CN111289675B - 一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，包括以下步骤：(1)采用食品模拟物对待测样品进行迁移试验，得食品模拟物试液，所述食品模拟物包括水基、酸性、酒精类食品模拟物和经过预处理后的油基食品模拟物；(2)经微孔过滤后，经超高效液相色谱‑串联质谱仪上机检测分析；(3)绘制标准工作曲线，计算食品模拟物试液中十二内酰胺的浓度，即为十二内酰胺的迁移量。本发明的方法检出限较低：水基、酸性、酒精类食品模拟物中十二内酰胺的检出限为1.0μg/L，定量限为3.0μg/L；油基食品模拟物中十二内酰胺的检出限为1.0μg/kg，定量限为3.0μg/kg。

Description

一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法。

背景技术

尼龙，又称聚酰胺纤维，是分子主链上含有重复酰胺基团-[NHCO]-的热塑性树脂总称。尼龙根据聚合单体不同可分为多种不同的聚酰胺，如尼龙6、尼龙12、尼龙66等。其中尼龙12在尼龙系列材料中相对密度小，最常用于食品接触材料。十二内酰胺作为尼龙12的单体因其小分子量及高扩散性，与不同食品接触时容易迁移至食品中，从而进入食用者体内。为防止己内酰胺与十二内酰胺对人体健康造成影响，不少国家对食品接触材料中这两种单体的迁移量进行了限制，如我国国标规定十二内酰胺迁移量上限为5.0mg/L(5.0mg/kg)，欧盟(EU)No.10/2011和韩国食品接触材料法规也有着同样的限量规定。

目前，已有的分析十二内酰胺迁移量的方法主要为高效液相色谱法和气相色谱法。其中，气相色谱法对于油基模拟物预处理要求低、分析选择性高，但是对于水基模拟物需要额外进行提取，若直接进样不利于气相色谱系统，长时间会对进样口、色谱柱造成不可逆的影响，且整个气相色谱分析时间更久。高效液相色谱虽然可用于分析，但出峰所需时间长，且紫外检测器灵敏度(210nm波长)较低，抗基质干扰能力不理想，容易受到杂质影响。此外，还有基于超高效液相色谱-串联质谱分析体系，该体系色谱部分原理与高效液相色谱相同，但色谱柱粒径更小、系统耐压更高，配合超高效液相色谱柱使用，相对高效液相色谱具有出峰更快，使用有机溶剂少、环保，分离度与响应也更好的优势。同时，后续采用的质谱检测器灵敏度、方法选择性也远远高于常规紫外光学检测器。方法预处理方面，目前大部分已有文献，对油基模拟物均采用体积排阻技术进行处理，但与其他色谱模式相比，体积排阻色谱的分辨率及峰容量均相对较低，且该技术在常规实验室中应用范围有限。因此，建立一种简单、快速、准确测定食品包装材料中十二内酰胺残留量的检测方法己成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明为了克服现有检测食品接触材料中十二内酰胺残留量的方法存在的预处理复杂、响应慢、准确度低的问题，提供了一种简单、快速、准确的测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用食品模拟物对待测样品进行迁移试验，得食品模拟物试液，所述食品模拟物包括水基、酸性、酒精类食品模拟物和经过预处理后的油基食品模拟物；该步骤中的迁移实验参照按照GB 5009.156及GB 31604.1的要求；

(2)将步骤(1)得到的食品模拟物试液经微孔过滤后，经超高效液相色谱-串联质谱仪上机检测分析；

(3)绘制标准工作曲线，计算食品模拟物试液中十二内酰胺的浓度，即为十二内酰胺的迁移量。

我国现有行业标准S/N 3651-2013中对于水基模拟物采用直接进样分离，紫外检测器分析；油基模拟物使用环己烷、乙酸乙酯混合液提取后分子排阻色谱柱分离，分段收集洗脱液氮吹浓缩后进样检测。该方法线性覆盖范围为0.0mg/L-20.0mg/L，水基模拟物检测低限为0.5mg/L，油基模拟物检测低限为0.5mg/kg，单个样品分析所需时间为15min。如上所述，已有大部分标准和文献均采用常规液相或气相色谱，本发明的检测原理为水基模拟物过膜后直接进样分析；油基模拟物由于富含油脂，会对仪器造成干扰，故需要经预处理后进样分析，采用基质匹配曲线外标法定量，方法分析基于超高效液相色谱-串联质谱在灵敏度和抗基质干扰能力上表现出独特的优越性，且分析速度也远远快于这两种方法。

作为优选，步骤(1)中，所述油基食品模拟物的预处理方法为：

(a)取2.0g油基食品模拟物加入4.0～5.0mL溶剂，进行一次振荡提取，离心取上清液；离心固体物再加入溶剂，重复以上操作，进行二次震荡提取，合并两次提取的上清液，得提取液；提取一次时回收率仅为67.7％±2.7％，较不理想，而提取2次时，回收率均可达到84.5％±3.0％(3次为85.0％±2.7％)。因为提取次数的增加会导致后续氮吹液体量的增加，从而大大延长实验所需时间，因此提取两次既可以保证目标化合物的回收率，又可以减少分析时间；

(b)将提取液于45℃条件下氮吹至近干(此时仅剩余极少量油脂)，以甲醇水溶液复溶后，加入到固相萃取柱进行一次净化处理，待上样结束后再次用甲醇水溶液复溶，然后将液体通过固相萃取柱进行二次净化处理，最后以乙腈洗脱，收集洗脱液，于45℃条件下氮吹至干，然后加入甲酸/乙腈水溶液涡旋复溶，完成油基食品模拟物的预处理。

本发明油基食品模拟物的预处理过程操作简单、影响因素少、结果稳定性好，检测灵敏度高，完全可满足食品模拟物中μg/kg级别十二内酰胺的测定。

作为优选，步骤(a)中，所述提取溶剂为乙腈。提取溶剂对后续过柱速度及净化效果影响很大，本发明在研究过程中对乙腈、甲醇、乙醇进行同时考察，乙醇极性相对较弱，油脂在其中的溶解度为三者最大，因此在乙醇提取液氮吹后可以发现其中含有大量油脂，会影响后续过柱速度及净化效果。对比甲醇与乙腈，二者在萃取过程中并不存在显著差异，包括氮吹后油脂的量及复溶液的清澈程度，但是甲醇回收率(75.4％±2.9％)低于乙腈(84.2％±2.8％)，因此本发明优选乙腈作为提取溶剂。

作为优选，步骤(a)中，一次振荡提取和二次震荡提取的时间为10～15min；离心转速为8500～9000rpm，离心时间为2～5min。

作为优选，步骤(b)中，一次净化处理之前，所述固相萃取柱依次以3.0mL乙腈和3.0mL纯水活化处理。

作为优选，步骤(b)中，所述甲醇水溶液的浓度为5％；所述甲酸/乙腈水溶液中甲酸的浓度为10％，乙腈的浓度为20％；涡旋时间为1～2min。

作为优选，步骤(b)中，所述固相萃取柱为HLB通用型固相萃取柱，兼具亲水基团(吡咯烷酮基团)和疏水基团(二乙烯基苯)吸附剂填料的固相萃取小柱，200mg，6mL，或相当者。

HLB通用型固相萃取柱、MCX混合型阳离子萃取柱、HLB PRiME固相萃取柱、C18固相萃取柱的净化效果相当，比值均大于80％并小于120％，尤其是MCX混合型阳离子萃取柱，其比值接近100％。但是，另一方面，HLB通用型固相萃取柱的方法回收率为几种固相萃取柱最高，综合考虑HLB通用型柱使用方便，易得，本发明优选HLB通用型固相萃取柱进行预处理。

作为优选，步骤(2)中，微孔过滤之前，先将步骤(1)得到的食品模拟物试于3～4℃温度条件下保存一周；微孔过滤采用0.22μm水相微孔滤膜。

作为优选，步骤(2)中，色谱条件为：C18色谱柱，柱长100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7μm；流动相：A相为0.1％甲酸水溶液；B相为0.1％甲酸-乙腈；梯度洗脱：0.00→0.50min，40％B；0.50→0.60min，40→50％B，0.60→4.00min，50％B；4.00→4.20min，50％-98％B；4.20→5.20min，98％B；5.20→5.30min，98→40％B；5.30→7.00min，40％B；流速0.3mL/min；色谱柱温40℃；进样体积2μL。

作为优选，步骤(2)中，质谱条件如表1所示为：电喷雾离子源，正离子模式，离子源电压5500V；离子源温度500℃。

表1.十二内酰胺质谱参考条件(ESI源正离子模式)

作为优选，步骤(3)中标准曲线的配制方法为：

水基、酸性、酒精类食品模拟物标准系列工作溶液：准确移取适量十二内酰胺标准工作溶液，用0.1％甲酸+20％乙腈水复溶液配制成1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L的标准系列，标准系列溶液临用新配。

油基食品模拟物标准系列工作溶液：按照预处理过程对空白油基食品模拟物进行处理后，在其氮吹残渣中加入适量十二内酰胺标准工作溶液配制成1.0μg/kg、2.5μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、25.0μg/kg、50.0μg/kg、75.0μg/kg的标准系列。

称取7份平行油基食品模拟物，按照上述预处理步骤进行操作，在最后氮吹复溶前，依次加入适量十二内酰胺标准工作溶液，后用0.1％甲酸+20％乙腈水溶液(3.2.3)定容至1.0mL，配制成2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、150.0ng/mL的基质匹配标准系列。

标准系列绘制和试样溶液测定

参照上述超高效液相色谱-串联质谱仪分析条件下，将标准系列溶液由低浓度至高浓度依次进样检测，以十二内酰胺色谱峰峰面积与其浓度进行线性回归，得到标准曲线回归方程，其线性相关系数不应小于0.99，本方法线性范围、响应值、线性相关系数及线性方程如表2-表5所示。

表2.标准系列与响应值(水基模拟物)

表3.线性方程及线性相关系数(水基模拟物)

组分名称	线性范围	线性方程	线性相关系数
				十二内酰胺	1.0-100.0μg/L	y＝5.89e+004x+7.89e+004	r＝0.9998

表4.标准系列与响应值(油基模拟物)

表5.线性方程及线性相关系数(油基模拟物)

组分名称	线性范围	线性方程	线性相关系数
				十二内酰胺	1.0-75.0μg/kg	y＝5.85e+004x+1.07e+005	r＝0.9998

按照上述测定条件，对标准工作溶液进行检测，测定相应的峰面积。以食品模拟物标准工作曲线中十二内酰胺浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程。

食品模拟物试液中十二内酰胺浓度按式(1)计算：

式中：

c——食品模拟物中十二内酰胺的浓度，单位为毫克每升(mg/L)或毫克每千克(mg/kg)；

y——食品模拟物试液中十二内酰胺的峰面积；

b——回归曲线的截距；

a——回归曲线的斜率。

将上式得到的食品模拟物中十二内酰胺的浓度，根据迁移实验中所使用的食品模拟物的体积和测试试样与食品模拟物检出面积，通过数学换算计算出十二内酰胺的特定迁移量，单位以(mg/kg)或(mg/L)表示，具体操作参考GB 5009.156。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，所有测定结果均保留至小数点后一位。

因此，本发明具有如下有益效果：

(1)基于超高效液相色谱-串联质谱在灵敏度和抗基质干扰能力上具有独特的优越性，且分析速度快，能够实现快速测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量；

(2)油基食品模拟物的预处理过程操作简单、影响因素少、结果稳定性好，检测灵敏度高，完全可满足食品模拟物中μg/kg级别十二内酰胺的测定，提取、净化工艺的优化既可以保证目标化合物的回收率，又可以减少分析时间；

(3)本方法检出限：水基、酸性、酒精类食品模拟物中十二内酰胺的检出限为1.0μg/L，定量限为3.0μg/L；油基食品模拟物中十二内酰胺的检出限为1.0μg/kg，定量限为3.0μg/kg。

附图说明

图1是各类食品模拟物定量限加标样品于ESI源下多反应监测色谱图。

图2是各类食品模拟物加标样品于ESI源下多反应监测色谱图。

图3是实施例1、对比例1-2不同提取溶剂的回收率对比图。

图4是实施例1、对比例3-7不同固相萃取柱的净化效果对比图。

图5是实施例1、对比例3-7不同固相萃取柱的回收率对比图。

图6是实施例1、对比例8-9不同提取次数的回收率对比图。

具体实施方式

下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。

在本发明中，若非特指，所有设备和原料均可从市场购得或是本行业常用的，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。实验用水为符合GB/T 6682-2008规定的一级水。水基、酸性、酒精类、油基食品模拟物：所用试剂依据GB 31604.1的规定。乙腈(CH₃CN)：色谱纯。

甲醇(CH₃OH)：色谱纯。

甲酸(HCOOH)：分析纯及以上。

通用型固相萃取柱：兼具亲水基团(吡咯烷酮基团)和疏水基团(二乙烯基苯)吸附剂填料的固相萃取小柱，200mg，6mL，或相当者。0.1％甲酸溶液：移取1mL甲酸用超纯水稀释至1000mL，混匀，供液质作流动相用，临用新配。

0.1％甲酸-乙腈溶液：移取1mL甲酸用乙腈稀释至1000mL，混匀，供液质作流动相用，临用新配。

0.1％甲酸+20％乙腈水溶液：准确移取50μL甲酸、10.0mL乙腈加入至适量水中，后用水定容至50mL，用作样品定容液，临用新配。

5％甲醇水溶液：准确移取2.5mL甲醇加入至适量水中，后用水定容至50mL，临用新配。

标准品：十二内酰胺(C₁₂H₂₃NO，CAS：947-04-6)：纯度大于99.5％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

标准溶液配制：

(1)标准储备溶液(1000μg/mL)：准确称取十二内酰胺10.0mg(精确至0.1mg)，溶于适量乙腈后全量转入10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，于-20℃下密封保存，有效期6个月。

(2)标准工作溶液(1.0μg/mL)：准确吸取十二内酰胺标准储备溶液0.1mL于100mL容量瓶中，使用乙腈定容至刻度，于-20℃下密封保存，有效期1个月。

(3)水基、酸性、酒精类食品模拟物标准系列工作溶液：准确移取适量十二内酰胺标准工作溶液，用0.1％甲酸+20％乙腈水复溶液配制成1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L的标准系列，标准系列溶液临用新配。

(4)油基食品模拟物标准系列工作溶液：按照样品预处理过程对空白油基食品模拟物进行处理后，在其氮吹残渣中加入适量十二内酰胺标准工作溶液配制成1.0μg/kg、2.5μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、25.0μg/kg、50.0μg/kg、75.0μg/kg的标准系列。

实施例1

(1)油基食品模拟物的预处理：

准确称取2.0g油基食品模拟物于15mL聚丙烯塑料离心管中，使用4.0mL乙腈振荡提取10min，后以8500rpm速度离心2min，再以4.0mL乙腈重复提取一次，合并两次提取液，在45℃条件下氮吹至近干，此时仅剩余极少量油脂。随后以4.0mL 5％甲醇水溶液复溶，通过事先依次以3.0mL乙腈、3.0mL纯水活化的HLB通用型固相萃取柱。待上样结束后再加入4.0mL5％甲醇水溶液到氮吹残渣中振荡1min复溶，结束后将液体通过固相萃取柱，最后以3.0mL乙腈洗脱，收集洗脱液于玻璃试管中，于45℃条件下氮吹至干，后加入1.0mL 0.1％甲酸+20％乙腈水溶液涡旋1min复溶；

(2)按照GB 5009.156及GB 31604.1的要求，采用食品模拟物对待测样品进行迁移试验，得食品模拟物试液，于4℃温度条件下保存一周；食品模拟物包括水基、酸性、酒精类食品模拟物和经过步骤(1)预处理后的油基食品模拟物；

(3)分别将步骤(1)得到的食品模拟物试液经0.22μm水相微孔滤膜过滤后，经超高效液相色谱-串联质谱仪上机检测分析：

色谱条件为：C18色谱柱，柱长100mm，柱内径2.1mm，填料粒径1.7μm；流动相：A相为0.1％甲酸水溶液；B相为0.1％甲酸-乙腈；梯度洗脱：0.00→0.50min，40％B；0.50→0.60min，40→50％B，0.60→4.00min，50％B；4.00→4.20min，50％-98％B；4.20→5.20min，98％B；5.20→5.30min，98→40％B；5.30→7.00min，40％B；流速0.3mL/min；色谱柱温40℃；进样体积2μL。

质谱条件为：电喷雾离子源，正离子模式，离子源电压5500V；离子源温度500℃；定性离子90m/z，碰撞电压28eV；

(4)将标准系列溶液由低浓度至高浓度依次进样检测，以十二内酰胺色谱峰峰面积与其浓度进行线性回归，得到标准曲线回归方程，其线性相关系数不应小于0.99，本方法线性范围、响应值、线性相关系数及线性方程如表2-表5所示。

表2.标准系列与响应值(水基模拟物)

表3.线性方程及线性相关系数(水基模拟物)

组分名称	线性范围	线性方程	线性相关系数
				十二内酰胺	1.0-100.0μg/L	y＝5.89e+004x+7.89e+004	r＝0.9998

表4.标准系列与响应值(油基模拟物)

表5.线性方程及线性相关系数(油基模拟物)

组分名称	线性范围	线性方程	线性相关系数
				十二内酰胺	1.0-75.0μg/kg	y＝5.85e+004x+1.07e+005	r＝0.9998

按照上述测定条件，对标准工作溶液进行检测，测定相应的峰面积。以食品模拟物标准工作曲线中十二内酰胺浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程。

食品模拟物试液中十二内酰胺浓度按式(1)计算：

式中：

c——食品模拟物中十二内酰胺的浓度，单位为毫克每升(mg/L)或毫克每千克(mg/kg)；

y——食品模拟物试液中十二内酰胺的峰面积；

b——回归曲线的截距；

a——回归曲线的斜率。

将上式得到的食品模拟物中十二内酰胺的浓度，根据迁移实验中所使用的食品模拟物的体积和测试试样与食品模拟物检出面积，通过数学换算计算出十二内酰胺的特定迁移量，单位以(mg/kg)或(mg/L)表示，具体操作参考GB 5009.156。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，所有测定结果均保留至小数点后一位。

方法检出限、定量限在方法空白试验中加入接近检出限的浓度，以信号强度高于背景噪音2-5倍的浓度为检出限。水基模拟物和油基模拟物定量限加标多反应监测图谱如图1所示。

最终，计算得到本实验室内水基、酸性、酒精类食品模拟物中十二内酰胺的检出限为1.0μg/L，定量限为3.0μg/L；油基食品模拟物中十二内酰胺的检出限为1.0μg/kg，定量限为3.0μg/kg.

方法精密度和准确度本部分实验在食品模拟物(水基模拟物：纯水、4％乙酸、10％乙醇；油基模拟物：橄榄油)中进行，其中低、中、高三水平加标试验分别进行6次平行实验，精密度、准确度具体结果如表6(典型加标色谱图见图2)所示。

表6.食品模拟物基质加标回收测定结果

实施例2

实施例2与实施例1的区别在于，步骤(1)和(2)的参数不同，其余步骤及检测条件完全相同。

(1)油基食品模拟物的预处理：

准确称取2.0g油基食品模拟物于15mL聚丙烯塑料离心管中，使用5.0mL乙腈振荡提取15min，后以9000rpm速度离心5min，再以4.0mL乙腈重复提取一次，合并两次提取液，在45℃条件下氮吹至近干，此时仅剩余极少量油脂。随后以4.0mL 5％甲醇水溶液复溶，通过事先依次以3.0mL乙腈、3.0mL纯水活化的HLB通用型固相萃取柱。待上样结束后再加入4.0mL5％甲醇水溶液到氮吹残渣中振荡1min复溶，结束后将液体通过固相萃取柱，最后以3.0mL乙腈洗脱，收集洗脱液于玻璃试管中，于45℃条件下氮吹至干，后加入1.0mL 0.1％甲酸+20％乙腈水溶液涡旋2min复溶；

(2)按照GB 5009.156及GB 31604.1的要求，采用食品模拟物对待测样品进行迁移试验，得食品模拟物试液，于3℃温度条件下保存一周；食品模拟物包括水基、酸性、酒精类食品模拟物和经过步骤(1)预处理后的油基食品模拟物。

对比例1(提取溶剂不同)

对比例1与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理采用甲醇作为提取溶剂，其余步骤及检测条件完全相同。

对比例2(提取溶剂不同)

对比例2与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理采用乙醇作为提取溶剂，其余步骤及检测条件完全相同。

对实施例1、对比例1-2的检测方法对十二内酰胺回收率做考察，结果如图3所示：

实施例1、对比例1-2分别以乙腈、甲醇、乙醇作为提取溶剂，乙醇极性相对较弱，油脂在其中的溶解度为三者最大，因此在乙醇提取液氮吹后可以发现其中含有大量油脂，会影响后续过柱速度及净化效果。对比甲醇与乙腈，二者在萃取过程中并不存在显著差异，包括氮吹后油脂的量及复溶液的清澈程度，但是甲醇回收率(75.4％±2.9％)低于乙腈(84.2％±2.8％)，因此本发明优选乙腈作为提取溶剂，提取溶剂对后续过柱速度及净化效果影响很大。

对比例3(固相萃取柱不同)

对比例3与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理净化工序中固相萃取柱采用MCX混合型阳离子萃取柱，其余步骤及检测条件完全相同。

对比例4(固相萃取柱不同)

对比例4与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理净化工序中固相萃取柱采用MCX混合型阳离子萃取柱，条件为：氮吹后残渣使用含有4.0mL 5％甲醇、5％甲酸的水溶液进行复溶、上样，结束后以5％甲醇、5％甲酸的水溶液进行淋洗，再以4.0mL乙腈进行净化，最后以4.0mL 90％乙腈、2％氨水和8％水的混合溶液进行洗脱；其余步骤及检测条件完全相同。

对比例5(固相萃取柱不同)

对比例5与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理净化工序中固相萃取柱采用HLB PRiME固相萃取柱，将两次提取后的提取液合并，直接通过固相萃取柱，结束后以2.0mL乙腈洗脱；其余步骤及检测条件完全相同。

对比例6(固相萃取柱不同)

对比例6与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理净化工序中固相萃取柱采用C18固相萃取柱，其余步骤及检测条件完全相同。

对比例7(固相萃取柱不同)

对比例7与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理净化工序中固相萃取柱采用C18固相萃取柱，将两次提取后的提取液合并，直接通过固相萃取柱，结束后以2.0mL乙腈洗脱；其余步骤及检测条件完全相同。

对实施例1、对比例3-7的检测方法对十二内酰胺回收率及净化效果做考察，将结果以基质效应的形式表示，通过基质匹配曲线斜率与标准溶液斜率比值做考察，结果如图4和图5所示。从图4可以看出，HLB通用型固相萃取柱、MCX混合型阳离子萃取柱、HLB PRiME固相萃取柱、C18固相萃取柱的净化效果相当，比值均大于80％并小于120％，尤其是MCX混合型阳离子萃取柱，其比值接近100％。但是，另一方面，从图5可以看出，HLB通用型固相萃取柱的方法回收率为几种固相萃取柱最高，综合考虑HLB通用型柱使用方便，易得，本发明优选HLB通用型固相萃取柱进行预处理。

对比例8(提取次数不同)

对比例8与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理提取次数为1次，其余步骤及检测条件完全相同。

对比例9(提取次数不同)

对比例9与实施例1的区别在于，步骤(1)中，油基食品模拟物的预处理提取次数为3次，其余步骤及检测条件完全相同。

对实施例1、对比例8-9的检测方法对十二内酰胺回收率做考察，结果如图6所示：提取一次时回收率仅为67.7％±2.7％，较不理想，而提取2次时，回收率均可达到84.5％±3.0％(3次为85.0％±2.7％)。因为提取次数的增加会导致后续氮吹液体量的增加，从而大大延长实验所需时间，因此提取两次既可以保证目标化合物的回收率，又可以减少分析时间。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (7)

1.一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）采用食品模拟物对待测样品进行迁移试验，得食品模拟物试液，所述食品模拟物包括水基、酸性、酒精类食品模拟物和经过预处理后的油基食品模拟物；

（2）将步骤（1）得到的食品模拟物试液经微孔过滤后，经超高效液相色谱-串联质谱仪上机检测分析；

（3）绘制标准工作曲线，计算食品模拟物试液中十二内酰胺的浓度，即为十二内酰胺的迁移量；

步骤（1）中，所述油基食品模拟物的预处理方法为：

（a）取2.0g油基食品模拟物加入4.0~5.0 mL乙腈，进行一次振荡提取，离心取上清液；离心固体物再加入乙腈，重复以上操作，进行二次震荡提取，合并两次提取的上清液，得提取液；

（b）将提取液于45°C条件下氮吹至近干，以甲醇水溶液复溶后，加入到固相萃取柱进行一次净化处理，待上样结束后再次用甲醇水溶液复溶，然后将液体通过固相萃取柱进行二次净化处理，最后以乙腈洗脱，收集洗脱液，于45°C条件下氮吹至干，然后加入甲酸乙腈水溶液涡旋复溶，完成油基食品模拟物的预处理；

其中固相萃取柱为HLB通用型固相萃取柱。

2.根据权利要求1所述的一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，步骤（a）中，一次振荡提取和二次震荡提取的时间为10~15min；离心转速为8500~9000rpm，离心时间为2~5min。

3.根据权利要求1所述的一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，步骤（b）中，一次净化处理之前，所述固相萃取柱依次以3.0 mL乙腈和3.0 mL纯水活化处理。

4.根据权利要求1所述的一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，步骤（b）中，所述甲醇水溶液的浓度为5%；所述甲酸乙腈水溶液中甲酸的浓度为10%，乙腈的浓度为20%；涡旋时间为1~2min。

5.根据权利要求1所述的一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，步骤（2）中，微孔过滤之前，先将步骤（1）得到的食品模拟物试于3~4℃温度条件下保存一周；微孔过滤采用0.22 μm水相微孔滤膜。

6.根据权利要求1所述的一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，步骤（2）中，色谱条件为：C18色谱柱，柱长100 mm，柱内径2.1 mm，填料粒径1.7 μm；流动相：A相为0.1%甲酸水溶液；B相为0.1%甲酸-乙腈；梯度洗脱：0.00→0.50 min，40% B；0.50→0.60min，40→50% B，0.60→4.00 min，50% B；4.00→4.20 min，50%-98% B；4.20→5.20 min，98% B；5.20→5.30 min，98→40% B；5.30→7.00 min，40% B；流速0.3 mL/min；色谱柱温40℃；进样体积2μL。

7.根据权利要求1所述的一种测定食品接触材料中十二内酰胺迁移量的方法，其特征在于，步骤（2）中，质谱条件为：电喷雾离子源，正离子模式，离子源电压5500 V；离子源温度500℃。

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