CN111235063A - 一种口腔益生菌干粉制备工艺及其应用 - Google Patents

一种口腔益生菌干粉制备工艺及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种口腔益生菌干粉制备工艺及其应用，本发明口腔益生菌干粉的制备工艺主要包括种子液发酵、扩培发酵、离心与冷冻干燥等步骤，本发明涉及微生物发酵工程领域，涉及一种口腔益生菌干粉制备工艺及其应用，具体是将口腔益生菌经种子培养、混菌扩培发酵、离心、冷冻干燥，得到口腔益生菌干粉，本发明的口腔益生菌发酵后产生的大量益生菌菌群能够有效抑制变异链球菌的量，具有维护口腔微生态的功能，在口腔复杂的微生态系统中，益生菌可以发挥稳定的功效，保障口腔微生态平衡。本发明的口腔益生菌干粉用于口腔护理产品中，以改善口腔微生态，可以有效预防龋齿、口臭、牙周炎等口腔问题。

Description

一种口腔益生菌干粉制备工艺及其应用
技术领域
本发明涉及微生物发酵工程技术领域，具体涉及一种口腔益生菌干粉制 备工艺及其应用。
背景技术
目前，口腔健康是全身健康的重要组成部分，口腔健康直接或间接影响 人体全身健康。口腔中定植的微生物种类繁多，维持口腔中的微生物之间、 微生物与宿主口腔组织的动态平衡，才能保持口腔微生态的健康状态。口腔 中的有害微生物，如变异链球菌等过量繁殖会导致龋齿、口臭、牙周炎；通 过服用抗生素治疗方式会破坏口腔生态系统的平衡，无法从根本上解决口腔 微生态环境。
目前现有口腔护理技术存在一些抑制口腔有害菌的方法，如三氯生、柠 檬酸锌等化学成分，但在使用过程中会产生一些副作用；植物提取物生物碱、 黄酮等，由于添加量少，活性弱。口腔益生菌在其发酵过程中，产生一些代 谢产物，如有机酸、过氧化氢、抗菌肽、凝集分子等成分，具有抑制口腔有 害菌的效果。同时口腔益生菌能够改善宿主口腔菌群平衡，对宿主产生有益 的生理作用，被认为具有改善口腔微生态环境的功能。专利公开号 CCN110257297A公开了一株用于促进口腔健康的副干酪乳杆菌PC-01，作为口 腔病理状态的微生物拮抗剂，可以抑制变形链球菌等有害菌。专利公开号CN 104140937A公开了一种植物乳杆菌KLDS1001，对口腔变异链球菌具有抑制作 用，可以用于口腔保健品。专利公开号CN103298924A公开了包含有效量的植 物乳杆菌CECT7481和短乳杆菌CECT7480的组合物，具有改善口腔健康的作 用。唾液乳杆菌(Streptococcus salivarius)K12作为现行使用较多的口 腔益生菌，分离自健康儿童唾液，显示出对涉及引进口臭多种菌株的拮抗活性，但受限于口臭症状的改善。
因此需要一种可以解决上述问题的一种口腔益生菌干粉制备工艺及其应 用。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的是提供一种口腔益生菌干粉制备工艺及其 应用，本发明涉及微生物发酵工程领域，具体涉及一种口腔益生菌干粉制备 工艺及其应用，具体是将口腔益生菌经种子培养、混菌扩培发酵、离心、冷 冻干燥，得到口腔益生菌干粉；本发明的口腔益生菌干粉用于口腔护理产品 中，能有效预防龋齿等口腔问题。
本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种口腔益生菌干粉 制备工艺，其特征在于，包括以下步骤:
(1)种子液发酵：制备种子液MRS培养基，将口腔益生菌接种于种子液 中进行发酵培养，其中种子液MRS培养基组分包括：葡萄糖20.0g、蛋白胨 10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、无水乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二胺2.0g、 磷酸氢二钾2.0g、吐温-80 1.0g、七水硫酸镁0.58g与一水硫酸锰0.19g， 加去离子水至1000mL，调节pH值到6.2-6.5；
(2)扩培发酵：制备扩培培养基，将发酵完成的种子液接种扩培培养基 中进行发酵培养；
(3)离心：步骤(2)发酵培养后的破壁混合液经过高速管式离心机离 心，收集菌泥；
(4)冷冻干燥：将离心后得到的菌泥添加保护剂，保护剂成分为脱脂乳 粉，添加量为菌泥量10％，将菌泥低温冷冻干燥，得到口腔益生菌干粉。
进一步，所述步骤(1)中的口腔益生菌菌种按种子液3‰的量接种至种 子液培养基中，培养温度为37℃，发酵48h。
进一步，所述步骤(2)中的培养基组分及比例为：葡萄糖2％，蛋白胨 1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，无水乙酸钠0.5％，柠檬酸氢二胺0.2％，磷酸 氢二钾0.2％，吐温-800.1％，七水硫酸镁0.058％，一水硫酸锰0.019％，pH 值范围为6.2-6.5。
进一步，所述步骤(2)中完成发酵培养的种子液的OD值范围在2.0-6.0， pH＜4.5。
进一步，所述步骤(2)中的口腔益生菌菌种按种子液1％-3％的量接种至 扩培培养基中，培养温度为37℃，发酵48h。
进一步，所述步骤(3)中发酵完成后的口腔益生菌发酵液的OD值范围 在3.0-6.0，pH＜5.0。
进一步，所述步骤(3)中高速管式离心机的离心力为10000～12000R.C.F， 离心时间为10min，离心后倒去上清液，保留菌泥。
进一步，所述步骤(4)中的菌泥置于冷冻干机中，冷冻温度设置为-40℃， 冷冻时长3h，干燥温度30℃，干燥时长大于36h。
进一步，所述口腔益生菌包括植物乳杆菌XY-381、副干酪乳杆菌XY-256 和唾液乳杆菌XY-101。
进一步，所述口腔益生菌干粉应用于口腔护理产品中，以改善口腔微生 态。
本发明的优点在于：本发明提供了一种口腔益生菌干粉制备工艺及其应 用，在口腔益生菌干粉制备过程中，不添加任何对人体有副作用的化学试剂， 确保产品对人体的健康保障，本发明的口腔益生菌发酵后产生的大量益生菌 菌群能够有效抑制变异链球菌的量，具有维护口腔微生态的功能，在口腔复 杂的微生态系统中，益生菌可以发挥稳定的功效，保障口腔微生态平衡，具 有较高的安全性、定植口腔能力和功效性。本发明公开一种口腔益生菌干粉 的制备工艺，由三株可以定植口腔且功效安全的菌株发酵制备成益生菌干粉， 具体是将口腔益生菌经种子培养、混菌扩培发酵、离心、冷冻干燥，得到口 腔益生菌干粉，本发明的口腔益生菌干粉用于口腔护理产品中，能有效预防 龋齿等口腔问题，而且口腔益生菌产物作为一种新型生物资源，其产业化的 研究和开发给口腔护理产品带来更积极意义。
具体实施方式
下面将结合附表对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所 描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中 的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有 其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本实施例1提供一种口腔益生菌干粉制备工艺，其干粉制备包括以下步 骤：
(1)种子液发酵：种子液MRS培养基制备，将口腔益生菌接种于种子液 中发酵培养。
口腔益生菌菌种包括植物乳杆菌XY-381、副干酪乳杆菌XY-256和唾液 乳杆菌XY-101。
种子液培养基制备，其特征在于所述种子液MRS培养基组分包括葡萄糖 20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，无水乙酸钠5.0g，柠檬 酸氢二胺2.0g，磷酸氢二钾2.0g，吐温-80 1.0g，七水硫酸镁0.58，一水 硫酸锰0.19，加去离子水至1000mL，调节pH到6.2-6.5，放置于高压灭菌 锅灭菌，温度118℃，时长20min；
将口腔益生菌菌种按种子液3‰的量无菌接种至种子液培养基中，培养 温度为37℃，发酵48h，控制起始pH 6.5左右。
发酵完成种子液的OD值范围在2.0-6.0，pH＜4.5。
(2)扩培发酵：扩培培养基制备，发酵完成的种子液接种扩培培养基中 发酵培养。
扩培培养基组分及比例为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏 0.5％，无水乙酸钠0.5％，柠檬酸氢二胺0.2％，磷酸氢二钾0.2％，Tween-80 0.1％， 七水硫酸镁0.058％，一水硫酸锰0.019％，pH到6.2-6.5。灭菌118℃，20min。
口腔益生菌菌种按种子液1％-3％的量接种至扩培培养基中，培养温度为 37℃，发酵48h。
(3)离心：破壁混合液经过高速管式离心机离心，收集菌泥。
控制离心力10000R.C.F到12000R.C.F，离心10min，倒去上清液， 保留菌泥。
(4)冷冻干燥：将离心后得到的菌泥，加保护剂，低温冷冻干燥，得口 腔益生菌干粉。
保护剂成分为脱脂乳粉，添加量为菌泥质量的10％。
冷冻干燥工艺特征在于菌泥置于冷冻干机，冷冻温度设置为-40℃，冷 冻时长3h，干燥温度30℃，干燥时长大于36h。
实施例2：
下面结合实例，进一步详细说明本发明的具体实施方式。以下实施例用 于说明本发明内容，但不限制本发明的范围。
口腔益生菌干粉在口腔护理产品中的应用：
一、口腔益生菌产品的性质
实施例中1制备的口腔益生菌干粉，颜色为淡黄色，菌落总数≥3.0*109， 无致病菌检出。
二、口腔益生菌干粉的口腔护理效果检测
牙菌斑生物膜是龋齿发生的始动因子，抑制菌斑生物膜的形成可在一定 程度上有效抑制龋齿的发生。
实验一
(1)实验对象：考察不同口腔益生菌产品对变异链球菌S.mutans形成 生物膜的影响。
(2)实验方法：实施例1制作的口腔益生菌干粉、产品1(市售，主要 成分为副干酪乳杆菌，植物乳杆菌，有效活菌量≥109)和产品2(市售，主 要成分唾液乳杆菌K12，有效活菌量≥109)，空白对照(不做任何处理)， 计算产品的抑制菌膜产生面积的比例，评价效果。
具体做法：
(3)实验结果与对照组不做任何处理的生长24h的S.mutans形成的生 物膜相比，使得S.mutans生物膜中细菌总面积分别减少68.92％、56.04％和 47.51％，表明上述菌株可以明显抑制S.mutans生物膜的形成，其中自制口 腔益生菌干粉抑制能力最强，如表1所示。
表1：不同口腔益生菌制剂对变异链球菌生物膜形成的影响：
Figure BDA0002404633760000061
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对 其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的通技 术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改， 或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并 不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于，包括以下步骤:
(1)种子液发酵：制备种子液MRS培养基，将口腔益生菌接种于种子液中进行发酵培养，其中种子液MRS培养基组分包括：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、无水乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二胺2.0g、磷酸氢二钾2.0g、吐温-80 1.0g、七水硫酸镁0.58g与一水硫酸锰0.19g，加去离子水至1000mL，调节pH值到6.2-6.5；
(2)扩培发酵：制备扩培培养基，将发酵完成的种子液接种扩培培养基中进行发酵培养；
(3)离心：步骤(2)发酵培养后的破壁混合液经过高速管式离心机离心，收集菌泥；
(4)冷冻干燥：将离心后得到的菌泥添加保护剂，保护剂成分为脱脂乳粉，添加量为菌泥量10％，将菌泥低温冷冻干燥，得到口腔益生菌干粉。
2.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述步骤(1)中的口腔益生菌菌种按种子液3‰的量接种至种子液培养基中，培养温度为37℃，发酵48h。
3.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述步骤(2)中的培养基组分及比例为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，无水乙酸钠0.5％，柠檬酸氢二胺0.2％，磷酸氢二钾0.2％，吐温-80 0.1％，七水硫酸镁0.058％，一水硫酸锰0.019％，pH值范围为6.2-6.5。
4.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述步骤(2)中完成发酵培养的种子液的OD值范围在2.0-6.0，pH＜4.5。
5.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述步骤(2)中的口腔益生菌菌种按种子液1％-3％的量接种至扩培培养基中，培养温度为37℃，发酵48h。
6.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述步骤(3)中发酵完成后的口腔益生菌发酵液的OD值范围在3.0-6.0，pH＜5.0。
7.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述步骤(3)中高速管式离心机的离心力为10000～12000R.C.F，离心时间为10min，离心后倒去上清液，保留菌泥。
8.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述步骤(4)中的菌泥置于冷冻干机中，冷冻温度设置为-40℃，冷冻时长3h，干燥温度30℃，干燥时长大于36h。
9.根据权利要求1所述的一种口腔益生菌干粉制备工艺，其特征在于：所述口腔益生菌包括植物乳杆菌XY-381、副干酪乳杆菌XY-256和唾液乳杆菌XY-101。
10.根据权利要求1～9任意一项所述的一种口腔益生菌干粉，其特征在于：所述口腔益生菌干粉应用于口腔护理产品中，以改善口腔微生态。
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