CN111303082A - 一种高纯度奥利司他的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种高纯度奥利司他的制备方法，本发明对与处理后的奥利司他发酵液经pH处理、大孔树脂过滤、柱层析过滤以及超滤四步完成对奥利司他发酵液的全处理过程，本发明通过合理设置工艺参数，完成对奥利司他的逐步制备，显著提升奥利司他产品的纯度，最大限度地提高了奥利司他的生产效率从而实现了高纯奥利司他的产业化生产。

Description

一种高纯度奥利司他的制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种高纯度奥利司他奥利司他的制备方法。

背景技术

奥利司他的化学名：N-甲酰-L-亮氨酸（s）-1[（2s，3s）3-己基-4氧基-2-环氧丙基甲基] 十二酯，也称四氢脂抑素（THL），是一种半合成的脂抑素衍生物，结构式如下：

奥利司他为白色至类白色的结晶性粉末，是一种脂溶性物质，在生理性pH的水中的溶解度很低，是一种脂肪酶抑制剂，由于它具有较低的熔点，大约44℃，会因水解或热 而降解，特别是贮存于潮湿的空气或65℃以上的潮湿空气中，其在体外内均抗具有各种脂肪酶如脂蛋白脂肪酶，胰腺甘油三酸脂脂肪酶和脂肪酸的合成酶的活性，使来自饮食中甘油 三酸酯不能被水解成易吸收的自由脂肪酸，从而使其不被吸收而排泄出体外。

目前以奥利司他为主要活性成分上市的减肥药物有鲁南制药集团山东新时代药业生产的含主药120mg和60mg的处方药“舒尔佳”。

随着奥利司他制备工艺的逐步提升，高纯度的奥利司他逐渐成为市场产品的主流，介于高纯度奥利司他在产品安全性以及产品稳定方法存在优势，因此近年来研究者不断追求的新的研究思路，提升奥利司他的纯度。

专利CN201610920367公开了一种奥利司他的制备方法，该方法通过过滤、离心、液相色谱分离、浓缩、干燥，通过采用固定规格的球形硅胶实现奥利司他的分离，该方法所得产品纯度达到99.5%。

公开号为CN97109732.1、发明名称为《生 产脂抑制素和四氢脂制素的方法》的中国专利申请， 催化氢化制得的奥利司他粗品均使用以硅胶为载体的低压柱层析进行制备。

发明US4,598,089中，分别有用到以硅胶为载体、氯仿为洗脱液进行的硅胶过滤层

析， 以硅胶为载体及以己烷、乙酸乙酯或己烷-乙酸乙酯混合溶液为洗脱液进行的低压柱层析，以非极性的反相硅胶为载体、以甲醇等极性溶剂为洗脱液的低压反相柱层析等制备方式。 该法因需进行多次柱层析及反复结晶， 制备效率及收率均比较低， 且设备不适合业放大，每批产能十分有限。

发明US4,598,089分别优选使用默克公司的低压柱(RP-8，Size C)，批处理量仅为毫克级；使用默克公司Gel60硅胶、规格为φ10cm×100cm的层析柱批制备处理量亦只达到克级， 收率约为20％～30％。

公开号为CN1266058、发明名称为《一制胰脂菌素的提纯方法》的中国专利申请通过使用与利普司他汀双流萃取相同的溶剂溶解奥利司他粗品进行结晶来分离提纯， 优的溶剂为己烷或庚烷。 该法较之前采用的低压硅胶柱层析制备法相比较， 虽易于放大，批处理量也有大幅提高， 收率可达75％以上， 但纯度仅为90％～97％， 远远达不到近年不断提高的临床用药质量标准要求(目前国内奥利司他原料药质量标准要求经HPLC检验纯度需达99.0％以上，且单杂＜0.2％、总杂质＜1.0％、含量98.0％以上，较之前的仅要求纯度达97％～98％即可上市又有了较大提高)

专利号为CN1763021、发明名称为《一种提纯奥利司他的方法》的专利申请， 对于催化氢化后的奥利司他样品仍采用以结晶为主的制备制备方式，但是制备样品含量要求为85％，制备后产品纯度仅为98.5％左右，单个杂质高达0.5％，制备效率较低。

公开号为CN101948450A、发明名称为《一种生产制备奥利司他的方法》 的中国专利申请亦仍采用普通硅胶柱与反复结晶相结合的方式进行制备， 操作步骤简易程度、放大线性及收率均仍有待进一步提高。

因此，目前缺乏一种制备工艺简单，制备效率高的方法来制备奥利司他。

发明内容

为提升奥利司他产品纯度，提搞制备效率，本发明提供一种操作简单、制备效率高，所得产品纯度高的奥利司他制备工艺，主要采用如下的技术方案：

本发明提供一种奥利司他的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1）将奥利司他发酵液调节pH至弱碱性、过滤；

2）将步骤1）得到的滤液调节至酸性后通过大孔吸附树脂，依次用水、极性溶剂洗脱，分段收集极性溶剂洗脱液；

3) 将步骤2）得到的极性洗脱液过滤，滤液通层析柱分离，层析柱的洗脱液为水/有机溶剂混合体系；分段收集洗脱液；8.

4）将步骤3）得到的洗脱液通过超滤膜超滤，得到超滤液，浓缩得到奥利司他。

其中步骤2）所述极性溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷以及异丙醇，其中优先为乙腈。

另外步骤2）所述酸性是指溶液体系为弱酸性溶液环境，经调整pH为6.0-7.0。

优选地，步骤2）所述大孔吸附树脂型号为D101、DA201、JD-1、FX-06。

优选地，步骤3）所述水/有机溶剂混合体系中，有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮及乙腈中的一种或多种，其中混合体系中有机溶剂的质量分数设置为80-95%。

优选地，步骤3）所述极性洗脱液过滤前用活性炭脱色，活性炭脱色温度为15-30℃。

优选地，步骤4）所述超滤膜的的截留分子量为100~5000，优先截留分子量为1000。

优选地，步骤4）所述超滤步骤的超滤温度为10-25℃。

优选地，步骤4）所述超滤步骤采用的超滤装置为管式、板式或卷式过滤装置。

优选地，步骤4）所述超滤步骤采用正压过滤方式。

本发明的有益效果在于：

本发明提供一种奥利司他制备的新方法，通过采用树脂吸附、溶剂洗脱以及超滤膜过滤的形式显著提升奥利司他产品的纯度，并且提升单位时间内的过滤的效率。利用超滤的形式过滤一方面显著提升了产品的质量，另一方面减少过滤液中杂质的残留，洗脱液可以循环利用，显著降低奥利司他制备的成本。

具体实施方式

以下将对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

1）将50L预处理后的奥利司他发酵液（纯度＜85%）用6%的氢氧化钠溶液调节至pH为8，开启搅拌将调节pH后的发酵液20min，维持温度为20℃，搅拌后的过滤发酵液，回收滤液。

2）将步骤1）过滤后的滤液用盐酸调节pH至6.4，通过D101大孔吸附树脂（购自天津允开树脂科技有限公司）分离，首先以水洗脱，然后用乙腈洗脱，乙腈洗脱过程中采用HPLC中控洗脱液的纯度，分段收集洗脱液，收集奥利司他段洗脱液。

3）向步骤2）所得奥利司他极性溶剂洗脱液中加入针用活性炭58g，控制洗脱温度为25℃，搅拌20分钟，脱色、过滤得澄清液。所得滤液通过硅胶柱层析过滤，柱层析的洗脱液的90%的乙醇水溶液，，按洗脱的先后顺序收集洗脱液，将所得洗脱液合并，HPLC中控产品纯度。

4）将步骤3）最终合并后的洗脱液在20℃下，经过截流分子量为 1000的超滤膜超滤，超滤装置（购自杭州凯洁膜分离技术有限公司）为管式装置，超滤过程给正压，连续进行得超滤液，超滤液浓缩、结晶、干燥得白色固体，HPLC测定固体纯度，所得产品纯度为99.7%，最大单杂小于0.05%，产品收率为92%。

实施例2

1）将25L预处理后奥利司他发酵液（纯度＜85%）用6%的氢氧化钠溶液调节至pH为8，开启搅拌将调节pH后的发酵液20min，维持温度为20℃，搅拌后的过滤发酵液，回收滤液。

2）将步骤1）过滤后的滤液用盐酸调节pH至6.5，通过FX-01大孔吸附树脂（购自天津允开树脂科技有限公司）分离，首先以水洗脱，然后用甲醇洗脱，甲醇洗脱过程中采用HPLC中控洗脱液的纯度，分段收集洗脱液，收集奥利司他段洗脱液。

3）向步骤2）所得奥利司他极性溶剂洗脱液中加入针用活性炭27g，控制洗脱温度为30℃，搅拌20分钟，脱色、过滤得澄清液。所得滤液通过硅胶柱层析过滤，柱层析的洗脱液的85的丙酮水溶液，，按洗脱的先后顺序收集洗脱液，将所得洗脱液合并，HPLC中控产品纯度。

4）将步骤3）最终合并后的洗脱液在15℃下，经过截流分子量为 2500的超滤膜超滤，超滤装置（购自杭州凯洁膜分离技术有限公司）为板式装置，超滤过程给正压，连续进行得超滤液，超滤液浓缩、结晶、干燥得白色固体，HPLC测定固体纯度，所得产品纯度为99.69%，最大单杂小于0.1%，产品收率为91.8%。

实施例3

1）将30L预处理后奥利司他发酵液（纯度＜85%）用6%的氢氧化钠溶液调节至pH为8，开启搅拌将调节pH后的发酵液20min，维持温度为20℃，搅拌后的过滤发酵液，回收滤液。

2）将步骤1）过滤后的滤液用盐酸调节pH至6.0，通过DA201大孔吸附树脂（购自天津允开树脂科技有限公司）分离，首先以水洗脱，然后用乙醇洗脱，乙醇洗脱过程中采用HPLC中控洗脱液的纯度，分段收集洗脱液，收集奥利司他段洗脱液。

3）向步骤2）所得奥利司他极性溶剂洗脱液中加入针用活性炭37g，控制洗脱温度为15℃，搅拌20分钟，脱色、过滤得澄清液。所得滤液通过硅胶柱层析过滤，柱层析的洗脱液的80%的乙醇水溶液，，按洗脱的先后顺序收集洗脱液，将所得洗脱液合并，HPLC中控产品纯度。

4）将步骤3）最终合并后的洗脱液在15℃下，经过截流分子量为 5000的超滤膜超滤，超滤装置（购自杭州凯洁膜分离技术有限公司）为管式装置，超滤过程给正压，连续进行得超滤液，超滤液浓缩、结晶、干燥得白色固体，HPLC测定固体纯度，所得产品纯度为99.7%，最大单杂小于0.1%，产品收率为90.5%。

对比实施例1

1）将50L预处理后的奥利司他发酵液（纯度＜85%）用6%的氢氧化钠溶液调节至pH为8，开启搅拌将调节pH后的发酵液20min，维持温度为20℃，搅拌后的过滤发酵液，回收滤液。

2）将步骤1）过滤后的滤液用盐酸调节pH至6.2，通过D101大孔吸附树脂（购自天津允开树脂科技有限公司）分离，首先以水洗脱，然后用甲醇洗脱，甲醇洗脱过程中采用HPLC中控洗脱液的纯度，分段收集洗脱液，收集奥利司他段洗脱液。

3）向步骤2）所得奥利司他极性溶剂洗脱液中加入针用活性炭55g，控制洗脱温度为25℃，搅拌20分钟，脱色、过滤得澄清液。所得滤液通过硅胶柱层析过滤，柱层析的洗脱液的80%的乙醇水溶液，，按洗脱的先后顺序收集洗脱液，将所得洗脱液合并，HPLC中控产品纯度，洗脱液降温、析晶、烘干，产品纯度为97.6%，收率为80.5%。

对比实施例2

1）将35L预处理后的奥利司他发酵液（纯度＜85%）用6%的氢氧化钠溶液调节至pH为8，开启搅拌将调节pH后的发酵液20min，维持温度为15℃，搅拌后的过滤发酵液，回收滤液。

2）将步骤1）过滤后的滤液用盐酸调节pH至5.5，通过JD-1大孔吸附树脂（购自天津允开树脂科技有限公司）分离，首先以水洗脱，然后用乙醇洗脱，乙醇洗脱过程中采用HPLC中控洗脱液的纯度，分段收集洗脱液，收集奥利司他段洗脱液。

3）向步骤2）所得奥利司他极性溶剂洗脱液中加入针用活性炭27g，控制洗脱温度为10℃，搅拌20分钟，脱色、过滤得澄清液。所得滤液通过硅胶柱层析过滤，柱层析的洗脱液的60的乙醇水溶液，，按洗脱的先后顺序收集洗脱液，将所得洗脱液合并，HPLC中控产品纯度。

4）将步骤3）最终合并后的洗脱液在20℃下，经过截流分子量为50000的超滤膜超滤，超滤装置（购自杭州凯洁膜分离技术有限公司）为管式装置，超滤过程给正压，连续进行得超滤液，超滤液浓缩、结晶、干燥得白色固体，HPLC测定固体纯度，所得产品纯度为94.7%%，最大单为2.1%，产品收率为66.8%。

对比实施例3

1）将40L预处理后的奥利司他发酵液（纯度＜85%）用6%的氢氧化钠溶液调节至pH为8，开启搅拌将调节pH后的发酵液20min，维持温度为20℃，搅拌后的过滤发酵液，回收滤液。

2）将步骤1）过滤后的滤液用盐酸调节pH至6.4，通过S-8大孔吸附树脂（购自天津允开树脂科技有限公司）分离，首先以水洗脱，然后用二氯甲烷洗脱，乙腈洗脱过程中采用HPLC中控洗脱液的纯度，分段收集洗脱液，收集奥利司他段洗脱液。

3）将步骤2）所得洗脱液在20℃下，经过截流分子量为 4000的超滤膜超滤，超滤装置（购自杭州凯洁膜分离技术有限公司）为板式装置，超滤过程给正压，连续进行得超滤液，超滤液浓缩、结晶、干燥得白色固体，HPLC测定固体纯度，所得产品纯度为95.8%，最大单杂为3.1%，产品收率为70.2%。

Claims (10)

1.一种高纯度奥利司他的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1）将奥利司他发酵液调节pH至弱碱性、过滤；

2）将步骤1）得到的滤液调节至酸性后通过大孔吸附树脂，依次用水、极性溶剂洗脱，分段收集极性溶剂洗脱液；

3) 将步骤2）得到的极性洗脱液过滤，滤液通层析柱分离，层析柱的洗脱液为水/有机溶剂混合体系；分段收集洗脱液；

4）将步骤3）得到的洗脱液通过超滤膜超滤，得到超滤液，浓缩得到奥利司他。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2）所述极性溶剂为丙酮、甲醇、乙醇或乙腈，其中优先为乙腈。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2）所述酸性是指pH为6.0-7.0。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2）所述大孔吸附树脂型号为D101、DA201、JD-1、FX-06。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3）所述水/有机溶剂混合体系中，有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮及乙腈中的一种或多种，混合体系中有机溶剂的质量分数为80-95%。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3）所述极性洗脱液过滤前用活性炭脱色，活性炭脱色温度为15-30℃。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4）所述超滤膜的的截留分子量为100~5000，优先截留分子量为1000。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4）所述超滤步骤的超滤温度为10-25℃。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4）所述超滤步骤采用的超滤装置为管式、板式或卷式过滤装置。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4）所述超滤步骤采用正压过滤方式。