CN116908319A - 一种检测血液中苄丝肼浓度的方法 - Google Patents

一种检测血液中苄丝肼浓度的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116908319A
CN116908319A CN202310632281.1A CN202310632281A CN116908319A CN 116908319 A CN116908319 A CN 116908319A CN 202310632281 A CN202310632281 A CN 202310632281A CN 116908319 A CN116908319 A CN 116908319A
Authority
CN
China
Prior art keywords
benserazide
solution
phase
sample
standard
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310632281.1A
Other languages
English (en)
Inventor
张�杰
贾永娟
刘春冉
刘杏立
倪君君
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Hehe Medical Test Co ltd
Original Assignee
Suzhou Hehe Medical Test Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Hehe Medical Test Co ltd filed Critical Suzhou Hehe Medical Test Co ltd
Priority to CN202310632281.1A priority Critical patent/CN116908319A/zh
Publication of CN116908319A publication Critical patent/CN116908319A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/045—Standards internal
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本公开涉及一种检测血液中苄丝肼浓度的方法，所述方法包括：(1)配制至少三种不同浓度的含有苄丝肼及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱‑质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果建立所述苄丝肼的标准曲线；(2)将待测血样与蛋白沉淀剂、内标物混合，离心，取上清液作为待测样品；(3)利用液相色谱‑质谱对所述待测样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待测血样中苄丝肼的含量。本公开提供的检测方法能够实现对苄丝肼浓度的准确检测，且准确度和精密度较高，并且本公开提供的检测方法能够在满足检测要求的前提下，能够减少样品用量，延长样本稳定性，降低检测难度，提高检测效率。

Description

一种检测血液中苄丝肼浓度的方法
技术领域
本公开涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种检测血液中苄丝肼浓度的方法。
背景技术
帕金森病又称震颤麻痹，是一种中枢神经系统椎体外系功能障碍的慢性进行性疾病。盐酸苄丝肼(Benserazide Hydrochloride)是治疗帕金森的复方药物美多巴(Madopar)中的一种有效成分。其药理作用玉卡比多巴类似，不易透过血-脑脊液屏障。口服后吸收快，血浆蛋白结合率较高，以代谢物形式排出。
监测苄丝肼的血药浓度，对开展与原研药的生物等效性研究具有重要意义。目前很少有对血液中苄丝肼含量进行检测的研究，仅有个别报道了利用电化学检测的方法对苄丝肼进行了含量检测，还没有利用液相色谱-质谱对血液中苄丝肼含量的检测方法。同时，由于苄丝肼的稳定性较差而导致血样的处理难度以及检测难度增加。
因此，需要提供一种能够准确且稳定检测血液中苄丝肼浓度的液相色谱-质谱方法，以便于实现大批量样本的检测。
发明内容
为了解决上述技术问题，本公开提供了一种检测血液中苄丝肼浓度的方法。本公开提供的检测方法能够实现对苄丝肼浓度的准确检测，且准确度和精密度较高，并且本公开提供的检测方法能够在满足检测要求的前提下，能够减少样品用量，延长样本稳定性，降低检测难度，提高检测效率。
第一方面，本公开提供了一种检测血液中苄丝肼浓度的方法，所述方法包括：
(1)配制至少三种不同浓度的含有苄丝肼及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱-质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果建立所述苄丝肼的标准曲线；
(2)将待测血样与蛋白沉淀剂、内标物混合，离心，取上清液作为待测样品；
(3)利用液相色谱-质谱对所述待测样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待测血样中苄丝肼的含量。
本公开提供的检测方法能够准确对血液中的苄丝肼进行定量检测，结果准确度和精密度均较高，能够在3min以内出结果，在提高了检测效率的同时降低了操作难度，适用于高通量样本的检测。
作为本公开的一种优选技术方案，所述蛋白沉淀剂选自甲醇和/或乙腈。
本公开仅仅使用简单的甲醇和/或乙腈作为蛋白沉淀剂即可完成样品前处理，样品前处理过程简单快捷，能够极大地节约整体检测时间，并且本公开提供的样品前处理方法能够保证苄丝肼的稳定性。
作为本公开的一种优选技术方案，所述待测血样和蛋白沉淀剂的体积比为1:(2-6)，例如1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5、1:5、1:5.5等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述液相色谱的条件包括：
流动相：A相为含有0.2-3％甲酸、1-10mmol/L甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B相为乙腈和/或甲醇；
梯度洗脱：
0.00min：A相98-80％，B相2-20％；
0.50min：A相98-80％，B相2-20％；
0.60min：A相60-40％，B相40-60％；
1.00min：A相60-40％，B相40-60％；
1.10min：A相98-80％，B相2-20％；
3.00min：A相98-80％，B相2-20％。
所述0.2-3％甲酸可以为0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％等；所述1-10mmol/L可以为2mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L等。
在梯度洗脱条件中，对于0.00-0.50min，A相可以为96％、94％、90％、85％等，B相可以为3％、5％、10％、15％等。对于0.60-1.00min，A相可以为58％、55％、52％、50％、48％、45％、42％等，B相可以为42％、45％、48％、50％、52％、55％、58％等。对于1.10-3.00min，A相可以为96％、94％、90％、85％等，B相可以为3％、5％、10％、15％等。
作为本公开的一种优选技术方案，柱温为35-40℃，例如36℃、37℃、38℃、39℃等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述流动相的流速为0.3-0.5mL/min，例如0.35mL/min、0.4mL/min、0.45mL/min等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述液相色谱的条件包括：使用的分析色谱柱为Agilent Poroshell 120EC-C18、phenomenex Kinetex F5、Waters cortecs T3、岛津Shim-pack veiox C18。
作为本公开的一种优选技术方案，所述质谱的条件包括：雾化气温度：300-400℃，雾化气气流：10-14L/min，喷雾器：40-50psi，毛细管电压：4000-4500V，电子倍增器电压值：300-350V。
所述雾化气温度：300-400℃，可以为320℃、340℃、360℃、380℃等；所述雾化气气流：10-14L/min，可以为11L/min、12L/min、13L/min等；所述喷雾器：40-50psi，可以为42psi、44psi、46psi、48psi等；所述毛细管电压：4000-4500V，可以为4100V、4200V、4300V、4400V等；所述电子倍增器电压值：300-350V，可以为310V、320V、330V、340V等。
本公开限定的液相色谱条件能够使苄丝肼及其内标物得到良好的色谱峰形，能够避免离子串扰并有效降低基质效应。
作为本公开的一种优选技术方案，所述苄丝肼的内标物为苄丝肼-d3。
作为本公开的一种优选技术方案，所述待测样品的制备方法包括：
将待处理血样与蛋白沉淀剂混合并保存备用，测试前，将混合液与内标工作液混合，离心，取上清液为待测样品。
其中，所述内标工作液为含有所述苄丝肼的内标物的溶液。
苄丝肼在血清/血浆中的放置稳定性较差，依据本公开提供的样品前处理方法，在采血后及时分离血浆或血清，然后对血清/血浆进行及时处理，处理后的血浆再进行保存，能够极大程度的增加苄丝肼的稳定性。
利用本公开提供的样品前处理方法处理后的样品更加稳定，常温可保存24h，4℃可保存48h，本公开提供的样品前处理方法能够降低样品运输要求和运输成本，提取回收率高，基质效应小，而且操作简单易行。
作为本公开的一种优选技术方案，所述待处理血样和所述内标工作液的体积比为(5-10):1，例如6:1、7:1、8:1、9:1等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述待处理血样为血浆或血清。
作为本公开的一种优选技术方案，所述内标工作液利用稀释剂由内标储备液稀释得到，所述内标储备液是利用溶剂溶解所述苄丝肼的内标物标准品得到。
作为本公开的一种优选技术方案，所述标准溶液的制备方法包括：将内标工作液、含有苄丝肼的标准工作液和稀释剂混合，得到所述标准溶液，所述标准工作液包括至少三个级别浓度，优选包括至少七个级别浓度。
各所述级别浓度的标准工作液均利用稀释剂由中间液稀释得到，所述中间液利用稀释剂由母液稀释得到，所述母液利用溶剂溶解所述苄丝肼的标准品得到。
作为本公开的一种优选技术方案，所述稀释剂I为甲醇水溶液，优选所述甲醇水溶液的浓度为65-75％，例如66％、68％、70％、72％、74％等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述稀释剂II为甲醇水溶液，优选所述甲醇水溶液的浓度为5-15％，例如6％、8％、10％、12％、14％等，优选为10％。
本公开利用稀释剂II对标准品储备液进行稀释，能够使得到的标准中间液更加稳定，存储稳定性高，无需现用现配，且得到的标准曲线也更加稳定。
在本公开中，所述甲醇水溶液的浓度均为体积浓度，本公开在此进行示例性列举，例如浓度为5-15％的甲醇水溶液，即甲醇:水的体积比为(5-15):(95-75)，二者的体积和为100。
本公开实施例提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：
(1)本公开提供的检测方法能够准确对血液中的苄丝肼进行定量检测，结果准确度和精密度均较高，能够在3min以内出结果，在提高了检测效率的同时降低了操作难度，适用于高通量样本的检测；
(2)苄丝肼在血清/血浆中的放置稳定性较差，依据本公开提供的样品前处理方法，在采血后及时分离血浆或血清，然后对血清/血浆进行及时处理，处理后的血浆再进行保存，能够极大程度的增加苄丝肼的稳定性。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本公开的实施例，并与说明书一起用于解释本公开的原理。
为了更清楚地说明本公开实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本公开实施例1所述标准溶液中苄丝肼的色谱图；
图2为本公开实施例1所述血浆样品中苄丝肼的色谱图；
图3为本公开实施例4所述标准溶液中苄丝肼的色谱图；
图4为利用实施例8检测加标样得到的苄丝肼的色谱图；
图5为利用对比例3检测加标样得到的苄丝肼的色谱图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本公开的上述目的、特征和优点，下面将对本公开的方案进行进一步描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本公开的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本公开，但本公开还可以采用其他不同于在此描述的方式来实施；显然，说明书中的实施例只是本公开的一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
本实施例提供了一种标准工作液的制备方法。
(1)配制苄丝肼标准品储备液
天平精密称量1.86mg苄丝肼盐酸盐于2mL离心管中，先加入1mL甲醇，再加入1mL(甲醇/水＝7:3)溶液，溶解混匀得到浓度为799.23μg/mL的储备液。
(2)利用甲醇:水＝1:9的稀释剂配制标准中间液，浓度为100μg/mL，标准中间液利用甲醇:水＝1:9的稀释剂进行稀释得到具有7种级别浓度的标准工作液，浓度依次为20μg/mL、6μg/mL、2.4μg/mL、0.6μg/mL、0.3μg/mL、0.15μg/mL、0.05μg/mL。
实施例2
本实施例提供了一种内标工作液的制备方法。
(1)配制内标储备液
苄丝肼-d3标准品为苄丝肼-d3盐酸盐，标品规格为1mg，先加入1mL二甲亚砜溶解，再加入1mL(甲醇:水＝7:3)溶液混匀，得到浓度为434.11μg/mL的储备液。
(2)利用甲醇:水＝7:3的稀释剂配制内标中间液，浓度为100μg/mL，内标中间液利用甲醇:水＝7:3的稀释剂稀释得到内标工作液，浓度为2.0μg/mL。
实施例3
本实施例提供了一种样本处理方法以及检测方法。
(1)配制标准溶液
a.内标工作液和标准工作液在室温下放置30min，以平衡至室温。
b.取9支1.5mL离心管，分别编号为L7-L1、空白，用微量移液器(量程：0.5-10μL)吸取10μL内标工作液加入到编号L7-L1的离心管中，空白的离心管中加入10μL甲醇:水＝7:3的稀释剂。
c.用微量移液器(量程：0.5-10μL)吸取各标准品工作液10μL，加入相应编号的离心管中，编号为空白的离心管中加入10μL甲醇:水＝1:9的稀释剂，准确吸取90μL纯水和100μL甲醇到上述各离心管中，2000r/min混匀1min，得到7种不同浓度的标准溶液。
(2)待测样品前处理
a.样品采集
样本类型：EDTA血浆。
容器和添加剂类型：紫帽管/EDTA抗凝管。
采集与处理：静脉采血，3500r/min离心10min，及时分离血浆；取1mL血浆加入2mL甲醇混匀，得到样本混合液。
保存方法：避光，冷藏，4℃可保存48h，常温可保存24h。
b.样品处理
移液枪移取10μL内标工作液至1.5mL塑料离心管中，加入300μL保存的样本混合液，2000r/min涡旋混匀5min，然后14000r/min离心10min，取上清液100μL作为待测样品。
(3)标准溶液和待测样品的检测
使用高效液相色谱质谱联用仪对标准溶液进行检测，建立苄丝肼的标准曲线；
在建立标准曲线时，以目标物的峰面积和其对应内标峰面积的比值为Y，以目标物的浓度和其对应内标浓度的比值为X；
使用高效液相色谱质谱联用仪对待测样品进行检测，并利用建立的标准曲线确定待测样品中苄丝肼的浓度。
检测参数为：
A、检测仪器为安捷伦MS6470A检测器
色谱分析所使用的色谱柱为Agilent Poroshell 120EC-C18，3.0×100mm，2.7μm；
流动相：A相为含0.3％甲酸的6mmol/L甲酸铵水溶液，B相为乙腈；分析色谱柱采用梯度洗脱方式，流速为0.4mL/min，柱温为40℃，进样量为5μL；分析时间3.0min，梯度洗脱条件见表1：
表1
对于质谱条件，采用电喷雾离子源(ESI)，正离子模式，多反应监测(MRM)，具体参数见表2，离子对参数见表3。
表2
表3
标准溶液中苄丝肼的色谱图见图1，血浆样品中苄丝肼的色谱图见图2；由图可知，本公开提供的样品前处理方法结合液相色谱-质谱检测条件，能够准确的分离并检测苄丝肼的含量。由图可知，苄丝肼及其内标物的保留时间如下表4所示：
表4
药物 保留时间/min
苄丝肼 1.31
苄丝肼-d3 1.31
实施例4
本实施例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，色谱分析所使用的色谱柱为phenomenexKinetex F5，对标准溶液检测得到的色谱图见图3。
实施例5
本实施例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，
(1)在样品前处理中，使用的甲醇含量为6mL；
(2)A相为含3％甲酸的1mmol/L甲酸铵水溶液，B相为乙腈，柱温为35℃，梯度洗脱条件见表5：
表5
实施例6
本实施例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，A相为含1.5％甲酸的10mmol/L甲酸铵水溶液，B相为乙腈，柱温为40℃，梯度洗脱条件见表6：
表6
性能分析1
对本公开实施例3-6提供的分析方法进行线性、回收率和精密度、基质效应等分析，方法如下：
(1)线性分析
对实施例3-6得到的苄丝肼的标准曲线论证其线性关系，结果见表7：
表7
由表7可知，本公开提供的分析方法的检测范围广，且线性相关性好，本公开提供的检测方法的检测限和定量限等各项指标均符合要求。
(2)回收率和精密度
取苄丝肼的标准工作液配制成低、中、高(15、60、600ng/mL)三种浓度进行加样回收率实验和精密度实验，按实施例3-6提供的方法进行测定，重复分析测定5批次，回收率和精密度如下表8所示：
表8：回收率
由表8可知，低、中、高的3个添加水平范围内的平均回收率为93-101％，精密度为2.5-6.5％，本公开提供的分析方法回收率、精密度均符合要求，重现性良好，加样回收率高，提高了检测结果的准确度。
(3)基质效应
在同一份高浓度(浓度大于等于10×基质样本中浓度)的标准溶液中加入不同基质比例的样本(90％基质、80％基质、50％基质、20％基质、0基质)，每个基质样本考察5个不同比例条件。对实施例3的研究发现：
1.不同基质相同基质比例的目标物面积/内标面积的RSD≤10％；
2.相同基质不同基质比例的目标物面积/内标面积比值偏倚＝(X基质-0基质)/0基质均小于10％，均符合要求。
实施例7
本实施例提供了一种样本处理方法以及检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，使用的蛋白沉淀剂为乙腈。
对比例1
本对比例提供了一种样本处理方法以及检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，步骤(2)中的待测样品前处理步骤为：
a.样品采集
样本类型：EDTA血浆；
容器和添加剂类型：紫帽管/EDTA抗凝管；
采集与处理：静脉采血，3500r/min离心10min，及时分离血浆；
保存方法：避光，冷藏；
b.样品处理
移液枪移取10μL内标工作液至1.5mL塑料离心管中，加入200μL血浆和400μL甲醇，2000r/min涡旋混匀5min，然后14000r/min离心10min，取上清液100μL作为待测样品。
对比例2
本对比例提供了一种样本处理方法以及检测方法。
与实施例3的区别在于，在本对比例中，步骤(2)待测样品前处理中的蛋白沉淀剂为6％高氯酸。
性能分析2
对实施例3、7和对比例1、2的提供的样品前处理方法利用实施例3提供的检测方法进行色谱分析，分析方法为：
根据实施例7和对比例1、2进行模拟实验，在空白血浆样本中添加苄丝肼的标准工作液配制成低、中、高(15、60、600ng/mL)三种浓度样本作为采血完成后的模拟样本，按照实施例7和对比例1-2对上述样本进行处理，4℃放置6h后进行样本处理并上机检测，检测结果见表9：
表9
注：检测准确度计算公式为：
检测准确度/％＝(检测结果/模拟样本的制备浓度)×100％
由表9可知，在对比例1和对比例2的条件下，样本中苄丝肼浓度大幅度降低，检测浓度与理论浓度出现极大偏差，对比例1-2的条件均不能满足临床检测要求。
实施例8
本对比例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本对比例中，色谱分析中的流动相B相为甲醇。
对比例3
本对比例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本对比例中，色谱分析中的梯度洗脱条件见表10：
表10
性能分析3
(1)对实施例3、8和对比例3提供的检测方法进行分析，分析方法如下：
根据实施例3、8和对比例3进行模拟实验，在空白血浆样本中添加苄丝肼的标准工作液配制成60ng/mL的加标样作为采血完成后的模拟样本，按照实施例3、8和对比例3对上述样本进行处理并上机检测，检测结果见图4-5：
图4为实施例8对加标样检测得到的苄丝肼的色谱图，图5为对比例3对加标样检测得到的苄丝肼的色谱图，由图4-5的对比可知，采用本公开提供的检测方法对苄丝肼的检测，苄丝肼的保留较好且基质效应低，而改变检测条件，则有可能导致苄丝肼保留弱，基质效应高导致检测限高，不能达到检测要求。
由实施例和对比例的性能测试可知，利用本公开提供的梯度洗脱条件配合其他条件使用，能够得到良好的色谱分离及较高的准确度和精密度。
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅是本公开的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本公开。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本公开的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本公开将不会被限制于本文所述的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种检测血液中苄丝肼浓度的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)配制至少三种不同浓度的含有苄丝肼及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱-质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果建立所述苄丝肼的标准曲线；
(2)将待测血样与蛋白沉淀剂、内标物混合，离心，取上清液作为待测样品；
(3)利用液相色谱-质谱对所述待测样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待测血样中苄丝肼的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂选自甲醇和/或乙腈；
和/或，所述待测血样和蛋白沉淀剂的体积比为1:(2-6)。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件包括：
流动相：A相为含有0.2-3％甲酸、1-10mmol/L甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B相为乙腈和/或甲醇；
梯度洗脱：
0.00min：A相98-80％，B相2-20％；
0.50min：A相98-80％，B相2-20％；
0.60min：A相60-40％，B相40-60％；
1.00min：A相60-40％，B相40-60％；
1.10min：A相98-80％，B相2-20％；
3.00min：A相98-80％，B相2-20％；
和/或，柱温为35-40℃；
和/或，所述流动相的流速为0.3-0.5mL/min。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件包括：使用的分析色谱柱为Agilent Poroshell 120EC-C18、phenomenex Kinetex F5、Waterscortecs T3、岛津Shim-pack veiox C18。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述质谱的条件包括：雾化气温度：300-400℃，雾化气气流：10-14L/min，喷雾器：40-50psi，毛细管电压：4000-4500V，电子倍增器电压值：300-350V。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述苄丝肼的内标物为苄丝肼-d3。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述待测样品的制备方法包括：
将待处理血样与蛋白沉淀剂混合并保存备用，测试前，将混合液与内标工作液混合，离心，取上清液为待测样品；
其中，所述内标工作液为含有所述苄丝肼的内标物的溶液。
8.根据权利要求7所述的样品前处理方法，其特征在于，所述待处理血样和所述内标工作液的体积比为(5-10):1；
和/或，所述待处理血样为血浆或血清；
和/或，所述内标工作液利用稀释剂I由内标储备液稀释得到，所述内标储备液是利用溶剂溶解所述苄丝肼的内标物标准品得到。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其特征在于，所述标准溶液的制备方法包括：将内标工作液、含有苄丝肼的标准工作液和稀释剂II混合，得到所述标准溶液，所述标准工作液包括至少三个级别浓度，优选包括至少七个级别浓度；
各所述级别浓度的标准工作液均利用稀释剂II由中间液稀释得到，所述中间液利用稀释剂II由母液稀释得到，所述母液利用溶剂溶解所述苄丝肼的标准品得到。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述稀释剂I为甲醇水溶液，优选所述甲醇水溶液的浓度为65-75％；
所述稀释剂II为甲醇水溶液，优选所述甲醇水溶液的浓度为5-15％。
CN202310632281.1A 2023-05-31 2023-05-31 一种检测血液中苄丝肼浓度的方法 Pending CN116908319A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310632281.1A CN116908319A (zh) 2023-05-31 2023-05-31 一种检测血液中苄丝肼浓度的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310632281.1A CN116908319A (zh) 2023-05-31 2023-05-31 一种检测血液中苄丝肼浓度的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116908319A true CN116908319A (zh) 2023-10-20

Family

ID=88365670

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310632281.1A Pending CN116908319A (zh) 2023-05-31 2023-05-31 一种检测血液中苄丝肼浓度的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116908319A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111830168B (zh) 一种泊洛沙姆的lc-hr-ms/ms定量分析方法
CN111766317B (zh) 聚乙二醇和水为制剂中gs-441524含量的测定方法
CN112730706A (zh) 一种液相色谱串联质谱检测生物小分子标志物的方法
CN112748198A (zh) 一种液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法装置
CN108072712B (zh) 一种sd大鼠血浆中新化合物wsj-557的血药浓度定量分析方法
CN111220722B (zh) 一种同时测定土壤中8种对羟基苯甲酸酯类化合物的方法
CN110554104B (zh) 一种hplc-ms/ms联用检测人血浆中咪达那新的方法
CN116642970A (zh) 一种同时检测血液中6种药物浓度的样品前处理方法
CN110824081A (zh) 一种血虚小鼠模型的脂质组学分析方法
CN116908319A (zh) 一种检测血液中苄丝肼浓度的方法
CN111307992B (zh) 一种定量检测pm2.5中有机酸的柱前衍生液质联用分析方法
CN110007023B (zh) 鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法及其与蛋白大分子相互作用的分析方法
CN116183783B (zh) 一种同时检测血液中6种药物浓度的方法
CN111579690A (zh) 一种利用霉酚酸-d3作为内标物测定生物样本中霉酚酸含量的质谱检测试剂及其使用方法
CN112362724A (zh) 一种快速检测人体尿液中3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺含量的方法
CN112213417A (zh) 一种检测干血斑中霉酚酸药物浓度的试剂盒及检测方法
CN113671064B (zh) 一种定量分析血浆中氨来占诺的血药浓度的检测方法
CN112903856B (zh) 一种用于检测水样中微量氯甲酰化合物的前处理方法及其应用
CN110672755B (zh) 一种基于lc-mc/ms同时测定肾上腺素及其代谢产物的方法
CN116500162A (zh) 一种同时检测6种药物浓度的液相色谱-质谱分析方法
CN114924015B (zh) 一种苦参碱和氧化苦参碱的快速检测方法
CN111122742B (zh) 一种待测样品中二巯基聚乙二醇残留量的检测方法
Sommadossi et al. Determination of theophylline in plasma by high performance liquid chromatography
CN117074581A (zh) 一种同时检测6种免疫抑制剂浓度的血样前处理方法
Degen et al. The determination of phanquone in biological material by gas-liquid chromatography

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination