。阿达帕林的抗肿瘤药效活性研究中，有文献报道发现，阿达帕林可通过诱导细胞G1期周期阻滞和凋亡发挥抗结直肠癌的作用（Adapalene inhibits theactivity of cyclin-dependent kinase 2 in colorectal carcinoma. Mol Med Rep.2015,12(5):6501-650）。此外，相关专利申报阿达帕林可用于部分实体瘤的治疗，包括肺癌、头颈癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、膀胱癌、大肠癌和胶质瘤等（CN 103961342 A、US20160113895A1和US20170181988A1）。

阿达帕林作为皮肤科常用药物，其前期研究或专利仅仅针对以痤疮为主的皮肤病和部分实体肿瘤的治疗。有文献表明，目前绝大多数维A酸类药物通过诱导G1期细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用。研究发现，阿达帕林不同于其他维A酸类药物，该药物可特异性诱导细胞周期阻滞于S期，引起细胞DNA断裂损伤，促进细胞凋亡。因此，阿达帕林在治疗血液系统肿瘤及皮肤纤维化等细胞异常增殖性疾病方面具有极大的治疗优势。因此，基于S期周期阻滞的作用机制，阿达帕林对于细胞异常增殖性疾病的治疗同样具有十分重要的临床意义。

发明内容

本发明是针对阿达帕林和其他与该药物不发生拮抗作用的抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，特别是阿达帕林预防或治疗淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤中的新用途。是阿达帕林基于S期阻滞药效用于预防或治疗血液系统肿瘤药物的一种新的医药用途。

完成上述发明任务的技术方案是：一种阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用。

所述的阿达帕林为：6-[3-(1-金刚烷基)-4-甲氧基苯基]-2-萘羧酸，或其盐单药或联合用于制备预防或治疗血液系统肿瘤药物的药物的新用途。

其中阿达帕林具有下列结构式：

所述阿达帕林包括阿达帕林的盐。

阿达帕林发挥预防或治疗作用是基于该药物诱导的细胞S期周期阻滞作用而发挥。

其中，阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用特别是指：阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤的药物中的应用。

阿达帕林在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用中，用药剂量可根据用药途径、患者年龄、体重、体表面积、疾病类型和严重程度等变化而选择，注射用推荐剂量为100mg/m²，口服推荐剂量为10mg/Kg，外用制剂推荐规格为0.1%，每日一次。

阿达帕林和其他与阿达帕林不发生拮抗作用的抗增殖药物联合用于治疗是指：

阿达帕林用于治疗白血病，其他药物主要包括柔红霉素、甲氨蝶呤、环磷酰胺、米托蒽醌、依托泊苷、阿糖胞苷、长春新碱、利妥昔单抗和硼替佐米等。

阿达帕林用于治疗多发性骨髓瘤，其他药物主要包括来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、卡非佐米、达雷木单抗、埃罗妥珠单抗、帕比司他等。

阿达帕林用于治疗淋巴瘤，其他药物主要包括氮芥、长春碱、依托泊苷、多柔比星、博来霉素、长春碱和达卡巴嗪、丙卡巴肼和泼尼松等。

药效学实验表明，与其他维A酸类药物药物相比，阿达帕林对肿瘤细胞的生长抑制作用最强，且该作用具有浓度依赖性；此外，阿达帕林作用多种不同的细胞IC₅₀均较低，包括黑素瘤A375和M14细胞、磷状细胞癌SCC-9细胞、皮肤T细胞淋巴瘤Hut78细胞、白血病U937细胞和人瘢痕疙瘩成纤维细胞，表明该药物具有较强的抗肿瘤活性；随药物浓度增加，阿达帕林明显诱导黑素瘤细胞数量减少及形态改变；阿达帕林显著抑制黑素瘤细胞的克隆形成；阿达帕林诱导细胞周期阻滞于S期，并明显诱导细胞凋亡发生。以上结果证明，阿达帕林通过特异性诱导细胞周期S期阻滞及凋亡等作用，在黑素瘤、鳞状细胞癌、皮肤T细胞淋巴瘤、白血病、瘢痕疙瘩和硬皮病等疾病中发挥治疗作用。

阿达帕林可以和药学上允许的任意一种辅料制成药物制剂，这些制剂可以是药学上允许的任意一种剂型，包括但不限于片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、注射剂、胶囊剂和脂质体等。也可以和其他与阿达帕林不发生拮抗作用的抗增殖药物联合用于治疗细胞异常增殖性疾病。阿达帕林的用量可根据用药途径、患者年龄、体重、体表面积、疾病类型和严重程度等变化而选择，可以一次或多次施用。

阿达帕林被制成片剂或胶囊，辅料选自淀粉，糊精，酒石酸和硬脂酸镁，其中片剂带有包衣，包衣液为欧巴代的乙醇溶液；阿达帕林被制成颗粒剂，辅料选自微晶纤维素，蔗糖粉，羧甲基淀粉钠，乳糖，阿斯巴甜，橘子香精，十二烷基硫酸钠和 3％聚维酮的30％乙醇液等；阿达帕林被制成软胶囊，药液辅料为大豆油，胶囊壳辅料选自明胶、甘油和蒸馏水等；阿达帕林被制成乳膏制剂，辅料选自维生素E，二甲基亚砜，β-环糊精，十二烷基硫酸钠，十八醇，白凡士林，液状石蜡，尼泊金乙酯，甘油，单硬脂酸甘油酯，对氯间甲苯酚，十六醇，十八醇，单硬脂酸甘油酯，平平加O-20，司盘-60，丙二醇，苯甲醇和蒸馏水；阿达帕林被制成凝胶制剂，辅料选自二甲基亚砜，丙二醇，乙醇，卡波姆，三乙醇胺，羟苯乙酯，PEG400，己二醇，Tween-80，苯甲醇和蒸馏水等；阿达帕林被制成溶液制剂，辅料选自二甲基亚砜，丙二醇，乙醇，N，N-二甲基甲酰胺，2，6-二叔丁基对甲酚，丁基羟基茴香醚，羟苯乙酯和蒸馏水等；阿达帕林被制成注射剂，辅料选自氯化钠、葡萄糖、盐酸、枸橼酸、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和硫代硫酸钠、三氯叔丁醇、苯酚、如苯甲醇、甘露醇、山梨醇等。

本发明的有益效果：

本发明研究发现阿达帕林明显抑制皮肤系统肿瘤、血液系统肿瘤和皮肤纤维化疾病相关细胞的增殖，并诱导细胞S期阻滞和细胞凋亡作用，是一个具有明显抗细胞异常增殖性疾病活性的药物，并为血液系统肿瘤和皮肤纤维化等疾病的治疗提供新的用药选择。

表1阿达帕林对黑素瘤、磷状细胞癌、皮肤T细胞淋巴瘤、白血病、和人瘢痕疙瘩成纤维细胞等细胞作用72h的时IC₅₀值：

表1.

附图说明

图1-A、图1-B是五种维A酸类药物全反式维A酸、异维A酸、阿维A、贝扎罗汀和阿达帕林对黑素瘤A375和M14细胞作用72h的增殖抑制作用的比较。

图2-A、图2-B、图2-C、图2-D、图2-E、图2-F分别是阿达帕林对黑素瘤、磷状细胞癌、皮肤T细胞淋巴瘤、白血病和人瘢痕疙瘩成纤维细胞等细胞作用72h的增殖抑制作用。

图3是阿达帕林作用于黑素瘤A375和M14细胞48h后细胞生长及形态变化情况。

图4是阿达帕林对黑素瘤A375和M14细胞的克隆形成的影响。

图5-A、图5-B、图5-C分别是阿达帕林对黑素瘤A375和M14细胞的细胞周期的影响。

图6是阿达帕林对黑素瘤A375和M14细胞的细胞凋亡的影响。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的阐述：

实施例1 维A酸类药物抗细胞增殖作用比较。

本实验中采用MTT法，具体操作如下：①使用EDTA胰酶消化处理生长状态良好并处于对数期生长的肿瘤细胞，终止消化后混匀，制成细胞悬液。②取20 μl体积的细胞悬液进行计数，并稀释至（1-2）×10⁴个/ml。③将准备好的细胞悬液转移至96孔板中，180 μl/孔，置于细胞培养箱中培养。④待细胞孵育过夜至完全贴壁后，以每孔20 μl的体积加入受试药物，每组浓度设3个平行孔，然后继续培养72小时。⑤将5 mg/ml MTT溶液加入到96孔板中，20 μl/孔，37℃孵箱中反应4小时。⑥弃尽培养板中的溶液，向每孔中加入适当体积的DMSO溶液，并置于振荡器上振摇5分钟，待甲臢完全溶解后，使用酶标仪在570 nm波长处检测各孔的吸光度值。⑦以溶剂孔为对照，计算各给药浓度条件下的细胞生长抑制率，药物对细胞的生长抑制率计算公式如下：细胞抑制率（%）=（1-药敏组OD/对照组OD）×100%。

分析：根据图1-A和图1-B，五种维A酸类药物中，不同浓度的全反式维A酸、异维A酸和贝扎罗汀对黑素瘤细胞A375和M14的增殖抑制作用较弱，阿维A的增殖抑制作用较强，但不呈浓度依赖性趋势，其中阿达帕林的细胞增殖抑制作用最强，并呈浓度依赖性趋势。因此证明，阿达帕林在黑素瘤细胞中可发挥抗肿瘤作用。

实施例2 阿达帕林在多种不同的肿瘤细胞中的IC₅₀：

本实验在贴壁细胞A375、M14、SCC-9和人瘢痕疙瘩成纤维细胞中采用MTT法考察阿达帕林的抗细胞增殖作用，悬浮细胞HuT-78和U937采用CCK8法考察阿达帕林的抗细胞增殖作用，CCK8法具体操作如下：①细胞计数，制备浓度为2×10⁴个/ml的细胞悬液。②以180 μl/孔体积转移至96孔板中，置于细胞培养箱中培养。③过夜后，以每孔20 μl的体积加入受试药物，每组浓度设3个平行孔，然后继续培养72小时。④将CCK8溶液加入到96孔板中，20 μl/孔，37℃孵箱中反应2小时。⑤使用酶标仪在450 nm波长处检测各孔的吸光度值。⑥以溶剂孔为对照，计算各给药浓度条件下的细胞生长抑制率，药物对细胞的生长抑制率计算公式如下：细胞抑制率（%）=（1-药敏组OD/对照组OD）×100%。

分析：根据图2-A到图2-F和表1，阿达帕林作用于黑素瘤细胞A375的IC₅₀为3.95±0.19μM，作用于黑素瘤细胞M14的IC₅₀为1.89±0.22μM，作用于口腔磷状上皮肿瘤SCC-9细胞的IC₅₀为7.62±0.72μM，作用于皮肤T细胞淋巴瘤HuT-78细胞的IC₅₀为0.72±0.26μM，作用于人组织细胞淋巴瘤细胞U937的IC₅₀为7.17±1.37μM，作用于人瘢痕疙瘩成纤维细胞的IC₅₀为21.14±10.24μM。总之，阿达帕林在上述细胞中的IC₅₀较低，阿达帕林在黑素瘤、磷状细胞癌、人皮肤T细胞淋巴瘤和白血病等类型的细胞中均能发挥较强的抗肿瘤作用，且对人瘢痕疙瘩通过抑制成纤维细胞的增殖而发挥治疗作用。

实施例3 阿达帕林对黑素瘤细胞数量及形态的影响：

本实验采用倒置相差显微镜考察阿达帕林对细胞数目及形态的影响。取对数生长期的A375和M14细胞，细胞计数后，以每孔30×10⁴个细胞的密度均匀接种到六孔板中，过夜贴壁培养后，加入终浓度为2.5 μM、5μM和10μM 的阿达帕林，以未加药物的细胞作为阴性对照组。给药后培养48h 后，在倒置相差显微镜下观察细胞密度及形态学变化并照相。

分析：根据图3所示，与对照组相比，随着阿达帕林药物浓度的提高，A375细胞间隙变大，数量减少，细胞形态伸展为梭形，且死细胞明显增多；M14细胞经阿达帕林处理后，细胞密度明显下降，细胞形态呈现明显拉丝。因此阿达帕林具有较强的细胞增殖抑制作用，并诱导细胞损伤及凋亡发生。

实施例4 阿达帕林对黑素瘤细胞克隆形成的影响：

本实验采用克隆形成法考察了阿达帕林对黑素瘤细胞克隆形成的影响，操作如下：①取生长状态良好且处于对数生长期的肿瘤细胞，使用0.25% 的EDTA胰酶消化细胞后，制成细胞悬液。②取20 μl体积的细胞悬液计数，并稀释至5000个/ml。③将稀释后的细胞悬液以200 μl体积转移于六孔板中，每孔接种约1000个细胞，充分晃匀后再置于细胞培养箱中培养。④待细胞孵育过夜至完全贴壁，用新鲜的完全培养基换液处理，并加入受试药物，待药物作用48h后，弃尽含受试药物的培养基。⑤更换新鲜的完全培养基，继续培养细胞7天。期间密切观察克隆形成情况，待细胞形成肉眼可见的克隆时（一般含有细胞数不少于50个），终止细胞培养。⑥弃除培养基，用预冷的PBS溶液润洗细胞两遍后，加入4%的多聚甲醛溶液固定细胞15分钟。⑦弃掉固定液，再用PBS溶液润洗细胞两遍，并加入0.1%的结晶紫染色液处理15分钟，以流水缓慢清洗染色液，并将培养板倒扣于吸水纸上以便吸干板中水分。⑧将培养板放置于凝胶成像系统中，利用可见光进行拍摄，保存扫描的图像，最后并使用IPP6.0软件进行计数。

分析：根据图4，与对照组相比，A375及M14细胞分别经阿达帕林处理后，细胞克隆形成数目显著减少，并呈现浓度依赖性趋势。因此证明，阿达帕林可通过抑制黑素瘤细胞的克隆形成而发挥抑制黑素瘤细胞增殖的作用。

实施例5 阿达帕林对黑素瘤细胞周期分布的影响：

本实验采用PI单染法考察阿达帕林对黑素瘤细胞周期分布的影响。步骤如下：①取生长状态良好的黑素瘤细胞，以每孔3×10⁵个细胞的密度将细胞转移至六孔培养板中，待细胞孵育过夜并完全贴壁后，加入阿达帕林继续培养48h。②作用相应时间后，弃尽培养基，并用预冷的PBS溶液润洗细胞，EDTA胰酶溶液消化细胞，终止消化所得细胞悬液以1000 rpm/min的条件离心5分钟。③所得细胞沉淀用PBS重悬，并在相同的条件下离心，弃去上清液。④首先加入200 μl 三蒸水快速混悬细胞后，再加入800 μl冰浴预冷的90%乙醇吹打混匀，并于4℃固定过夜。⑤1000 rpm/min条件下离心5分钟，弃除固定液，加入1 ml预冷的PBS溶液重悬并清洗细胞，离心后弃去上清。⑥每个样品中加入0.5 ml PI染色液重悬细胞，37℃避光孵育30分钟。染色完成后，使用流式细胞仪直接进行周期分布检测。

分析：根据图5-A到图5-C，阿达帕林作用A375细胞48h后，2.5 μM、5 μM和10 μM阿达帕林处理后的S期细胞比例分别为27.22%、51.26%和100%，阿达帕林作用M14细胞48h后，2.5 μM、5 μM和10 μM阿达帕林处理后的S期细胞比例分别为25.48%、59.05%和100%。因此证明，阿达帕林可通过诱导黑素瘤细胞阻滞于S期而发挥抗肿瘤作用。

实施例6 阿达帕林对黑素瘤细胞凋亡的诱导作用：

本实验采用AnnexinV/PI法考察阿达帕林对细胞凋亡的诱导作用。操作如下：①取生长状态良好的黑素瘤细胞，计数后以每孔3×10⁵个的密度将细胞转移至六孔培养板中，待细胞孵育过夜且完全贴壁后，加入阿达帕林作用48小时。②弃尽培养基，再用预冷的PBS润洗细胞，在无EDTA的胰酶的作用下消化细胞，终止后所得悬液以1000 rpm/min的条件离心5分钟，然后弃尽上清液，再以PBS重悬细胞。③相同条件下离心，取细胞沉淀，以500 μl 1×Binding Buffer吹散细胞，每组样品中再分别加入5 μl Annexin V和5 μl PI染色液。④混匀后，避光静置15分钟，且在1小时内完成所有检测。

分析：根据图6所示，阿达帕林作用A375细胞48h后，2.5 μM、5 μM和10 μM阿达帕林处理后的细胞凋亡比例分别为2.98%、19.33%和53.33%，阿达帕林作用M14细胞48h后，2.5 μM、5 μM和10 μM阿达帕林处理后的细胞凋亡比例分别为22.06%、51.86%和53.50%。因此证明，阿达帕林可通过诱导黑素瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。

Claims

1.阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的阿达帕林包括阿达帕林的盐。

3.根据权利要求1所述的阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，其特征在于，其中血液系统肿瘤是指：淋巴瘤、白血病和多发性骨髓瘤。

4.根据权利要求1所述的阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗增殖药物是指其他与阿达帕林不发生拮抗作用的抗增殖药物。

5.根据权利要求1所述的阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗增殖药物是指其他与阿达帕林不发生拮抗作用的抗增殖药物是指：

阿达帕林用于治疗白血病，其他药物包括：红霉素、甲氨蝶呤、环磷酰胺、米托蒽醌、依托泊苷、阿糖胞苷、长春新碱、利妥昔单抗和硼替佐米；

阿达帕林用于治疗多发性骨髓瘤，其他药物包括：那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、卡非佐米、达雷木单抗、埃罗妥珠单抗、帕比司他；

阿达帕林用于治疗淋巴瘤，其他药物包括：氮芥、长春碱、依托泊苷、多柔比星、博来霉素、长春碱和达卡巴嗪、丙卡巴肼和泼尼松。

6.根据权利要求1述的阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，其特征在于，阿达帕林在生产预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用中，用药剂量可根据用药途径、患者年龄、体重、体表面积、疾病类型和严重程度等变化而选择，注射用推荐剂量为100mg/m²，口服推荐剂量为10mg/Kg，外用制剂推荐规格为0.1%，每日一次。

7.根据权利要求1-6中所述的阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，其特征在于，阿达帕林和药学上允许的任意一种辅料制成药物制剂，这些制剂是药学上允许的任意一种剂型，包括但不限于片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、注射剂、胶囊剂和脂质体。

8. 根据权利要求7述的阿达帕林和抗增殖药物联合在制备预防或治疗血液系统肿瘤药物中的应用，其特征在于，阿达帕林被制成片剂或胶囊，辅料选自淀粉，糊精，酒石酸和硬脂酸镁，其中片剂带有包衣，包衣液为欧巴代的乙醇溶液；阿达帕林被制成颗粒剂，辅料选自微晶纤维素，蔗糖粉，羧甲基淀粉钠，乳糖，阿斯巴甜，橘子香精，十二烷基硫酸钠和 3％聚维酮的30％乙醇液；阿达帕林被制成软胶囊，药液辅料为大豆油，胶囊壳辅料选自明胶、甘油和蒸馏水等；阿达帕林被制成乳膏制剂，辅料选自维生素E，二甲基亚砜，β-环糊精，十二烷基硫酸钠，十八醇，白凡士林，液状石蜡，尼泊金乙酯，甘油，单硬脂酸甘油酯，对氯间甲苯酚，十六醇，十八醇，单硬脂酸甘油酯，平平加O-20，司盘-60，丙二醇，苯甲醇和蒸馏水；阿达帕林被制成凝胶制剂，辅料选自二甲基亚砜，丙二醇，乙醇，卡波姆，三乙醇胺，羟苯乙酯，PEG400，己二醇，Tween-80，苯甲醇和蒸馏水；阿达帕林被制成溶液制剂，辅料选自二甲基亚砜，丙二醇，乙醇，N，N-二甲基甲酰胺，2，6-二叔丁基对甲酚，丁基羟基茴香醚，羟苯乙酯和蒸馏水；阿达帕林被制成注射剂，辅料选自氯化钠、葡萄糖、盐酸、枸橼酸、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和硫代硫酸钠、三氯叔丁醇、苯酚、如苯甲醇、甘露醇、山梨醇。