CN111281944A - 一种泻白散组合物及其制备方法与质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药制备及分析技术领域，公开了一种泻白散组合物及其制备方法与质量检测方法，泻白散组合物按重量数计，由桑白皮1.965～5.895g，地骨皮1.965～5.895g，炙甘草0.1965～0.5895g，粳米1～2g组成。所述泻白散组合物的质量检测方法为：采用高效液相色谱建立泻白散组合物指纹图谱；用高效液相色谱法测定泻白散组合物中绿原酸、甘草苷、甘草酸铵含量；用高效液相色谱法测定泻白散组合物中地骨皮甲素的含量。本发明提供的泻白散组合物的质量检测方法中的指纹图谱可全面反映出泻白散的质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制泻白散组合物制剂产品质量的目的。

Description

一种泻白散组合物及其制备方法与质量检测方法

技术领域

本发明属于中药制备及分析技术领域，尤其涉及一种泻白散组合物及其制备方法与质量检测方法。

背景技术

目前，最接近的现有技术：中药汤剂是临床用药的主流，但因煎煮、携带不方便，煎煮制备的汤剂质量往往因人、因煎煮器具而存在较大差异，而经典名方临床疗效确切，因煎煮简便、物美价廉而深受广大消费者喜爱，运用现代科学技术将经典名方开发承携带方便、便于服用的中药制剂，不仅是对中医药的传承，也能更好的促进经典名方的临床应用。颗粒剂制备工艺相对简单、易赋形，服用、携带方便，在服用形式上与传统汤剂最为一致，能较大限度的保留传统汤剂的优点，因此以汤剂形式服用的经典名方选择颗粒剂最为适宜。颗粒剂的开发应遵循“原汁原味”的原则，在现有技术条件下，首先通过研究制备明确煎煮参数的标准(基准)汤剂，对基准汤剂的关键质量属性进行研究，主要以单处方标准汤剂的固含量(干膏率)、指纹图谱、多指标成分作为质量参比，指导颗粒的研制。研究中为减少不同来源的饮片存在的质量差异对一致性研究带来影响，选择随行对照的方式，采用同一批次的饮片，煎煮18份标准汤剂，以其关键质量的均值作为颗粒剂制备工艺参数研制的“基准”。本发明采用指纹图谱技术，结合多波长测定多指标成分的方式对泻白散标准汤剂(以下称为泻白散组合物)的质量进行全面评价。

泻白散出自宋代钱乙所著《小儿药证直诀》，该方由桑白皮、地骨皮、甘草、粳米四味中药组成，其剂型为煮散。主治小儿肺盛，气急喘嗽。现代临床运用其加减方治疗儿童及成人的呼吸系统疾病，慢性炎症性皮肤病、肺经热盛之鼻病以及中晚期非小细胞肺癌等。自古至今应用广泛，临床效果显著。因此，该方具有较大的开发价值。为了更全面、更有效地控制泻白散临床用药的质量，使其安全性和疗效更加有所保障，将中医药和中成药发扬与世界接轨，需要对本中药组合物采用更为先进的质量检测手段。

临床上常应用“泻白散”治疗小儿麻疹初期、肺炎或支气管炎等属肺中伏火郁热者，取得了良好的效果。该方由四位药组成，其中，桑白皮为双子叶植物桑科桑树除去栓皮后的干燥根皮，主要含有黄酮类化合物、香豆素类、苯骈呋喃衍生物、多糖类、挥发油多种成分。桑白皮总黄酮具有较强的镇咳、祛痰作用，桑白皮水提物、碱提物以及非丙酮和丙酮提取物均具有显著的抗炎作用；桑皮苷具有平喘作用；桑白皮的乙酸乙酯提取物、非丙酮提取物等有效部位均具有舒张心血管的作用；另外，桑白皮低壳聚糖和挥发油均可有效抑制肿瘤细胞的生长，具有明显的抗癌作用。地骨皮，别名枸杞皮，为茄科、枸杞属植物，是枸杞(Lycium chinense Mill.)的根皮。具有明显的降血糖作用，地骨皮水煎剂的降糖作用，与抑制体内氧自由基的产生、并增强抗氧化能力、加速自由基的清除有关，地骨皮甲素为降血压的主要成分，地骨皮的水煎液及醇提取物都有较好的抗菌活性，且对甲型溶血性链球菌、肺炎双球菌、铜绿假单胞菌有明显的抑菌作用。除此之外，地骨皮还具有解热、镇痛及增强免疫调节作用。甘草为豆科植物甘草的干燥根及根茎，含甘草甜素及多种黄酮类成份，具有多种生物活性。甘草酸类化合物通过对多种病毒的直接作用和诱生干扰素，增强天然杀伤细胞和巨噬细胞活性等活化宿主免疫功能的问接作用而发挥广谱的抗病毒作用，对艾滋病毒、单纯性疱疹病毒、带状疱疹病毒均有抑制作用。还具有诱导干扰素的作用，刺激细胞产生γ-干扰素，而γ-干扰素为国外报道具有抑制SARS病毒的作用。此外，甘草还有提高免疫功能、抗炎、解毒等作用。粳米，别名大米、粳粟米等，用于呕吐、泻痢或温热病所致的脾胃阴伤、胃气不足，口干渴等。粳米有润肠通便有助胃肠蠕动，对胃病、便秘、痔疮等疗效、促进血液循环，从而减少高血压、中和胃酸，缓解胃痛。

“泻白散”传统用药剂型为煮散剂，为了更好地明确泻白散的临床疗效，医药工作者对该方进行了大量的研究。主要针对临床药理作用以及泻白散方义的历史演变进行了大量归类记录和研究，对质量检测的研究报道较少。中药复方具有多靶点、多成分的特点。此外，中国药典对其两味药材桑白皮、地骨皮无指标成分检测规定，大部分现有研究在质量检测上成分单一，难以全面反映产品的质量状况。目前在泻白散全面质量检测的研究尚未见报道，因此目前本领域需要一种较为全面的泻白散组合物的质量检测方法。

综上所述，现有技术存在的问题是：泻白散经典方具体煎煮处方量及煎煮条件没有明确方法，此外，现有技术对泻白散组合物的质量检测成分单一，难以全面反映产品的质量状况。目前关于泻白散全面质量检测的研究尚未见报道。

解决上述技术问题的难度：古籍与“经典名方第一批”中的处方表述有所出入，按照记载技术进行煎煮难以实现，需要考究古籍并结合“目录”要求重新计算处方量及煎煮用量。此外，针对泻白散组合物的质量控制的现有技术及论文成果较少，创建全新全面的质量检测方法并应用于泻白散组合物的质量控制有一定的难度。

解决上述技术问题的意义：经典名方泻白散用于治疗小儿肺盛，气急喘嗽，复方的质量是临床疗效的重要保障。应用现代科研手段和方法制备泻白散组合物，建立泻白散组合物的质量控制方法，保障复方的质量稳定可控，有利于进一步保证其在临床发挥更精准的疗效，并为下一步颗粒剂的研究及泻白散加减方的开发提供技术基础。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种泻白散组合物及其制备方法与质量检测方法，旨在解决现有技术中的中药复方制剂在含量检测上只有一个或两个指标成分，质量检测相关方法缺失、指标少，难以全面反映多组分的泻白散组合物的质量状况，从而提供泻白散组合物的全面整体质量检测方法。

本发明是这样实现的，一种泻白散组合物，所述泻白散组合物按重量数计，由桑白皮1.965～5.895g、地骨皮1.965～5.895g、炙甘草0.1965～0.5895g和粳米1～2g组成。

本发明的另一目的在于提供一种泻白散组合物的制备方法，所述泻白散组合物的制备方法包括以下步骤：

步骤一，按每一煎重量份计称取如下饮片：锉散、炒黄的桑白皮，锉散地骨皮，锉散炙甘草，粳米。

步骤二，将粳米及三味饮片置于包煎袋内，后置于2L砂锅中，加120ml(约为药材的12.30倍量)水，浸泡30分钟。

步骤三，加盖，武火加热煮沸，文火保持微沸至煎液84ml，即得泻白散组合物。

本发明的另一目的在于提供一种泻白散组合物的质量检测方法，所述泻白散组合物的质量检测方法如下：

步骤1，采用高效液相色谱建立泻白散组合物指纹图谱。

步骤2，用高效液相色谱法测定泻白散组合物中绿原酸、甘草苷、甘草酸铵含量。

步骤3，用高效液相色谱法测定泻白散组合物中地骨皮甲素的含量。

进一步，步骤1中，所述高效液相色谱条件为：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流速0.6ml/min～1.0ml/min，柱温25℃～35℃，

检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为215nm～255nm；

理论塔板数按照参照物甘草苷峰计算，不得小于3000；

参照物溶液为甘草苷的甲醇溶液；

流动相为0.05～0.20％磷酸水-乙腈，按照洗脱系统梯度洗脱程序进行梯度洗脱。

进一步，步骤1中，所述指纹图谱包括9个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：

1号峰的相对保留时间RRT为5.303，2号峰的相对保留时间RRT17.11，3号峰的相对保留时间RRT为27.349，4号峰(S)峰的相对保留时间RRT为27.73，5号峰的相对保留时间RRT为28.381，6号峰的相对保留时间RRT为31.277，7号峰的相对保留时间RRT为37.858，8号峰的相对保留时间RRT为39.069，9号峰的相对保留时间RRT为46.112，其中4号峰S峰是参照物的色谱峰。

进一步，步骤1中，所述泻白散组合物参照物溶液和供试品溶液按如下方法制备：

(1)供试品溶液的制备：取泻白散组合物0.0293～0.1758g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50～100％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液，即得；

(2)参照物溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇配制成9.64μg/ml的参照物溶液，即得。

进一步，供试品溶液及参照物溶液进样量为2～20μl。

进一步，步骤2中，所述高效液相色谱条件为：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流速0.6ml/min～1.0ml/min，柱温25℃～35℃，

检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为215nm～255nm；

绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的理论塔板数不得小于3000；

对照品溶液为绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的甲醇溶液；

流动相为0.05～0.20％磷酸水溶液-乙腈，按照洗脱系统梯度洗脱程序进行梯度洗脱。

进一步，所述供试品溶液、对照品溶液按如下方法制得：

(I)供试品溶液的制备：精密称取泻白散组合物0.0293～0.1758g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50～100％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液，即得供试品溶液；

(II)对照品溶液的制备：精密称定绿原酸、甘草苷、甘草酸铵对照品，加甲醇分别制得浓度为绿原酸8.20μg/ml、甘草苷9.64μg/ml、甘草酸铵120.24μg/ml的对照品溶液，即得。

进一步，所述测定绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的含量时的进样量为2～20μl。

进一步，步骤3中，所述高效液相色谱色谱条件为：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流速0.6ml/min～1.0ml/min，柱温25℃～35℃，

检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为215nm～255nm；

被测物质的理论塔板数不得小于3000；

对照品溶液为地骨皮甲素的甲醇溶液；

流动相为0.05～0.20％磷酸水溶液-乙腈，按照洗脱系统梯度洗脱程序进行梯度洗脱。

进一步，所述供试品溶液、对照品溶液按如下方法制得：

(a)供试品溶液的制备：精密称取泻白散组合物0.0293～0.1758g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50～100％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液1ml至5～10ml容量瓶内，定容，摇匀，即得供试品溶液；

(b)对照品溶液的制备：精密称定地骨皮甲素对照品，加甲醇制得浓度为地骨皮甲素11.10μg/ml的对照品溶液，即得。

进一步，所述测定地骨皮甲素的含量时的进样量为2～20μl。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：本发明提供的泻白散组合物的质量检测方法中的指纹图谱可全面反映出泻白散的质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制泻白散组合物制剂产品质量的目的。与已发表技术对比如下表所示：

本发明提供的桃核承气汤组合物的质量检测方法采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所测指纹图谱进行辨认，操作方便、快捷；而且，以此得出的相以度结果对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。

本发明提供的泻白散组合物的质量检测方法经过对供试品制备方法的考察及测定指纹图谱的仪器，色谱柱、流动相、检测波长等条件进行系统的优选，建立了指纹图谱测定条件并进行了方法学考察，在对多批本组合物指纹图谱检测结果的基础上，逐渐积累数据，提出了对照指纹图谱作为本品指纹图谱标准，从而达到能够更全面、有效地控制制剂质量的目的。

本发明提供的泻白散组合物的质量检测方法采用国家药典委员会提供中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算本组合物相似度，经多次试验研究，通过与计算相对保留时间及相对峰面积的方法相比较，所得出的评价结论基本一致，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统评价指纹图谱的相似度，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。

本发明提供的泻白散组合物的质量检测方法采用指纹图谱较全面的表征组合物的质量信息，从整体上反映产品质量，同时针对处方三味药材，采用多波长切换技术建立其中两味(约占67％)的含量控制指标，其中供试品制备方法简单、便捷，且测定结果准确、可靠；本发明考虑目前现有技术在控制复方中成药上往往只有一个或两个指标性成分，且缺乏指纹图谱整体表征产品质量信息，因此提出以指纹图谱结合多指标成分含量控制的方式全面的控制泻白散组合物质量。

本发明提供的泻白散组合物的质量检测方法提出采用指纹图谱，结合多波长切换技术测定泻白散组合物种多个指标成分。

本发明提供的泻白散组合物的质量检测方法可以为泻白散组合物提供一种较全面的质量检测方法。

附图说明

图1是本发明实施例提供的泻白散组合物的制备方法流程图。

图2是本发明实施例提供的泻白散组合物的质量检测方法流程图。

图3是本发明实施例提供的绿原酸对照品DAD图。

图4是本发明实施例提供的甘草苷对照品DAD图。

图5是本发明实施例提供的甘草酸铵对照品DAD图。

图6是本发明实施例提供的地骨皮甲素对照品DAD图。

图7是本发明实施例提供的绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、地骨皮甲素混合对照品图谱。

图8-9是本发明实施例提供的绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的供试品溶液图谱。

图10是本发明实施例提供的地骨皮甲素的供试品溶液图谱。

图11是本发明实施例提供的指纹图谱测定中参照物溶液色谱图。

图12是本发明实施例提供的指纹图谱测定中的对照指纹图谱。

图13是本发明实施例提供的连续18批样品指纹图谱对比色谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种泻白散组合物及其制备方法与质量检测方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。

本发明实施例提供的泻白散组合物按重量数计，由桑白皮1.965～5.895g、地骨皮1.965～5.895g、炙甘草0.1965～0.5895g和粳米1～2g组成。

如图1所示，本发明实施例提供的泻白散组合物的制备方法包括以下步骤：

S101，按每一煎重量份计称取如下饮片：锉散、炒黄的桑白皮，锉散地骨皮，锉散炙甘草，粳米。

S102，将粳米及三味饮片置于包煎袋内，后置于2L砂锅中，加120ml(药材的12.30倍量)水，浸泡30分钟。

S103，加盖，武火加热煮沸，文火保持微沸至煎液84ml，即得泻白散组合物。

如图2所示，本发明实施例提供的泻白散组合物的质量检测方法如下：

S201，采用高效液相色谱建立泻白散组合物指纹图谱。

S202，用高效液相色谱法测定泻白散组合物中绿原酸、甘草苷、甘草酸铵含量。

S203，用高效液相色谱法测定泻白散组合物中地骨皮甲素的含量。

本发明实施例提供的绿原酸对照品DAD图如图3所示。

本发明实施例提供的甘草苷对照品DAD图如图4所示。

本发明实施例提供的甘草酸铵对照品DAD图如图5所示。

本发明实施例提供的地骨皮甲素对照品DAD图如图6所示。

下面结合实施例对本发明作进一步描述。

本发明试药及仪器：

试药：

地骨皮甲素对照品(批号：W02J11Z107432，上海源叶生物科技有限公司)绿原酸对照品(批号：110753–201817，中国食品药品检定研究院)

甘草苷对照品(批号：111610–201607，中国食品药品检定研究院)

甘草酸铵对照品(批号：P13A9L67602，上海源叶生物科技有限公司)

甲醇(Fisher Scientific，色谱纯)

乙睛(Fisher Scientific，色谱纯)

泻白散组合物(试验室自制，具体方法见实施例1)。

试剂为分析纯，水为超纯水。

仪器：

Agilent 1260高效液相色谱仪(1260DAD检测器)；

实施例1：泻白散组合物的制备

按重量份计称取如下饮片：桑白皮(锉散、炒黄)3.93g，地骨皮3.93g，炙甘草0.393g，粳米1.5g；将粳米及三味饮片置于包煎袋内，后置于2L砂锅中，加120ml水，浸泡30分钟，加盖，武火加热煮沸，文火保持微沸至煎液84ml，即得泻白散组合物。

实施例2：HPLC法测定泻白散组合物中绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的含量

(1)色谱条件及系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸水为流动相A，以乙腈为流流动相B；检测波长：220nm、250nm；理论塔板数按对照品计算应不小于3000；流速：0.8ml/min；柱温：30℃。梯度洗脱程序叫表1。

表1 梯度洗脱程序

(2)对照品溶液的制备

精密称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵对照品适量，加甲醇制成每1ml分别含绿原酸8.20μg、甘草苷9.64μg、甘草酸铵120.24μg的溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备

精密称取泻白散组合物0.1172g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液，有机系0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

(4)检测波长的选择

《中国药典》2015年版无桑白皮、地骨皮项下绿原酸相关检测方法记载，取绿原酸对照品的3D-DAD在线图谱观察，选取其最大吸收约220nm作为检测波长。《中国药典》2015年版甘草中甘草苷和甘草酸铵的检测波长为237nm，由于本方中甘草含量较低，237nm下甘草酸铵峰面积较低，故选择在最大吸收波长附近250nm检测甘草酸铵。秉着运用最少波长组的简便方法原则，甘草苷选择在220nm下进行检测。

(5)测定法

精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。(见图8-10)

(6)标准曲线的制备

按照对照品溶液制备方法，取绿原酸对照品，配制成浓度为0.82、1.64、2.05、3.28、4.10、10.25、20.50μg/ml的对照品溶液；甘草苷配制成0.96、1.93、2.41、3.86、4.82、9.64、24.10、48.20μg/ml的对照品溶液；甘草酸铵配制成12.02、24.05、30.06、48.10、60.12、120.24、300.60、601.20μg/ml的对照品溶液。分别进样10μ1，测定，记录色谱图。以浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，以浓度对峰面积进行回归分析，绘制标准曲线。绿原酸的线性回归方程为：A＝16.759C-3.9088，r＝0.9997，线性关系良好；甘草苷线性回归方程为A＝37.857C-0.9558，r＝1.0000，线性关系良好；甘草酸铵线性回归方程为A＝9.9376C-96.794，r＝0.9999，线性关系良好。绿原酸的线性范围为0.82～25.50μg/ml，甘草苷的线性范围为0.96～48.20μg/ml，甘草酸铵的线性范围为12.02～601.20μg/ml。本品所用供试品溶液与对照品溶液的浓度均在此范围内。

(7)方法学考察及样品测定

该测定方法经过方法学验证，空白样品对测定结果无干扰，样品在48h的稳定性良好，绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的RSD值依次分别为：2.84％，1.66％，1.33％；重复性测定结果RSD值依次分别为1.36％，1.27％，1.49％。加样回收率为：绿原酸102.00％(n＝6)，RSD为2.99％；甘草苷99.18％(n＝6)，RSD为3.42％；甘草酸铵100.14％(n＝6)，RSD为1.51％。表明方法准确度高，重复性良好。用本方法测定18批次泻白散组合物的绿原酸、甘草苷、甘草酸铵含量，结果件表2。

表2 18批泻白散组合物中绿原酸、甘草苷、甘草酸铵含量结果

实施例3：HPLC法测定泻白散组合物中地骨皮甲素的含量

(1)色谱条件及系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸水为流动相A，以乙腈为流流动相B；检测波长：220nm；理论塔板数按地骨皮甲素算应不小于3000；溜速：0.8ml/min；柱温：30℃。梯度洗脱程序见表3。

表3 梯度洗脱程序

(2)对照品溶液的制备

精密称取地骨皮甲素对照品适量，加甲醇制成每1ml含地骨皮甲素11.10μg的溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备

精密称取泻白散组合物0.1172g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液，使用移液管精密移取的泻白散组合物1ml至10ml容量瓶内，加50％甲醇超声溶解并稀释至刻度，即得。

(4)检测波长的选择

《中国药典》2015年版地骨皮项下无地骨皮甲素相关检测方法记载，取地骨皮甲对照品的3D-DAD在线图谱观察，其吸收段约为190-230nm，最大吸收约为198nm，但末端吸收位置杂峰较多，重复性差，为了兼并达到检测地骨皮甲素的目的以及简便的检测原则，选取220nm作为检测波长。

(5)测定法

精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。(见图7、图11)

(6)标准曲线的制备

精密称取地骨皮甲素适量，配制成2.22、2.78、4.44、5.55、11.10、27.76、55.52μg/ml的对照品溶液；分别进样10μ1，测定，记录色谱图。以浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，以浓度对峰面积进行回归分析，绘制标准曲线。地骨皮甲素的线性回归方程为：A＝4.4493C-0.1478，r＝0.9997，在浓度为的范围内，线性关系良好。本品所用供试品溶液与对照品溶液的浓度均在此范围内。

(7)方法学考察及样品测定

该测定方法经过方法学验证，阴性样品对测定结果无干扰，样品在48h的稳定性良好，RSD值为1.37％；重复性测定结果RSD值为3.00％；加样回收率为：100.79％(n＝6)，RSD为3.52％。表明方法准确度高，重复性良好。用本方法测定18批次泻白散组合物的地骨皮甲素含量，结果见表4。

表4 18批泻白散组合物中地骨皮甲素含量结果

实施例4：HPLC法建立泻白散组合物的指纹图谱的检测方法

(1)色谱条件及系统适应性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18，4.6×250mm，3.5μm。0.1％磷酸水为流动相A，以乙腈为流流动相B；检测波长：220nm；理论塔板数按对照品计算应不小于3000；流速：0.8ml/min；柱温：30℃。梯度洗脱程序见表5。

表5 梯度洗脱程序

(2)参照物溶液的制备

精密称取甘草苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含甘草苷9.64μg的参照物溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备

精密称取泻白散组合物0.1172g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液，有机系0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

(4)测定法

精密吸取参照物溶液与供试品溶液10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

泻白散组合物对照指纹图谱的确定及相似度分析

制备泻白散组合物18份，分别制泻白散组合物供试品溶液，按指纹图谱测定法测定，记录图谱。通过分析，确定其共有特征峰为9个(见附图12-13)，所述的9个共有特征峰的相对保留时间偏差RSD均小于2％,即：

1号峰的相对保留时间RRT为5.303，RSD％为0.07；

2号峰的相对保留时间RRT为17.11，RSD％为0.07；

3号峰的相对保留时间RRT为27.349，RSD％为0.02；

S峰的相对保留时间RRT为27.73，RSD％为0.02；

5号峰的相对保留时间RRT为28.381，RSD％为0.02；

6号峰的相对保留时间RRT为31.277，RSD％为0.04；

7号峰的相对保留时间RRT为37.858，RSD％为0.04；

8号峰的相对保留时间RRT为39.069，RSD％为0.02；

9号峰的相对保留时间RRT为46.112，RSD％为0.02。

运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)处理图谱，以S(1)作为参照图谱，得到泻白散对照指纹图谱(见附图12)。计算样品相似度，结果表明，煎煮的18份泻白散组合物相似度在0.859-1.000之间，相似度较高。18批泻白散组合物相似度评价结果见表6。

表6 18批泻白散组合物相似度评价结果

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种泻白散组合物，其特征在于，所述泻白散组合物按重量数计，由桑白皮1.965～5.895g、地骨皮1.965～5.895g、炙甘草0.1965～0.5895g和粳米1～2g组成。

2.一种如权利要求1所述的泻白散组合物的制备方法，其特征在于，所述泻白散组合物的制备方法包括以下步骤：

步骤一，按每一煎重量份计称取如下饮片：锉散、炒黄的桑白皮，锉散地骨皮，锉散炙甘草，粳米；

步骤二，将粳米及三味饮片置于包煎袋内，后置于2L砂锅中，加120ml(药材的12.30倍量)水，浸泡30分钟；

步骤三，加盖，武火加热煮沸，文火保持微沸至煎液84ml，即得泻白散组合物。

3.一种如权利要求1所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，所述泻白散组合物的质量检测方法如下：

步骤1，采用高效液相色谱建立泻白散组合物指纹图谱；

步骤2，采用高效液相色谱法测定泻白散组合物中绿原酸、甘草苷、甘草酸铵含量；

步骤3，用高效液相色谱法测定泻白散组合物中地骨皮甲素的含量。

4.如权利要求3所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，步骤1中，所述高效液相色谱条件为：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流速0.6ml/min～1.0ml/min，柱温25℃～35℃，

检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为215nm～255nm；

理论塔板数按照参照物甘草苷峰计算，不小于3000；

参照物溶液为甘草苷的甲醇溶液；

流动相为0.05～0.20％磷酸水-乙腈，按照洗脱系统梯度洗脱程序进行梯度洗脱。

5.如权利要求3所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，步骤1中，所述指纹图谱包括9个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：

1号峰的相对保留时间RRT为5.303，2号峰的相对保留时间RRT17.11，3号峰的相对保留时间RRT为27.349，4号峰(S)峰的相对保留时间RRT为27.73，5号峰的相对保留时间RRT为28.381，6号峰的相对保留时间RRT为31.277，7号峰的相对保留时间RRT为37.858，8号峰的相对保留时间RRT为39.069，9号峰的相对保留时间RRT为46.112，其中4号峰S峰是参照物的色谱峰。

6.如权利要求3所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，步骤1中，所述泻白散组合物参照物溶液和供试品溶液按如下方法制备：

(1)供试品溶液的制备：取泻白散组合物0.0293～0.1758g，置于50ml锥形瓶中，加10ml50～100％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液，即得；

(2)参照物溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇配制成9.64μg/ml的参照物溶液，即得。

7.如权利要求3所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，所述进样量为2～20μl。

8.如权利要求3所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，步骤2中，所述高效液相色谱条件为：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流速0.6ml/min～1.0ml/min，柱温25℃～35℃，

检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为215nm～255nm；

绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的理论塔板数不得小于3000；

对照品溶液为绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的甲醇溶液；

流动相为0.05～0.20％磷酸水溶液-乙腈，按照洗脱系统梯度洗脱程序进行梯度洗脱。

9.如权利要求3所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，步骤2中，所述供试品溶液、对照品溶液按如下方法制得：

(I)供试品溶液的制备：精密称取泻白散组合物0.0293～0.1758g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50～100％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液，即得供试品溶液；

(II)对照品溶液的制备：精密称定绿原酸、甘草苷、甘草酸铵对照品，加甲醇分别制得浓度为绿原酸8.20μg/ml、甘草苷9.64μg/ml、甘草酸铵120.24μg/ml的对照品溶液，即得。

10.如权利要求3所述的泻白散组合物的质量检测方法，其特征在于，所述测定绿原酸、甘草苷、甘草酸铵的含量时的进样量为2～20μl；

所述高效液相色谱色谱条件为：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流速0.6ml/min～1.0ml/min，柱温25℃～35℃；

检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为215nm～255nm；

被测物质的理论塔板数不得小于3000；

对照品溶液为地骨皮甲素的甲醇溶液；

流动相为0.05～0.20％磷酸水溶液-乙腈，按照洗脱系统梯度洗脱程序进行梯度洗脱；

步骤3中，所述供试品溶液、对照品溶液按如下方法制得：

(a)供试品溶液的制备：精密称取泻白散组合物0.0293～0.1758g，置于50ml锥形瓶中，加10ml 50～100％甲醇溶解，称重，超声溶解，放冷，补足重量，摇匀，取溶液，离心，取上清液1ml至5～10ml容量瓶内，定容，摇匀，即得供试品溶液；

(b)对照品溶液的制备：精密称定地骨皮甲素对照品，加甲醇制得浓度为地骨皮甲素11.10μg/ml的对照品溶液，即得；

所述测定地骨皮甲素的含量时的进样量为2～20μl。

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