CN110964687A - 用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：制备步骤为：(1)原位系统菌群的增殖培养；(2)原位系统菌群的驯化筛选；(3)原位系统菌种的分离鉴定；(4)原位系统宏基因组鉴定及优势菌判定；(5)优势菌种的复配与扩大培养；(6)微生物菌剂的制成与保藏。本发明设计科学合理，分离筛选得到的原位系统优势微生物经扩大培养和复配后，对原位系统废水适应能力超强，微生物间共生关系和谐，生物处理效率高，对废水中的有机物降解性强，显示出高效、快速和实用等特点，大大提高工作的便捷性。本发明不仅可以应用于废水生物处理菌剂的制备，还可以推广到其他固体废弃物、废气及土壤的生物处理、生物修复菌剂的制备。
Description
技术领域
本发明属于废水处理技术领域，涉及有效降解工业废水的特定复合微生物菌剂的培养方法，特别涉及一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法。
背景技术
工业废水大多属于成分复杂、有一定毒害性的难降解有机废水，但大多工业废水中都栖息生长着一定数量的特定优势微生物，这些微生物由于长期受到废水的驯化和筛选，共生关系和谐稳定，存活的都具有非常出色的适应能力和降解能力。通过一定的生物技术手段，增殖并分离得到这些特定的微生物菌群，按照特定环境样品中宏基因组的鉴定结果，将主要的微生物复配成菌剂，再利用这种特定的微生物菌剂强化工业废水的生物处理系统，是生物法处理工业废水的一条重要途径，具有很好的实用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，该方法的菌种适应性更强，降解效果更显著，处理效率更高，使用更加便捷，对相关领域特定优势微生物的获得具有很好的借鉴和推广价值。
本发明解决其技术问题是通过以下技术方案实现的：
一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法的步骤为：
(1)原位系统菌群的增殖培养：配制增殖培养基并调节pH近中性，分装于 250mL锥形瓶中，增殖好氧微生物时，每瓶装100mL；增殖兼氧微生物时，每瓶装 200mL；将6～8％的废水或3～5％的相应污泥接入增殖培养基中，在30～35℃条件下，好氧微生物采用振荡培养，摇床转速110～160r/min，培养时间约20～30小时；兼氧微生物群采用静置培养，定时摇动，培养时间约20～30小时；
(2)原位系统菌群的驯化筛选：以不同浓度的废水作为碳源，根据废水特点调节C/N，适当添加无机盐配制成筛选培养基，分装于锥形瓶中，接入步骤(1)的菌种，培养方法同步骤(1)；驯化从低到高逐步提高废水浓度，驯化时间72～80小时，最后在8000～10000r/15min条件下离心收集，得到驯化好的优势菌群；
(3)原位系统菌种的分离鉴定：将增值、筛选驯化得到的优势微生物菌群进行 10-9～10-1梯度的稀释，取一定稀释浓度的悬浊液，进行平板涂布或划线，在30～35℃条件下培养，挑取单菌落并转接斜面再进行培养，对分离纯化出的菌种进行16s rDNA 基因高通量测序鉴定；
(4)原位系统宏基因组鉴定及优势菌判定：取原位系统中的废水及污泥为样品，进行宏基因组鉴定，得到原位系统中主要微生物种类和分布占比关系，并以此为复配微生物菌剂的依据；
(5)优势菌种的复配与扩大培养：根据步骤(3)及(4)的鉴定结果，将分离纯化得到的主要菌种按占比关系进行复配，得到微生物菌剂的配方，再将这些主要菌种进行扩大培养，接种量为5～10％，装液率为70～75％，在30～35℃条件下，好氧微生物采用通风搅拌培养，通风比1:0.3～1；兼氧微生物采用静置培养，定时摇拌，培养时间约20～30小时；
(6)微生物菌剂的制成与保藏：将步骤(5)扩培的不同菌种的培养液按配方混合，再添加0.2～0.5％的吸附保护剂，混匀后制成菌剂，菌种的保藏是将培养得到的菌液离心收集，逐一做成冻干管长期保存，短期使用时将菌体在4℃条件下保藏，三个月内使用。
而且，步骤(1)中增殖培养基的成分为：蛋白胨8～12g/L、酵母粉4～6g/L、氯化钠8～12g/L，所述增值培养基的pH为7.0～7.2。
而且，步骤(2)中筛选培养基的成分为：废水、有机或无机含氮物、磷、钾、镁、钙、铁、硫、铜、锌、钴、锰、钼无机盐，所述筛选培养基的pH为7.0～7.2，所说筛选培养基经121℃、20min灭菌备用。
本发明的优点和有益效果为：
1、本发明用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，与传统的分离、纯化、驯化方法相比，菌种适应性更强，降解效果更显著，处理效率更高，使用更加便捷，对相关领域特定优势微生物的获得具有很好的借鉴和推广价值。
2、本发明用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，获得的优势微生物菌剂，强化特定微生物对工业废水有机物的降解性，大大提高了废水COD降解率。
3、本发明用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，具有实用性强，简单、快速、高效的特点，适合推广应用。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
实施例一
本发明提出的一种制备用于废水处理的好氧复合微生物菌剂的方法，以四溴双酚A废水为例，包括以下步骤:
(1)好氧优势菌的增殖培养：配制增殖培养基，每升含蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，调节pH＝7.0，直接分装于250mL锥形瓶，每瓶装100mL。将8％的四溴双酚A废水接入增殖培养基中，在33℃条件下，采用振荡培养，摇床转速115r/min，培养时间约24小时，得到浓度为109Cell/ml的微生物培养液；
(2)好氧优势菌的驯化筛选：配制特定的筛选培养基，培养基分别用25％、50％、75％和100％的四溴双酚A废水配置，每升添加蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，调节pH＝7.0，培养基经121℃/20min灭菌备用。第一轮培养：添加25％的废水，接入步骤⑴的增殖培养液，接菌量为5％，在33℃条件下，采用振荡培养，摇床转速 115r/min，培养时间约24小时，离心收集菌体；第二轮以后的培养：分别添加50％、 75％和100％的废水，接菌量为上一轮离心收集到的菌体，培养条件同第一轮，如此进行多轮废水浓度递增式筛选；
(3)好氧优势菌种的分离纯化：采用步骤⑴的增殖培养基，将步骤⑵筛选出的优势菌进行10-9～10-1的梯度稀释，取10-5～10-7浓度做平板涂布，每个稀释度连涂3 板，33℃静置培养48小时，挑取单菌落，分别转接试管斜面，得到5株优势菌种；
(4)好氧优势菌种的鉴定：将步骤(3)得到的5株优势菌种进行16s rDNA高通量测序鉴定，结果分别为假炭疽杆菌、腐败希瓦氏菌、杀鲑气单胞菌、施氏假单胞菌和嗜碱假单胞菌；
(5)好氧菌宏基因组鉴定：样品为好氧废水和污泥，鉴定结果假炭疽杆菌、腐败希瓦氏菌、杀鲑气单胞菌、施氏假单胞菌和嗜碱假单胞菌为好氧系统中分布的主要微生物，分别占比26％、22％、20％、13％和8％；
(6)好氧优势菌种的保藏：将分离得到的好氧优势菌种保藏于4℃冰箱中，做短期(3个月)保存；或将好氧优势菌种均匀分布在乳液中做成冻干管长期保存；
(7)好氧优势菌种的扩大培养：将步骤(3)得到的5株优势菌种经30升、300 升到3立方发酵罐逐级放大培养，3立方发酵罐使用工业培养基(配方：糖蜜5％、豆粕粉3％、酵母膏0.5％、磷酸二氢钾0.2％和硫酸镁0.2％，pH近中性)，121℃、30min 灭菌待用，接种量为10％，装液率为75％，在33℃条件下，采用通风搅拌培养，通风比1:0.6；培养时间约22小时；
(8)好氧优势菌种的复配：将扩培后的5株好氧菌液(假炭疽杆菌、腐败希瓦氏菌、杀鲑气单胞菌、施氏假单胞菌和嗜碱假单胞菌)参考步骤(5)的鉴定结果，按3:2.5:2:1.5:1比例混合，添加0.1％活性炭制成复合优势好氧菌剂。
实施例二
本发明提出的一种制备用于废水处理的兼氧复合微生物菌剂的方法，以四溴双酚A废水为例，包括以下步骤：
(1)兼氧优势菌的增殖培养：配制增殖培养基，每升含蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，调节pH＝7.0，直接分装于250mL锥形瓶，每瓶装200mL。将2％的四溴双酚A废水污泥接入增殖培养基中，在32℃条件下，采用静置培养，培养时间约 30小时，得到浓度为109Cell/ml的微生物培养液；
(2)兼氧优势菌的驯化筛选：配制特定的筛选培养基，培养基分别用25％、50％、75％和100％的四溴双酚A废水配置，每升添加蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，调节pH＝7.0，培养基经121℃/20min灭菌备用。第一轮培养：添加25％的废水，接入步骤⑴的增殖培养液，接菌量为5％，在32℃条件下，静置培养，定时搅拌，培养时间约30小时，离心收集菌体；第二轮以后的培养：分别添加50％、75％和100％的废水，接菌量为上一轮离心收集到的菌体，培养条件同第一轮，如此进行多轮废水浓度递增式筛选；
(3)兼氧优势菌种的分离纯化：采用步骤⑴的增殖培养基，将步骤⑵筛选出的优势菌进行10-9～10-1的梯度稀释，取10-5～10-7浓度做平板涂布，每个稀释度连涂3 板，32℃静置培养48小时，挑取单菌落，分别转接试管斜面，得到2株优势菌种；
(4)兼氧优势菌种的鉴定：将步骤(3)得到的2株优势菌种进行16s rDNA高通量测序鉴定，结果分别为球形赖氨酸芽孢杆菌和假单胞菌；
(5)兼氧菌宏基因组鉴定：样品为兼氧废水和污泥，鉴定结果球形赖氨酸芽孢杆菌和假单胞菌为兼氧系统中分布的主要微生物，分别占比54％和37％；
(6)兼氧优势菌种的保藏：将分离得到的兼氧优势菌种保藏于4℃冰箱中，做短期(3个月)保存；或将兼氧优势菌种均匀分布在乳液中做成冻干管长期保存；
(7)兼氧优势菌种的扩大培养：将步骤(3)得到的2株优势菌种经30升、300 升到3立方发酵罐逐级放大培养，3立方发酵罐使用工业培养基(配方：糖蜜5％、豆粕粉3％、酵母膏0.5％、磷酸二氢钾0.2％和硫酸镁0.2％，pH近中性)，121℃、30min 灭菌待用，接种量为10％，装液率为85％，在32℃条件下，采用间歇搅拌培养，培养时间约28小时；
(8)兼氧优势菌种的复配：将扩培后的2株兼氧菌液(球形赖氨酸芽孢杆菌和假单胞菌)参考步骤(5)的鉴定结果，按1.5:1比例混合，添加0.1％活性炭制成复合优势兼氧菌剂。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。
Claims (3)
1.一种用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法的步骤为：
(1)原位系统菌群的增殖培养：配制增殖培养基并调节pH近中性，分装于250mL锥形瓶中，增殖好氧微生物时，每瓶装100mL；增殖兼氧微生物时，每瓶装200mL；将6～8％的废水或3～5％的相应污泥接入增殖培养基中，在30～35℃条件下，好氧微生物采用振荡培养，摇床转速110～160r/min，培养时间约20～30小时；兼氧微生物群采用静置培养，定时摇动，培养时间约20～30小时；
(2)原位系统菌群的驯化筛选：以不同浓度的废水作为碳源，根据废水特点调节C/N，适当添加无机盐配制成筛选培养基，分装于锥形瓶中，接入步骤(1)的菌种，培养方法同步骤(1)；驯化从低到高逐步提高废水浓度，驯化时间72～80小时，最后在8000～10000r/15min条件下离心收集，得到驯化好的优势菌群；
(3)原位系统菌种的分离鉴定：将增值、筛选驯化得到的优势微生物菌群进行10-9～10-1梯度的稀释，取一定稀释浓度的悬浊液，进行平板涂布或划线，在30～35℃条件下培养，挑取单菌落并转接斜面再进行培养，对分离纯化出的菌种进行16s rDNA基因高通量测序鉴定；
(4)原位系统宏基因组鉴定及优势菌判定：取原位系统中的废水及污泥为样品，进行宏基因组鉴定，得到原位系统中主要微生物种类和分布占比关系，并以此为复配微生物菌剂的依据；
(5)优势菌种的复配与扩大培养：根据步骤(3)及(4)的鉴定结果，将分离纯化得到的主要菌种按占比关系进行复配，得到微生物菌剂的配方，再将这些主要菌种进行扩大培养，接种量为5～10％，装液率为70～75％，在30～35℃条件下，好氧微生物采用通风搅拌培养，通风比1:0.3～1；兼氧微生物采用静置培养，定时摇拌，培养时间约20～30小时；
(6)微生物菌剂的制成与保藏：将步骤(5)扩培的不同菌种的培养液按配方混合，再添加0.2～0.5％的吸附保护剂，混匀后制成菌剂，菌种的保藏是将培养得到的菌液离心收集，逐一做成冻干管长期保存，短期使用时将菌体在4℃条件下保藏，三个月内使用。
2.根据权利要求1所述的用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中增殖培养基的成分为：蛋白胨8～12g/L、酵母粉4～6g/L、氯化钠8～12g/L，所述增值培养基的pH为7.0～7.2。
3.根据权利要求1所述的用于废水处理的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中筛选培养基的成分为：废水、有机或无机含氮物、磷、钾、镁、钙、铁、硫、铜、锌、钴、锰、钼无机盐，所述筛选培养基的pH为7.0～7.2，所说筛选培养基经121℃、20min灭菌备用。
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Cited By (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN113293100A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-08-24 | 东莞市科绿智能环保科技有限公司 | 一种锂电池废水处理专用微生物的培养方法 |
| CN113416646A (zh) * | 2021-06-21 | 2021-09-21 | 烟台南山学院 | 一种处理化工废水的微生物菌群的筛选方法 |
| CN113929219A (zh) * | 2021-10-27 | 2022-01-14 | 深水海纳(深圳)智慧环境技术有限公司 | 一种废水生化调试的处理系统及处理方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109402016A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-03-01 | 江苏宜裕环保科技有限公司 | 用于化工废水处理的复合微生物菌剂及其筛选和制备方法 |
| CN110511975A (zh) * | 2019-08-05 | 2019-11-29 | 天津亿利科能源科技发展股份有限公司 | 一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109402016A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-03-01 | 江苏宜裕环保科技有限公司 | 用于化工废水处理的复合微生物菌剂及其筛选和制备方法 |
| CN110511975A (zh) * | 2019-08-05 | 2019-11-29 | 天津亿利科能源科技发展股份有限公司 | 一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113293100A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-08-24 | 东莞市科绿智能环保科技有限公司 | 一种锂电池废水处理专用微生物的培养方法 |
| CN113416646A (zh) * | 2021-06-21 | 2021-09-21 | 烟台南山学院 | 一种处理化工废水的微生物菌群的筛选方法 |
| CN113929219A (zh) * | 2021-10-27 | 2022-01-14 | 深水海纳(深圳)智慧环境技术有限公司 | 一种废水生化调试的处理系统及处理方法 |
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