CN111226839B - 一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法 - Google Patents
一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法，涉及水产动物选育和繁育技术领域；包括父母亲本选育、配组、缺氧胁迫后筛选到杂交子代繁育与培育等技术，其中通过家系选育的方法，选育母本，利用缺氧胁迫筛选耐低氧的家系，同时兼顾生长提高，有助于提高后代的耐低氧能力和生长性能；通过群体选育的方法筛选生长快速的瓦氏黄颡鱼作为父本。在本发明实施例中，提供的催产技术与繁育方法，雌鱼催产率高于95％，受精率高于96％，孵化率高于94％；且利用本发明所述方法繁育的子一代生长性能较快，同时耐低氧，适合稻田养殖与长途运输。
Description
技术领域
本发明属于水产动物选育和繁育技术领域，具体涉及一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法。
背景技术
在国家的农村政策指引和科技进步的带动下，我国渔业得到了持续快速的发展，并实现了“以捕为主”向“以养为主”的历史性转变。近年来，江苏以市场为导向，以优质、高效、生态、安全为基本要求，已建成多个名特优水产品品牌与产业集成，包括河蟹、小龙虾、青虾、黄颡鱼、河豚鱼、鲥鱼等，名特优水产品产量占江苏渔业总产量的70％以上。黄颡鱼作为江苏省水产养殖“十大主推品种”之一，产量以每年20％的增速上涨，江苏的黄颡鱼市场需求强劲，销售行情好，价格逐年上升，是一种具有高回报的养殖品种。目前，市场上主要养殖的黄颡鱼品种有瓦氏黄颡鱼、YY黄颡鱼与杂交黄颡鱼“黄优 1号”等，这些品种具有一定的生长优势。然而，这些黄颡鱼的耐低氧能力较差，长途运输过程中容易引起体表粘液大量损失，受伤与死亡的鱼体大量增加。
黄颡鱼作为底层鱼类，底层水的溶氧低于2mg/L，则容易死鱼。近年来，黄颡鱼养殖池塘因增氧机跳闸缺氧而泛塘的现象频繁发生，给渔民造成了重大经济损失。因此，培育出生长性能良好的耐低氧新品种具有重要的生产价值。在稻田养鱼中，适合放养的特色鱼类较少，通常放养中上层鱼类，如鲤鱼、罗非鱼等，适合的底层鱼类较少，开发适合稻田养鱼中低氧的底层环境的养殖鱼类具有良好的应用前景。因此，开发耐低氧杂交黄颡鱼新品种，不仅可以解决黄颡鱼苗种与成鱼长途运输问题，而且也能为稻田低溶氧环境养殖黄颡鱼提供数据支撑。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法，克服现有黄颡鱼品种的缺陷，提高黄颡鱼的耐低氧能力，且获得的耐低氧杂交黄颡鱼生长势良好。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法，包括以下步骤：(1) 以瓦氏 黄颡鱼的不同地理种群为选育群体，利用种间杂交构建瓦氏 黄颡鱼群体的F0代，筛选含氧量在0.9～1.2mg/L时存活率高于80％的F0代群体进行家系选育，得F1代群体；
(2)根据F1代群体中雌雄个体的估计育种值和亲缘关系设计亲本配对，进行连续3代选育，得F3代瓦氏 黄颡鱼群体；
(3)以瓦氏黄颡鱼为基础种群，以体重和体长为选育指标，通过群体选育的方法，连续选育3代，得F3代瓦氏黄颡鱼群体；
(4)以所述F3代瓦氏 黄颡鱼群体中的雌性个体为母本，以所述F3代瓦氏黄颡鱼群体的雄性个体为父本进行杂交，得耐低氧杂交黄颡鱼；
在所述杂交前2周，将所述母本和父本单独置于流水中饲养，所述饲养期间投喂蛋白质量含量为42～47％和油脂质量含量为5～9％的饲料；
在所述杂交前还包括向所述父本和母本注射催产药物。
优选的，步骤(1)所述地理种群包括珠江水系的云南西江、广东珠江、广西漓江和四川金沙江四个地理种群。
优选的，每个所述地理种群的数量为120～150尾，雌雄数量比为3：1～2： 1。
优选的，步骤(2)所述配对时，将每个地理种群的育种值从高到低排列，选择前100位作为繁殖亲本，且F3代的近交系数不大于1/16。
优选的，在步骤(2)进行连续3代选育过程中，每一代中都包括筛选含氧量在0.9～1.2mg/L时存活率高于80％的群体进行下一代选育。
优选的，步骤(3)所述瓦氏黄颡鱼来源于四川嘉陵江流域，雌雄比例为2：1。
优选的，对所述瓦氏黄颡鱼进行连续选育时，当每一代体长相同，选择背部厚度不低于体宽10％的作为下一代亲本；且每一代亲本的体重都与上一代具有显著差异。
优选的，步骤(4)所述催产药物的成分包括：促黄体素释放激素类似物2号、马来酸地欧酮和绒毛膜促性腺激素，其中促黄体素释放激素类似物 2号的使用剂量为10μg/kg，马来酸地欧酮的使用剂量为5mg/kg，绒毛膜促性腺激素的使用剂量为4000IU/kg。
优选的，雌鱼分2次注射所述催产药物，第一次注射用药量为全剂量的 1/5～1/3，22～24h后第二次注射；雄鱼注射一次，所述雄鱼的注射时间与雌鱼的第二次注射时间同步，所述雄鱼的注射剂量为所述雌鱼第二次注射量的一半。
优选的，步骤(4)所述杂交为人工授精，在所述人工授精后还包括卵孵化，所述卵孵化的水温为26～29℃，流水速度为3升/分钟，溶氧浓度为 6～8mg/L；
在所述卵孵化72h后，收集所述耐低氧杂交黄颡鱼的苗种进行培育。
本发明提供了一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法，包括父母亲本选育、配组、缺氧胁迫后筛选到杂交子代繁育与培育等技术，其中通过家系选育的方法，选育母本，利用缺氧胁迫筛选耐低氧的家系，同时兼顾生长提高，有助于提高后代的耐低氧能力和生长性能；通过群体选育的方法筛选生长快速的瓦氏黄颡鱼作为父本。在本发明实施例中，提供的催产技术与繁育方法，雌鱼催产率高于95％，受精率高于96％，孵化率高于94％；且利用本发明所述方法繁育的子一代生长性能较快，同时耐低氧，适合稻田养殖与长途运输。
附图说明
图1为耐低氧杂交黄颡鱼选育流程图。
具体实施方式
本发明提供了一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法，包括以下步骤：(1) 以瓦氏 黄颡鱼的不同地理种群为选育群体，利用种间杂交构建瓦氏 黄颡鱼群体的F0代，筛选含氧量在0.9～1.2mg/L时存活率高于80％的F0代群体进行家系选育，得F1代群体；
(2)根据F1代群体中雌雄个体的估计育种值和亲缘关系设计亲本配对，进行连续3代选育，得F3代瓦氏 黄颡鱼群体；
(3)以瓦氏黄颡鱼为基础种群，以体重和体长为选育指标，通过群体选育的方法，连续选育3代，得F3代瓦氏黄颡鱼群体；
(4)以所述F3代瓦氏 黄颡鱼群体中的雌性个体为母本，以所述F3代瓦氏黄颡鱼群体的雄性个体为父本进行杂交，得耐低氧杂交黄颡鱼；
在所述杂交前2周，将所述母本和父本单独置于流水中饲养，所述饲养期间投喂蛋白质量含量为42～47％和油脂质量含量为5～9％的饲料；
在所述杂交前还包括向所述父本和母本注射催产药物。
本发明以瓦氏 黄颡鱼的不同地理种群为选育群体，利用种间杂交构建瓦式黄颡鱼群体的F0代，筛选含氧量在0.9～1.2mg/L时存活率高于80％的F0 代群体进行家系选育，得F1代群体。本发明所述地理种群优选包括珠江水系的云南西江、广东珠江、广西漓江和四川金沙江四个地理种群。在本发明中，在每个所述地理种群中优选筛选出120～150尾的瓦氏 黄颡鱼，且雌雄数量比优选为3：1～2：1。本发明所述筛选的标准优选包括生长性状优良和体型较好，更优选的：在体重和体形选择中，选择个体较大；三处均体宽大于基础群体10％以上且差异显著，体重遗传改良15％以上，育种值较高；近交系数不大于1/16。本发明以4个地理种群为例，通过种间杂交(4×4)构建全同胞家系，包括16种杂交组合，每个组合建立6个家系，共计96个家系，构建基础瓦氏 黄颡鱼群体F0代。
本发明在构建得到所述基础瓦氏 黄颡鱼群体F0代后，优选还包括将所述基础瓦氏 黄颡鱼群体F0代隔离培育至15g后，在土池中培育7个月。本发明在所述F0代培育期间会出现天然低氧胁迫，暴雨来临前或高温季节池塘溶氧降至0.9～1.2mg/L，将存活率超过80％的家系构成下一世代选育的群体。
得F1代群体后，本发明根据F1代群体中雌雄个体的估计育种值和亲缘关系设计亲本配对，进行连续3代选育，得F3代瓦氏 黄颡鱼群体。本发明所述估计育种值优选利用BLUP计算得出，以体重和存活率为指标。本发明在设计亲本配对时，优选将雌、雄鱼的估计育种值从大到小排序，按估计育种值的大小(前100位)和鱼的家系背景设计下一代鱼的亲本配对方案，要求雌、雄鱼不是来自同一家系。
本发明在所述连续3代选育过程中，每一代都会出现所述天然低氧胁迫，筛选存活率超过80％的家系构成下一世代选育的群体。本发明对所述每一代群体的培育方法并没有特殊限定，利用本领域的常规培育方法即可。
本发明以瓦氏黄颡鱼为基础种群，以体重和体长为选育指标，通过群体选育的方法，连续选育3代，得F3代瓦氏黄颡鱼群体。
本发明所述瓦氏黄颡鱼优选来源于四川嘉陵江流域，优选筛选400尾所述瓦氏黄颡鱼作为基础种群，且其中雌雄比例优选为2：1。本发明采用群体选育的方式，连续进行3代连续选育，以体重和体长为选育指标，选择标准优选包括：当每一代体长相同，选择背部厚度不低于体宽10％的作为下一代亲本；且每一代亲本的体重都与上一代具有显著差异。本发明所述背部宽度优选包括背鳍、腹鳍和臀鳍处的体宽。本发明在进行所述选育时，优选通过观察活力情况、挑选体质是否强壮和标记后数据采集再挑选的方法进行，具体的在本发明实施例中，F1代群体的选择标准为：体长和体质量选择差分别为5.38cm和109.4g，体长和体质量选择强度分别为2.30和1.07，选择压力为4.18；F2代群体的选择标准为：体长和体质量选择差分别为4.52cm和 101.3g，体长和体质量选择强度分别为2.04和1.01，选择压力为4.82；F3 代群体的选择标准为：体长和体质量选择差分别为4.24cm和96.3g，体长和体质量选择强度分别为1.95和0.93，选择压力为5.32。在本发明中，各代群体选择的选择压力优选的均大于上一代，一直至培育瓦氏黄颡鱼F3代。
得到F3代瓦氏 黄颡鱼群体和F3代瓦氏黄颡鱼群体后，本发明以所述 F3代瓦氏黄颡鱼群体中的雌性个体为母本，以所述F3代瓦氏黄颡鱼群体的雄性个体为父本进行杂交，得耐低氧杂交黄颡鱼；在所述杂交前2周，将所述母本和父本单独置于流水中饲养，所述饲养期间投喂蛋白质量含量为45％和油脂质量含量为6％的饲料；在所述杂交前还包括向所述父本和母本注射催产药物。本发明优选鱼体体形、体色正常，体质健壮，性腺饱满而红润的瓦氏 黄颡鱼F3代雌性个体作为母本；优选性腺发育较好的瓦氏黄颡鱼F3代雄性个体作为父本。本发明在所述杂交前2周，优选将雌鱼与雄鱼分别放入水温为28℃，水流速度优选为10升/分钟的流水中，培育期间投喂蛋白水平为45％，饲料油脂水平为6％(鱼油：大豆油：椰子油按照30％～40％：30％～50％：10％～20％比例)的饲料，以加速性腺发育。本发明所述饲料的原料优选包括鱼油、大豆油和椰子油，其中鱼油、大豆油和椰子油的质量百分含量比优选为30％～40％：30％～50％：10％～20％。
本发明在所述杂交前还包括向所述父本和母本注射催产药物，所述催产药物的注射时期优选为：同池同批亲本中，雄鱼较易挤出精液，雌鱼腹部颜色变淡，膨大，手指轻压弹性好。本发明所述催产药物的成分优选包括：促黄体素释放激素类似物2号、马来酸地欧酮和绒毛膜促性腺激素，其中促黄体素释放激素类似物2号的使用剂量优选为10μg/kg，马来酸地欧酮的使用剂量优选为5mg/kg，绒毛膜促性腺激素的使用剂量优选为4000IU/kg。在本发明中，所述雌鱼优选分2次注射所述催产药物，第一次注射用药量为全剂量的1/5～1/3，22～24h后第二次注射。本发明所述第一次注射的时间优选为早上9：00-10：00，注射部位为鱼体两侧背鳍与侧线间肌肉，稍靠近体前，避开体腔，斜下针，进针深约1cm。在本发明中，所述雄鱼注射一次所述催产药物，所述雄鱼的注射时间优选与雌鱼的第二次注射时间同步，所述雄鱼的注射剂量为所述雌鱼第二次注射量的一半。本发明在所述第二次注射后 22～24h，亲鱼达到效应时间。
本发明所述杂交优选为人工授精，其中对于雌鱼的处理方法优选包括：轻轻挤压雌鱼腹部，用不锈钢盆收集卵子。本发明中所述雄鱼优选采用杀鱼取精巢的方式，用纱布裹住精巢后轻轻挤压出精液。本发明在所述人工授精时，优选的按照每1000粒卵子加入0.2mL精液，并加入10mL水激活，搅动2min，待精卵充分混合后，将人工授精后的卵子用8％浓度的黄泥浆悬浊液脱粘5min，将筛绢铺于大塑料盆中，再将脱黏后的受精卵倒入筛绢，在水槽中漂洗干净后倒入孵化桶流水孵化。本发明卵孵化的水温优选为 26～29℃，流水速度优选为3升/分钟度，溶氧浓度优选为6～8mg/L。
本发明在所述卵孵化72h后，优选收集所述耐低氧杂交黄颡鱼的苗种进行培育，所述培育的条件优选包括：饲料投喂量为体重的15～20％；培育期间连续充气，水温控制在26～29℃，水流速度为10～20升水/分钟，每隔3d 换水1/3，换水前后温差不超过0.5℃，自然光周期；水中NO2 –<0.01mg/L，NO3 –<3.5mg/L，总氨氮0.02mg/L。本发明所述饲料优选为鳗鱼料，其中蛋白的质量含量优选为42～47％，脂肪的质量含量优选5～9％。
下面结合实施例对本发明提供的选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
按图1所示流程选育耐低氧杂交黄颡鱼：
第1步、2011年4月，选取珠江水系的四个地理种群(云南西江，广东珠江，广西漓江和四川金沙江)的瓦氏 黄颡鱼，要求长性状优良，体型较好，其中云南西江120尾(雌雄比2:1)，广东珠江130尾(雌雄比2:1)，广西漓江150尾(雌雄比3:1)和四川金沙江145尾(雌雄比3:1)，将上述地理种群作为选育基础群体。通过种间杂交(4×4)构建全同胞家系，包括16种杂交组合，每个组合建立6个家系(共计96个家系)，其中包括6个西江(♀)×西江(♂)家系、6个西江(♀)×珠江(♂)家系、6个西江(♀)×漓江(♂)家系、6个西江(♀)×金沙江(♂)家系、6个珠江(♀)×西江(♂)家系、6个珠江(♀)×珠江(♂) 家系、6个珠江(♀)×漓江(♂)家系、6个珠江(♀)×金沙江(♂)家系、6个漓江 (♀)×漓江(♂)家系、6个漓江(♀)×西江(♂)家系、6个漓江(♀)×珠江(♂)家系、 6个漓江(♀)×金沙江(♂)家系、6个金沙江(♀)×金沙江(♂)家系、6个金沙江 (♀)×西江(♂)家系、6个金沙江(♀)×珠江(♂)家系、6个金沙江(♀)×漓江(♂) 家系，构建基础瓦氏 黄颡鱼群体F0代。家系鱼苗经隔离培育至15g左右，每个家系随机各选50尾用PIT进行个体标记，并测量每尾鱼的体重、体长、体高、体宽等数据。将标记好的鱼放入一个6亩的土池中培育7个月，收获后测量每尾鱼的体重、体长、体高、体宽及各家系存活率等数据。其中，F0代在7月份暴雨来临前，池塘溶氧降至1.1mg/L时，部分不耐低氧的种鱼出现死亡。剩余的种鱼继续饲养至11月中旬。在以体重和存活率为指标，运用BLUP计算每尾存活的雌、雄鱼的估计育种值，将雌、雄鱼的估计育种值从大到小排序，按估计育种值的大小和鱼的家系背景设计下一代鱼的亲本配对方案，要求雌、雄鱼不是来自同一家系。
通过一次天然缺氧胁迫后，共有56个家系的种鱼存活高于80％，这些家系作为耐低氧F1奠基群体。在以体重和体长为指标，运用BLUP计算每尾奠基群体的雌、雄鱼的估计育种值，将雌、雄鱼的估计育种值从大到小排序，按估计育种值的大小和鱼的家系背景设计下一代鱼的亲本配对方案，要求雌、雄鱼不是来自同一家系。
2013年4月，按设计的亲鱼配对方案进行F1代亲本的配对，设计建立90个选育家系(育种值排名靠前)和18个对照家系(平均育种值)，实际建立81个选育家系(育种值排名靠前)和17个对照家系(平均育种值)。按上述方法进行标记与饲养。8月中旬高温季节，池塘水温高达38℃，水体溶氧降至1.2mg/L，部分不耐低氧的种鱼出现死亡。通过天然缺氧胁迫后，共有 59个家系的种鱼存活高于80％，这些家系作为耐低氧F1代群体。养殖至11 月中旬，数据测量和分析，根据估计育种值的大小和鱼的家系背景设计下一代亲本选配方案，要求雌、雄鱼来自亲缘关系较远的家系(近交系数小于 0.04)。
2014年4月，生产F2代，实际建立78个选育家系和15个对照家系。8月上旬高温季节，池塘水温高达37℃，水体溶氧降至1.2mg/L，共有 53个家系的种鱼存活高于80％，这些家系作为耐低氧F2代群体。
2015年4月，生产F3代，实际建立84个选育家系和16个对照家系。8月中旬高温季节，池塘水温高达39℃，水体溶氧降至0.9mg/L，共有51个家系的种鱼存活高于80％，这些家系作为耐低氧F3代群体。
第2步、收集四川嘉陵江流域的瓦氏黄颡鱼400尾(雌雄比例2:1)作为基础种群。采用群体选育的方式，连续进行3代连续选育，以体重和体长为选育指标。F1群体选择体长和体质量选择差分别为5.38cm和109.4g，体长和体质量选择强度分别为2.30和1.07，选择压力为4.18。F2群体选择体长和体质量选择差分别为4.52cm和101.3g，体长和体质量选择强度分别为 2.04和1.01，选择压力为4.82。F3群体选择体长和体质量选择差分别为 4.24cm和96.3g，体长和体质量选择强度分别为1.95和0.93，选择压力为5.32。各代群体选择选择压力均大于上一代，培育瓦氏黄颡鱼F3代。
第3步、选取鱼体体形、体色正常，体质健壮，性腺饱满而红润的瓦氏 黄颡鱼F3代雌性个体作为母本；选择性腺发育较好的瓦氏黄颡鱼F3代雄性个体作为父本，亲鱼配组前2周，雌鱼与雄鱼分别放入水温为28℃，水流速度为10升/分钟的流水中，培育期间投喂蛋白水平为45％，饲料油脂水平为 6％(鱼油：大豆油：椰子油按照40％：50％：10％比例)的饲料，加速性腺发育；
第4步、配制催产药物为促黄体素释放激素类似物2号、马来酸地欧酮和绒毛膜促性腺激素合剂，剂量分别为10μg/kg、5mg/kg和4000IU/kg。雌鱼分2次注射。首次注射时间为早上9：00～10：00，注射部位为鱼体两侧背鳍与侧线间肌肉，稍靠近体前，避开体腔，斜下针，进针深约1cm。第一次注射用药量为全剂量的1/4，23h后第二次注射余量，雄鱼与雌鱼的第二针同步注射，剂量减半。第二针注射后约22-24h，亲鱼达到效应时间。轻轻挤压雌鱼腹部，用不锈钢盆收集卵子；雄鱼采用杀鱼取精巢的方式，用纱布裹住精巢后轻轻挤压出精液。每1000粒卵子需加入0.2mL精液，并加入 10mL水激活，搅动2min左右，待精卵充分混合后，人工授精后的卵子用 8％浓度的黄泥浆悬浊液脱粘5min，将筛绢铺于大塑料盆中，再将脱黏后的受精卵倒入筛绢，在水槽中漂洗干净后倒入孵化桶。孵化条件为水温 26～29℃，3升/分钟流水速度，溶氧在6～8mg/L。
第5步、孵化72h后收集杂交黄颡鱼苗种，放入1立方米的苗种培育桶中，使用鳗鱼料(蛋白含量45％～50％，脂肪含量8％～10％)作为开口饵料。培育条件：饲料投喂量为体重的15％-20％；培育期间连续充气，水温控制在 26～29℃，水流速度为20升水/分钟，每隔3d换水1/3，换水前后温差不超过0.5℃，自然光周期；水中NO2 –<0.01mg/L，NO3 –<3.5mg/L，总氨氮 0.02mg/L。
选取本发明发育的杂交黄颡鱼200尾与市场上购买的超雄黄颡鱼200尾和杂交黄颡鱼200尾，放置于同一套封闭流水槽循环系统中，养殖管理与饲料投喂相同，进行120天的生长性能比较，结果如表1所示，利用本发明所述方法选育的杂交黄颡鱼生长速度明显高于超雄黄颡鱼，略高于市场购买的杂交黄颡鱼。
表1选育杂交黄颡鱼与两种市场主要养殖黄颡鱼的生长性能比较
设置2.4、1.2和0.6mg/L来确定黄颡鱼96h中半致死低氧。实验在12个 500L的塑料桶中进行，每个养殖桶加入150L的曝气3d的自来水。每个实验桶放置20尾实验鱼，设置4组平行，共计240尾鱼。实验中依据溶氧仪 (HACH LDO101，测量范围0.1mg/L～20.0mg/L)的实时读数，通过调节充入水中的氮气和空气的速率控制水中溶氧。实验开始时，通过充入氮气将实验桶中的溶氧在2小时后达到每个实验溶氧水平。计算每个处理组在96小时内的累积死亡率，并通过线性插值获得不同黄颡鱼的96h中半致死低氧。在实验过程中，发现死鱼及时捞出清理，以防污染水质，结果如表2～表4 所示，利用本发明所述方法选育的杂交黄颡鱼96h半致死低氧明显低于超雄黄颡鱼与市场购买的杂交黄颡鱼。
表2选育杂交黄颡鱼与两种市场主要养殖黄颡鱼的96h半致死低氧浓度
| 项目 | 选育杂交黄颡鱼 | 超雄黄颡鱼 | 购买杂交黄颡鱼 |
| 96h半致死低氧 | 1.12mg/L | 1.67mg/L | 1.31mg/L |
表3选育杂交黄颡鱼与其它两种养殖黄颡鱼96h半致死缺氧胁迫后血清指标
由表3可见，96h半致死缺氧胁迫后选育的杂交黄颡鱼血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活力均低于超雄黄颡鱼与购买的杂交黄颡鱼，血清皮质醇浓度也明显低于超雄黄颡鱼，表明选育杂交黄颡鱼肝脏应激损伤可能较小。
表4选育杂交黄颡鱼与其它两种养殖黄颡鱼96h半致死缺氧胁迫后肝脏指标
| 肝脏 | 选育杂交黄颡鱼 | 超雄黄颡鱼 | 购买杂交黄颡鱼 |
| 溶菌酶(ng/ml) | 42.61 | 38.92 | 43.61 |
| 补体C3(nmol/ml) | 385.23 | 311.43 | 367.93 |
| 超氧化物歧化酶(ng/ml) | 45.63 | 38.56 | 45.94 |
| 丙二醛(nmol/ml) | 36.77 | 44.86 | 37.98 |
由表4可见，96h半致死缺氧胁迫后选育的杂交黄颡鱼肝脏溶菌酶、补体C3与超氧化物歧化酶活力均显著高于超雄黄颡鱼肝脏指标；然而，肝脏丙二醛含量低于超雄黄颡鱼肝脏指标。因此，选育的杂交黄颡鱼肝脏组织中较强的免疫与抗氧化能力可能有助于增强低氧胁迫能力。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种选育耐低氧杂交黄颡鱼的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以瓦氏 黄颡鱼的不同地理种群为选育群体，利用种间杂交构建瓦氏 黄颡鱼群体的F0代，筛选含氧量在0.9～1.2mg/L时存活率高于80％的F0代群体进行家系选育，得F1代群体；所述地理种群包括珠江水系的云南西江、广东珠江、广西漓江和四川金沙江四个地理种群；
2)根据F1代群体中雌雄个体的估计育种值和亲缘关系设计亲本配对，进行连续3代选育，得珠江水系的F3代瓦氏 黄颡鱼群体；
3)以嘉陵江的瓦氏黄颡鱼为基础种群，以体重和体长为选育指标，通过群体选育的方法，连续选育3代，得嘉陵江的F3代瓦氏黄颡鱼群体；
4)以所述珠江水系的F3代瓦氏 黄颡鱼群体中的雌性个体为母本，以所述嘉陵江的F3代瓦氏黄颡鱼群体的雄性个体为父本进行杂交，得耐低氧杂交黄颡鱼；
在所述杂交前2周，将所述母本和父本单独置于流水中饲养，所述饲养期间投喂蛋白质量含量为42～47％和油脂质量含量为5～9％的饲料；
在所述杂交前还包括向所述父本和母本注射催产药物。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，每个所述地理种群的数量为120～150尾，雌雄数量比为3：1～2：1。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2)所述配对时，将每个地理种群的育种值从高到低排列，选择前100位作为繁殖亲本，且F3代的近交系数不大于1/16。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，在步骤2)进行连续3代选育过程中，每一代中都包括筛选含氧量在0.9～1.2mg/L时存活率高于80％的群体进行下一代选育。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤3)所述瓦氏黄颡鱼来源于四川嘉陵江流域，雌雄比例为2：1。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，对所述瓦氏黄颡鱼进行连续选育时，当每一代体长相同，选择背部厚度不低于体宽10％的作为下一代亲本；且每一代亲本的体重都与上一代具有显著差异。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)所述催产药物的成分包括：促黄体素释放激素类似物2号、马来酸地欧酮和绒毛膜促性腺激素，其中促黄体素释放激素类似物2号的使用剂量为10μg/kg，马来酸地欧酮的使用剂量为5mg/kg，绒毛膜促性腺激素的使用剂量为4000IU/kg。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，雌鱼分2次注射所述催产药物，第一次注射用药量为全剂量的1/5～1/3，22～24h后第二次注射；雄鱼注射一次，所述雄鱼的注射时间与雌鱼的第二次注射时间同步，所述雄鱼的注射剂量为所述雌鱼第二次注射量的一半。
9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤4)所述杂交为人工授精，在所述人工授精后还包括卵孵化，所述卵孵化的水温为26～29℃，流水速度为3升/分钟，溶氧浓度为6～8mg/L；
在所述卵孵化72h后，收集所述耐低氧杂交黄颡鱼的苗种进行培育。
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