CN111268808B - 土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中氨氮的方法 - Google Patents

土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中氨氮的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种利用土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中氨氮的方法。首先从稀土浸矿场地采集土壤样品和淋出液样品，然后从其中分离、富集、筛选出土著硫酸盐还原菌菌群和土著脱氮菌菌群，再利用硫酸盐还原菌菌群对酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液进行预处理使其pH升高，最后用土著脱氮菌菌群对预处理后的淋出液进行再处理，最终实现了淋出液的达标排放。本发明使用的硫酸盐还原菌菌群和脱氮菌菌群均来源于稀土浸矿场地，对稀土浸矿场地残留铵盐淋出液适应性强，整个方法具有工艺简单、生产成本低、环境友好等优点，尤其适用于稀土浸矿场地残留铵盐淋出液的大规模脱氮处理。

Description

土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留 铵盐淋出液中氨氮的方法
技术领域
本发明涉及环境微生物和污水处理技术领域，具体涉及一种利用土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中氨氮的方法。
背景技术
离子型稀土矿是我国稀土矿产业体系之一，该稀土矿富含中重稀土，广泛应用于国防、电子、航天、能源、交通等众多行业，是我国重要战略性资源。几十年来，离子型稀土矿开采工艺已从池浸、堆浸发展到原地浸取。原地浸取工艺不开挖表土、不破坏植被，通过在山体表面布设注液井，将硫酸铵溶液作为浸取剂注入到矿体中，稀土离子与铵根离子发生离子交换反应后经收液工程汇集至水冶车间，再通过添加碳酸氢铵等试剂进行沉淀富集，最终得到碳酸盐稀土产品。该工艺在一定程度上减少了离子型稀土矿开采过程中对环境的破坏，但在整个开采过程中使用了大量铵盐，使得稀土浸矿场地残留有大量铵盐。通过注入清水或其它洗脱剂进行淋洗，借助原地浸出工艺的注液系统和收液系统可以收集残留铵盐淋出液，便于集中处理。
不同于其他行业的氨氮废水，稀土浸矿场地残留铵盐淋出液具有如下特征：①pH呈酸性，约在4-6之间；②碳氮比低；③淋出液氨氮浓度值差异大(低则50mg/L，高可达1000mg/L)；④含有大量硫酸根离子及少量金属离子(以铝、铁、硅、钙、铅等为主)。目前，氨氮废水处理工艺方法较多、工艺也较为成熟，主要应用在生活污水、工业废水等领域，尚没有在稀土矿山应用的先例。其中，生物法在氨氮废水的处理中以工艺简单、处理效果好、成本低等因素占有独特优势。
自然界中有许多具有特殊功能的微生物菌种，如脱氮菌是生物法脱氮工艺的基础。硫酸盐还原菌也是自然界中大量存在的一类具有特殊功能的微生物，它能将环境中的SO4 2-还原成S2-，同时产生碱使水体酸碱度达到自身生长所需的适宜pH(7-8)。利用硫酸盐还原菌处理酸性矿山废水能节约大量的碱，从而节约成本，因此其在酸性矿山废水的治理中有较为广泛的应用。稀土浸矿场地富含硫酸盐和氨氮，是天然的硫酸盐还原菌和脱氮菌生存场所，从中富集筛选出的土著硫酸盐还原菌和土著脱氮菌对稀土浸矿场地残留铵盐淋出液具有较好的适应性和耐受性，是生物法治理稀土浸矿场地酸性氨氮废水的最佳菌种来源。
目前硫酸盐还原菌、脱氮菌用于处理酸性废水和生物法脱氮的研究报道较为多见，但两者联合用于酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液的研究尚未有相关报道。本发明通过土著硫酸盐还原菌的代谢作用调节酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液的pH至适宜水平，再利用土著脱氮菌高效脱除其中的氨氮，最终实现了淋出液氨氮的达标排放。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种利用土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中氨氮的方法。该方法利用土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合处理稀土浸矿场地酸性氨氮废水，具有菌群适应性好、产碱量高、脱氮能力强效率高、工艺简单、生产成本低以及环境友好等诸多优点。
该方法具体步骤如下：(a)采集稀土浸矿场地的土壤样品和淋出液样品，经过分离、富集分别得到土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液、土著脱氮菌菌群富集培养液，对这两种富集培养液进行筛选，分别得到土著硫酸盐还原菌菌群和土著脱氮菌菌群；(b)利用土著硫酸盐还原菌菌群对酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液进行预处理，提高其pH至适宜水平，得到处理后的淋出液；(c)将土著脱氮菌菌群接种到预处理后的淋出液中，添加脱氮培养基进行培养，待氨氮含量达标即可排放。
进一步的，步骤(a)中样品采集方法具体如下：从稀土浸矿场地随机选择至少3个点取样，每个点采集100-200g土壤样品；从稀土浸矿场地的集液池、集液沟中随机选择至少3个点取样，每个点采集100-200mL淋出液样品；将采集到的土壤样品和淋出液样品置于0-4℃环境中保存备用。
进一步的，步骤(a)从土壤样品中分离、富集土著硫酸盐还原菌的方法具体如下：按照200-500g:1L的比例，将采集来的土壤样品与无菌水混合并恒温振荡培养(温度为28-30℃，振荡时间20-30min，转速150-170r/min)，静置一段时间(10-15min)后取上清液，得到土壤样品初始菌悬液；接着按照1:2-3的体积比，将土壤样品初始菌悬液与硫酸盐还原菌富集培养基混合并恒温厌氧培养(培养温度30-38℃，培养时间3-5天)，得到第一次富集的土壤硫酸盐还原菌菌群富集培养液；按照1:3-4的体积比，在同样的培养条件下将第一次富集的土壤硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合再次进行恒温厌氧培养，得到第二次富集的土壤硫酸盐还原菌菌群富集培养液；按照1:4-5的体积比，在同样的培养条件下将第二次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合进行第三次恒温厌氧培养；重复上述厌氧培养过程3-5次，得到土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液。
进一步的，步骤(a)从淋出液样品中分离、富集土著硫酸盐还原菌的方法具体如下：按照1:2-3的体积比，将采集的淋出液样品与硫酸盐还原菌富集培养基混合并恒温厌氧培养(培养温度30-38℃，培养时间3-5天)，得到第一次富集的淋出液硫酸盐还原菌菌群富集培养液；按照1:3-4的体积比，在同样的培养条件下将第一次富集的淋出液硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合再次进行恒温厌氧培养，得到第二次富集的淋出液硫酸盐还原菌菌群富集培养液；按照1:4-5的体积比，在同样的培养条件下将第二次富集的淋出液硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合进行第三次恒温厌氧培养；重复上述厌氧培养过程3-5次，得到淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液。
进一步的，所述硫酸盐还原菌富集培养基按照重量份数计的配方为：蛋白胨8-12份，牛肉膏4-6份，NaCl 4-6份，FeSO4·7H2O 0.45-0.6份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5。
进一步的，步骤(a)中土著硫酸盐还原菌菌群筛选方法具体如下：按照1:3-6的体积比，将土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合恒温厌氧培养(培养温度30-38℃，培养时间3-5天)，得到第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群；按照1:4-8的体积比，在同样的培养条件下将第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合恒温厌氧培养，得到第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群；按照1:5-10的体积比，在同样的培养条件下将第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合恒温厌氧培养；重复上述筛选培养3-5次，得到土著硫酸盐还原菌菌群。
进一步的，所述土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液选自土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液、淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液中的至少一种，或者两者以任意比例混合形成的混合物。
进一步的，所述硫酸盐还原菌功能筛选培养基按照重量份数计的配方为：KH2PO40.4-0.6份，NH4Cl 0.8-1.2份，MgSO4·7H2O 0.05-0.08份，Na2SO4 2.5-4.5份，CaCl2 0.06-0.1份，FeSO4·7H2O 0.008-0.012份，柠檬酸钠0.25-0.35份，乳酸钠3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5。
进一步的，步骤(a)从土壤样品中分离、富集土著脱氮菌的方法具体如下：按照200-500g:1L的比例，将采集来的土壤样品与无菌水混合并恒温振荡培养(温度为28-30℃，振荡时间20-30min，转速150-170r/min)，静置一段时间(10-15min)后取上清液，得到土壤样品初始菌悬液；接着按照1:2-3的体积比，将土壤样品初始菌悬液与脱氮富集培养基混合恒温培养(培养温度28-30℃，转速150-170r/min，培养时间1-3天)，得到第一次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液；按照1:3-4的体积比，在同样的培养条件下将第一次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合再次进行恒温培养，得到第二次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液；按照1:4-5的体积比，在同样的培养条件下将第二次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合进行第三次恒温培养；重复上述培养过程3-5次，得到土壤土著脱氮菌菌群富集培养液。
进一步的，步骤(a)从淋出液样品中分离、富集土著脱氮菌的方法具体如下：按照1:2-3的体积比，将采集来的淋出液样品与脱氮富集培养基混合恒温培养(培养温度为28-30℃，转速150-170r/min，培养时间1-3天)，得到第一次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液；按照1:3-4的体积比，在同样的培养条件下将第一次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合恒温培养，得到第二次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液；按照1：4-5的体积比，在同样的培养条件下将第二次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合恒温培养；重复上述培养过程3-5次，得到淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液。
进一步的，所述脱氮富集培养基按照重量份数计的配方为：蛋白胨8-12份，NaCl8-12份，酵母提取物3-7份，蒸馏水1000份，pH值7-7.5。
进一步的，步骤(a)中土著脱氮菌菌群的筛选方法具体如下：按照1:3-6的体积比，将土著脱氮菌菌群富集培养液与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养(培养温度为28-30℃，转速150-170r/min，培养时间1-3天)，得到第一次筛选的土著脱氮菌菌群；按照1:4-8的体积比，在同样的培养条件下将第一次筛选的土著脱氮菌菌群与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养，得到第二次筛选的土著脱氮菌菌群；按照1:5-10的体积比，在同样的培养条件下将第二次筛选的土著脱氮菌菌群与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养；重复培养3-5次，得到土著脱氮菌菌群。
进一步的，所述土著脱氮菌菌群富集培养液选自土壤土著脱氮菌菌群富集培养液、淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液中的至少一种，或者两者以任意比例混合形成的混合物。
进一步的，所述脱氮功能筛选培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠5-20份，(NH4)2SO4 0.5-2份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O 0.01-0.05份，MnSO4·4H2O 0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。
进一步的，步骤(b)中的酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液的pH具体为4-6，氨氮浓度不超过300mg/L。
进一步的，步骤(b)预处理具体如下：将土著硫酸盐还原菌菌群接种到硫酸盐还原菌菌群培养基中进行恒温厌氧培养(培养温度为30-38℃)，待菌群生长到对数期得到硫酸盐还原菌菌群培养液；按照1:2-3:4-5的体积比，将制得的硫酸盐还原菌菌群培养液、硫酸盐还原菌培养基、酸性稀土浸矿场地地残留铵盐淋出液混合均匀后进行恒温厌氧培养(培养温度30-38℃，培养时间3-5天)，培养完成后固液分离，得到预处理后的淋出液，检测可知其pH为7-8。
进一步的，所述硫酸盐还原菌菌群培养基按照重量份数计的配方为：KH2PO40.4-0.6份，NH4Cl 0.8-1.2份，MgSO4·7H2O 0.05-0.08份，Na2SO4 2.5-4.5份，CaCl20.06-0.1份，柠檬酸钠0.25-0.35份，乳酸钠3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5。所述硫酸盐还原菌培养基按照重量份数计的配方为：KH2PO4 0.4-0.6份，MgSO4·7H2O 0.05-0.08份，柠檬酸钠0.25-0.35份，乳酸钠3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5。
进一步的，步骤(c)具体过程如下：将土著脱氮菌菌群接种到脱氮微生物培养基中培养(培养温度为28-30℃，转速150-170r/min)，待菌群生长到对数期得到脱氮菌菌群培养液；按照1:2-3:4-5的体积比，将脱氮菌菌群培养液、脱氮培养基、预处理后的淋出液混合均匀并恒温培养(培养温度为28-30℃，转速150-170r/min，培养时间2-3天)即可。
进一步的，所述脱氮微生物培养基按照重量份数计的配方为：柠檬酸钠3-6份，(NH4)2SO4 0.3-0.5份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O0.01-0.05份，MnSO4·4H2O 0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。所述脱氮培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠5-20份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O 0.01-0.05份，MnSO4·4H2O0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明方法使用的土著硫酸盐还原菌菌群和土著脱氮菌菌群均来自于稀土浸矿场地的土壤和淋出液，使其对成分复杂的稀土浸矿场地残留铵盐淋出液环境有较好的适应性；(2)本发明方法确定的土著硫酸盐还原菌菌群有较好的产碱量，能快速有效提高酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液的pH至7-8，满足脱氮菌适宜的生长pH，无需外加碱试剂因而节约成本；(3)本发明方法确定的土著脱氮菌菌群对淋出液中非氨氮杂质的耐受能力强，脱氮率达到90％及以上；(4)本发明采用土著硫酸盐还原菌菌群和土著脱氮菌菌群联合处理酸性稀土浸矿场地氨氮废水，能实现达标排放，具有工艺简单、生产成本低、环境友好等诸多优点，尤其适用于大规模处理稀土浸矿场地残留铵盐淋出液。
具体实施方式
为使本领域普通技术人员充分理解本发明的技术方案和有益效果，以下结合具体实施例进行进一步说明。
本发明所使用的几种培养基配方(按照重量份数或浓度计)如下：
硫酸盐还原菌富集培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，FeSO4·7H2O0.5g，蒸馏水1000mL，pH值6.3。
硫酸盐还原菌功能筛选培养基：KH2PO4 0.5g，NH4Cl 1g，MgSO4·7H2O0.06g，Na2SO44.5g，CaCl2 0.1g，FeSO4·7H2O 0.01g，柠檬酸钠0.3g，乳酸钠4g，酵母浸粉1g，蒸馏水1000mL，pH值6.3。
硫酸盐还原菌菌群培养基：KH2PO4 0.5g，NH4Cl 1g，MgSO4·7H2O 0.06g，Na2SO44.5g，CaCl2 0.1g，柠檬酸钠0.3g，乳酸钠4g，酵母浸粉1g，蒸馏水1000mL，pH值6.3。
硫酸盐还原菌培养基：KH2PO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.06g，柠檬酸钠0.3g，乳酸钠4g，酵母浸粉1g，蒸馏水1000mL，pH值6.3。
脱氮富集培养基：蛋白胨10g，NaCl 10g，酵母提取物5g，蒸馏水1000mL，pH值7-7.5。
脱氮功能筛选培养基：柠檬酸钠15g，(NH4)2SO4 1.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl 2g，FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1g，蒸馏水1000mL，pH值7-7.5。
脱氮微生物培养基：柠檬酸钠5g，(NH4)2SO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，NaCl2g，FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1g，蒸馏水1000mL，pH为7-7.5。
脱氮培养基：柠檬酸钠15g，NaCl 2g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.04g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1g，蒸馏水1000mL，pH值7-7.5。
本发明中待处理的稀土矿闭矿场地残留铵盐淋出液来自江西省赣州市龙南县某稀土矿。实验之前，按照下述方法分别提前制备土著硫酸盐还原菌菌群和土著脱氮菌菌群：
1.土壤样品和淋出液样品的采集
(1)土壤样品的采集
从稀土矿闭矿场地随机选点取样，采集5个点的土壤样品，每个点采集150g土壤样品。将5个土壤样品混合均匀，装入保鲜塑料袋内，将保鲜塑料袋装入4℃冰盒中，迅速(24h以内，下同)带回实验室。
(2)淋出液样品的采集
从稀土矿闭矿场地集液池中随机选点取样，采集5个点的淋出液样品，每个点采集100mL淋出液样品。将5个淋出液样品混合均匀后装入保鲜塑料瓶中，将保鲜塑料瓶装入4℃冰盒中，并迅速带回实验室。
2.土著硫酸盐还原菌菌群的制备
(1)土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液的制备
称取300g土壤样品与1L无菌水混合，放入恒温摇床中振荡培养，振荡时间为30min，转速为160r/min，温度为28℃。振荡完成后静置10min，取上清液得到土壤样品初始菌悬液。量取20mL土壤样品初始菌悬液与50mL硫酸盐还原菌富集培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到第一次富集的土壤硫酸盐还原菌富集培养液。取10mL第一次富集的土壤硫酸盐还原菌富集培养液，与40mL硫酸盐还原菌富集培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到第二次富集的土壤硫酸盐还原菌富集培养液。取10mL第二次富集的土壤硫酸盐还原菌富集培养液，与40mL硫酸盐还原菌富集培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到所需的土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液。
(2)淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液的制备
量取25mL淋出液样品与50mL硫酸盐还原菌富集培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到第一次富集的淋出液硫酸盐还原菌富集培养液。取10mL第一次富集的淋出液硫酸盐还原菌富集培养液，与40mL硫酸盐还原菌富集培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到第二次富集的淋出液硫酸盐还原菌富集培养液。取10mL第二次富集的淋出液硫酸盐还原菌富集培养液，与50mL硫酸盐还原菌富集培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到所需的淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液。
(3)土著硫酸盐还原菌菌群的制备
将土壤土著硫酸盐还原菌富集培养液和淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液按照1:1的体积比混合，制得土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液。
量取10mL土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液与40mL硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群。取10mL第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与40mL硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群。取10mL第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与50mL硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天，得到所需的土著硫酸盐还原菌菌群。
3.土著脱氮菌菌群的制备
(1)土壤土著脱氮菌菌群富集培养液的制备
称取300g土壤样品与1L无菌水混合，放入恒温摇床中振荡培养，振荡时间为30min，转速为160r/min，温度为28℃。振荡完成后静置10min取上清液得到土壤样品初始菌悬液。量取20mL土壤样品初始菌悬液，与50mL脱氮富集培养基混合后置于恒温摇床中，于28℃、160r/min条件下振荡培养2天，得到第一次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液。取10mL第一次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液，与40mL脱氮富集培养基混合后置于恒温摇床中，于28℃、160r/min条件下振荡培养2天，得到第二次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液。取10mL第二次富集的土壤脱氮菌菌群富集培养液，与40mL脱氮富集培养基混合后置于恒温摇床中，于28℃、160r/min条件下发酵培养2天，得到所需的土壤土著脱氮菌菌群富集培养液。
(2)淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液的制备
量取25mL淋出液样品与50mL脱氮富集培养基混合，将混合物置于恒温摇床中于28℃、170r/min条件下振荡培养2天，得到第一次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液。取10mL第一次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液，与40mL脱氮富集培养基混合后置于恒温摇床中，于28℃、170r/min条件下振荡培养2天，得到第二次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液。取10mL第二次富集的淋出液脱氮菌菌群富集培养液，与50mL脱氮富集培养基混合后置于恒温摇床中，于28℃、170r/min条件下发酵培养2天，得到所需的淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液。
(3)土著脱氮菌菌群的制备
将土壤土著脱氮菌菌群富集培养液和淋出液土著脱氮菌菌群群富集培养液按照1:1的体积比混合，制得土著脱氮菌菌群富集培养液。
量取10mL土著脱氮菌菌群富集培养液与50mL脱氮功能筛选培养基混合，将混合物置于恒温摇床中于28℃、170r/min条件下振荡培养2天，得到第一次筛选的土著脱氮菌菌群。取10mL第一次筛选的土著脱氮菌菌群，与40mL脱氮功能筛选培养基混合后置于恒温摇床中，于28℃、170r/min条件下振荡培养2天，得到第二次筛选的土著脱氮菌菌群。取10mL第二次筛选的土著脱氮菌菌群，与50mL脱氮功能筛选培养基混合后置于恒温摇床中，于28℃、170r/min条件下发酵培养2天，得到所需的土著脱氮菌菌群。
实施例1
1.用纳式试剂紫外分光光度法检测稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中的氨氮浓度为290.5mg/L，用pH计测得其pH值为4.9。
2.将提前筛选得到的土著硫酸盐还原菌菌群接种到硫酸盐还原菌菌群培养基中进行恒温厌氧培养(培养温度为35℃)，待菌群生长到对数期得到硫酸盐还原菌菌群培养液。按照1:2:4的体积比，将制得的硫酸盐还原菌菌群培养液、硫酸盐还原菌培养基、稀土浸矿场地残留铵盐淋出液混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于35℃条件下静置培养4天。培养完成后用10000r/min的转速离心10min，分离上清液得到预处理后的淋出液，测得其pH值为7.21。
3.将提前准备好的土著脱氮菌菌群接种至脱氮微生物培养基中，在28℃、160r/min条件下培养12h使其达到对数生长期，得到脱氮菌菌群培养液。按照1:2:5的体积比，将制得的脱氮菌菌群培养液与脱氮培养基、步骤(2)所得预处理后的淋出液混合，接着置于恒温摇床中于28℃、160r/min条件下振荡培养3天。
4.取样检测步骤(3)培养液的氨氮浓度，结果为11.4mg/L。结合淋出液的初始氨氮浓度290.5mg/L，计算可知氨氮脱除率为96.1％。
实施例2
1.用纳式试剂紫外分光光度法检测稀土浸矿场地地残留铵盐淋出液中的氨氮浓度为300mg/L，用pH计测得其pH值为4.3。
2.将提前筛选得到的土著硫酸盐还原菌菌群接种到硫酸盐还原菌菌群培养基中进行恒温厌氧培养(培养温度为32℃)，待菌群生长到对数期得到硫酸盐还原菌菌群培养液。按照1:3:4的体积比，将制得的硫酸盐还原菌菌群培养液、硫酸盐还原菌培养基、稀土浸矿场地残留铵盐淋出液混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于32℃条件下静置培养4天。培养完成后用10000r/min的转速离心10min，分离上清液得到预处理后的淋出液，测得其pH值为7.68。
3.将提前准备好的土著脱氮菌菌群接种至脱氮微生物培养基中，在28℃、165r/min条件下培养12h使其达到对数生长期，得到脱氮菌菌群培养液。按照1:3:5的体积比，将制得的脱氮菌菌群培养液与脱氮培养基、步骤(2)所得预处理后的淋出液混合，接着置于恒温摇床中于28℃、165r/min条件下振荡培养3天。
4.取样检测步骤(3)培养液的氨氮浓度，结果为10.6mg/L。结合淋出液的初始氨氮浓度300mg/L，计算可知氨氮脱除率为96.5％。
实施例3
1.用纳式试剂紫外分光光度法检测稀土浸矿场地地残留铵盐淋出液中的氨氮浓度为185.6mg/L，用pH计测得其pH值为5.6。
2.将提前筛选得到的土著硫酸盐还原菌菌群接种到硫酸盐还原菌菌群培养基中进行恒温厌氧培养(培养温度为37℃)，待菌群生长到对数期得到硫酸盐还原菌菌群培养液。按照1:2:4的体积比，将制得的硫酸盐还原菌菌群培养液、硫酸盐还原菌培养基、稀土浸矿场地残留铵盐淋出液混合，经厌氧处理并保持厌氧环境后置于恒温培养箱中，于37℃条件下静置培养3天。培养完成后用10000r/min的转速离心10min，分离上清液得到预处理后的淋出液，测得其pH值为7.36。
3.将提前准备好的土著脱氮菌菌群接种至脱氮微生物培养基中，在28℃、170r/min条件下培养12h使其达到对数生长期，得到脱氮菌菌群培养液。按照1:2:5的体积比，将制得的脱氮菌菌群培养液与脱氮培养基、步骤(2)所得预处理后的淋出液混合，接着置于恒温摇床中于28℃、170r/min条件下振荡培养2天。
4.取样检测步骤(3)培养液的氨氮浓度，结果为7.8mg/L。结合淋出液初始氨氮浓度185.6mg/L，计算可知氨氮脱除率为95.8％。

Claims (2)

1.土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中氨氮的方法，其特征在于包括以下步骤：
(a)采集稀土浸矿场地土壤样品和淋出液样品，经过分离、富集分别得到土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液、土著脱氮菌菌群富集培养液，对两种富集培养液进行筛选，分别得到土著硫酸盐还原菌菌群和土著脱氮菌菌群；
(b)利用土著硫酸盐还原菌菌群，对pH为4-6且氨氮浓度不超过300mg/L的酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液进行预处理，使其pH升高至7-8，得到处理后的淋出液；
(c)将土著脱氮菌菌群接种到预处理后的淋出液中，添加脱氮培养基培养即可；
从土壤样品或淋出液样品中分离、富集土著硫酸盐还原菌的方法具体如下：按照200-500g:1L的比例，将采集来的土壤样品与无菌水混合并恒温振荡培养，静置后取上清液，得到土壤样品初始菌悬液；接着按照1:2-3的体积比，将土壤样品初始菌悬液或采集的淋出液样品与硫酸盐还原菌富集培养基混合并恒温厌氧培养，得到第一次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液；按照1:3-4的体积比，在同样的培养条件下将第一次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合再次进行恒温厌氧培养，得到第二次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液；按照1:4-5的体积比，在同样的培养条件下将第二次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合进行第三次恒温厌氧培养；重复上述厌氧培养过程3-5次，得到土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液或淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液；所述硫酸盐还原菌富集培养基按照重量份数计的配方为：蛋白胨8-12份，牛肉膏4-6份，NaCl 4-6份，FeSO4·7H2O 0.45-0.6份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5；
土著硫酸盐还原菌菌群筛选方法具体如下：按照1:3-6的体积比，将土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合并恒温厌氧培养，得到第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群；按照1:4-8的体积比，在同样的培养条件下将第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合恒温厌氧培养，得到第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群；按照1:5-10的体积比，在同样的培养条件下将第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合恒温厌氧培养；重复上述筛选培养3-5次，得到土著硫酸盐还原菌菌群；所述土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液选自土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液、淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液中的至少一种，或者两者以任意比例混合形成的混合物；所述硫酸盐还原菌功能筛选培养基按照重量份数计的配方为：KH2PO4 0.4-0.6份，NH4Cl0.8-1.2份，MgSO4·7H2O 0.05-0.08份，Na2SO42.5-4.5份，CaCl2 0.06-0.1份，FeSO4·7H2O0.008-0.012份，柠檬酸钠0.25-0.35份，乳酸钠3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5；
从土壤样品中分离、富集土著脱氮菌的方法具体如下：按照200-500g:1L的比例，将采集来的土壤样品与无菌水混合并恒温振荡培养，静置取上清液，得到土壤样品初始菌悬液；接着按照1:2-3的体积比，将土壤样品初始菌悬液或采集来的淋出液样品与脱氮富集培养基混合恒温培养，得到第一次富集的脱氮菌菌群富集培养液；按照1:3-4的体积比，在同样的培养条件下将第一次富集的脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合再次进行恒温培养，得到第二次富集的脱氮菌菌群富集培养液；按照1:4-5的体积比，在同样的培养条件下将第二次富集的脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合进行第三次恒温培养；重复上述培养过程3-5次，得到土壤土著脱氮菌菌群富集培养液或淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液；脱氮富集培养基按照重量份数计的配方为：蛋白胨8-12份，NaCl 8-12份，酵母提取物3-7份，蒸馏水1000份，pH值7-7.5；
土著脱氮菌菌群的筛选方法具体如下：按照1:3-6的体积比，将土著脱氮菌菌群富集培养液与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养，得到第一次筛选的土著脱氮菌菌群；按照1:4-8的体积比，在同样的培养条件下将第一次筛选的土著脱氮菌菌群与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养，得到第二次筛选的土著脱氮菌菌群；按照1:5-10的体积比，在同样的培养条件下将第二次筛选的土著脱氮菌菌群与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养；重复培养3-5次，得到土著脱氮菌菌群；所述土著脱氮菌菌群富集培养液选自土壤土著脱氮菌菌群富集培养液、淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液中的至少一种，或者两者以任意比例混合形成的混合物；所述脱氮功能筛选培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠5-20份，(NH4)2SO4 0.5-2份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O 0.01-0.05份，MnSO4·4H2O0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5；
步骤(b)预处理过程具体如下：将土著硫酸盐还原菌菌群接种到硫酸盐还原菌菌群培养基中进行恒温厌氧培养，待菌群生长到对数期得到硫酸盐还原菌菌群培养液；按照1:2-3:4-5的体积比，将制得的硫酸盐还原菌菌群培养液、硫酸盐还原菌培养基、酸性稀土浸矿场地地残留铵盐淋出液混合均匀后进行恒温厌氧培养，培养完成后固液分离，得到pH为7-8的预处理后的淋出液；所述硫酸盐还原菌菌群培养基按照重量份数计的配方为：KH2PO40.4-0.6份，NH4Cl 0.8-1.2份，MgSO4·7H2O 0.05-0.08份，Na2SO42.5-4.5份，CaCl2 0.06-0.1份，柠檬酸钠0.25-0.35份，乳酸钠3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5；所述硫酸盐还原菌培养基按照重量份数计的配方为：KH2PO4 0.4-0.6份，MgSO4·7H2O0.05-0.08份，柠檬酸钠0.25-0.35份，乳酸钠3.5-4份，酵母浸粉1-1.2份，蒸馏水1000份，pH值6.2-6.5。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(c)具体过程如下：将土著脱氮菌菌群接种到脱氮微生物培养基中培养，待菌群生长到对数期得到脱氮菌菌群培养液；按照1:2-3:4-5的体积比，将脱氮菌菌群培养液、脱氮培养基、预处理后的淋出液混合均匀并恒温培养即可；所述脱氮微生物培养基按照重量份数计的配方为：柠檬酸钠3-6份，(NH4)2SO4 0.3-0.5份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O 0.01-0.05份，MnSO4·4H2O0.01-0.04份，K2HPO40.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5；所述脱氮培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖或柠檬酸钠5-20份，MgSO4·7H2O 0.3-0.5份，NaCl 1.5-3份，FeSO4·7H2O 0.01-0.05份，MnSO4·4H2O 0.01-0.04份，K2HPO4 0.5-1.5份，蒸馏水1000份，pH为7-7.5。
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