CN114292793A - 一株耐盐的盐单胞菌菌株及其在水净化领域的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一株耐盐的盐单胞菌(Halomonas sp.)菌株及其在水净化领域的应用，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.24127，该菌株耐盐性能好，最适生长盐度为5％，实验室条件下，15％以下盐度时24h的氨氮降解率达到100％，且能够耐受高氨氮浓度和高温，针对3000ppm的氨氮浓度72h的氨氮降解率达到89.1％，氨氮初始浓度为100ppm时，30‑40℃下氨氮降解率在24h达到100％。

Description

一株耐盐的盐单胞菌菌株及其在水净化领域的应用
技术领域
本发明涉及一株盐单胞菌(Halomonas sp.)菌株及包含其的微生物菌剂，具体涉及一种能够耐高盐、耐高温和耐高氨氮浓度的盐单胞菌菌株及其应用，属于环境微生物技术领域。
背景技术
水体的富营养化是水污染中的一大类，其中氨氮污染占很大比重，因此引起了人们的密切关注。污水处理中的脱氮方法主要有物理化学法和生物法。物理化学法包括折点加氯法、离子交换法等，处理污水需要的成本高，并且对环境造成的影响较大，而生物法的成本费用低、脱氮能力强、对环境不会造成二次污染，具有较高的实用价值。
然而，印染、农药、煤化工、造纸、炼油、海水利用、粮果、制药等行业废水不同于传统的城市污水，其产生的都是高盐废水，其产生的含氮废水的盐度偏高，而盐度高会导致菌株的生长代谢受到抑制，脱氢酶活性降低，甚至会导致细菌的细胞质壁分离和破裂死亡，显著影响脱氮效率。近年来，国内外开展了大量针对特殊环境脱氮菌株的筛选研究，为耐盐菌株的筛选奠定了重要基础。
然而，目前所筛选出来的菌株很少具有耐盐特性，导致其在高盐废水的应用中难以发挥优势，因此筛选出能够耐高盐的菌株对于解决高盐废水的处理问题具有十分重要的意义。
发明内容
本发明针对生物法处理废水的过程中，现有的菌株很少具有耐盐特性，无法在高盐废水中应用的现状，提供一种能够在高达15％的盐度下氨氮降解率达到100％、且能够耐受最高3000ppm的氨氮浓度和最高45℃下仍具有氨氮降解能力的盐单胞菌菌株及包含其的微生物菌剂。
一株耐盐的盐单胞菌(Halomonas sp.)菌株AOB-NY01，其16S rDNA序列如SEQ IDNo:1所示，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物所，保藏号为CGMCC No.24127，保藏日期为2021年12月17日。
在没有特别说明的情况下，本发明中所述的盐单胞菌均是指盐单胞菌菌株AOB-NY01。
本发明还要求保护包含上述盐单胞菌的微生物菌剂。
本发明提供的盐单胞菌的有益效果是：
(1)耐盐性能好，最适生长盐度为5％，实验室条件下，初始氨氮浓度为100pm 时，15％以下盐度时24h的氨氮降解率达到100％，20％盐度时48h氨氮降解率为58％，30％盐度时仍具有一定的氨氮降解效果；
(2)能够耐受高氨氮浓度，实验室测试在5％盐度、30℃条件下，针对3000ppm 的氨氮浓度72h的氨氮降解率达到89.1％；
(3)能够耐高温，实验室测试在5％盐度、初始氨氮浓度100ppm的条件下， 30-42℃对氨氮的降解率48h达到100％，30-40℃下氨氮降解率在24h达到 100％，45℃时48h氨氮降解率达到50％；同时园区污水的实验也证明了本发明的菌剂在40℃、盐度15％实验条件下接种量分别为50-1000ppm时，氨氮降解率72h均达到96％以上，45℃实验条件下仍具有一定的降解能力；
(4)包含本发明的盐单胞菌的微生物菌剂活菌数高，所以使用时添加量低，最低可至50ppm，不破坏原始环境、无二次污染、处理效果好、操作简便，菌剂应用领域广、普适性强。
本发明还要求保护包含上述盐单胞菌的微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)一级种子培养：无菌条件下取盐单胞菌菌株接种于富集培养基中，于 25-35℃、100-150rpm的条件下培养24-48h，得到一级种子培养液；
(2)二级种子培养：无菌条件下将一级种子培养液按照0.5-2vol％的接种量接种于富集培养基中，于25-35℃、100-150rpm的条件下培养24-48h，得到二级种子培养液；
(3)发酵：待发酵罐内的发酵培养基消毒完毕后，将步骤(2)所得的二级种子培养液按照0.1-0.5vol％的接种量接种于发酵培养基中，控制温度为25-35℃，常压、通气比为1:(1-2)和转速150-300rpm的条件下发酵，待溶氧开始上升时停止发酵，得发酵液；
(4)制备微生物菌剂：将步骤(3)所得的发酵液稀释灌装，即得微生物菌剂。
进一步，所述富集培养基的组成如下：硫酸铵0.3-0.8g/L，琥珀酸钠 4-8g/L，维氏盐30-80ml/L，氯化钠30-80g/L，溶剂为水，且pH＝6.5-8。
优选的，所述富集培养基的组成如下：硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，氯化钠50g/L，溶剂为水，且pH＝7.0-7.5。
进一步，所述发酵培养基的组成如下：碳源30-80g/L，氮源5-15g/L， PO4 3-0.3-0.8g/L，K+0.1-0.3g/L，Mg2+0.03-0.1g/L，Fe2+(1-3)*10-3g/L，Mn2+ (2-5)*10-3g/L，盐度3-8％，消泡剂0.03-0.1wt％，溶剂为水，且pH＝6.5-8。
优选的，所述发酵培养基的组成如下：碳源40-60g/L，氮源8-12g/L， PO4 3-0.4-0.6g/L，K+0.2-0.3g/L，Mg2+0.05-0.08g/L，Fe2+(1-3)*10-3g/L，Mn2+ (3-4)*10-3g/L，盐度4-7％，消泡剂0.04-0.06wt％，溶剂为水，pH＝6.5-7.5。
进一步，所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、淀粉、醋酸钠或丁二酸钠中的一种或多种，所述氮源选自酵母粉、蛋白胨、尿素、硫酸铵或硝酸钾中的一种或多种。
优选的，所述PO4 3-的来源为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾中的一种或二者的复配，所述K+的来源为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸钾、氯化钾、硝酸钾中的一种或多种，所述Mg2+的来源为硫酸镁、氯化镁中的一种或二者的复配，所述Mn2+的来源为一水硫酸锰、硝酸锰、氯化锰中的一种或多种，所述Fe2+的来源为硫酸亚铁、氯化亚铁、硫酸亚铁铵中的一种或多种。
优选的，所述消泡剂优选高碳醇(C7-C9)、天然油脂(豆油、玉米油等) 和二甲基硅油。
微生物菌剂的制备方法中所述的通气比是指每分钟内通入发酵罐的空气体积与发酵液的总体积之比。
该制备方法的有益效果是：采用本发明的发酵工艺，发酵周期缩短至 10h，活菌数高达300亿cfu/ml，高盐条件下所得的发酵液不易染菌，在常温下存放2个月以上活菌数不下降，液体产品成本更低，远低于市场上其他产品。
本发明还要求保护使用盐单胞菌或包含该菌株的微生物菌剂净化水体的方法，包括向水体中接种盐单胞菌或包含该菌株的微生物菌剂的步骤。
优选的，盐单胞菌或微生物菌剂的接种量为50ppm以上，更优选 50-1000ppm，最优选100-1000ppm；
优选的，净化水体过程的适用温度为25-45℃，更优选30-42℃，进一步优选30-40℃，最优选35-40℃；
优选的，水体的盐度为30％以下，更优选25％以下，进一步优选20％以下，更进一步优选15％以下，最优选2-8％。
本发明还要求保护盐单胞菌或包含该菌株的微生物菌剂在水体净化领域的应用。
优选的，盐单胞菌或包含其的微生物菌剂用于降解水中的含氮物质，更优选的，所述含氮物质为含氨态氮的物质；
优选的，应用的适用温度为25-45℃，更优选30-42℃，进一步优选 30-40℃，最优选35-40℃。
优选的，盐单胞菌或微生物菌剂的接种量为50ppm以上，更优选 50-1000ppm，最优选100-1000ppm。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1.菌株筛选与性能检测
1.富集培养
采集某发酵厂污水，吸取10ml污水转接至装有100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调pH＝7.0)的250ml三角瓶中，30℃、200r/min条件下培养，进行第一次富集。氨氮含量下降到最低时，再吸取10ml的一次富集液，加入到新鲜的100ml 富集培养基中，30℃、200r/min条件下培养，进行第二次富集。按上述富集方法再进行第三次富集。
2.初筛
采用梯度稀释法将第三次富集液分别稀释到10-3、10-4、10-5和10-6，取各个稀释液各200μl至营养琼脂平板上，涂布均匀后倒置于30℃条件下培养约48h至长出单菌落。挑选形态相异的单菌落转接至试管斜面分离培养基上，30℃条件下培养约48h，然后转移至4℃冰箱中保藏备用。
按上述分离方法共得到4株菌，分别编号为：AOB-NY01、AOB-NY02、 AOB-NY03、AOB-NY04。
3.复筛
无菌环境中，将初筛得到的4株菌株分别挑取1环接种于盛有100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调pH＝7.0)的250ml三角瓶中，30℃、200r/min条件下培养48h 进行活化，得活化液；
分别吸取5μl各个菌株的活化液接种至盛有100ml已灭菌的评价培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，调 pH＝7.0)的250ml三角瓶中，30℃、200r/min条件下培养。用无菌水代替活化液作为空白，各实验组设置3个平行，定期检测培养基中的氨氮含量，氨氮检测方法按照《HJ 535-2009氨氮的测定-纳氏试剂分光光度法》执行，结果如表1所示。
表1 5％盐度条件下各菌株的氨氮降解能力评价
Figure BDA0003468599990000061
根据表1中的检测结果，AOB-NY01菌株具有较强的降氨氮能力，24h 氨氮降解效率达到了100％。
实施例2.盐单胞菌AOB-NY01菌株的检测鉴定
AOB-NY01菌株斜面经过16S rDNA基因序列测序，将测序结果在 NCBI(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi？PROGRAM＝blastn&PAGE_TYP E＝BlastSearch&LINK_LOC＝blasthome)中比对，选择相似度最大的序列作为物种鉴定结果(详见表2中的分析比对结果)。
表2样品的NCBI比对结果
ID No. DNA identification results Identities
AOB-NY01 Halomonas sp.GT 99％
实施例3.盐单胞菌对不同环境条件的耐受度研究
1.盐单胞菌AOB-NY01菌株在不同盐度下的生长情况
无菌环境中，将AOB-NY01菌株接种于盛有100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调 pH＝7.0)的250ml三角瓶中，30℃，200r/min条件下培养48h进行活化，得活化液；
分别吸取5μl活化液接种至盛有100ml已灭菌的评价培养基(硫酸铵 0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，溶剂为水，调pH＝7.0)的250ml 三角瓶中，评价培养基的盐度分别为0-30％，于30℃、200r/min条件下培养 24h，分别检测吸光度OD600(OD600表示溶液在600nm波长处的吸光值，用该值来测量细菌培养液的浓度，通常用来指菌体细胞密度，细菌的生长情况可通过OD600的值来监测)，并使用梯度稀释和平板涂布法进行计数，结果如表3所示。
表3 AOB-NY01菌株在不同盐度下的生长情况
Figure BDA0003468599990000081
根据表3中的检测结果，AOB-NY01菌株在5％盐度时，24h吸光值 OD600最高，活菌数达到13×108CFU/ml，最适合其生长。
2.盐单胞菌AOB-NY01菌株在不同盐度下的氨氮降解能力评价
无菌环境中，将AOB-NY01菌株接种于盛有100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调 pH＝7.0)的250ml三角瓶中，30℃、200r/min条件下培养48h进行活化，得活化液；
分别吸取5μl活化液接种至盛有100ml已灭菌的评价培养基(硫酸铵 0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，溶剂为水，调pH＝7.0)的250ml 三角瓶中，评价培养基的盐度分别为1-30％，于30℃、200r/min条件下培养。用无菌水代替活化液作为空白，每个实验组设置3个平行，定期检测培养基中的氨氮含量，氨氮检测方法按照《HJ 535-2009氨氮的测定-纳氏试剂分光光度法》执行，结果如表4所示。
表4 AOB-NY01菌株在不同盐度条件下的氨氮降解能力
Figure BDA0003468599990000091
根据表4中的检测结果，AOB-NY01菌株在15％以下盐度时24h对氨氮的降解率可达100％，20％盐度时48h氨氮降解率可达58％，30％盐度时仍有一定的降解效果。
3.盐单胞菌AOB-NY01菌株对不同浓度氨氮的降解能力评价
无菌环境中，将AOB-NY01菌株接种于盛有100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调 pH＝7.0)的250ml三角瓶中，30℃、200r/min条件下培养48h进行活化，得活化液。
分别吸取5μl活化液接种至盛有100ml已灭菌评价培养基(琥珀酸钠按C/N比10:1添加，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调pH＝7.0) 的250ml三角瓶中，评价培养基中分别添加0.5、5、10和15g/L的硫酸铵，分别在30℃、200r/min条件下培养。用无菌水代替活化液作为空白，每个实验组设置3个平行，定期检测培养基中的氨氮含量，氨氮检测方法按照《HJ 535-2009氨氮的测定-纳氏试剂分光光度法》执行，结果如表5所示。
表5 AOB-NY01菌株对不同浓度氨氮的降解能力
Figure BDA0003468599990000101
根据表5中的检测结果，AOB-NY01菌株可耐最高3000ppm的氨氮， 72h的氨氮降解率达到89.1％。
4.盐单胞菌AOB-NY01菌株在高温情况下的氨氮降解能力评价
无菌环境中，将AOB-NY01菌株接种于盛有100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调 pH＝7.0)的250ml三角瓶中，于30℃、200r/min条件下培养48h进行活化，得活化液。
分别吸取5μl活化液接种至盛有100ml已灭菌的评价培养基(硫酸铵 0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调pH＝7.0) 的250ml三角瓶中，分别在30-50℃，200r/min条件下培养。用无菌水代替活化液作为空白，每个实验组设置3个平行，定期检测培养基中的氨氮含量，氨氮检测方法按照《HJ 535-2009氨氮的测定-纳氏试剂分光光度法》执行，结果如表6所示。
表6 AOB-NY01菌株在不同温度下的氨氮降解能力
Figure BDA0003468599990000111
根据表6中的检测结果，AOB-NY01菌株在30-40℃时，24h对氨氮的降解率可达100％，42℃时48h对氨氮的降解率可达100％，45℃时48h对氨氮的降解率可达50％。
实施例4:微生物菌剂的制备与储存
4.1微生物菌剂的制备：
(1)一级种子培养：无菌环境中挑取1环盐单胞菌AOB-NY01菌株接入装有 100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，氯化钠50g/L，溶剂为水，调pH＝7.20)的250ml三角瓶中置于30℃、120rpm条件下培养48h，得到一级种子培养液；
(2)二级种子培养：无菌环境中，将一级种子培养液分别转接5ml至四个装有500ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，氯化钠50g/L，溶剂为水，调pH＝7.20)的1L三角瓶中，置于30℃、120rpm条件下培养24h，得到二级种子培养液；
(3)消毒灭菌：物料均在配料罐中配料，然后打入1t发酵罐，发酵培养基的组成为：每1L发酵培养基中包含丁二酸钠47g、酵母粉10g、磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.3g、氯化钠50g、一水硫酸锰0.01g、七水硫酸亚铁0.01g和消泡剂0.5g，定位600L，开始消毒灭菌。发酵罐实消条件：蒸汽直接进内层升温，升温至118℃开始排汽，排汽时间：20分钟，排汽温度：115℃，发酵罐培养基实消条件：蒸汽直接进内层升温至118℃开始排汽，排汽时间30 分钟，排汽温度121℃，消毒后体积约700L，然后冷却至30℃，等待接种； (4)发酵：将二级种子培养液2000ml通过压差接种法接种至发酵罐的发酵培养基中，初始pH调节为7.2，控制温度为30℃，通气比控制为 1:1.25(m3·min/m3)，罐压为0.05MPa，搅拌转速为200rpm，发酵过程中观察溶氧变化情况，溶氧从开始的100％逐渐下降至0％，发酵周期约10h，溶氧开始回升，立即停止发酵，此时发酵处于对数期末期，活菌数高达300亿 cfu/ml，菌体活力最强，发酵营养物质残余较少，存放活菌数衰减较少，发酵过程中活菌数随发酵时间的变化情况如表7所示。
表7活菌数随发酵时间的变化
Figure BDA0003468599990000121
4.2微生物菌剂的储存
采用对数期末期下料的发酵液进行灌装，常温储备。通过摸索不同的储存温度10℃、15℃、20℃、25℃、30℃下的存放时限确定最佳存放温度为 25℃，通过在25℃条件下摸索不同pH＝5.0、pH＝5.5、pH＝6.0、pH＝6.5、pH＝7.0、 pH＝7.5、pH＝8.0、pH＝8.5、pH＝9.0、pH＝9.5下的存放时限确定最佳存放pH 为8.5。
表8不同温度下存放活菌数变化(单位亿cfu/ml)
Figure BDA0003468599990000122
Figure BDA0003468599990000131
表9 25℃不同pH条件下存放的活菌数变化(单位亿cfu/ml)
存放时间 pH＝5.0 pH＝5.5 pH＝6.0 pH＝6.5 pH＝7.0 pH＝7.5 pH＝8.0 pH＝8.5 pH＝9.0 pH＝9.5
0day 300 300 300 300 300 300 300 300 300 300
30day ＜0.1 ＜0.1 200 300 330 350 340 360 350 260
60day ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1 150 270 270 300 310 200 120
90day ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1 90 110 110 120 60 2
实施例5.青岛某园区污水中盐单胞菌的降氨氮能力评价
5.1、菌种的活化
无菌环境中挑取1环AOB-NY01菌株接入装有100ml富集培养基(硫酸铵0.5g/L，琥珀酸钠5.62g/L，维氏盐50ml/L，50g/L氯化钠，溶剂为水，调pH＝7.0)的250ml三角瓶中，置于30℃、120rpm条件下培养48h活化，得到活化菌液，稀释活菌含量至50亿cfu/ml待用。
5.2、AOB-NY01菌株的降氨氮能力评价实验
分别向装有100ml青岛某园区污水(加入氯化钠调节盐度为15％)的250ml三角瓶中加入活化菌液5μl、10μl、100μl，各接种量分别置于35℃、 40℃和45℃下静置培养，每隔24h检测废水中的氨氮含量，共设置3个平行实验组和1个用无菌水替代活化菌液的空白对照组。
污水指标如下：氨氮含量1106mg/L，COD 4325mg/L，pH＝7.35，硝酸盐氮含量35mg/L，亚硝酸盐氮含量13mg/L。
具体实验安排如下：
空白对照组1：不加活化菌液；
实验组2：活化菌液添加量50ppm，35℃培养；
实验组3：活化菌液添加量100ppm，35℃培养；
实验组4：活化菌液添加量1000ppm，35℃培养；
实验组5：活化菌液添加量50ppm，40℃培养；
实验组6：活化菌液添加量100ppm，40℃培养；
实验组7：活化菌液添加量1000ppm，40℃培养；
实验组8：活化菌液添加量50ppm，45℃培养；
实验组9：活化菌液添加量100ppm，45℃培养；
实验组10：活化菌液添加量1000ppm，45℃培养。
3、实验结果
评价实验结果见下表。
表10青岛某园区污水中AOB-NY01菌株的降氨氮能力评价结果
Figure BDA0003468599990000141
由表10可知，在15％盐度条件下，35℃、接种量1000ppm时该菌株的氨氮降解速率最快，降解率最高，72h达到99％。同时可以看到，在同样条件下，该菌株的氨氮降解能力随着接种量的提高而增强，在35-45℃范围内随着温度的升高，降解能力有所下降，在45℃时仍有降解能力，但受温度影响效率降低。
实施例6.垃圾渗透液中盐单胞菌的降氨氮能力评价
6.1盐单胞菌AOB-NY01菌剂的制备
将盐单胞菌菌株AOB-NY01进行三级液体有氧发酵(同实施例4中描述的微生物菌剂的制备方法)，达到对数末期时停止发酵，此时活菌数为330 亿cfu/ml，稀释菌剂至活菌数为50亿cfu/ml待用，降温至25℃保存。
6.2垃圾渗滤液基本情况
该垃圾焚烧发电厂位于云南罗平。污水处理站的设计日处理能力为 100m3/天，污水处理工艺为：垃圾渗滤液经过渗滤液收集池暂存，泵入气浮单元去除悬浮的胶体颗粒和油类物质，再进入UASB单元去除有机COD，自流入两级AO系统降解COD、氨氮和总磷，再进入外置式MBR膜进行泥水分离，MBR膜出水进入超滤反渗透进行脱盐，淡水最后排放。
浓水经进一步浓缩后脱盐蒸发，蒸发出的淡水达标排放，固废按环保要求处理。
UASB水力停留时间约7天，两级AO水力停留时间各约7-10天，其中 A池的总停留时间约2-3天，O池的总停留时间约5-7天。
废水水质情况如下：原污水盐度50000mg/L，COD约60000mg/L，氨氮浓度约2500mg/L，总氮浓度约2800mg/L，总氮中含有大量的有机氮，会全部转化为氨氮，也就是氨氮总量约2800mg/L；要求出水总氮浓度为≤ 45mg/L，氨氮浓度约≤25mg/L。
6.3应用对比实验
实验条件:从污水处理站的好氧池中取活性污泥20L，取一级AO的A 池入口处污水30L，加入SBR污水处理模拟实验装置，控制模拟器运行参数如下：
(1)环境温度：25℃；
(2)污泥龄20d；
(3)溶解氧，曝气时DO控制在2.0-3.0mg/L，停止曝气时DO≤0.5mg/L。
实验设计:具体实验安排如下，每个实验组设置3个重复：
空白对照组：不投加菌液；
实验组1：按照50ppm，投加菌液2.5ml；
实验组2：按照100ppm，仅投加菌液5ml；
实验组3：按照1000ppm，仅投加菌液50ml。
为避免对O池造成较大干扰，选择在A池入口处投加菌液。
经两级AO处理72h后，取出水水样进行氨氮含量的测定。测定并记录原污水和出水的氨氮含量，氨氮含量的检测方法按《HJ 535-2009氨氮的测定-纳氏试剂分光光度法》执行，实验结果见表11。
表11 AOB-NY01菌株在垃圾渗滤液中的降氨氮效果
Figure BDA0003468599990000161
从表11中的结果可知，和空白对照组对比，各实验组出水氨氮均有降低，按照50ppm的接种量投加菌剂后，72h的氨氮降解率达到98.6％，与空白对照组相比提高了约17个百分点，出水氨氮降至21mg/L，已经达到了出水水质要求，菌剂接种量提高后，出水氨氮降至更低，污水的氨氮处理效果更好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 青岛蔚蓝赛德生物科技有限公司
<120> 一株耐盐的盐单胞菌菌株及其在水净化领域的应用
<130> 2
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1433
<212> DNA
<213> 盐单胞菌(Halomonas sp.菌株AOB-NY01)
<400> 1
agggcgaggg actaccatgc agtcgagcgg taacaggtct agcttgctac ccgctgacga 60
gcggcggacg ggtgagtaat gcataggaat ctgcccggta gtgggggata acctggggaa 120
acccaggcta ataccgcata cgtcctacgg gagaaagggg gctccggctc ccgctattgg 180
atgagcctat gtcggattag ctagttggtg aggtaaaggc tcaccaaggc aacgatccgt 240
agctggtctg agaggatgat cagccacatc gggactgaga cacggcccga actcctacgg 300
gaggcagcag tggggaatat tggacaatgg gggcaaccct gatccagcca tgccgcgtgt 360
gtgaagaagg ccttcgggtt gtaaagcact ttcagcgagg aagaacgcct agtggttaat 420
acccattagg aaagacatca ctcgcagaag aagcaccggc taactccgtg ccagcagccg 480
cggtaatacg gagggtgcaa gcgttaatcg gaattactgg gcgtaaagcg cgcgtaggtg 540
gcttgataag ccggttgtga aagccccggg ctcaacctgg gaacggcatc cggaactgtc 600
aagctagagt gcaggagagg aaggtagaat tcccggtgta gcggtgaaat gcgtagagat 660
cgggaggaat accagtggcg aaggcggcct tctggactga cactgacact gaggtgcgaa 720
agcgtgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac gatgtcgacc 780
agccgttggg tgcctagcgc actttgtggc gaagttaacg cgataagtcg accgcctggg 840
gagtacggcc gcaaggttaa aactcaaatg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag 900
catgtggttt aattcgatgc aacgcgaaga accttaccta ctcttgacat cctgcgaact 960
tgtgagagat cacttggtgc cttcgggaac gcagagacag gtgctgcatg gctgtcgtca 1020
gctcgtgttg tgaaatgttg ggttaagtcc cgtaacgagc gcaacccttg tccttatttg 1080
ccagcgggta atgccgggaa ctctaaggag actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg 1140
gacgacgtca agtcatcatg gcccttacga gtagggctac acacgtgcta caatggccgg 1200
tacaaagggt tgcgagctcg cgagagtcag ctaatcccga aaagccggtc tcagtccgga 1260
tcggagtctg caactcgact ccgtgaagtc ggaatcgcta gtaatcgtga atcagaatgt 1320
cacggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccatgg gagtggactg 1380
caccagaagt ggttagccta acgcaagagg gcgatcacca cggtgtttcg acc 1433

Claims (10)

1.一株耐盐的盐单胞菌(Halomonas sp.)菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.24127。
2.根据权利要求1所述的盐单胞菌菌株，其特征在于，其16S rDNA序列如SEQ ID No:1所示。
3.一种微生物菌剂，其特征在于，包含权利要求1或2所述的盐单胞菌菌株。
4.权利要求3所述微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)一级种子培养：无菌条件下取盐单胞菌菌株接种于富集培养基中，于25-35℃、100-150rpm的条件下培养24-48h，得到一级种子培养液；
(2)二级种子培养：无菌条件下将一级种子培养液按照0.5-2vol％的接种量接种于富集培养基中，于25-35℃、100-150rpm的条件下培养24-48h，得到二级种子培养液；
(3)发酵：待发酵罐内的发酵培养基消毒完毕后，将步骤(2)所得的二级种子培养液按照0.1-0.5vol％的接种量接种于发酵培养基中，控制温度为25-35℃，常压、通气比为1:(1-2)和转速150-300rpm的条件下发酵，待溶氧开始上升时停止发酵，得发酵液；
(4)制备微生物菌剂：将步骤(3)所得的发酵液稀释灌装，即得微生物菌剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述富集培养基的组成如下：硫酸铵0.3-0.8g/L，琥珀酸钠4-8g/L，维氏盐30-80ml/L，氯化钠30-80g/L，溶剂为水，且pH＝6.5-8；
所述发酵培养基的组成如下：碳源30-80g/L，氮源5-15g/L，PO4 3-0.3-0.8g/L，K+0.1-0.3g/L，Mg2+0.03-0.1g/L，Fe2+(1-3)*10-3g/L，Mn2+(2-5)*10-3g/L，盐度3-8％，消泡剂0.03-0.1wt％，溶剂为水，且pH＝6.5-8；
所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、淀粉、醋酸钠或丁二酸钠中的一种或多种；
所述氮源选自酵母粉、蛋白胨、尿素、硫酸铵或硝酸钾中的一种或多种。
6.一种净化水体的方法，包括向水体中接种净水有效量的权利要求1或2所述的盐单胞菌菌株或权利要求3所述的微生物菌剂的步骤，优选的，所述盐单胞菌菌株或微生物菌剂的接种量为50ppm以上，更优选50-1000ppm，最优选100-1000ppm。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述净化水体过程的适用温度为25-45℃，优选30-42℃，更优选30-40℃，最优选35-40℃。
8.根据权利要求6或7中任一项所述的方法，其特征在于，所述水体的盐度为30％以下，优选25％以下，进一步优选20％以下，更进一步优选15％以下，最优选2-8％。
9.权利要求1或2所述的盐单胞菌菌株或权利要求3所述的微生物菌剂在水净化领域的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，权利要求1或2所述的盐单胞菌菌株或权利要求3所述的微生物菌剂用于降解水中的含氮物质，更优选的，所述含氮物质为含氨态氮的物质。
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