CN111072468A - 提取莽草酸的方法和莽草酸提取物 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了提取莽草酸的方法及莽草酸提取物，该方法包括：(1)将含有莽草酸的发酵液进行膜过滤处理，以便得到第一处理液；(2)调节第一处理液至碱性，过滤并收集滤液，调节滤液至酸性，以便得到第二处理液；(3)将第二处理液进行脱盐和脱色处理，以便得到第三处理液；(4)将第三处理液进行结晶处理，并收集所得到的晶体；(5)将晶体溶解，并将溶解液加入到层析柱中，收集穿透液；(6)将穿透液与活性炭进行混合，过滤，收集滤液；(7)将滤液进行干燥处理，以便得到莽草酸提取物。利用本发明的方法可以获得高纯度的莽草酸提取物，纯度可高达99％。并且，该方法操作简便，生产成本低，可实现大规模生产应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域。具体地，本发明涉及提取莽草酸的方法和莽草酸提取物。
背景技术
莽草酸(3,4,5-3羟基-1-环己烯-1-羧酸)，英文名称：shikimic acid(SA)，是合成抗病毒药物磷酸奥司他韦(可威)的关键中间体。莽草酸为白色针状结晶，易溶于水，难溶于石油醚等有机溶剂，气味辛酸，熔点为185-187℃。莽草酸是生物体内芳香族氨基酸生物合成途径中的关键中间体，也是合成吲哚衍生物、生物碱、手性药物(如抗病毒药)的重要前体，具有广泛的药用价值。
莽草酸广泛存在于多种植物中，在木兰科植物八角茴香中含量较高，可达成熟干重的10％左右。野生八角中莽草酸含量较高，是很好的植物提取来源，所以现多采用可食用的中国八角进行工业提取。从植物中提取莽草酸方法简单，通过热水即可提取，如专利CN107721848公布的一种从八角中提取莽草酸的方法，该方法用纯净水加热提取，再进行柱层析和结晶，虽然能够从八角中制备得到莽草酸，但提取过程操作复杂，且受到原料来源的限制。随着制药工艺的不断升级，目前提取方法也变得多样化，在热水提取的基础上与化学法相结合，如形成络合物沉淀、微波辅助法、膜分离法、硅胶柱法等。但总体来说，从植物中提取莽草酸步骤繁琐，原料来源不稳定，常受产地气候等条件影响，并不利于工业上提高莽草酸产量。
近些年来，通过微生物发酵合成莽草酸的技术日趋成熟，但发酵液中存在着较多杂质，这些杂质限制了莽草酸的提纯与分离(如：蛋白、色素、无机盐和莽草酸结构类似物)，尤其是生物合成中难以避免产生的3-脱氢莽草酸(DHSA)，由于与莽草酸性质相近，分离十分困难。
专利JP2001026567公布了一种在碱性条件下，将3-脱氢莽草酸异构化为原儿茶酸等与莽草酸性质差异较大的物质，再通过强阴离子交换树脂吸附莽草酸，从而达到分离的方法，但是在该工艺中，脱氢莽草酸转化的内在机理不明确，已知物质的转化质量也不守恒，存在未知物质的生成，此外，最终得到的莽草酸含量偏低，仅为97％。又如专利JP2001258583公布的含有莽草酸的溶液经过碱处理后，利用强碱性阴离子树脂对莽草酸进行吸附来去除脱氢莽草酸的方法，但该方法中树脂载量过低，处理量仅为9.8g/L，造成的废水过多，污染环境。王慧等人报道了利用阴阳离子交换树脂共同制备莽草酸晶体的方法，晶体纯度可以达到98％，但由于是对莽草酸进行吸附解吸，因此需要较大体积的树脂，且同样存在着树脂处理量低、总收率低等问题，不具备产业化可行性。
因此，目前提取莽草酸的方法仍有待研究。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种提取莽草酸的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)将含有莽草酸的发酵液进行膜过滤处理，以便得到第一处理液；(2)调节所述第一处理液至碱性，过滤并收集滤液，调节所述滤液至酸性，以便得到第二处理液；(3)将所述第二处理液进行脱盐和脱色处理，以便得到第三处理液；(4)将所述第三处理液进行结晶处理，并收集所得到的晶体；(5)将所述晶体溶解，并将溶解液加入到层析柱中，收集穿透液；(6)将所述穿透液与活性炭进行混合，过滤，收集滤液；(7)将所述滤液进行干燥处理，以便得到莽草酸提取物。
发明人发现，预先对经膜过滤处理的发酵液进行碱处理除杂、脱盐和脱色处理以及结晶处理，可以有效地除去大部分蛋白、色素、无机盐和脱氢莽草酸，经此一系列处理所得到的结晶溶解液无需采用大量层析柱填充材料即可达到分离提取莽草酸的目的，并且，由于仅有少量莽草酸会吸附在层析柱上，大量莽草酸会直接穿透层析柱，因此，无需额外添加溶剂对层析柱进行洗脱。由此，根据本发明实施例的方法可以获得高纯度的莽草酸提取物，纯度可高达99％。并且，该方法操作简便，生产成本低，可实现大规模生产应用。
根据本发明的实施例，所述提取莽草酸的方法还可以具有下述附加技术特征：
根据本发明的实施例，所述膜过滤处理是采用孔径为0.1～1μm的微滤膜和截留量为200～1000Da的纳滤膜进行的。
根据本发明的实施例，步骤(2)中，利用碱调节所述第一处理液至pH值为8～10，过滤并收集滤液，利用酸液调节所述滤液的pH值为3～5。
根据本发明的实施例，步骤(3)中，所述第二处理液预先经过10～20倍浓缩，以便得到处理物；将所述处理物与有机溶剂和活性炭于40～60℃混合20～60分钟，过滤并收集滤液，以便进行脱盐和脱色处理，得到第三处理液。
根据本发明的实施例，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮或正丁醇，优选乙醇。
根据本发明的实施例，所述有机溶剂与所述处理物的体积比为(15～20)：1。
根据本发明的实施例，所述活性炭与所述处理物的质量体积比为1：(4～7)，单位为克/毫升。
根据本发明的实施例，步骤(4)中，采用乙酸对所述第三处理液进行结晶处理。
根据本发明的实施例，所述结晶处理是在5～15℃下静置40～50小时。
根据本发明的实施例，步骤(4)中，所述第三处理液预先经过5～8倍浓缩处理，以便得到浓缩液。
根据本发明的实施例，所述乙酸与所述浓缩液的体积比为(1～2)：1。
根据本发明的实施例，步骤(5)中，将所述溶解液于3～5BV/h的流速加入到层析柱中。
根据本发明的实施例，所述层析柱的填充物选自强碱性阴离子交换树脂。
根据本发明的实施例，所述层析柱的填充物添加量与所述溶解液的体积比为1：(2～20)，单位为克/毫升。
根据本发明的实施例，所述强碱性阴离子交换树脂的型号为717、D201或D301。
根据本发明的实施例，溶解所述晶体之前，用乙酸洗涤所述晶体，过滤并将晶体干燥。
根据本发明的实施例，步骤(6)中，所述活性炭与穿透液的质量体积比为1：(80～120)，单位为克/毫升。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种莽草酸提取物。根据本发明的实施例，所述莽草酸提取物是通过前面所述提取莽草酸的方法所获得的。由此，根据本发明实施例的莽草酸提取物纯度高，无有毒有害试剂残留，应用价值高。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明实施例的提取莽草酸方法的流程示意图；
图2显示了根据本发明实施例的透过液的液相色谱分析图；
图3显示了根据本发明实施例的调碱后处理液的液相色谱分析图；
图4显示了根据本发明实施例的脱盐和脱色后滤液的液相色谱分析图；
图5显示了根据本发明实施例的粗品的液相色谱分析图；
图6显示了根据本发明实施例的产品的液相色谱分析图；
图7显示了根据本发明对比例的粗品的液相色谱分析图；
图8显示了根据本发明对比例的产品的液相色谱分析图；
图9显示了根据本发明实施例的含有脱氢莽草酸的莽草酸提取物的红外图谱；
图10显示了根据本发明实施例的莽草酸红外图谱；
图11显示了根据本发明实施例的脱氢莽草酸红外图谱。
附图标记：
SA：莽草酸；DHS：脱氢莽草酸。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
本发明提出了提取莽草酸的方法及莽草酸提取物，下面将分别对其进行详细描述。
提取莽草酸的方法
在本发明的一个方面，本发明提出了一种提取莽草酸的方法。根据本发明的实施例，参见图1，该方法包括：S100膜过滤处理；S200调碱和调酸；S300脱盐和脱色处理；S400结晶处理；S500溶解晶体并加入到层析柱中；S600穿透液与活性炭混合；S700干燥处理。由此，根据本发明实施例的方法可以获得高纯度的莽草酸提取物，纯度可高达99％。并且，该方法操作简便，生产成本低，可实现大规模生产应用。
根据本发明的实施例，参见图1，该方法包括：
S100膜过滤处理
在该步骤中，将含有莽草酸的发酵液进行膜过滤处理，以便得到第一处理液。由此，以便除去菌种和蛋白等固形物。
根据本发明的实施例，膜过滤处理是采用孔径为0.1～1μm的微滤膜和截留量为200～1000Da的纳滤膜进行的。发明人发现，采用具有上述尺寸的微滤膜和纳滤膜，可以有效地除去菌体和蛋白等固形物。
S200调碱和调酸
在该步骤中，调节第一处理液至碱性，过滤并收集滤液，调节滤液至酸性，以便得到第二处理液。通过调节第一处理液至碱性，以便于使金属离子，如钙镁离子沉淀，再对经调碱处理的料液调酸，以便于使莽草酸以莽草酸分子的形式存在，避免形成莽草酸盐，从而有利于莽草酸析出结晶。
根据本发明的实施例，步骤S200中，利用碱调节第一处理液至pH值为8～10，过滤并收集滤液，利用酸液调节滤液的pH值为3～5。通过将第一处理液的pH值调节至8～10，以便高效去除金属离子，如钙镁离子。由于莽草酸的酸度系数为pH3.87，发明人发现，在pH值为3～5的溶液中，莽草酸基本不解离，以莽草酸分子的形式存在，避免形成莽草酸盐，有利于莽草酸析出结晶，提高收率。
S300脱盐和脱色处理
在该步骤中，将第二处理液进行脱盐和脱色处理，以便得到第三处理液。由此，以脱除无机盐类和色素，便于后续莽草酸结晶，并保证产品色泽良好。
根据本发明的实施例，步骤S300中，第二处理液预先经过10～20倍浓缩，以便得到处理物；将处理物与有机溶剂和活性炭于40～60℃混合20～60分钟，过滤并收集滤液，以便进行脱盐和脱色处理，得到第三处理液。预先将第二处理液进行10～20倍浓缩以除去水分和溶剂，然后利用无机盐和莽草酸在有机溶剂中的溶解度不同的特性，以除去无机盐。并且，利用活性炭的吸附特性以吸附除去色素。
根据本发明的实施例，有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮或正丁醇。无机盐在上述有机溶剂中的溶解度低，而莽草酸的溶解度高，因此，通过过滤可以除去不溶的无机盐，以达到脱盐目的。其中，乙醇效果较佳。
根据本发明的实施例，有机溶剂与处理物的体积比为(15～20)：1。由此，以便于莽草酸充分溶解于有机溶剂中，避免因有机溶剂添加量过少而导致莽草酸无法完全溶解而被过滤处理，造成莽草酸得率降低。
根据本发明的实施例，活性炭与处理物的质量体积比为1：(4～7)，单位为克/毫升。由此，以便于充分将处理物中的色素除去，避免影响后续结晶，保证产品的色泽良好。
S400结晶处理
在该步骤中，将第三处理液进行结晶处理，并收集所得到的晶体。发明人发现，经步骤S100～S300处理所得到的第三处理液中脱氢莽草酸含量较少，在结晶过程中，脱氢莽草酸因含量太少而无法达到饱和状态，不易形成结晶，而莽草酸含量较多，可以充分结晶析出，因此，通过结晶处理可以进一步除去脱氢莽草酸。例如，第三处理液中莽草酸与脱氢莽草酸的质量比为10:1左右，经结晶处理后莽草酸与脱氢莽草酸的质量比可达95:5左右。
根据本发明的实施例，步骤S400中，采用乙酸对第三处理液进行结晶处理。由于脱氢莽草酸与莽草酸在乙酸中的结晶能力有所差异，莽草酸能够很好地在乙酸中结晶析出，从而有效地分离出莽草酸。然而，其他的有机溶剂，例如丙酮的结晶效果不及乙酸，少量脱氢莽草酸也会在丙酮中结晶析出，导致产品中莽草酸纯度偏低。
根据本发明的实施例，结晶处理是在5～15℃下静置40～50小时。由此，可以使莽草酸充分结晶析出，进一步提高得率和纯度。
根据本发明的实施例，步骤S400中，第三处理液预先经过5～8倍浓缩处理，以便得到浓缩液。由此，以便于除去有机溶剂，便于后续结晶。
根据本发明的实施例，乙酸与浓缩液的体积比为(1～2)：1。由此，以便于莽草酸充分结晶析出，进一步提高得率和纯度。
S500溶解晶体并加入到层析柱中
在该步骤中，将晶体溶解，并将溶解液加入到层析柱中，收集穿透液。由此，以便进一步分离除去脱氢莽草酸。
根据本发明的实施例，层析柱的填充物选自强碱性阴离子交换树脂。该填充物可以有效地吸附脱氢莽草酸，虽然也可能还有少量莽草酸被吸附上，但是，由于溶解液中莽草酸含量极多，基数大，因此，大量的莽草酸仍然会穿过层析柱而被收集，因此，无需额外采用溶剂对层析柱进行洗脱，简化处理工序，减少溶剂使用，降低成本。并且，由于强碱性阴离子树脂的解离能力很强，在不同的pH溶液中均能解离和产生离子交换作用，吸附后用强碱性溶液可再生，供下次使用。
根据本发明的实施例，强碱性阴离子交换树脂的型号为717、D201或D301。由此，可以充分除去脱氢莽草酸，提高莽草酸提取物中莽草酸纯度。
根据本发明的实施例，层析柱的填充物添加量与溶解液的体积比为1：(2～20)，单位为克/毫升。由于经过前面步骤S100～S400的提取纯化处理，使得溶解液中脱氢莽草酸的含量极少，因此，无需大量使用填充物即可有效地充分除去脱氢莽草酸，获得高纯度的莽草酸提取物。
根据本发明的实施例，步骤S500中，将溶解液于3～5BV/h的流速加入到层析柱中。由此，可以使得脱氢莽草酸充分吸附于层析柱上，从而达到分离除杂的目的。
根据本发明的实施例，溶解晶体之前，用乙酸洗涤所述晶体，过滤并将晶体干燥。由此，以便于除去杂质和溶剂。
S600穿透液与活性炭混合
在该步骤中，将穿透液与活性炭进行混合，过滤，收集滤液。由此，以便于除去树脂层析中混入的色素。
根据本发明的实施例，步骤S600中，活性炭与穿透液的质量体积比为1：(80～120)，单位为克/毫升。由此，以便于充分除去树脂层析中混入的色素。
S700干燥处理
在该步骤中，将滤液进行干燥处理，以便得到莽草酸提取物。
莽草酸提取物
在本发明的另一方面，本发明提出了一种莽草酸提取物。根据本发明的实施例，所述莽草酸提取物是通过前面所述提取莽草酸的方法所获得的。由此，根据本发明实施例的莽草酸提取物纯度高，无有毒有害试剂残留，应用价值高。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对提取莽草酸的方法所描述的特征和优点，同样适用于该莽草酸提取物，在此不再赘述。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
取2L莽草酸发酵液(莽草酸浓度为60g/L)，用0.2μm微滤陶瓷膜和250Da纳滤膜过滤，收集透过液(色谱图参见图2)，加入氢氧化钠调节pH至10.00(处理液色谱图参见图3)，过滤，用硫酸回调pH至3.50，80℃减压浓缩20倍，向100mL浓缩液中加入1.9L 95体积％乙醇和20g活性炭，50℃加热搅拌30min，过滤，滤液(色谱图参见图4)浓缩5倍，向400ml浓缩液中加入400mL乙酸，5℃静置结晶48h，过滤，收集晶体，加入400mL乙酸搅拌洗涤，过滤，50℃真空干燥4h，得到粗品95g，莽草酸含量为95.07％，收率为75.26％(粗品质量×粗品中莽草酸含量/发酵液中莽草酸的质量)，色谱图参见图5，红外图谱参见图9。
向粗品中加入1600mL纯化水于50℃加热溶解，上717阴离子树脂柱(100g，湿装于
玻璃柱)中，流速3BV/h，收集穿透液，向1600mL穿透液中加入16g活性炭，搅拌30min，过滤，滤液浓缩至干，70℃干燥24h，得到83g产品，莽草酸含量为99.69％，不含有脱氢莽草酸，收率为91.61％(产品质量×产品中莽草酸含量/粗品中莽草酸质量)，总收率为68.95％(产品质量×产品中莽草酸含量/发酵液中的莽草酸质量)，色谱图参见图6，红外图谱参见图10，脱氢莽草酸红外图谱参见图11。
可以看出，利用实施例1的方法所得到的产品中莽草酸含量较好，高达99.69％，可以完全除去脱氢莽草酸，收率高。
实施例2
取2L莽草酸发酵液(莽草酸浓度为60g/L)，用0.2μm微滤陶瓷膜和250Da纳滤膜过滤，收集透过液，加入氢氧化钠调节pH至9.00，过滤，用硫酸回调pH至3.00，80℃减压浓缩15倍，向120mL浓缩液中加入1.8L 95体积％乙醇和20g活性炭，50℃加热搅拌30min，过滤，滤液浓缩7倍，向270mL浓缩液中加入405mL乙酸，5℃静置结晶45h，过滤，收集晶体，加入405mL乙酸搅拌洗涤，过滤，50℃真空干燥4h，得到粗品96g，莽草酸含量为94.61％，收率为75.69％。
向粗品中加入1600mL纯化水50℃加热溶解，上D201阴离子树脂柱(100g，湿装于
玻璃柱)中，流速5BV/h，收集穿透液，向1600mL穿透液中加入16g活性炭，搅拌30min，过滤，滤液浓缩至干，70℃干燥16h，得到产品83g，莽草酸含量为99.00％，收率为90.47％，总收率为68.48％。
可以看出，利用实施例2的方法所得到的产品中莽草酸含量较好，高达99.00％，可以完全除去脱氢莽草酸，收率高。
实施例3
取2L莽草酸发酵液(莽草酸浓度为60g/L)，用0.2μm微滤陶瓷膜和250Da纳滤膜过滤，收集透过液，加入氢氧化钠调节pH至9.00，过滤，用硫酸回调pH至3.00，80℃减压浓缩15倍，向120mL浓缩液中加入1.8L 95体积％乙醇和20g活性炭，60℃加热搅拌20min，过滤，滤液浓缩6倍，向300mL浓缩液中加入600mL乙酸，10℃静置结晶42h，过滤，收集晶体，加入300mL乙酸搅拌洗涤，过滤，50℃真空干燥4h，得到粗品94g，莽草酸含量为95.55％，收率为74.85％。
向粗品中加入1600mL纯化水50℃加热溶解，上D301阴离子树脂柱(100g，湿装于
玻璃柱)中，流速3BV/h，收集穿透液，向1600mL穿透液中加入16g活性炭，搅拌30min，过滤，滤液浓缩至干，70℃干燥16h，得到82g产品，莽草酸含量为99.20％，不含有脱氢莽草酸，收率为90.57％，总收率为67.79％。
可以看出，利用实施例3的方法所得到的产品中莽草酸含量较好，高达99.20％，可以完全除去脱氢莽草酸，收率高。
实施例4
取10L莽草酸发酵液(莽草酸浓度为60g/L)，用0.5μm微滤陶瓷膜和1000Da纳滤膜过滤，收集透过液，加入氢氧化钠调节pH至9.00，过滤，用硫酸回调pH至3.50，80℃减压浓缩20倍，向500mL浓缩液中加入9.5L 95体积％乙醇和100g活性炭，60℃加热搅拌60min，过滤，滤液浓缩6倍，向1600mL浓缩液中加入1.6L乙酸，15℃静置结晶50h，过滤，收集晶体，加入2.4L乙酸洗涤，过滤，50℃真空干燥8h，得到粗品471g，莽草酸含量为95.43％，收率为74.91％。
向粗品中加入2.0L纯化水50℃加热溶解，上717阴离子树脂柱(500g，湿装于
玻璃柱)中，流速4.8BV/h，收集穿透液，向2000mL穿透液中加入20g活性炭，搅拌30min，过滤，滤液浓缩至干，80℃干燥24h，得到产品410g，莽草酸含量为99.50％，收率为90.76％，总收率为68.00％。
可以看出，利用实施例4的方法所得到的产品中莽草酸含量较好，高达99.50％，可以完全除去脱氢莽草酸，收率高。
对比例1
取2L莽草酸发酵液(莽草酸浓度为60g/L)，用0.2μm微滤陶瓷膜和250Da纳滤膜过滤，收集透过液，加入氢氧化钠调节pH 10.00，过滤，用硫酸回调pH至3.50，80℃减压浓缩20倍，向100mL浓缩液中加入1.9L 95体积％乙醇和20g活性炭，50℃加热搅拌30min，过滤，滤液浓缩5倍，向400ml浓缩液中加入400mL丙酮，5℃静置结晶48h，过滤，收集晶体，加入400mL丙酮搅拌洗涤，过滤，50℃真空干燥4h，得到粗品100g，莽草酸含量92.76％，收率为77.30％，色谱图参见图7。
加入1600mL纯化水50℃加热溶解，上717阴离子树脂柱(100g，湿装于
玻璃柱)中，流速3BV/h，收集穿透液，向1600mL穿透液中加入16g活性炭，搅拌30min，过滤，滤液浓缩至干，70℃干燥24h，得到产品86g，莽草酸含量为98.37％，收率为91.20％，总收率为70.50％，色谱图参见图8。
可以看出，采用丙酮结晶，粗品中莽草酸的含量不足94％，所得的最终产品中莽草酸含量也偏低，不足99％，仍含有脱氢莽草酸，无法满足莽草酸提纯的质量要求，除杂效果差。
表1产品分析数据
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种提取莽草酸的方法，其特征在于，包括：
(1)将含有莽草酸的发酵液进行膜过滤处理，以便得到第一处理液；
(2)调节所述第一处理液至碱性，过滤并收集滤液，调节所述滤液至酸性，以便得到第二处理液；
(3)将所述第二处理液进行脱盐和脱色处理，以便得到第三处理液；
(4)将所述第三处理液进行结晶处理，并收集所得到的晶体；
(5)将所述晶体溶解，并将溶解液加入到层析柱中，收集穿透液；
(6)将所述穿透液与活性炭进行混合，过滤，收集滤液；
(7)将所述滤液进行干燥处理，以便得到莽草酸提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜过滤处理是采用孔径为0.1～1μm的微滤膜和截留量为200～1000Da的纳滤膜进行的。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，利用碱调节所述第一处理液至pH值为8～10，过滤并收集滤液，利用酸液调节所述滤液的pH值为3～5。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述第二处理液预先经过10～20倍浓缩，以便得到处理物；
将所述处理物与有机溶剂和活性炭于40～60℃混合20～60分钟，过滤并收集滤液，以便进行脱盐和脱色处理，得到第三处理液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮或正丁醇，优选乙醇；
任选地，所述有机溶剂与所述处理物的体积比为(15～20)：1；
任选地，所述活性炭与所述处理物的质量体积比为1：(4～7)，单位为克/毫升。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，采用乙酸将所述第三处理液进行结晶处理；
任选地，所述结晶处理是在5～15℃下静置40～50小时。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述第三处理液预先经过5～8倍浓缩处理，以便得到浓缩液；
任选地，所述乙酸与所述浓缩液的体积比为(1～2)：1。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，将所述溶解液于3～5BV/h的流速加入到层析柱中；
任选地，所述层析柱的填充物选自强碱性阴离子交换树脂；
任选地，所述强碱性阴离子交换树脂的型号为717、D201或D301；
任选地，所述层析柱的填充物添加量与所述溶解液的质量体积比为1：(2～20)，单位为克/毫升；
任选地，溶解所述晶体之前，用乙酸洗涤所述晶体，过滤并将晶体干燥。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)中，所述活性炭与穿透液的质量体积比为1：(80～120)，单位为克/毫升。
10.一种莽草酸提取物，其特征在于，是通过权利要求1～9任一项所述提取莽草酸的方法所获得的。
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| 温素萍: ""发酵来源莽草酸分离纯化及质量研究"", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)，医药卫生科技辑》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112142591A (zh) * | 2020-10-09 | 2020-12-29 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种从发酵液中分离提取原儿茶酸的方法 |
| CN114213241A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-03-22 | 浙江来益生物技术有限公司 | 一种从莽草酸发酵液中提取莽草酸的方法 |
| CN114213241B (zh) * | 2021-12-28 | 2023-09-01 | 浙江来益生物技术有限公司 | 一种从莽草酸发酵液中提取莽草酸的方法 |
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